UE Modèles d’étude de la cellule à l’animal
Des cultures en deux dimensions (2D) aux cultures 3D
Les organoïdes
Y. HAMMA-KOURBALI
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Principales étapes de l’évolution des modèles 2D vers 3D
Modèle de culture cellulaire 3D
2D 3D
Mini brain
Modèle de culture cellulaire 3D
Différentes techniques et milieux de culture 3D
iPSC
Modèle de culture cellulaire 3D
Différentes techniques et milieux de culture 3D
Modèle de culture cellulaire 3D
• Principe d’auto-organisation (Holtfreter, Gierer..)
• La fabrication des organoïdes (supports, milieux..)
• Différents types de cultures
• Signaux endogènes et exogènes (‘symmetry breaking’)
• Origines des cellules (fœtale, adulte)
• Cellules ES et iPS
Modèle de culture cellulaire 3D
Structure 3D
► Sphéroïdes : modèle relativement simple de culture cellulaire 3D, basé sur
l’agrégation de cellules adhérentes (cellules embryonnaires ou adulte).
► Organoïdes : modèle qui présentent un ordre supérieur permettant une représentation
plus proches des interactions et des réponses cellulaires in vivo complexes.
Raghavan et al., 2015
Sphéroïdes à partir de cellules tumorales
Modèle de culture cellulaire 3D
Structure 3D
► Sphéroïdes : modèle relativement simple de culture cellulaire 3D, basé sur
l’agrégation de cellules adhérentes (cellules embryonnaires ou adulte).
► Organoïdes : modèle qui présentent un ordre supérieur permettant une représentation
plus proches des interactions et des réponses cellulaires in vivo complexes.
Sphéroïdes Organoïdes
Wells et Spence, 2014
Sphéroïdes à partir de cellules souches
Modèle de culture cellulaire 3D
Structure 3D
► Dérivée de
• Cellules souches embryonnaire (CSE) ou
• Cellules souches pluripotentes induites (CSPi ou iPSC) à partir de cellules
somatiques.
► Auto-organisation en structure 3D «self-organized» caractéristique de
l’organe in vivo
► Différenciation en cellules fonctionnelles pour former un tissu
ressemblant à sa contrepartie in vivo.
► Cellules exécutent au moins certaines des fonctions qu’elles exercent
normalement dans cet organe.
Modèle de culture cellulaire 3D
Organoïdes de rétines humaines
Organoïdes intestinaux
Organoïdes intestinaux
Organoïdes intestinaux
Organoïdes intestinaux
Modèle de culture cellulaire 3D
Différentes techniques de culture 3D
Plusieurs milliers Corps embryoïdes Inclusion en matrigel et Passage en
de cellules hES en milieu ‘neural’ milieu de différenciation bioréacteur
Protocole pour organoïdes cérébraux:
4’500 cellules hES, FGF+ Rho Kinase inhibiteur + Héparine
Modèle de culture cellulaire 3D
Différentes techniques de culture 3D
Non-Scaffold Based: Scaffold-free 3D cell culture techniques
• Hanging Drop Microplates
• Spheroid Microplates containing Ultra-Low Attachment (ULA) coating
• Microfluidic 3D Cell Culture
Scaffold Based
• Polymeric Hard Scaffolds
• Biologic Scaffolds
• Micropatterned Surface Microplates
Modèle de culture cellulaire 3D
Différentes techniques de culture 3D
Scaffold-free 3D cell culture techniques
Scaffold-free 3D cell culture techniques- from S.Breslin et l.,”Three-
dimensional cell culture: the missing link in drug discovery”
Modèle de culture cellulaire 3D
Différentes techniques de culture 3D
Scaffold Based 3D Hydrogel Coating Protocol
Modèle de culture cellulaire 3D
Différentes techniques de culture 3D
Scaffold-based 3D cell culture technique
Hydrogels scaffolds
Ceramic scaffolds
Fabrication process and microscopic view
of a composite scaffold (from pubs.rsc.org)
Modèle de culture cellulaire 3D
Différentes techniques de culture 3D
Scaffold-free 3D cell culture techniques
Modèle de culture cellulaire 3D
3D culture models exhibit many features of tumor microenvironement
Gurski et al, 2010
Modèle de culture cellulaire 3D
3D culture models exhibit many features of tumor microenvironement
Gurski et al, 2010
Modèle de culture cellulaire 3D
Potentiel thérapeutique
Modèle de culture cellulaire 3D
Potentiel thérapeutique
Modèle de culture cellulaire 3D
microfluidic 3D cell culture : Organs-on-chips
Organe sur puce
Modèle de culture cellulaire 3D
microfluidic 3D cell culture : Organs-on-chips
Organe sur puce
Modèle de culture cellulaire 3D
microfluidic 3D cell culture : Organs-on-chips
Organe sur puce
Modèle de culture cellulaire 3D
Modèles 3D de reins
Journal of Molecular Medicine, Review 2020
Conclusions
➢ Les modèles in vitro sont incontournables pour étudier les
mécanismes cellulaires et moléculaires du vivant.
➢ Les modèles in vitro sont incontournables pour l’identification de
nouvelles molécules thérapeutiques et notamment anticancéreuses.
➢ Les organoïdes : un énorme potentiel en biologie et en médecine.
➢ Les organoïdes sont essentiels pour modéliser les processus
embryologiques ainsi que les maladies et pour tester des
médicaments.
➢ Réduire les expériences sur l’animal.
