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Protocole Eau

Le laboratoire de bactériologie analyse les eaux en utilisant principalement la méthode de filtration sur membrane pour détecter divers germes, notamment les coliformes totaux, fécaux, E. coli, streptocoques fécaux et anaérobies sulfito-réducteurs. Les échantillons sont traités dans des conditions stériles et les résultats sont confirmés par des incubations spécifiques. Le processus implique des étapes précises de stérilisation, de filtration et d'incubation pour assurer des analyses fiables.

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Protocole Eau

Le laboratoire de bactériologie analyse les eaux en utilisant principalement la méthode de filtration sur membrane pour détecter divers germes, notamment les coliformes totaux, fécaux, E. coli, streptocoques fécaux et anaérobies sulfito-réducteurs. Les échantillons sont traités dans des conditions stériles et les résultats sont confirmés par des incubations spécifiques. Le processus implique des étapes précises de stérilisation, de filtration et d'incubation pour assurer des analyses fiables.

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Laboratoire de Bactériologie des eaux et de l'environnement

C’est un laboratoire qui s’occupe des analyses bactériologique des eaux et La principale
méthode utilisée est la filtration sur membrane

1-Materiel utilisé :
Bec benzen ; Eau de javel ; Anse de platine ; Pipette pasteur ; Boite de pétrie ; Bain mari ;
Etuve ;

3-Les germes recherchés


1-Les coliformes totaux : entérobactéries anaérobie (bacilles à Gram -) fermentant le lactose à
30°C

2-Coliformes fécaux : coliforme thermo tolérant fermentant le lactose à 44°C

3-E.coli : coliforme thermo tolérant produisant de l’indole à 44°C

4- Streptocoque fécaux : entérocoques (cocci sphérique a Gram+), se développent à 37°C

8-les ASR : les anaérobies sulfito-réducteur des bacilles à GRAM+ anaérobies strictes et
souvent sporulés

-Le travail effecteur


-Les échantillons sont obtenus dans des conditions stériles et réfrigéré

-Il faut tout d’abord remplir le registre du labo qui a la structure suivante

Numéro operateu Date de demandeu Nature Germes conclusion Observation


d’ordre r réception r des
produits

-Remplir la fiche de laboratoire

Méthode utilisée : Filtration sur membrane

Mode opératoire : Devant un bec-bunsen et sur une paillasse javellisée

-Stérilisation de l'équipement de filtration par flambage et en utilisant l’alcool et mise en


place de la pompe à vide.
-Prendre une membrane filtrante stérile près du bord à l'aide d'une pince stérilisée par
flambage à la flamme et la déposer sur le support du filtre.

- Placer l'entonnoir sur le support et le fixer fermement

-Verser dans chaque entonnoir un volume 100ml de l'échantillon bien homogénéise.

- Faire le vide jusqu'à filtration totale de l'échantillon.

- Retirer l'entonnoir et déposer la membrane filtrante à l'aide d'une pince stérile sur un
milieu adapte bactéries recherchées.

-Les coliformes totaux

-Effectuer une filtration totale de l’échantillon

- Déposer la membrane en la déroulant pour tenir un contact étroit avec le tergitol (TTC)

- Placer les boites de Petrie en position inverse une dure spécifique pour chaque germe

-Placer les boites à l'étuve à 37°C (incuber les boîtes couvercle vers le bas pour que la
condensation s'accumule dans le couvercle

Confirmation de la présence des coliformes fécaux

1-Prendre une colonie des boites positives à l’aide d’une pipette pasteur

-Encemencer dans un milieu héctoen

-Incuber à 37°C

Confirmation de la présence de E.coli

-Prendre une colonie des boites de tergitole positives et la mettre dans un tube contenant
eau peptoné exempte d’indole

2- Streptocoque fécaux :

-Effectuer une filtration totale de l’échantillon

- Déposer la membrane en la déroulant pour tenir un contact étroit avec Slanetz

-incuber à 37°C pendant 24h

6-Recherche des ASR

Mode opératoire :
-Prendre 4 tubes à essai stérile

-Verser 10ml de l’échantillon dans chaque tube

-Ajouter dans chaque tube la gélose viande foie jusqu’à 20 ml pour réaliser l’anaérobiose

-Mettre les tubes dans un bain mari à 30°C pendant 10min

-Après 10 min les mètres sous l’eau pour appliquer un choc thermique et détruire les
formes végétatives

-Incuber à 37°C pendant 48h

Resultat :

-Apparition de quelques tubes noirs

-transférer les tubes vers le service des anaérobies pour confirmer si c’était des ASR

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