HEMATOLOGIE OU PHYSIOLOGIE DU SANG

HISTOIRE
Le sang a toujours tenu un rôle important dans l’histoire de la population et de l’humanité :
 Hématologie géographique : étant facile d’accès, le sang a pu faire l’objet d’études auprès de
diverses parties du globe afin de déterminer les origines des différentes races humaines à
travers le monde.
 Pendant les différentes guerres, il était systématique que du sang soit versé.
 Même dans la culture malgache, la tradition du « fati-drà » est souvent pratiquée par des
personnes cherchant à appartenir à la même famille sans avoir de réels liens de sang.
 Dans toutes les cultures, le sang symbolise la vie.
 Par exemple, le sang du Christ symbolise le sacrifice de sa vie pour le salut de l’humanité.

DEFINITION
Etymologie :
 Grec : « ema » ou sang αiµα
 Latin : « sanguis » ou sang qui coule
 Logos : étude
Hématologie : branche de la médecine qui étudie le sang
Physiologie du sang : étude du comportement normal du sang
OBJECTIFS : comprendre et décrire :
- La composition et les fonctions du sang
- Le fonctionnement normal des cellules hématologiques : hématologie cytologique
- Le fonctionnement normal des phénomènes de l’hémostase
- Les notions fondamentales en immunohématologie

I- GENERALITES
1° DEFINITION
- Tissu spécialisé (le seul tissu liquide)
- Liquide physiologique rouge présent chez la plupart des animaux évolués ,circulant
dans les vaisseaux sanguins et propulsé par le cœur vers les tissus et organes
2° COMPOSITION
Deux constituants : _ la phase cellulaire ( 45%) formée de cellules en suspension ou éléments
figurés :hématies, leucocytes et plaquettes
_ la phase liquide (55%) constituée du plasma
Le plasma :
- Jaune citrin
- Solution composée de : _ eau (90%)
_protéines (7%)
_ions, molécules organiques et inorganiques, mitochondries libres
- pH entre 7,35 et 7,45 (alcalin)
a) Constituants fonctionnels
o Protéines de transport
Ex : albumine
o Protéines de défense
Ex : immunoglobines
o Facteurs de coagulation
o Facteurs de l’inflammation
o Enzymes
b) Constituants nutritifs
Glucose, acides aminés, lipides, corps cétoniques, vitamines
c) Déchets du métabolisme
Urée, acide urique, bilirubine
d) Hormones
e) Constituants minéraux
Cations ( Na, K, Ca, Mg)
Anions ( Cl, HCO3, SO4, HPO4)
f) Constituants inertes : N2
g) Constituants accidentels : enzymes, médicaments

3° CHEZ LES AUTRES ESPECES

CHEZ TOUS LES VERTEBRES : liquide rouge, légèrement visqueux
- Densité variant légèrement selon les espèces et le sexe (homme ≥femme)
- Odeur également variable : identique à l’odeur de la sueur de l’espèce
- Réaction toujours alcaline car pH toujours alcalin
- Température variable selon les espèces (36 à 40 °C)
_ chez les hétérothermes ( animaux à sang froid, mammifères hibernants)
température légèrement supérieure à celle du milieu ambiant
_ chez les homéothermes (animaux à sang chaud)
température non variable
ORGANISMES INFERIEURS
-beaucoup moins constante et fixe
- ne renferme que des leucocytes
- couleur variable
-proportions de sels très variables

4° FONCTIONS DU SANG
 Transport : CO2, O2 , nutriments , hormones, déchets , chaleur
 Homéostasie :maintien de la composition du milieu intérieur
 Défense contre les infections, inflammations et pertes sanguines
 a) Rôle de transporteur
-Forte rapidité : la totalité du sang passe dans le cœur en l’espace d’une minute
raison pour laquelle l’injection intraveineuse est préférée aux autres techniques
aussi utile pour véhiculer les médicaments ingérés par voie orale( ces derniers
vont atterrir dans le sang par absorption intestinale)
-Cependant, cela signifie aussi que les maladies peuvent se transmettre
facilement par le sang, et que ce dernier peut aussi transporter des produits
toxiques.

5° VOLUME SANGUIN
-7 à 8 % du volume sanguin
- Hématocrite : volume occupé par des globules rouges
-Ce volume peut être calculé.

Fractionnement du sang

 Centrifugation en présence d’un anticoagulant :

_un surnageant jaunâtre : le plasma
_un culot d’hématies
_un anneau jaunâtre contenant les leucocytes et les plaquettes se situe à
l’interface de ces 2 phases c
Une simple agitation permet de mélanger tous ces composants et de les remettre en
suspension.

 Centrifugation sans anticoagulant

-un surnageant jaunâtre : le sérum
-un culot contenant les hématies contenues dans un réseau de fibrine
Les hématies ne peuvent pas être remises en suspension car elles sont d’ores et déjà
engagées dans un processus de coagulation.

Sérum et plasma
_Sérum : plasma dépourvu de facteurs de coagulation ;
Sang prélevé sans anticoagulant (caillot de fibrine + sérum)
_Plasma : sang prélevé avec anticoagulant (culot globulaire + plasma)

II- HEMATOLOGIE CELLULAIRE

1) PHYSIOLOGIE DES CELLULES SANGUINES
A-Physiologie des hématies
 o Egalement appelées « érythrocytes » (érythro=rouge) ou
« globules rouges »
o Ce sont les plus nombreuses cellules sanguines
o Uniformes et anucléées
A-1° Morphologie
HEMATIE VUE DE FACE HEMATIE VUE DE PROFIL

-arrondie (7µm) - forme biconcave

-la zone centrale claire désigne une bi concavité

Avantages :- plus grande surface d’échange

-plus grande déformabilité (souplesse) une hématie peut entrer dans un trou de 1,5µm
tout en ayant un diamètre de 7µm.

A-2° Structure

Une hématie est constituée par trois éléments :- la membrane,

-l’hémoglobine,

Et les enzymes.

a) La membrane
-bicouche lipidique + couche intermédiaire de protéines
-squelette constitué de protéines spécifiques à la membrane du globule rouge :
_ spectrine
_ankyrine
_bandes 3 et 4
b) Enzymes érythrocytaires
Survie du globule rouge
Deux enzymes principales : Зεεεε-G6PD : Glc 6- phosphodéshydrogénase
-PK : pyruvate kinase

c) L’hémoglobine

 Raison d’être de l’hématie, qu’on peut aussi appeler « sac à hémoglobines »

 Principal constituant du contenu érythrocytaire
 Pigment couleur rouge du sang
  Formée de : -4 chaînes de globine, symétriques 2 à 2 :_ 2 chaînes de type α

_2 chaînes de type non-α

-4 molécules d’hème contenant du fer

 Molécules de fer dans la poche de l’hème :
-fixées à l’hème par 4 fois,
-fixées à la globine au niveau de l’histidine proximale
-fixe l’oxygène dans l’oxyhémoglobine
 2-3 DPG (diphosphoglycérate) : présent au centre de la molécule dans la forme
oxygénée

Chez l’embryon, il existe un type particulier d’hémoglobine : hémoglobine de Gowers

Chaines de type (ς ;ε)
Chez le fœtus et le nouveau-né (2α ;2γ)
-forte affinité pour l’oxygène par rapport à celle de l’hémoglobine adulte
-majoritaire à la naissance(80%)
-taux décroissant au cours de la première année de vie (il ne reste plus que des traces à un
an)
Chez l’adulte, il y a :
-les hémoglobines A
o 2 chaînes α et 2 chaînes  ( α2, 2)
o Majoritaire (+ de 97%)
- Les hémoglobines A2
o 2 chaînes α et 2 chaînes δ (α2,δ2)
o Minoritaire (1,5 à 3 %)

A-3° Vie et destinée

 Durée de vie moyenne : 120 jours

 Vieillissement :anomalies de structure
anomalies morphologiques
 Mort : hémolyse physiologique en milieu extravasculaire
 Destruction par phagocytose dans le système réticulo-endithélial par les
macrophages
 Catabolisme de l’hémoglobine résidus de biliverdine (pigment) bilirubine (par
réduction de la biliverdine)se lie avec l’albumine du plasma avant d’arriver
dans le foie
 Cellules hépatiques
 Conjugaison diglucuronate de bilirubine : hydrosoluble et sécrétée par la bile
 Intestins : stercobilinogène  stercobiline coloration des selles
 Urines : urobilinogène urobiline  coloration des urines

A-4° Eléments nécessaires à la synthèse des hématies

Synthèse d’ADN :- vitamine B12

-vitamine B9 ou acide folique
 Synthèse de l’hémoglobine :- fer
-protéines
-vitamine B6

A-5° Répartition des hématies

Nombre : - 4 à 6 1012 /L (Tera/L) ou 4000000 à 6000000 / mm3

Il y en a moins chez la femme et chez l’enfant ;

Par contre il y en a beaucoup chez le nouveau-né (+ de 6 T/L : polyglobulie physiologique) , ces

hématie sont également en macrocytose(de grande taille)

A-6° Fonctions

Transport d’oxygène vers les tissus (oxygénation tissulaire) par l’hémoglobine

Transport de dioxyde de carbone
Système tampon

B- Plaquettes ou thrombocytes
a) Morphologie
_Ce sont les plus petites cellules sanguines
_Anucléées et discoïdes
_ce sont des fragments de cytoplasme

b) Structure

b)1/ Le cytosquelette

Il comporte deux parties principales :la tubuline et l’actine

b)2/ La membrane

Constituée de :

 Deux couches lipidiques faites de phospholipide, acide arachidonique et cholestérol

 Couches protéiques intermédiaires formées par des glycoprotéines (GP)
Il y a deux types de GP possibles :
 GP Ib IX :
-adhésion des plaquettes à la membrane extra cellulaire vasculaire par le facteur de
von Willebrand
-25000/ plaquette
 GP IIb IIIa :
-activation pour l’agrégation des plaquettes entre elles par le fibrinogène
-50000/ plaquette et 30000/granule α
 Deux systèmes canaliculaires :
- Système canaliculaire ouvert, connecté au niveau de la membrane plaquettaire
- Système canaliculaire fermé, non connecté à la surface

b)3/ Les granules

Lors de l’activation plaquettaire :
_ vont s’unir à la membrane externe ou à celle du système connecté à la surface
_leur membrane s’unit à celle de la plaquette et leur contenu se déverse à l’extérieur
 _Il y a deux types de granules :
 Granules alpha(a)
-8 à 10 par plaquette
-contenant :
_des protéines synthétisées :thromboglobulines, facteur 4 plaquettaire VWF
_des protéines plasmatiques : fibrinogènes, thrombospondines , facteur V
_des facteurs de régulation de croissance ( PDGF growth factor)
 Granules denses
-4 à 5 par plaquette
-contenu :
_ADP et ATP (synthèse au niveau local) :
 Libérées lors de l’activation( release)
 Hydrolyse de l’ATPpolymérisation de l’actine

_ Ca2+

_sérotonine (provenant du plasma)

Facteur de von Willebrand : protéine située dans :

_le plasma

_Les granules alpha (synthétisée lors du stade mégacaryocytes)

_la matrice sous-endothéliale (corps de Weibel Palade)

Rôles :- adhésion des plaquettes à la plaie vasculaire (récepteur GP Ip-IX)

-liaison au facteur anti-hémophilique VIII

c) Nombre et répartition

 Taux normal dans le sang :

-150 à 400 G/L (giga :109)
-constant
 30 % de la masse totale est située dans la rate :
une augmentation importante du volume de la rate fait diminuer le chiffre des plaquettes
circulantes
d- Origine et durée de vie
o origine :
-Megacaryopoïèse
-un mégacaryocyte produit 2000 à 8000 plaquettes
-Durée de vie : 7 à 10 jours ( raccourcie si activation de l’hémostase)
o destruction :
_ plaquettes vieillies éliminées par les macrophages de la moelle osseuse( rate et
foie)
o A l’extérieur du corps :
- Les plaquettes sont détruites par le froid
- Elles ne sont plus fonctionnelles à pH acide
e) Fonctions
DANS L’HEMOSTASE : deux premiers temps de l’hémostase :
 _ Rôle principal : formation du clou plaquettaire dans l’hémostase primaire
_support de l’activation des facteurs de coagulation dans l’hémostase secondaire
Autres :
Immunité non spécifique : inflammation
Pathologie :
-constitution de l’athérosclérose
-dans les cancers
C- Les leucocytes
-globules blancs : nucléés
-les cellules sanguines les moins nombreuses (4à10 G/L) mais les plus volumineuses
-divisées en trois types

1) Les polynucléaires ou granulocytes

 Noyau multilobé
 Cytoplasme provenant des granulations( d’où le nom « granulocyte »)
 Les affinités tinctoriales différentes au May Grumwald Gemsa (MGG) les divisent en trois
catégories : - polynucléaires neutrophiles : granulations fines à coloration neutre
-polynucléaires éosinophiles : grosses granulations réfringentes de couleur
orange.
-polynucléaire basophile : peu abondantes, granulations roiuges violacées dites
« métachromatiques »
a- Polynucléaires neutrophiles
 Morphologie :
- 10 à 14 µ
- 2 à 5 lobes
- Chromatine assez dense
- Cytoplasme abondant contenant de fines granulations neutrophiles marrons
 Nombre et répartition

_ les plus nombreux des leucocytes sanguins : - 50 à 75 % des leucocytes

-2 à 75 G/L

_ deux secteurs ou pools :

 Secteur circulant : le seul mesuré directement lors de la prise de sang pour

numération
 Secteur marginal :
-polynucléaires plaqués contre les vaisseaux (rate, foie et poumons)
-non mesuré mais dont la quantité est égale à celles du secteur circulant
-fonctionnels et immédiatement disponibles
 Fonctions :

_ mobilité

_diapédèse

_chimiotactisme (éléments bactériens , fragments de compléments )

_phagocytose (en plusieurs étapes : adhésion, ingestion , formation d’une vacuole de phagocytose)

_bactéricidie
 N.B : Phagocytose :

- synthèse de radicaux oxygénés a l’aide du péroxydase

- grâce à des enzymes : lysozyme, hydrolase , phosphatase

-après phagocytose, le PNN meurt et forme le pus.

b- Polynucléaires éosinophiles

 Morphologie :
- 10 à 15 µ
- 2 lobes réunis par un pont
- Chromatine dense, sans nucléole
- Cytoplasme incolore et abondant
- Granulations secondaires spécifiques : _volumineuses (0,5 à 1,5 µ)
_rondes ou ovales
_assez régulièrement réparties
_ de couleur orangée au MGG
- Granulations responsables de la formation de cristaux de Charlot-Leyden chez les tissus à
forte concentration en PNE
 Nombre et répartition :
_ 1 à 5 % des leucocytes sanguins
_40 à 500 par mm3( moins de 0,5 G/L)
_temps de transit dans le sang : 6 à 8 heures
_durée de vie moyenne : 3 à 8 jours
 Fonctions :
- Cellules essentiellement tissulaires
- Migration par diapédèse régulée par des substances chimiotactiques
- Pouvoir phagocytaire faible
- Substances des granules (Major Binding Protein) très toxiques : utiles contre les parasites
- Phénomènes allergiques, hypersensibilité : immédiate due à la présence d’IgE
- Absence de lysozymes : pas de pouvoir bactéricide efficace

c- Polynucléaires basophiles

 Morphologie :
- taille moyenne
- noyau assez volumineux
-cytoplasme et noyau recouverts de granulations :
- basiques (très bleus)
- métachromatiques par la présence de mucopolysaccharides acides
 Nombre et répartition :
- Les moins nombreux : moins de 1% des leucocytes
- Moins de 100 par mm3 (0,1 G/L)
- Equivalent dans les tissus : mastocytes
 Fonctions :
- Chimiotactisme
- Sans pouvoir phagocytaire ou bactéricidique
- Phénomène d’hypersensibilité immédiate grâce à son récepteur de surface pour les IgE
- Interaction des IgE membranaires avec l’antigène correspondantdégranulation
- Libération de produits très actifs : _ histamine vasoactive
_héparine
2) Monocytes ou macrophages
MORPHOLOGIE :

Monocytes (sang) Macrophages (tissus)

- Le plus grand des leucocytes (plus de - Grande taille : entre 20 et 80 µ

20µ) - Noyau excentré
- RNC ( rapport nucléo cytoplasmique) - Cytoplasme très basophile, étalé avec
bas : moins de 50 % des vacuoles
- Contours nucléaires irréguliers, - Limites cytoplasmiques ambiguës
noyau rubané
- Cytoplasme étendu, hétérogène,
violacé, très finement granulaire
avec des vacuoles
- Limites cytoplasmiques nettes,
festonnées
NOMBRE ET REPARTITION
-2 à 10 % des leucocytes sanguins
-0,1 à 1 G/L
-transit sanguin : 20 à 40 heures
-trois pools : circulant, marginal et tissulaire
-passage dans les tissus macrophages
FONCTIONS :
- Phagocytose : le monocyte ne meurt pas après la phagocytose
- Présentation d’antigène : dans l’immunité à médiation cellulaire (d’où le surnom « CPA » :
cellules présentatrices d’antigène)
3) Lymphocytes
o MORPHOLOGIE :
- Taille variable, on distingue parfois : _les petits lymphocytes (6 à 8 µ)
_les grands lymphocytes (10 à 15 µ)
- Noyau arrondi ou ovoïde
- Chromatine dense, sans nucléole
- Cytoplasme souvent assez basophile, peu abondant dans les petits lymphocytes comparés
aux grands lymphocytes
- Quelquefois, présence de granulations azurophiles ( violets
- L’étude morphologique ne distingue pas les LB des LT , d’où la nécessité de
l’immunophénotypage

o NOMBRE ET REPARTITION
_Adulte : -20 à 40 % des leucocytes sanguins
-1,5 à 4 G/L
_Enfant : plus nombreux, 60% des leucocytes sanguins (lymphocytose physiologique
de l’enfant)

- Au niveau du sang : très faible partie du pool lymphocytaire de l’organisme

- Au niveau des organes lymphoïdes secondaires : rate, ganglions, organes lymphoïdes
des muqueuses
 o FONCTIONS
- Cellules spécialisées dans l’immunité
- Morphologies identiques, mais deux sous-populations très différentes :
_ LB : cellules de l’immunité à médiation humorale sécrétion d’anticorps
_LT : cellules de l’immunité à médiation cellulaire
 Deux classes de LT matures :
_ LT4 ou auxiliaires (helper) :
-portant le récepteur CD4
-60 à 80 % des LT
_LT8 (suppresseurs)
-portant le récepteur CD8
 LB matures : - récepteurs d’Ig
-CD20
-CD19

- autres populations lymphocytaires (ni LB, ni LT) : cellules NK (natural killer)

4) Plasmocytes

-cellules tissulaires ou ganglionnaires

- exceptionnellement dans le sang

-dérivent des LB

-durée de vie : 4 à 6 jours

-rôle de synthèse et sécrétion d’anticorps

- un clone plasmocytaire ne peut sécréter qu’un seul type d’Ig (M,G,D,A,E)

2) HEMATOPOÏESE
1- Définition
-C’est l’ensemble des phénomènes qui permettent la fabrication et le remplacement continu et
régulé des cellules sanguines.

- Processus physiologique soumis à une régulation selon les besoins de l’organisme, pouvant être
reproduite expérimentalement : _ en présence des cellules souches (donneur)

_avec un apport d’éléments de régulation

2- Résultats
L’organisme a des besoins importants, ce qui nécessite une production importantes de cellules
sanguines : 1013 cellules sanguines/ jour 28 g de sang / jour.

Globules rouges : 200 x 109 /j (2 millions/s)

Leucocytes : 50 à 100 x 109/j

Plaquettes : 100 x 109 /j

3- Siège
 HEMATOPOÏESE FŒTALE lors de la vie intra utérine :
- Tissu conjonctif jusqu’au 2ème mois
- Le foie, puis la rate de 2 à 6 mois
- La moelle osseuse à partir de 4 mois (ébauche osseuse)
 Après la naissance, elle se déroule exclusivement dans la moelle osseuse.

4- Composantes
 ErythropoïèseGlobules rouges
 GranulopoïèseGranulocytes ou polynucléaires
 Monocytopoïèse Monocytes
 LymphopoïèseLymphocytes
 MégacaryopoïèsePlaquettes

5- Compartiments de l’hématopoïèse

cellules
souches
totipotentes

progéniteurs

précurseurs

cellules matures circulantes

a) Compartiment des cellules souches totipotentes

Cellules à forme indéterminée
Cellules pouvant : - s’auto renouveler
-évoluer en progéniteurs de manière irréversible
Elles portent des marqueurs CD34+
b) Compartiment des progéniteurs
 Progéniteurs lymphoïdes CFU L : lymphopoïèse
 Progéniteurs myéloïdes CFU GEMM : érythropoïèse, granulopoïèse,
mégacaryopoïèse, monocytopoïèse
c) Compartiments des précurseurs et des cellules matures
 Précurseurs érythrocytaires Globules rouges
Précurseurs granulocytaires Granulocytes / polynucléaires
Précurseurs mégacaryocytaires Plaquettes
Précurseurs monocytaires Monocytes / macrophages
Précurseurs lymphocytaires Lymphocytes

Les cellules commencent à être identifiées morphologiquement au niveau du compartiment

des précurseurs au médullogramme(myélogramme) après ponction de la moelle.

Progéniteurs
myéloïdes : CFU PRO
CST GEMMCFU ERYTHROBLASTES
EMBFU ECFU E

ERYHTROBLASTE
ERYTHROBLASTE CHROMATOPHILE: ERYTHROBLASTE
BASOPHILE début de synthèse ACIDOPHILE
d'hémogobine

RETICULOCYTES ERYTHROCYTES

ERYTHROPOÏESE
 PROGENITEURS
MYELOÏDES: CFU
CST MYELOBLASTE
GEMM - CFU GM -
CFU G

PROMYELOCYTE MYELOCYTE METAMYELOCYTE

GRANULOCYTES:
PNN - PNB - PNE

GRANULOPOÏESE

CFU GEMM - CFU

CST MEGACARYOBLASTE
EM - BFU M- CFU M

MEGACARYOCYTE MEGACARYOCYTE
MEGACARYOCYTE
GRANULEUX THROMBOCYTOGE
BASOPHILE
NE MATURE

FRAGMENTATION DU CYTOPLASME

PLAQUETTES

MEGACARYOPOÏESE : la différenciation mégacaryocytaire aboutit à des cellules de plus

en plus grandes avec un noyau qui se lobule et un cytoplasme qui acquiert progressivement
le contenu et l’aspect des plaquettes sanguines.
 CFU GEMM - CFU GM -
CST MONOBLASTES
CFU M

PROMONOCYTES MONOCYTES MACROPHAGES

MONOCYTOPOÏESE

CST

PROGENITEUR PROGENITEUR LYMPHOÏDE

LYMPHOÏDE

B
T

PRE B
PRETHYMOCYTES

THYMOCYTES
COMMUNS PRO B

THYMOCYTES
MEDULLAIRES IMMATURES B

LT MATURES
CD8 ou CD4
LB
MATURES

LYMPHOPOÏESE
CFU : colony forming unit
BFU : burst forming unit
G : granulocytes
E : érythrocytes
M : mégacaryocytes
M : monocytes
Burst : formation plus grande que les colonies

6) Régulation de l’hématopoïèse
 Cellules souches
 3 éléments :
- Le micro environnement
- Les vitamines et les oligo éléments :
_ vitamine B12 et vitamine B9 ( synthèse d’ADN)
_fer (spécifique des globules rouges)
_protéines
- Les facteurs de croissance :
_ de promotion : SCF
_multipotents : GM CSF
_restreints(spécifiques de lignées) : ex : érythroprolétine, GSF

Facteurs de croissance restreints :

- G-CSF : lignée granuleuse neutrophile
- M-CSF : lignée monocytaire
- IL 5 : lignée granuleuse éosinophile
- IL 4 : lignée granuleuse basophile
- IL 6 ,la TPO (thrombopoïétine) et IL 10 (lignée mégacaryocytaire)
- EPO (lignée érythrocytaire)
- IL 7 (lignée lymphocytaire)

_IL : interleukine
_EPO : érythropoïétine
_CSF : colony stimulating factor
_SCF : stem cell factor

7) Exploration de l’hématopoïèse
- Etude directe de la moelle osseuse :
_ cytologique : médullogramme ( par recueil du suc médullaire)
_ histologique : biopsie ostéo médullaire
- Culture des cellules souches
- Cytogénétique ( chromosome)
- Moléculaire
- Bactériologique, virologique ou parasitologique

8) Exploration des cellules sanguines

 Hémogramme ou Numération Formule Sanguine(NFS) : étude qualitative et
quantitative des cellules sanguines
Hématies :
- Nombre
- Taux d’hémoglobine
- Hématocrite
- Constantes érythrocytaires : _ volume globulaire moyen (VGM)
_ Teneur corpusculaire moyenne en hémoglobine
(TCMH) :nombre d’hémoglobine dans une hématie couleur des hématies
_concentration corpusculaire moyenne en
hémoglobine(CCMH) : nombre d’hémoglobine par unité de volume
Leucocytes : - nombre
-formule leucocytaire : _PNN
_PNE
_PNB
_L
_M
Plaquettes : - nombre
-volume moyen plaquettaire (VMP)
Autres :
Vitesse de sédimentation des globules rouges

III- PHYSIOLOGIE DE L’HEMOSTASE

A- Définition
L’hémostase est l’ensemble des phénomènes physiologiques qui concourent à :
- L’arrêt d’un saignement
- La prévention d’une hémorragie
- L’intégrité vasculaire ;
- Le tout afin de limiter les pertes sanguines liées à la rupture de la continuité vasculaire.
B- Trois étapes de l’hémostase
 Hémostase primaire : formation du clou plaquettaire
 Hémostase secondaire : formation du caillot de fibrine
 Fibrinolyse : destruction de la fibrine
 C- Bases
 Les mécanismes mis en jeu dépendent de l’importance de la lésion.
 Les acteurs : le vaisseau, les plaquettes, les protéines de coagulation.
 Phénomène localisé :
- Rapide : auto- amplification locale
- Régulé négativement : afin d’éviter une obstruction prolongée du vaisseau
 Equilibre :
-entre activateurs et inhibiteurs
-entre l’activation de la coagulation et la fibrinolyse

1) Hémostase primaire
a- Définition
C’est la première étape de l’hémostase.

Temps cardio-vasculaire aboutissant à la formation d’un thrombus blanc ou clou plaquettaire.

b- Les intervenants
1) Le vaisseau
L’endothélium au contact du sang est non thrombogène (ne permet pas la formation d’un
thrombus).

Le sous-endothélium est thrombogène.

2) Les plaquettes
-contenu des plaquettes
-les glycoprotéines sur leurs membranes
3) Les vWF et le fibrinogène
- Dans le plasma
- Dans les granules alpha
- Au niveau des cellules endothéliales
c- Déroulement
C’est un processus à deux étapes : le temps vasculaire et le temps plaquettaire.

1- Temps vasculaire
 Vasoconstriction
 Diminution du calibre de 40 % de sa taille initiale : diminution du débit de
sang
 Facilite l’orientation et l’adhésion des plaquettes
 Nécessite un vaisseau intègre (sans coupure) et normal
2- Temps plaquettaire
 Adhésion

Le vWF sert de colle entre le vaisseau et les plaquettes en se fixant sur GP Ib IX à la membrane.

 Activation
- Changement de forme des plaquettes : sphériques, prolongements
- Libération du contenu des granules : _ substances pro agrégantes
 _acide arachidonique transformé en thromboxane C2
(puissant agrégant)
- Remaniement des phospholipides membranaires (charges)
 Recrutement des plaquettes
Grâce à des récepteurs à la surface des plaquettes
 Agrégation
 Accolement des plaquettes entre elles :
_ En présence de calcium
_Sous l’influence des éléments sécrétés par les plaquettes
_Par l’intermédiaire des molécules de fibrinogène qui se fixent sur la GP IIb IIIa
 L’agrégation devient rapidement irréversible : clou plaquettaire
d- Contrôle de l’activation des plaquettes
 Prostacycline et monoxyde d’azote
 Ecto-ADPase

2) Hémostase secondaire ou coagulation plasmatique

a- Définition
L’hémostase secondaire ou coagulation plasmatique est la deuxième étape de
l’hémostase, faite d’une succession de réactions enzymatiques desquelles résulte la
formation d’un réseau de fibrine permettant de renforcer le clou plaquettaire par le
caillot de fibrine.

b- Les protéines de coagulation

1/ Facteurs de coagulation
- Désignés par des chiffres romains
- Une fois activés, ils portent un suffixe a après leurs noms
- Plusieurs types :
1-a) Zymogènes de sérine protéase
 Enzymes protéolytiques :
- II :prothrombine
- VII :proconvertine
- IX : facteur antihémophilique B
- X :facteur Stuart
- XI :facteur Rosenthal
- XII :facteur Hageman
1-b) Transglutaminase
 Facteur XIII ou facteur stabilisant de la fibrine
1-c ) Cofacteurs
-sans action enzymatique
 V : proaccélérine (cofacteur du X)
 VIII : facteur anti hémophilique A (cofacteur du IX)
 Kininogène de haut poids moléculaire ou KMPH (cofacteur de la prékallicréine : facteur de
contact)

1-d) Substrat final

Fibrinogène :facteur I substrat final des réactions de coagulation
 2/Inhibiteurs physiologiques
a) Inhibiteurs de sérine protéates (SERPINES) : surtout anti thrombine AT
b) Système de la protéine C
Deux protéines plasmatiques : -protéine C (zymogène de sérine protéase)
-protéine S (co facteur)
c) Tissue factor pathway inhibitor (TFPH) : inhibe le facteur tissulaire

3/ Facteur tissulaire(FT) ou thromboplastine tissulaire

- Protéine membranaire
- Synthétisé par les fibroblastes
- Forme une enveloppe hémostatique autour du vaisseau
- Initiateur de la coagulation et récepteur

c- Synthèse des protéines de coagulation

 Synthèse :
- Dans les hépatocytes (sauf FT et TFPI)
- F VIII lié au vWF qui le protège de la dégradation
 Protéines vitamine K dépendantes
Certaines protéines de coagulation nécessitent de la vitamine K pour leur fonctionnement : II, VII, IX,
X, PC, PS.

d- Trois étapes
1) Formation du complexe prothrombinase
Complexe formé par : Xa + Va + Phospholipides + Ca2+
 Activation de X en Xa
Cette activation se fait par deux voies :
 Voie extrinsèque
- Tout commence par une plaie vasculaire.
- Le FT sort à aprtir du sous-endithélium et entre dans le plasma.
- Il se fixe au facteur VII, qui devient FVIIa.
- Le complexe FT-VIIa se forme sous l’action du Ca2+ et active le X en Xa
 Voie intrinsèque
- Tout commence par une plaie vasculaire.
- Le vaisseau blessé met à nu le collagène (surface négative)
- La surface négative active les facteurs de contact : la prékallicréine en présence de KHPM
- La kallicréine active le XII en XIIa
- Le XIIa active le XI en XIa
- Le IXa, le VIIIa, les PL et le Ca2+forment le complexe ténase qui active le X en Xa
NB : le IX est aussi activé par le VIIa.

2) La thrombinoformation
La prothrombine (II) est activée en thrombine IIa par le complexe prothrombinase.

3) La fibrinoformation
  La fibrinogène I (substrat final) soluble et activé en fibrine Ia insoluble(caillot)
par la thrombine IIa ;
 La fibrine est stabilisée par le XIIIa (activé par la thrombine)

 Thrombine (FIIa) :
Enzyme clé du processus de coagulation, multifonctionnelle :
- Au niveau de l’hémostase primaire :
_activation plaquettaire
_stabilisation du clou plaquettaire
_modulation des fonctions des cellules endothéliales
- Au niveau de l’hémostase secondaire :
_ fibrinoformation
_activation du XIII en XIIIa (stabilisation de la fibrine)
_activation du V en Va
_activation du VII en VIIa
- Au niveau de la régulation
_activation du système anticoagulant naturel de la protéine C
- Activation de la PC en PCa

e- Contrôle négatif de la coagulation plasmatique

1) Les serpines
 Liaison anti thrombine aux héparanes sulfates de la paroi vasculaire,
 Inhibition irréversible de : IIa, IXa,Xa, XIa, XIIa.
2) Système PC/PS
- La thrombine devient capable d’activer le PC en PCa,
- Le PCa inactive Va et VIIIa.
3) TFPI
- Le complexe TFPI- Xa-VIIa-FT inhibe l’action du FT.

f- Réparation du vaisseau
Le PDGF (platelet derived growth factor)
- Sécrété par les plaquettes activées (granules alpha)
- Facteur de croissance pour les myocytes lisses et les fibroblastes
- A la fois chimiotactique et mitogène
3) Fibrinolyse
a- Définition
C’est la troisième étape de l’hémostase, servant à dissoudre progressivement la fibrine formée afin
de reperméabiliser le vaisseau.
b- Les facteurs
 Un substrat : caillot de fibrine
 La plasmine
 Des activateurs
 Des inhibiteurs

c- Déroulement
- La fibrine est clivée par la plasmine,
- La plasmine provient de l’activation du plasminogène par :
 Le XIIa
  L’urokinase
 L’activateur tissulaire du plasminogène (t-PA)
- Le t-PA est inhibé par les inhibiteurs de l’activateur du plasminogène :
_PAI (Plasminogen Activator Inhibitor) abondant dans les vaisseaux des organes
_PAI2 présent dans le placenta
_antiplasmine
d-Produits de la dégradation de la fibrine
 Production de produits de dégradation de la fibrine (PDF)
- Poids moléculaire de plus en plus petits au fur et à mesure que se déroule la fibrinolyse,
- Emportés dans le courant circulatoire et épurés au niveau du foie par les macrophages
(cellules de Kupffer)
- Produits précoces ou tardifs monomères ou dimères (surtout les D-dimères)

4) Durée
Hémostase primaire : 3 à 5 minutes
Hémostase secondaire : 5 à 10 minutes
Fibrinolyse : 48 à 72 heures

5) Exploration de l’hémostase
o Hémostase primaire
- Temps de saignement (test in vivo) : reproduction d’une plaie capillaire
- Temps d’occlusion : perforer une membrane artificielle et utiliser les cellules du patient pour
effectuer l’hémostase
- Dosage du fibrinogène, du vWF
- Etude des plaquettes dans l’hémogramme : quantité et morphologie
- Etude fonctionnelle des plaquettes : agrégation des plaquettes

o Hémostase secondaire

_ Globale
- Voie extrinsèque :
Temps de Quick (TQ en sec) - taux de prothrombine (%) – INR (en chiffre)
- Voie intrinsèque :
Temps de céphaline avec activateur ou TCA (en sec)
_ Dosage spécifique des facteurs :
- I, II, V, VII, X
- VIII, IX
_ Dosage des inhibiteurs

o Fibrinolyse
- Temps de lyse des euglobulines
- PDF
- D-Dimères
- Dosage des plasminogènes

IV- Immunohématologie
1-Définition
  Immunologie appliquée à l’hématologie étudiant les antigènes et anticorps en hématologie.
 Immunologie des cellules sanguines
 Immunologie de l’hémostase

2-Introduction à l’immunohématologie
 Début : découverte par Landsteiner(1900) des systèmes de groupe sanguin ABO
 Concept de système d’antigène polymorphe des cellules sanguines
 Sérologie des hématies
 Pratique moderne de la transfusion sanguine
 Sérologie des plaquettes et sérologie des leucocytes : connaissances et progrès plus tardifs

 Notion de groupe :
- Groupe : ensemble de personnes présentant les mêmes caractères
- Groupe sanguin : ensemble d’individus présentant les mêmes antigènes des hématies, des
plaquettes et des leucocytes.

 Applications de l’immunohématologie :
- Principalement par la transfusion sanguine
- Compatibilité foeto-maternelle
- Auto-immunité
A- Groupes sanguins érythrocytaires
1) Groupes sanguins érythrocytaires à antigènes glucidiques
a- Système ABO
Génétique
 Défini par les gènes alléliques A, B et O sur le chromosome 9
 Hérités par paire de façon mendélienne dominante
 Un gène H pour une substance H
 Substance H convertie par des enzymes :
- Glycosyltransférase A en substance A (phénotype A)
- Glycosyltransférase B en substance B (phénotype B)
- Pour le sujet de type O : déficit en glycosyltransférase, substance H non convertie

Phénotype
_ Quatre phénotypes : - O (génotype OO)
-A (génotype AA ou AO)
-B (génotype BB ou BO)
-AB (génotype AB)
-A et B dominants sur O (récessif)
- A et B co-dominants

Antigènes
- A (A1 et A2) et B
- Antigènes de nature glucidique
- Définissent aussi un groupe tissulaire : exprimés à la surface des hématies et d’autres cellules

Anticorps
 Dans le sérum :
- Anticorps dirigé contre les antigènes absents :
_ groupe A : présence d’anticorps anti B
_ groupe B : présence d’anticorps anti A
 _groupe O : présence d’anticorps anti A et anti B
_ groupe AB : absence d’anticorps anti A et anti B
 Les anticorps du système ABO sont de type IgM (ne traversent pas la barrière
placentaire)
 Ils ont deux caractères :
_ naturels (apparus sans contact avec un antigène)
_réguliers (présents de façon constante)

b- Le système Lewis
 Antigènes : -Lea (LE1)
-Leb (LE2)
 Anticorps : _naturels et irréguliers
_de nature IgM
_surtout anti Lea (surtout anti Lea-)

c- Le système P
 Antigènes : Pk, P et P1
Cinq phénotypes dont 2 :
- P1 (75%) : P1, P, traces de Pk
- P (25%) : P et Pk
 Anticorps : anti P et anti P1
Naturels mais irréguliers

2) Systèmes érythrocytaires liés à des antigènes protidiques

a- Système Rhésus
- Très complexe
- Plusieurs antigènes (plus de 45) de nature protidique trouvés uniquement chez les hématies

Antigènes
- Cinq antigènes importants :
_Antigène D (RH1)
_Antigène C (RH2) et c (RH4) (antithétiques)
_Antigène E (RH3) et e (RH5) (antithétiques)
- Autres : Cw
- Antigène D le plus immunogène des antigènes érythrocytaires
 Patients à antigène D (génotype Dd ou DD) : rhésus positif
 Patients sans antigène D (génotype dd) : rhésus négatif
 D n’est pas exprimé
Anticorps
- Les anticorps produits dans le système Rhésus sont :
_ immuns (produits après contact avec l’antigène)
_irréguliers
_de type IgG (petit, formé d’une seule molécule)

b- Système Kell
 Antigènes
- Kell (K ou KEL1) : le plus immunogène, présent à 10% dans la race caucasienne, très rare chez
nous
- Cellano (k ou KEL2)
 Anticorps
-immuns et réguliers
 -anti K surtout
c- Système Duffy
Deux antigènes :
-Fya ou FY1
-Fyb ou FY2
Anticorps (immuns et irréguliers)
- Anti Fya
- Anti Fyb

d- Système Kidd
 Deux antigènes : - Jka ou JK1
-Jkb ou JK2
 Anticorps (immuns et irréguliers) : anti Jka et anti Jkb

e- Système MNS
 Quatre antigènes :
- M ou MNS1
- N ou MNS2
- S ou MNS3
- s ou MNS4
 Anticorps (immuns et irréguliers)
_ anti S +++
_anti s, anti M, anti N

3) Autres systèmes
Plus de 30 sont actuellement connus :
-Lutheran,
-Diego,
-Domsbrock,
-Xga, etc.

4) Répartition
La répartition des antigènes est variable :
-entre les différentes populations
-entre les individus d’une même population

B- Les antigènes leucocytaires

 Antigènes des PNN : HNA (Human Neutrophil Antigen)
 Antigènes monocytaires
 Antigènes HLA (Human Leucocyte Antigen) : Histocompatibilité
_ Spécifiques ou communs aux autres cellules
_les anticorps correspondants

C- Les antigènes plaquettaires

Spécifiques ou communs aux autres cellules :
- Human Platelet Antigen ou HPA : de HP1 à HP15
- Glycoprotéines
_ Anticorps correspondants
3- Transfusion sanguine
1) Définition
Introduction du sang ou d’un produit de sang d’un organisme donneur à un
organisme receveur : -sang
-produit de sang : culot de sang, plasma, culot plaquettaire, culot
leucocytaire

2) Première règle
Ne pas transfuser à une personne les antigènes qu’elle ne possède pas

3) Deuxième règle
Ne pas transfuser l’antigène qui correspond à l’anticorps que le receveur possède

4) Exploration
a- Recherche d’antigènes : phénotypage
b- Recherche d’anticorps : sérologie
4-1) Groupage ABO
- Recherche d’Ag ABO : épreuve globulaire (de Beth Vincent)
_ utilisant des anticorps conus
- Recherche des anticorps anti ABO : épreuve sérique (de Simonin)
_utilisant des hématies connues

Règle du 4 x 2 :
_ 2 techniciens : un pour chaque épreuve (épreuve globulaire et épreuve sérique)
_2 séries de réactifs différentes
_2 méthodes différentes
_2 échantillons prélevés à des moments différents
 Carte de groupe définitive
4-2) Groupage Rhésus D
- Recherche d’Ag D, utilisant des anticorps anti D
Phénotypage :
_recherche des Ag des autres systèmes érythrocytaires :
-soit Rhésus (D,C,E,c,e) – Kell (K,k)
-soit complet ou élargi (intéressant tous les systèmes érythrocytaires)
Recherche des anticorps :
_ recherche des Ac réguliers :épreuve de Simonin (ABO)
_recherche des Ac anti érythrocytaires irréguliers (agglutinines irrégulières) RAI :
autres systèmes
_test à l’antiglobuline ou test de Coombs :
-direct (anticorps fixés sur la membrane)
-indirect (anticorps dans le sérum)
_test de compatibilité entre le sérum du malade et les hématies à transfuser

 Test ultime au lit du malade : cross match

-tester les réactions entre le sang du malade et le sang à transfuser
 -ou tester le sang du malade et le sang à transfuser avec les mêmes antigènes
4-3) Autres cellules
- Phénotypage leucocytaire : HLA
- Recherche des Ac anti leucocytaire : anti HLA

- Phénotypage plaquettaire

- Recherche des Ac anti plaquettes

4-4) Facteurs de coagulation

Recherche des Ac anti facteurs de coagulation (inhibiteurs)
-TCA allongé non corrigé par le plasma normal