Résumé détaillé : Les Propriétés Fondamentales des Cellules et Leurs Méthodes d'Étude
1. Classification des cellules :
- Cellules procaryotes : Ce sont des cellules primitives, sans noyau défini. Leur ADN est
libre dans le cytoplasme sous forme d’un chromosome circulaire. Elles sont petites (0,5
à 2 µm) et ne contiennent pas d’organites. Exemples : bactéries, archéobactéries.
- Cellules eucaryotes : Plus évoluées, elles possèdent un noyau entouré d’une
membrane nucléaire contenant l’ADN sous forme de chromosomes linéaires. Elles
contiennent des organites spécialisés comme les mitochondries, l’appareil de Golgi, le
réticulum endoplasmique, etc.
- Acaryotes : Structures sans noyau ni organites, comme les virus, qui sont incapables
de se reproduire seuls. Ils contiennent un acide nucléique (ADN ou ARN), une capside,
et parfois une enveloppe lipidique.
2. Comparaison entre procaryotes et eucaryotes :
- Taille : les procaryotes sont plus petits.
- Noyau : absent chez les procaryotes, présent chez les eucaryotes.
- Organisation de l’ADN : circulaire chez les procaryotes, linéaire et organisé en
chromosomes chez les eucaryotes.
- Organites : absents chez les procaryotes, nombreux chez les eucaryotes.
- Division cellulaire : scissiparité chez les procaryotes, mitose et méiose chez les
eucaryotes.
3. Différences entre cellules animales et végétales :
- Cellules animales : présence de centrioles, lysosomes ; absence de chloroplastes et
paroi cellulosique.
- Cellules végétales : paroi cellulosique, chloroplastes, grande vacuole centrale ; pas de
centrioles.
4. Techniques d’étude des cellules :
a) Microscopie optique :
- Utilise la lumière pour visualiser les structures.
- Grossissement max ~1000x, résolution de 0,2 µm.
- Utilisée pour observer cellules, tissus vivants, colorations.
b) Microscopie électronique :
- Utilise des électrons, meilleure résolution (~0,1 nm).
- MET : image 2D, traverse l’échantillon.
- MEB : image 3D, balaie la surface de l’échantillon.
5. Préparation des échantillons :
- Prélèvement : frottis, biopsie, organes complets.
- Fixation : tue les cellules en conservant la structure (formol, liquide de Bouin).
- Déshydratation : élimine l’eau par bains d’alcool.
- Inclusion : paraffine ou résine pour rigidifier l’échantillon.
- Coupe : microtome pour préparer des tranches fines.
- Déparaffinage et réhydratation : rend l’échantillon prêt pour la coloration.
6. Coloration :
- Permet de distinguer les différents composants cellulaires.
- Exemples : noyau (bleu de méthylène), mitochondrie (vert de Janus B), ADN (vert de
méthyle), ARN (rose par pyronine).
7. Techniques spéciales :
a) Cryofracture et cryodécapage : technique de fracture sur tissu congelé pour observer
la surface interne.
b) Méthodes cytochimiques :
- Spécifiques (ex : méthode de Feulgen pour ADN).
- Non spécifiques (ex : protéines, glucides).
c) Immunocytochimie :
- Localisation d’antigènes avec anticorps marqués (fluorochromes ou enzymes).
- Réactions directes ou indirectes selon le marquage.
Ces méthodes permettent une exploration approfondie des structures et fonctions
cellulaires, essentielles en biologie et médecine.
Résumé sur la Centrifugation et la Chromatographie
1. Centrifugation
La centrifugation est une technique permettant de séparer les constituants d'un mélange en fonction
de leur densité.
Elle est couramment utilisée en biochimie pour isoler des cellules, des organites et des
macromolécules.
Types de centrifugation :
- Centrifugation différentielle
Cette méthode consiste à séparer les constituants d'un mélange en plusieurs étapes successives
de centrifugation, en augmentant progressivement la vitesse.
Les éléments les plus lourds sédimentent en premier, tandis que les plus légers restent en
suspension et sont récupérés dans le surnageant.
- Centrifugation en gradient de densité
Un gradient de concentration est utilisé pour améliorer la séparation.
Chaque composant migre à une vitesse déterminée par sa densité, permettant une séparation plus
précise des organites cellulaires.
- Centrifugation zonale
Cette technique permet de séparer les particules selon leur coefficient de sédimentation.
Les macromolécules se déplacent dans un gradient de densité et se regroupent en zones distinctes,
facilitant leur récupération.
2. Chromatographie
La chromatographie est une méthode de séparation qui repose sur la distribution d'un soluté entre
une phase mobile (liquide ou gazeuse) et une phase stationnaire (solide ou liquide fixée).
Types de chromatographie :
- Chromatographie en phase liquide (CPL)
Elle utilise un solvant liquide comme phase mobile et une colonne contenant une phase
stationnaire.
C'est une technique efficace pour séparer et analyser des molécules en solution.
- Chromatographie sur couche mince (CCM)
Cette méthode repose sur la migration des composants d'un mélange à travers une fine couche de
matériau adsorbant (silice, alumine).
Elle est simple et rapide, souvent utilisée pour des tests préliminaires.
- Chromatographie en phase gazeuse (CPG)
Dans cette technique, la phase mobile est un gaz inerte (comme l'hélium), et la phase stationnaire
est fixée à l'intérieur d'une colonne.
Elle est particulièrement utile pour l'analyse des substances volatiles et thermiquement stables.
Applications
Ces techniques sont essentielles en biochimie, en médecine et en industrie pharmaceutique pour
l'analyse, la purification et la production de composés chimiques et biologiques.
Résumé : Culture cellulaire
La culture cellulaire est une technique de laboratoire permettant de maintenir et de
faire proliférer des cellules vivantes in vitro. Elle est essentielle pour étudier la biologie
cellulaire, produire des molécules thérapeutiques ou effectuer des recherches
médicales.
1. Objectifs de la culture cellulaire :
- Maintenir des cellules vivantes dans des conditions artificielles.
- Étudier leurs propriétés ou les multiplier pour des applications variées.
2. Conditions nécessaires :
- Environnement stérile (hottes, outils désinfectés).
- Incubateur assurant température, humidité, CO₂.
- Milieu de culture spécifique au type cellulaire.
3. Types de cellules mises en culture :
- Micro-organismes (bactéries, levures).
- Cellules saines issues de biopsies (culture primaire).
- Cellules immortelles (lignées cellulaires cancéreuses, modifiées ou cellules souches).
- Fragments d’organes.
4. Types de cultures cellulaires :
- Culture primaire : cellules directement prélevées et cultivées. Avantages : proches du
comportement naturel. Inconvénients : durée de vie courte, mélange cellulaire.
- Culture secondaire : obtenue par repiquage d'une culture primaire.
- Culture de lignée cellulaire : cellules immortelles se divisant indéfiniment.
5. Applications de la culture cellulaire :
- Étude de la physiologie cellulaire (cycle, métabolisme, expression génique).
- Recherche biomédicale : greffes, thérapie génique, dépistage génétique.
- Industrie pharmaceutique : tests de médicaments, production d’hormones, vaccins,
anticorps.
6. Origine des cellules :
- Cellules libres (sang, moelle osseuse) : cultivées en suspension.
- Cellules de tissus solides : nécessitent un support pour l’ancrage (explant ou
dissociation enzymatique).
La culture cellulaire reste un outil fondamental de la recherche et des applications
biomédicales modernes.
