Révision TP et type de questions d’examen TP
1- Donnez le Principe de la Réduction de la liqueur de Fehling :
La réaction à la liqueur de Fehling permet la mise en évidence de certains petits glucides solubles
(maltose et glucose par exemple) par la formation d’un précipité rouge brique (orange) à chaud.
En milieu alcalin et à chaud, les oses et dans certaines conditions les polyholosides peuvent s’oxyder et en
même temps réduire des substances telles que les sels métalliques. On parle alors de pouvoir réducteur des
sucres.
2 -Donnez le Principe d’ Hydrolyse enzymatique de L’amidon
L'amylase dégrade l'amidon en ses monomères. Cette hydrolyse plus douce se réalise à une température
compatible avec la vie et ne libère pas exactement les mêmes produits.
3-Donnez le protocole expérimental d’ Hydrolyse enzymatique de L’amidon
1) Préparer 100 ml de solution d'amidon à 1 %.
2) Préparer dans un panier deux séries de 8 tubes à essais avec:
- 5 ml de solution,
- 2 ml de solution d'amylase.
3) Placer le panier au bain marie à 37°C.
4) Toutes les 5 min, prélever un tube de chaque série et faire:
- Un test au lugol : ajouter quelques gouttes de Lugol ;
- Un test à la liqueur de Fehling : Ajouter 2 ml de liqueur de Fehling. Replacer au bain-marie.
5) Témoins initiaux : faire ces deux réactions sur 2 tubes non placés au bain-marie (T0).
3 -Donnez le Principe de la Mise en évidence d'une activité amylasique dans la salive
L’ amylase est une enzyme qui permet la digestion partielle de l’amidon et du glycogène, en hydrolysant
les liaisons 1-4 glycosidiques. Elle est sécrétée par les glandes salivaires. En présence d'une amylase,
l'amidon est hydrolysé et sa disparition peut être visualisée par la réaction au lugol.
4- Donnez protocole expérimental de la mise en évidence d'une activité amylasique dans la
salive
1) Préparer une solution contenante 1 g de gélose, 1 g d'amidon soluble et 100 ml d'eau.
2) Chauffer sur une plaque chauffante, en remuant avec un agitateur, jusqu'à ce que la solution devienne limpide.
3) Verser la solution dans les boîtes de Pétri et laisser refroidir.
4) Préparer des morceaux de papier filtre humectés avec :
- de l'eau (témoin),
- la solution d'amylase,
- de la salive.
5) Placer les papiers sur la gélose solidifiée, refermer les boîtes et attendre 10 min.
6) Enlever les papiers, recouvrir la boîte avec du lugol dilué et observer.
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5-Donnez le Principe de la Mise en évidence d'une activité amylasique chez les végétaux
En présence d'une amylase, l'amidon est hydrolysé et sa disparition peut être visualisée par la réaction
au Lugol.
6- Donnez protocole expérimental de la Mise en évidence d'une activité amylasique chez
les végétaux
1) Préparer les boîtes de Pétri, avec 1 % de gélose et 1 % d'amidon soluble.
2) Sectionner des grains de maïs longitudinalement (coupe sagittale), la section devant être la plus nette possible.
3) Humecter légèrement la section et placer les demi-grains sur la gélose, en prenant soin que la surface de section
adhère bien à la surface de la gélose.
4) Réaliser des témoins (papier humide, papier imbibé de salive, demi-grain de Maïs bouilli pendant 2 min,
5) Attendre 15 à 30 min.
6) Enlever délicatement les échantillons sans les faire glisser sur la gélose.
7) Recouvrir complètement la gélose avec du Lugol dilué.
8) Observer
7- Donnez le Principe de dosage de l’enzyme alpha amylase contenue dans le
médicament ''MAXILASE''
• L’enzyme alpha amylase contenue dans le médicament « Maxilase » catalyse la réaction suivante :
• Le produit de la réaction enzymatique (Maltose) est un sucre réducteur qui peut être dosé par le réactif
(DNS) à 540 nm.
• La réaction avec le DNS permet de déterminer la teneur en sucres réducteurs libres présents dans les
échantillons à doser.
• Le DNS de couleur jaune, en présence de sucres réducteurs et à chaud, se transforme en une forme
réduite (acide 3-amino-5-nitrosalicylique) d’une couleur rouge orangé , dosable par spectrophotométrie à 540
nm.
8- Donnez le Protocole de l’Etude cinétique de l’enzyme alpha amylase contenue dans le
médicament ''MAXILASE''
1- Etablir la Courbe d’étalonnage du maltose (5mM)
2- Détermination de l’activité enzymatique , et on déterminant la quantité du maltose produite
par l’enzyme en se référant à la Courbe d’étalonnage du maltose (5mM)
3- Etude de concentration de substrat en travaillant avec 4 concentration croissantes de
substrat (amidon) et des volumes constants en enzyme et en DNS et un temps de réaction
de l’enzyme sur le substrat constant .
4- Etude de concentration d’enzyme en travaillant avec 4 volumes décroissants d’enzyme et
des concentration constantes en Substrat et en DNS et un temps de réaction de l’enzyme
sur le substrat constant .
5- Etude du temps de la réaction, en travaillant avec un temps de réaction de l’enzyme sur le
substrat qui augmente de 2 mn, et des volumes constants en enzyme et en Substrat et en
DNS.
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9- Comment interpréter les résultats des expériences de l’effet de la concentration en substrat,
en enzyme, et du temps de la réaction ?
La lecture de l’absorption renseigne sur la quantité du maltose produite par l’enzyme, est donc
sur l’activité de l’enzyme :
- Si l’absorption augmente avec l’augmentation de la concentration de l’élément testé
(Substrat ou enzyme) ou du temps, ça veut dire que cela un effet positif sur l’activité
enzymatique.
- Si l’absorption n’augmente pas, donc l’augmentation de la concentration de l’élément
testé (Substrat ou enzyme) ou du temps n’ont pas d’effet sur l’activité enzymatique,
- Si l’absorption diminue avec l’augmentation de la concentration de l’élément testé
(Substrat ou enzyme) ou du temps ça veut dire que cela a un effet négatif sur l’activité
enzymatique.
Bon courage
