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Frottis sanguin et coloration MGG

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Université Med Boudiaf -M'Sila Matière : BIOLOGIE CELLULAIRE

Faculté des Sciences /1ère TC-SNV 2022-2023 Responsable du Matière : LADJAL.S

TP N°: 04
Etude microscopique de la cellule animale

PARTIE .II DE TP : Le frottis sanguin et coloration MGG

3. REALISATION ET COLORATION D’UN FROTTIS SANGUIN


Introduction : Le sang est un liquide biologique vital qui circule continuellement dans les vaisseaux sanguins et
le cœur.
 Érythrocytes ou hématies ou globules rouges (à peu près 99 %). Elles ne possèdent ni noyau ni organites chez
les Mammifères. Elles contiennent l’hémoglobine (1⁄3 des composants du cytoplasme)
 Leucocytes ou globules blancs (0,2 %), qui font partie du système immunitaire et permettent la destruction des
agents infectieux.
o Les granulocytes ou polynucléaires (neutrophiles, éosinophiles, basophiles) ;
o Les lymphocytes ;
o Les monocytes.

 Thrombocytes ou plaquettes (0,6 - 1,0 %), responsables de la formation du clou plaquettaire précédant la
coagulation sanguine. Ils ne contiennent pas de noyau

Ces éléments figurés constituent 45 % du sang. Les 55 % restants constituent le plasma sanguin, un liquide jaunâtre
qui est la phase liquide dans laquelle sont en suspension les éléments figurés.

3.1 Prélèvement :
 Déposer une goutte de sang à 1cm de l’extrémité de la lame
 Faire glisser la seconde lame à étalement inclinée de 45° vers la goutte de sang jusqu’à la toucher
 Laisser s’étaler la goutte de sang le long de l’arête de la lame à étalement
 Glisser la lame en tirant ou en poussant (tout le sang doit être étalé avant d’atteindre l’autre extrémité de la lame) ;
le mouvement doit être rapide, régulier, sans trop appuyer, en maintenant la même inclinaison
 Sécher le frottis par agitation dans l’air
3.2 Coloration par MGG (May-Grunwald Geimsa) :
La coloration de May-Grünwald Giemsa, est une méthode de coloration utilisée notamment
en hématologie pour différencier les cellules du sang lors des préparations cellulaires (cytologie).
 Principe de la coloration : Repose sur l'action combinée de deux colorants neutres :

• Le May-Grünwald, contenant un colorant acide, l'éosine, et un colorant basique, le bleu de méthylène.

 Le Giemsa, contenant lui aussi de l'éosine, et un colorant basique, l'azur de méthylène

Ces deux colorants sont en solution dans l'alcool méthylique sous forme inactive. Lors de l'addition d'eau, les
sels précipitent (éosinate de méthylène et azur de méthylène) et se fixent sélectivement sur les constituants cellulaires.

 Les constituants cellulaires acides, fixeront électivement les colorants basiques. Ces éléments sont qualifiés
de basophiles (ADN, cytoplasme des lymphocytes riche en ARN).

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Université Med Boudiaf -M'Sila Matière : BIOLOGIE CELLULAIRE
Faculté des Sciences /1ère TC-SNV 2022-2023 Responsable du Matière : LADJAL.S

 Les constituants cellulaires basiques, fixeront électivement les colorants acides. Ces éléments sont qualifiés
d'acidophiles ou d'éosinophiles (cas de l'hémoglobine, protéine basique contenue dans les hématies et des
granulations des granulocytes éosinophiles).
 Les constituants fixant les deux types de colorants sont dits neutrophiles.
3.3 Résultat de coloration :

 Les noyaux sont de bleu à violet-noir


 Les hématies sont beige-rosé,
 les granulations des granulocytes éosinophiles sont orangées.
 Les granulations des granulocytes neutrophiles sont violet-lilas.
 Les granulations des granulocytes basophiles sont bleu-noir
 Les granulations des grands lymphocytes sont pourpres.
3.4 Technique de coloration de MGG :
Etapes Manipulation Durée d’action
1. Coloration au May-Grünwald  Placer la lame du frottis sur les barrettes de support 3 minutes
horizontal d’un bac de coloration
 Recouvrir le frottis de 15 gouttes de colorant
 Ajouter 15 gouttes d’eau distillée 2 minutes
2. Coloration au Giemsa  Eliminer le May-Grünwald sous un faible courant 10 minutes
d’eau distillée
 Déposer 2 gouttes de Giemsa, puis 20 gouttes
d’eau distillée
3. Séchage  Rincer par un faible jet d’eau distillée Au moins
 Laisser sécher la lame à l’air, en position inclinée, 5 minutes
après avoir essuyé la face inférieure avec du papier
essuie-tout

3.5 Observation : Dessiner, mettre un titre et une légende et décrivez vos observations

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