UNIVERSITE D’ANTANANARIVO

FACULTE DES SCIENCES

DOMAINE DES SCIENCES ET TECHNOLOGIES
MENTION SCIENCE DE LA TERRE ET DE L’ENVIRONNEMENT
PARCOURS HYDROGEOLOGIE (GREEN)
NIVEAU S9 M2
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COMPTE RENDU DU TP : ANALYSE

MICROBIOLOGIQUE DE L’EAU

Rédigée par : RANARIVELO Herimampionona Felanirina

Encadrée par : Docteur Hasina ANDRIAMADY

Année Universitaire : 2024-2025

 I- INTRODUCTION

L'eau est une ressource vitale pour la vie. Cependant, la potabilité de l’eau demeure un enjeu majeur
pour la santé humaine. En effet, la consommation d’eau contaminée peut entrainer des graves
maladies chez l’homme. Il est donc crucial de surveiller régulièrement la qualité de l’eau destinée à la
consommation humaine pour prévenir la contamination par des microorganismes pathogènes
pouvant nuire à la santé publique.

L’analyse bactériologique de l’eau joue un rôle clé dans cette surveillance. Elle permet de détecter et
de quantifier les microorganismes présents notamment les germes pathogènes et les indicateurs de
pollution fécale.

Ce travail pratique (TP) vise lors à évaluer la potabilité de l’eau en analysant sa composition
microbiologique, afin d’identifier les microorganismes présents dans l’échantillon pour déterminer si
l’eau est conforme aux normes de sécurité et de potabilité établies.

II- METHODOLOGIE
1- Matériels utilisés
a- Verreries
- Bécher : Utilisé pour mélanger et contenir des solutions.
- Erlenmeyer : Utilisé pour agiter des solutions sans risque de débordement,
bouché avec du coton lors du chauffage sur la plaque pour prévenir les
contaminations et les débordements.
- Éprouvette : Utilisée pour mesurer précisément des volumes de liquide.
- Boîte de Pétri : Utilisée pour cultiver des microorganismes.
- Tube à essai : Utilisé pour contenir des échantillons de culture ou des
réactions chimiques.

b- Petits matériels
- Spatule : Utilisée pour manipuler des échantillons solides ou des poudres.
- Anse d’ensemencement : Utilisée pour prélever et transférer des échantillons
microbiologiques.
- Portoir : Utilisé pour maintenir les tubes à essai en position verticale.

c- Gros matériels :
- Plaque chauffante : Utilisée pour chauffer des solutions.
- Étuve bactériologique : Utilisée pour incuber des échantillons à des
températures spécifiques.
- Balance de précision : Utilisée pour peser précisément les échantillons.
- Bec Bunsen : Utilisé pour stériliser les instruments jusqu’à 20 cm de diamètre.
- Microscope : Utilisé pour observer les microorganismes.
 d- Autres matériel
- Echantillon d’eau usée
- Alcool : Utilisé pour désinfecter les mains de la manipulation.
- Coton : Utilisé pour boucher les Erlenmeyers lors du chauffage sur la plaque
afin de prévenir les contaminations et les débordements.

2- Etape de l’analyse bactériologique

a- Préparation des milieux de culture
Les milieux de cultures utilisés sont des Milieux lyophilisés : en poudre
déshydraté diluer dans l’eau distillée stérile.

 Dosage des milieux de culture et de l'eau distillée stérile :

Les quantités spécifiques des milieux de culture lyophilisés sont
mesurées avec précision, ainsi que le volume d'eau distillée stérile
nécessaire pour leur préparation.

 Mélange de l'eau distillée stérile et du milieu de culture :

L'eau distillée stérile est ajoutée au milieu de culture lyophilisé, et le
mélange est agité pour obtenir une solution homogène.

 Chauffage :
La solution de milieu de culture est chauffée à une température
adéquate pour dissoudre complètement les composants et stériliser
le mélange.

 Versement du milieu de culture dans la boîte de Pétri :

Le milieu de culture stérile est versé dans des boîtes de Pétri près du
bec Bunsen pour éviter toute contamination, puis laissé à solidifier.

 Revivification :
Cette étape permet aux bactéries de retrouver leur état actif et
fonctionnel pour la croissance sur les milieux de culture.
Il consiste à les laisser reposer à température ambiante pendant 20
minutes.
 Germes Milieu de Type Concentration lecture
recherchés culture d’ensemencent
Coliformes Gélose VRBL En profondeur 1.925 g/50 ml Colonies rouges
totaux violacées
Staphylococcus Baird parker En surface 2.5 g/50ml noir
aureus
Clostriduim TSC En sandwich 1.6 g/40ml noir
sulfito-
réducteur
Salmonella sp XLD En surface 2.75g/50ml Rouge à centre
noir
Streptocoques Slanetz et En surface 2.07 g/50ml Blanche
fécaux Bartley
Pseudomonas sp CN pseudomonas En profondeur 2.285 g/50ml Bleu-Vert
agar

b- Préparation de la suspension mère (SM) :

Pour la préparation de la suspension mère, 10ml de l'échantillon d'eau à analyser sont mis en
suspension dans 90ml de diluant stérile (EPT).

10 ml d’eau + 90 ml EPT

Le mélange est ensuite agité manuellement pour obtenir une suspension homogène.

c- Ensemencement sur les milieux de culture :

Les échantillons dilués sont ensemencés sur des milieux de culture spécifiques en fonction des
germes recherchés. Les types d’ensemencements sont déjà cités ci-dessus.

d- Incubation :

Les échantillons ensemencés sont incubés à température entre 35 à 44°C pendant 48 heures.
e- Lecture et dénombrement :
 Étude des caractères culturaux : Observation macroscopique de la
croissance, la forme, la taille et l’aspect des colonies.

 Étude des caractères morphologiques et structuraux : Observation de la

forme des cellules bactériennes (coques, bâtonnet), leur mode de
regroupement (isolé, par paire, en amas, ...).

 Mode opératoire

 Prélèvement des bactéries

Dans un milieu solide ou liquide, les bactéries ont été prélevées à
l’aide d’une œse et déposées sur la lame contenant une fine goutte
d’eau distillée stérile.

 Coloration
- coloration par le violet de gentiane : le frottis fixé à la chaleur
a été coloré pendant une minute avec une solution de gentiane.
- mordançage : le frottis coloré a été rincé rapidement avec une
solution iodo-iodurée de lugol. Il a été maintenu dans ce même milieu
pendant une minute.
- décoloration par l’alcool : le frottis a ensuite été décoloré avec
de l’alcool-acétone (prolongé pendant quelques secondes jusqu’à ce
que l’excès de colorant soit éliminé. Puis, le frottis a été rincé sous un
robinet
- recoloration à la fuschine : le frottis a enfin été traité avec une
solution de fuschine pendant une minute, rincé rapidement au
robinet et séché entre deux feuilles de papier filtre.
 III- RESULTATS

Germes Milieu de Concentration Colonies Gram

recherchés culture observés
Coliformes Gélose VRBL 1.925 g/50 ml - -
totaux
Staphylococcus Baird parker 2.5 g/50ml Noir Violet
aureus  Gram +
Clostriduim TSC 1.6 g/40ml - -
sulfito-
réducteur
Salmonella sp XLD 2.75g/50ml - -
Streptocoques Slanetz et 2.07 g/50ml Blanche Gram +
fécaux Bartley 42/50ml
 84/100ml
Pseudomonas sp CN pseudomonas 2.285 g/50ml Bleu-Vert -
agar

IV- DISCUSSION ET INTERPRETATION

Selon la norme de potabilité Malagasy (Décret n°2004-635 du 15/06/04)

COLIFORMES TOTAUX 0 / 100ml

STREPTOCOQUES FECAUX 0 / 100ml

E. COLI 0 / 100ml

CLOSTRIDIUM SULFITO-REDUCTEUR 0 / 100ml

 On peut interpréter le tableau comme suivant :

Germes Milieu de Colonies Gram Interprétation

recherchés culture observés
Coliformes Gélose VRBL - - satisfaisant
totaux
Staphylococcus Baird parker Noir Violet insatisfaisant
aureus  Gram +
Clostriduim TSC - - satisfaisant
sulfito-
réducteur
Salmonella sp XLD - - satisfaisant
Streptocoques Slanetz et Blanche Gram + insatisfaisant
fécaux Bartley 42/50ml
 84/100ml
Pseudomonas sp CN pseudomonas Bleu-Vert - satisfaisant
agar

Même s’il y a des résultats satisfaisants, les résultats obtenus montrent que l’eau est contaminée par
‘’Staphylococcus aureus’’ de forme grappe de raisin observé en microscope et ‘’Streptocoques fécaux’’
de colonies significative 84/100ml., la présence de ces bactéries rend l'eau impropre à la
consommation. On peut dire, d’après la norme de potabilité malgache, que l’eau est non potable.

V- CONCLUSION

Cette étude révèle une contamination microbiologique significative, notamment les ’’Staphylococcus
aureus’’ et ‘’Streptocoques fécaux’’ rendant l'eau impropre à la consommation. On peut conclure que
l’eau ne répond au norme de potabilité malgache, donc elle n’est pas potable.

Il est alors important de noter que bien que l’eau puisse paraître claire et limpide, cela n’assure pas sa
potabilité. Des analyses microbiologiques régulières sont donc nécessaire pour assurer la qualité de
l’eau afin de protéger la santé humaine.