REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE

MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR

ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

UNIVERSITE DES SCIENCES ET DE LA TECHNOLOGIE

HOUARI BOUMEDIENE

FACULTE DES SCIENCES BIOLOGIQUES

THESE
PRESENTEE A L’ U.S.T.H.B POUR L’OBTENTION DU DIPLOME DE
MAGISTER EN BIOLOGIE

OPTION : ECOBIOLOGIE ET AMELIORATION VEGETALES

THEME /

ESSAIS D’ASSAINISSEMENT DE TROIS VARIETES

AUTOCHTONES DE VIGNE DE TABLE (Vitis vinifera L.)
ATTEINTES DE VIROSES, PAR CULTURE IN VITRO
DE MERISTEMES.

PRESENTEE PAR : MELLE AMEDJKOUH HAFIDA

SOUTENUE LE : 04 JUILET 2004

DEVANT LE JURY D’EXAMEN

MELLE F. AID PROFESSEUR / USTHB PRESIDENT

MME N. BOUGUEDOURA PROFESSEUR / USTHB DIRECTEUR DE THESE
MELLE D. MORSLI MAITRE ASSISTANTE/ USTHB CO-DIRECTEUR DE THESE
MME H. OUZNADJI MAITRE DE CONFERENCES / USTHB EXAMINATEUR
MME F.Z. CHAOUCH CHARGEE DE COURS / INES BLIDA EXAMINATEUR
MR B. AOUANE CHEF DE DEPARTEMENT /ITAFV INVITE
SOMMAIRE

SOMMAIRE

Page
INTRODUCTION GENERALE…………………………………………………………. 01

PREMIERE PARTIE : GENERALITES

CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE

1/ SYSTEMATIQUE..……………………………………………………………... 03
2/ ORIGINE DE LA VIGNE……………………………………………………………. 05
3/ CARACTERES BOTANIQUES…………………………………………………….. 05
3.1/ morphologie de la vigne ……………………………………………………………. 05
3.1.1/ organes végétatifs………………………………………………………………. 05
[Link]/ les racines………………………………………………………………….. 05
[Link]/ la tige………………………………………………………………………. 05
[Link]/ les feuilles…………………………………………………………………. 07
[Link]/ les vrilles…………………………………………………………………… 08
[Link]/ les bourgeons……………………………………………………………… 08
3.1.2/ organes reproducteurs………………………………………………………….. 08
[Link]/ les fleurs et inflorescence………………………………………………… 08
[Link]/ le fruit : la grappe et les baies……………………………………………. 10
3.2/ Le cycle de développement de la vigne…………………………………………… 11
3.2.1/ la phase végétative………………………………………………………… 11
[Link]/ les pleurs………………………………………………………………….. 11
[Link]/ Le débourrement…………………………………………………….. 11
[Link]/ La croissance des pousses…………………………………………… 11
[Link]/ L’aoûtement…………………………………….. ………………….. 11
[Link]/ La chute des feuilles………………………………………………… 12
3.2.2/ la phase reproductrice………………………………………………………… 12
[Link]/ L’induction florale et l’initiation florale……………………………. 12
[Link]/ Floraison et fécondation……………………………………. ……… 12
[Link]/ La nouaison…………………………………………………………. 12
[Link]/ La véraison………………………………………………………….. 13
[Link]/ La maturation……………………………………………….. ……… 13
4/ MULTIPLICATION DE LA VIGNE………………………………………………. 16
4.1/ Multiplication par voie sexuée ou semis………………………………………. 16
4.2/ multiplication par voie asexuée ou végétative………………………………… 16
4.2.1/ bouturage………………………………………………………………… . 16
4.2.2/ marcottage………………………………………………………………………. 16
4.2.3/ greffage…………………………………………………………………… .. 16
4.3/ multiplication par culture in vitro…………………………………………………… 17
SOMMAIRE

Page

5/ EXIGENCES DE LA VIGNE…………………………………………………….. 18
5.1/ facteur du milieu………………………………………………………………… 18
5.1.1/ nature du sol………………………………………………………………… 18
5.1.2/ la température………………………………………………………………. 18
5.1.3/ la lumière…………………………………………………………………… 18
5.1.4/ l’eau………………………………………………………………………… 18
5.2/ facteurs culturaux……………………………………………………………….. 19
5.2.1/ entretien du sol……………………………………………………………… 19
5.2.2/ la taille………………………………………………………………………. 19
5.2.3/ fertilisation et alimentation minérale……………………………………….. 19
5.2.4/ protection du vignoble……………………………………………………… 20
6/ répartition…………………………………………………………………………. 20
6.1/ la viticulture dans le monde…………………………………………………….. 20
6.2/ la viticulture en Algérie…………………………………………………………. 21
6.2.1/ origine ……………………………………………………………………… 21
6.2.2/ de 1830 à 1962 …………………………………………………………….. 21
6.2.3/ après l’indépendance…………………………………….. ……………….. 21

CHAPITRE II : LES MALADIES VIRALES DE LA VIGNE

1/ GENERALITES SUR LES MALADIES VIRALES DES PLANTES………………… 23

2/ CARACTERES MORPHOLOGIQUES ET PROPRIETES DES VIRUS DES PLANTES 23
3/ LES MALADIES VIRALES CHEZ LA VIGNE……………………………………… 24
3.1/ virus du court noué (GFLV)………………… …………………………………. 26
3.1.1/ Symptômes…………………………………………………………………. 26
[Link]./ Les malformations ou court-noué proprement dit………….. ……….. 26
[Link]/ La mosaïque jaune ou panachure ordinaire……………………………. 27
[Link]/ La panachure réticulée ………………………………………………… 27
[Link]/ Nouvelle forme symptomatologique du court noué…………………… 27
[Link]/ Symptômes internes…………………………………………………… 27
3.1.2/ Agent causal et mode de transmission du virus……………………………. 27
3.1.3/ Les effets de la maladie sur les cultures ……………………………………. 30
3.2/ Virus de l’enroulement foliaire (GLRaV)………………………………………. 30
3.2.1/ symptômes …………………………………………………………………. 30
3.2.2/ agent causal et mode de transmission du virus de l’enroulement foliaire …. 30
3.2.3/ Les effets de la maladie sur les cultures………………..…………………… 31
3.3/ La marbrure ou Fleck…………………………………………………………… 31
3.3.1/ Symptômes…………………………………………………………………. 31
3.3.2/ Agent causal et mode de transmission…………………………………….. 32
3.3.3/ Effet de la maladie sur les cultures………………………………………… 32
SOMMAIRE

Page

CHAPITRE III :
™ METHODES DE DIAGNOSTIC
™ METHODES DE LUTTE

1/ METHODE DE DIAGNOSTIC…………………………………………………….. 33
1.1/ détection par symptomatologie au champ…………………………………. 33
1.2/ Détection par indexage …………………………………………………… 33
1.2.1/ l’inoculation mécanique sur indicateurs herbacés…………………….. 33
1.2.2/ l’indexage par greffage sur indicateurs ligneux………………………. 34
1.2.3/ le greffage en vert ……………………………………………………. 35
1.2.4/ L’indexage par microgreffage de tige in vitro………………………… 35
1.3/ détection par la sérologie………………………………………………….. 35
1.3.1/ Le test Elisa …………………………………………………………… 35
1.3.2/ Détection par la technique d’immuno-électromicroscopie. …………… 36
1.4/ Détection par électrophorèse ………………………………………………. 36
1.5/ Détection basée sur l’hybridation des acides nucléiques…………………… 36
2/ METHODES DE LUTTE…………………………………………………………… 37
2.1/ Sélection sanitaire………………………………………………………….. 37
2.2/ La lutte contre les vecteurs de virus……………………………………….. 38
2.1.1/ la lutte contre les nématodes…………………………………………… 38
2.1.2/ La lutte contre les cochenilles………………………………………….. 38
2.3/ La prémunition…………………………………………………………….. 38
2.4/La recherche de porte-greffes résistants…………………………………… 39
2.5/ Résistance induite par transfert de gènes………………………………….. 39

CHAPITRE IV : LA CULTURE IN VITRO

1/ INTRODUCTION………… ………………………………………………….. 40
2/ HISTORIQUE ………………………………………………. ………………. 40
3/ TECHNIQUES DE MULTIPLICATION PAR CULTURE IN VITRO……………… 41
3.1/ la micropropagation…………………………………………………………. 41
3.1.1/ multiplication par bourgeonnement axillaire…………………………… 41
3.1.2/ multiplication par bourgeonnement adventif…………………………… 41
3.2/ l’embryogenèse somatique…………………………………………….. ……….. 42
3.3/ la culture de méristèmes…………………………………………………….. 42
3.3.1/problèmes posés par la culture in vitro………………………………………. 42
4/ LES CONDITIONS DE CULTURE DES TISSUS IN VITRO………………………… 43
4.1/ le milieu de culture …………………………………………………………. 43
4.1.1/ les éléments minéraux…………………………………………………… 43
4.1.2/ les éléments organiques…………………………………………………. 44
4.1.3/ les régulateurs de croissance…………………………………………….. 44
4.2/ les facteurs physiques………………………………………………………… 46
4.2.1/ les besoins en lumière…………………………………………………… 46
SOMMAIRE

Page

4.2.2/ l’influence de la température……………………………………………. 46

5/ CULTURE DE TISSUS, PHYTOPATHOLOGIE ET ASSAINISSEMENT
DE LA VIGNE……………………………………………………………………….. 46
5.1 la culture in vitro de méristèmes……………………………………………… 46
5.2/ la thermothérapie…………………………………………………………….. 47
5.3/ microgreffage d’apex………………………………………………………… 47
5.4/ cultures des cellules isolées………………………………………………….. 48
5.5/ utilisation des inhibiteurs de la réplication virale……………………………. 48

DEUXIEME PARTIE : MATERIEL ET METHODES

1/ MATERIEL VEGETAL……………………………………………………………… 49
1.1/ origine du matériel végétal………………………………… ………………. 49
1.2/ caractéristiques des variétés étudiées……………………………………….. 49
1.2.1/ la variété Ahmer bou amer……………………………………………… 49
1.2.2/ la variété Valensi ou Mokrani………………………………………….. 49
1.2.3/ Muscat de Cherchell……………………………………………………. 50
1.3/ Préparation du matériel végétal……………………………………………… 51
1.3.1/ Prélèvement et conservation du bois………………………………….… 51
1.3.2/ stratification……………………………………………………………… 51
1.3.3/ forçage sous serre…………………………………… …………………. 51
1.3.4/ défoliation ……………………………………………………………… 51
2/ METHODES EXPERIMENTALES……………………………………………… 53
2.1/ méthodes de détection des viroses…………………………………………… 53
2.1.1/ méthodes d’observation des symptômes………………………………… 53
2.1.2/ méthode biologique : Indexage par inoculation mécanique sur 53
indicateurs herbacés …………………………………………………….. 53
[Link]/ principe………………………………………………….. ………… 53
[Link]/ préparation des plantes indicatrices…………………… ………….. 53
[Link]/ préparation de l’inoculum……………………………. …………… 53
[Link]/ mode opératoire ……………………………………………………. 54
2.1.3/ méthode sérologique …………………………………….. …………….. 55
[Link]/ matériels nécessaires au test Elisa……………. …………………… 55
3 matériel végétal …………………………………………………………… 55
3 Les sérums utilisés ………………………………………………………… 55
[Link]/ principe du test Elisa………………………………………………… 55
[Link]/ mode opératoire …………………………………………………….. 55
3 fixation des anticorps sur la paroi de la plaque………………. ……….. 55
3 préparation de l’antigène………………………………………. ………… 56
3 lavage des plaques …………………………………………………………. 56
3 fixation des antigènes aux anticorps………………………… ………… 56
SOMMAIRE

Page

3 Fixation des anticorps conjugués à enzyme sur les antigènes……….. 56

3 Dépôt du substrat………………………………………………………. 56
3 Lecture des résultats…………………………………………………… 57
2.2/ méthodes d’assainissement et de régénération par culture in vitro
de méristèmes…………………………………………………………….. 59
2.2.1/technique de stérilisation…………………………………. …………. 59
[Link]/ stérilisation du matériel du laboratoire…………………………. 59
[Link]/ stérilisation des milieux de culture……………………………… 59
[Link]/ stérilisation du matériel végétal………………………….. ……. 59
2.2.2/ milieux de culture…………………………………………….. ……… 60
[Link]/ milieu de culture d’initiation……………………………………. 60
[Link]/ milieu de multiplication ………………………………. ………. 61
[Link]/ milieu d’allongement et d’enracinement :……………………… 61
[Link]/ phase d’acclimatation………………………………………….. . 61
2.2.3/ autres facteurs étudiés…………………………………………… ….. 61
[Link] type d’explant méristématique utilisé……………………………. 61
[Link]/ effet de la nature liquide ou solide du milieu d’initiation…… …. 63
[Link]/ influence de la température du jour………………… ………….. 63
2.2.4/ contrôle de l’état sanitaire des vitroplants obtenus….. ………………. 63
3/ TRAITEMENT STATISTIQUE DES DONNEES……………………… ……….. 63
.

TROISIEME PARTIE : RESULTATS ET DISCUSSION

1/ DETECTION DES VIROSES…………………………………………………………. 64

1.1/observation directe des symptômes …………….. ……………………………… 64
1.1.1/ symptômes du court noué…………………………………. …………… 64
1.1.2/ Symptômes de la marbrure………………………………………………. 64
64
1.1.3/ Symptômes de l’enroulement foliaire ………………………………………….
64
1.2/ indexage par inoculation mécanique sur indicateurs herbacés……………….
69
1.3/ méthode sérologique : résultats du test Elisa…………………… ……….. 74
1.3.1/ résultat du test Elisa pour les trois variétés de vigne :…………………… 74
1.3.2/ résultat du test Elisa pour les plantes indicatrices……………………… 75
2/ ASSAINISSEMENT ET REGENERATION PAR CULTURE IN VITRO
DE MERISTEMES……………………………………………………………………. 76
2.1/ la phase d’initiation et de croissance ………………………. . …………. 76
2.1.1/ stérilisation du matériel végétal ................................................................ 76
2.1.2/ type d’explant méristématique utilisé……………………………………. 79
2.1.3/ effet de la nature solide ou liquide du milieu de culture initial……….. 80
2.1.4/ influence de la température du jour………………………… ………………. 81
2.1.5/ influence de la concentration en substance de croissance……………….. 82
SOMMAIRE

Page

[Link]/ Milieu MURASHIGE et SKOOG (1962)………………………….. 82

[Link]/ Milieu CHEE et POOL (1987)………………………… …………. 84
2.1.6/ influence des milieux de base sur la croissance des méristèmes……….. 86
2.2/ la phase de multiplication …………………………………………………… 89
2.2.1/effet du génotype sur le taux de multiplication…………… ……………. 90
2.3/ phase d’allongement et d’enracinement…………………………… ………... 92
2.4/ phase d’acclimatation………………………………………………………. . 95
3/ CONTROLE DE L’ETAT SANITAIRE DES VITROPLANTS OBTENUS………. 99
DISCUSSIONS ET CONCLUSIONS GENERALES ……………………………….. 101
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES………………………………………….. … 105
ANNEXES…………………………………………………………………………. 121
INTRODUCTION GENERALE -1-

INTRODUCTION GENERALE

La vigne (Vitis vinifera L.) représente sans aucun doute l’une des cultures les plus
importantes et les plus répandues dans les régions à climat tempéré et elle est d’une
importance économique majeure surtout dans le bassin méditerranéen.
En Algérie, comme dans l’ensemble des pays viticoles, la vigne occupe une place
importante sur le plan économique. En effet, actuellement le vignoble algérien occupe
une superficie de 81 550 hectares, soit 19% de la superficie agricole.

Cependant, comme beaucoup d’autres cultures, la vigne est sujette aux attaques d’un
grand nombre de parasites et pathogènes, parmi lesquels les agents infectieux viraux
causant de grandes pertes et menaçant la survie d’un vignoble entier (BOVEY et al.,
1986).

Ces maladies sont transmises par le matériel de multiplication (greffon et porte greffe)
infecté. Le risque est accru lorsqu’elles sont transmises par les vecteurs (nématodes,
cochenilles, cicadelles) (MORSLI, 1995).

Les prospections réalisées dans le territoire algérien ont révélé que toutes les variétés
de vignes locales sont au moins infestées par les virus du court noué et de
l’enroulement foliaire ; une diminution de la production ainsi qu’une extinction
progressive de certaines variétés locales ont été constatées (MARTELLI, 1985 ;
MORSLI, 1995).

De plus, à la suite des mesures d’arrachage de milliers d’hectares de vignes de cuve et

leur reconversion en vigne de table, avec l’introduction de nouvelles variétés de
diverses provinces (Italie, France, Espagne et proche orient), les variétés autochtones
disparaissent de plus en plus de nos vignobles ; la préservation de ce patrimoine
variétal s’impose de manière urgente (SEMADI et BOURDJIBA, 2002).

A ce jour, seules les sélections massales et clonales ont été utilisées, aboutissant à une
réduction de la perte considérable de la production et de la variabilité génétique. Pour
pallier certains défauts des cultivars, il était donc nécessaire de recourir à des méthodes
d’amélioration qui ne modifient pas les caractères organoleptiques et variétaux
(KEDDAM, 1995).

Les biotechnologies offrent des perspectives nouvelles pour l’amélioration de la vigne,

notamment pour la résistance aux pathogènes.
En effet, les méthodes de culture in vitro sont aujourd’hui des techniques qui offrent
la possibilité d’atteindre ce but tout en cultivant un grand nombre d’individus dans un
espace réduit et avec un gain de temps appréciable.

Actuellement, l’Algérie par le programme de reconversion du système agricole prévu

sur cinq ans, débuté en l’an 2000, consacre une grande importance à l’arboriculture en
général et à la viticulture en particulier.
INTRODUCTION GENERALE -2-

Ce programme vise la modernisation des exploitations et leur compétitivité, mais

également l’adaptation des mentalités des agriculteurs à un contexte économique en
constante évolution.
En ce qui concerne le plan de reconversion, les besoins en plants exprimés par la
direction des statistiques agricoles (DSA) s’élèvent à 33.182.000 plants viticoles et
pour subvenir à ses besoins 29.537.000 plants viticoles seront importés.
Dans le programme de la mise en culture de la jachère (plus de trois millions
d’hectares) qui touche une superficie de 700 000 hectares en première phase, la
viticulture bénéficiera d’une superficie de 25 000 hectares (ministère de l’agriculture,
2000).

Ainsi et dans le cadre des activités de l’institut technique de l’arboriculture fruitière et de

la vigne (ITAFV) qui a pris en charge la conservation des variétés autochtones au sein
d’une collection ampélographique et clonale dans le but de l’amélioration de leur état
sanitaire, nous nous sommes fixée comme objectifs à travers cette étude :

1- de détecter la présence ou l’absence des virus par symptomatologie directe, par

indexage biologique (inoculation mécanique sur indicateurs herbacés) et par le test
sérologique Elisa sur trois variétés de vigne de table autochtones : Ahmar bou amar,
Valensi et Muscat de Cherchell.

2- d’identifier les conditions optimales pour la mise au point de la technique de la

culture in vitro des méristèmes pour la guérison des variétés de vignes atteintes de
maladies virales.

Dans ce contexte, notre étude a été réalisée au niveau du laboratoire central de

l’ITAFV, qui se situe dans la région de Tessala El Merdja (Boufarik) à 20 kilomètres
du sud Ouest d’Alger.
Les expériences ont été effectuées au niveau de la chambre de stratification, la serre
d’élevage, la serre d’indexage, la serre d’acclimatation, laboratoire de virologie et
laboratoire d’amélioration.
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE -3-

1/ SYSTEMATIQUE

La vigne appartient à la famille des vitacées qui comprend un millier d’espèces

réparties en quatorze genres dont les principaux sont : Ampelopsis et Parthenocissus
(vignes ornementales), Cissus (vigne tropicale) et le genre Vitis originaire des zones
tempérées de l’Asie, de l’Europe et de l’Amérique (CHAUVET et REYNIER, 1979).

Le genre Vitis auquel appartient la vigne est divisé en deux sous genres (CRESPY,
1992) : (Figure 01)
- Le sous genre Muscadinia à 2n = 40 chromosomes.
- Le sous genre Euvitis à 2n = 38 chromosomes.

La quasi-totalité des vignes cultivées fait partie du sous genre Euvitis, à l’intérieur
duquel on distingue trois groupes (HUGLIN, 1986) :

- Groupe eurasiatique : comporte une seule espèce Vitis vinifera qui comprend
des milliers de variétés cultivées.
- Groupe asiatique : comprend dix espèces, la plus connue est Vitis amurensis
- Groupe américain : comprend plusieurs espèces, les plus importants sont Vitis
riparia, Vitis rupestris, Vitis lambusca et Vitis berlandieri.
 CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE -4-

Embranchement
Spermaphytes ou Phanérogames

Sous embranchement
Angiospermes

Classe
Dicotylédones

Ordre
Ramnales

Famille
Vitacées ou ampélidées

Genre

Ampélopsis Cissus Vitis Parthénocissus autres

Sous genre

Euvitis Muscadinia

Groupe

Asiatique Eurasiatique Américain

Espèce Espèce Espèce Espèce

Vitis riparia

Vitis rupestris
Vitis amurensis Vitis vinifera Vitis rotundifolia
Vitis labrusca

Vitis berlandieri
Figure 01 : Classification de la vigne
(CHAUVET et REYNIER., 1979 ; CRESPY., 1992).
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE -5-

2/ ORIGINE DE LA VIGNE

L’histoire de la vigne accompagne l’histoire de l’humanité depuis des millénaires. On

admet que la culture de la vigne a débuté il’ y a 4000 ans à partir des espèces
sauvages du proche orient (Caucase, Asie mineure, Iran) (ABROUS, 1993).

C’est à l’époque secondaire que commence à se différencier le genre Cissus, ancêtre

de la vigne actuelle. Les fruits des ceps servaient déjà de nourriture à nos ancêtres de
l’âge de la pierre comme le témoignent les nombreux pépins retrouvés prés des abris et
des campements de cette époque (CRESPY, 1992).

Les pépins datés de la fin du tertiaire permettent déjà de différencier deux groupes de
Vitis : 1- Vitis ludwigii, qui donnera les muscadinia américains
2- Vitis teutonica ancêtre des euvitis ou vignes vraies (CRESPY, 1992).

A la faveur des bouleversements climatiques et de la séparation des continents,

Vitis teutonica a évolué pour former divers rameaux qui ont aboutit aux vignes
actuelles qu’elles soient américaines ou eurasiatiques. En effet, c’est l’aire écologique
indo-européenne qui a permis la naissance de Vitis vinifera (AOUF, 1984)

3/ CARACTERES BOTANIQUES
3.1/ Morphologie de la vigne (Figure 02)
3.1.1/ Organes végétatifs

[Link]/ Les racines

Le système racinaire d’un plant issu de semis est pivotant, constitué d’une racine
principale et de radicelles (CHAUVET et REYNIER, 1979) ; pour les plants produits
par boutures, les racines se forment principalement au niveau des nœuds et se dirigent
en toutes directions de l’horizontale à la verticale (REYNIER, 1986 ; VIDAUD et al,
1993).
La croissance des racines est fonction des caractéristiques du milieu, de l’âge de la
vigne et de l’activité de la partie aérienne (CHAMPAGNOL, 1984).

[Link]/ la tige

Un plant de vigne est appelé couramment pied ou cep. Il présente des formes très
variées (HUGLIN, 1986). En effet la vigne est une liane dont la tige a tendance à
s’allonger rapidement, donc elle nécessite une taille qui permet la formation d’un tronc
et d’un ou de plusieurs bras (VIDAUD et al, 1993).
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE -6-

Feuille

Vrille

Grappe

Bourgeon

Sarment

Tronc

Racines

Figure 02 : Morphologie générale de la vigne (X 0.15)

CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE -7-

Le tronc est plus ou moins tordu, il est recouvert d’une écorce d’autant plus épaisse
que la vigne est âgée (HUGLIN, 1986).
Selon le système de taille adopté (Figure 03), la tige peut être simple (Guyot) ou
ramifiée en bras (Royat = deux bras ou Goblet = quatre bras) ; l’ensemble tige et bras
constitue la charpente du cep (CRESPY, 1992).

(A) (B) (C)

Figure 03 : Système de taille de la vigne : (A) Guyot, (B) Royat,

(C) Goblet (CRESPY, 1992) .

A l’extrémité de la charpente naissent chaque année à partir des bourgeons situés sur
les rameaux de l’année précédente, de nouveaux rameaux qui sont d’abord vert,
tendres et riches en eau, puis prennent une teinte brune du à leur durcissement
(HUGLIN, 1986 ; CRESPY, 1992).
L’intervalle entre chaque niveau d’insertion foliaire s’appelle mérithalle (entre nœud),
qui est plus ou moins long selon les cépages, la vigueur du cep et son état sanitaire
(BRANAS, 1974 ; VIDAUD et al, 1993).

[Link]/ Les feuilles

Les feuilles de vigne sont insérées sur le rameau au niveau des nœuds en position
alterne par l’intermédiaire d’un pétiole assez long (CRESPY, 1992).
La feuille de vigne est simple, dentée et présente des sinus plus ou moins accentués ;
elle porte en général cinq lobes séparés par cinq nervures (Figure 04) (GALET, 1993).
La forme des dents, le sinus pétiolaire, la pilosité et la pigmentation fait que les
feuilles sont les organes les plus utilisées en ampélographie pour la détermination des
cépages (RIBEREAU-GAYON et PEYNAUD, 1971; CRESPY, 1992).
Lobe terminal

Lobe latéral supérieur

Sinus latéral supérieur

Sinus latéral inférieur

Lobe latéral inférieur

Sinus petiolaire

Figure 04 : Structure générale de la feuille de vigne (CRESPY, 1992).

CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE -8-

[Link]/ les vrilles

En général les vrilles de la vigne sont bifurquées. Elles comprennent un pédoncule,

une branche majeure située à l’aisselle d’une bractée et une branche mineure
(RIBEREAU-GAYON et PEYNAUD, 1971).
Les vrilles s’enroulent autour des supports auxquels elles sont accrochées à l’aide du
renflement adhésif de leurs extrémités et se lignifient en même temps que les
sarments (REYNIER, 1991).

[Link]/ Les bourgeons

Les bourgeons de la vigne sont tous axillaires, ils se caractérisent par leurs possibilités
de développement ; ainsi, selon RIBEREAU-GAYON et PEYNAUD (1971) ;
HUGLIN (1986) et GALET (1993) on distingue (Figure 05) :
- un prompt bourgeon qui se développe souvent l’année même de sa formation
pour donner des pousses réduites appelées entre-cœurs ou rameaux anticipés
- un bourgeon latent qui ne débourrera que l’année suivant sa formation.

Prompt bourgeon
Merithalle
Bourgeon latent

Pétiole

Noeud

Figure 05 : Rameau de vigne (RIBEREAU-GAYON et PEYNAUD., 1971).

3.1.2/ Organes reproducteurs

[Link]/ Les fleurs et inflorescence

Chez Vitis vinifera les fleurs sont hermaphrodites, verdâtres, petites et le plus souvent
elles sont pentamères avec la formule suivante (RIBEREAU-GAYON et PEYNAUD,
1971 ; REYNIER, 1986) : (Figure 06 et 07)
- le calice comprend cinq sépales rudimentaires soudés entre eux.
- la corolle est formée par cinq pétales verts qui alternent avec les sépales, les
pétales sont d’abord soudés entre eux donnant à la fleur une forme de capuchon,
qui se détache du réceptacle floral au moment de la floraison.
- l’androcée est constitué par cinq étamines libres qui alternent avec cinq
nectaires plus ou moins soudés à l’ovaire.
- le gynécée est formé de deux carpelles soudés, l’ovaire est donc biloculaire et
chaque loge renferme deux ovules, le style est court, le stigmate petit et aplati.
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE -9-

Figure 06 : diagramme floral de la vigne (PACOTTET, 1912 in RIBEREAU-

GAYON et PEYNAUD., 1971)

Etamine
Capuchon
floral Ovaire

Nectaire
Réceptacle
Pédicelle

(A) (B) (C)

Figure 07 : fleur de vigne (CRESPY, 1992): (A) bouton floral.

(B) détachement du capuchon floral.
(C) organes reproducteurs.

Les fleurs chez la vigne sont toujours groupées en inflorescence (grappe) (Figure 08)
assez variées en forme, en grandeur, en nombre de ses ramifications et en nombre des
fleurs qu’elle porte selon les cépages (RIBEREAU-GAYON et PEYNAUD, 1971 ;
GALET, 1977).

Figure 08 : Inflorescence de la vigne.

CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE - 10 -

[Link]/ Le fruit : la grappe et les baies

Les différentes parties de l’inflorescence acquièrent progressivement leur dimension et

leur structure définitives. Ainsi les ovaires se transforment en fruit qui est une baie
appelée communément grains de raisin et les ovules en graines appelées pépins.
L’ensemble constitue la grappe (GALET, 1977 ; HUGLIN, 1986).
Les grappes se développent à l’opposé des feuilles comme les vrilles ; elles sont
composées d’un ensemble de ramification dont on peut identifier le pédoncule ou
queue de raisin, l’axe principal ou rachis et les pédicelles qui portent les baies.
L’ensemble de toutes les ramifications constitue la rafle de la grappe (Figure 09)
(RIBEREAU-GAYON et PEYNAUD, 1971).

Pedoncule

Axe principal = rachis

Baies

Figure 09 : Grappe de vigne.

De l’extérieur à l’intérieur de la baie (Figure 10), on trouve successivement : la

pellicule, la pulpe toujours incolore, les pépins le plus souvent lignifiés au nombre de
un à quatre par baie et qui peuvent être absents chez les variétés apyrènes (VIDAUD et
al, 1993).
Pedicelle

Bourrelet

Pinceau

Pepin
Pulpe

Pellicule
Figure 10 : Coupe longitudinale d’une baie de vigne (CRESPY, 1992).

La taille et la forme de la grappe (cylindrique, conique, aillée ou composée), la

longueur des pédoncules, la couleur et la forme des baies constituent des critères de
reconnaissance des cépages (VIDAUD et al, 1993).
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE - 11 -

3.2/ Le cycle de développement de la vigne

La vigne est une plante pérenne, caractérisée par une succession de phases.
L’apparition de chacune d’elles est conditionnée par la précédente aussi que par les
conditions climatiques et physiologiques (VIDAUD et al, 1993).
Il apparaît deux phases qui se déroulent en même temps (CRESPY, 1992) :
- une phase végétative avec un développement des rameaux et des feuilles.
- une phase reproductive avec développement des inflorescences et des grappes.

3.2.1/ La phase végétative

[Link]/ Les pleurs

A partir du mois de février jusqu’à la fin du mois de mars, dés les premiers
réchauffements du sol (8°C à 12°C à 25 cm dans le sol) (VIDAUD et al, 1993), le
système racinaire entre en activité ; de la sève brute circule et s’écoule par les plaies de
taille : ce sont les pleurs de la vigne (Figure 11) (REYNIER, 1991 ; CRESPY, 1992).

[Link]/ Le débourrement

Dés le printemps, les bourgeons latents entrent en croissance active, les écailles
s’écartent pour laisser apparaître un feutrage protecteur : le coton ou « bourre »
d’où le nom de débourrement (CRESPY, 1992) ; au bout de quelques jours le coton
est expulsé et il apparaît une pointe verte au sommet du bourgeon latent : c’est le stade
pointe verte (Figure 12) (VIDAUD et al, 1993).

[Link]/ La croissance des pousses

Elle se caractérise par l’allongement des rameaux issus de bourgeons et la naissance de

nouvelles feuilles (Figure 13) (GALET, 1995).
La vitesse de croissance des pousses est d’abord lente mais elle s’accélère rapidement
pour atteindre son maximum juste avant la floraison (vers la fin du mois de mai à mi-
juillet) (VIDAUD et al, 1993).

[Link]/ L’aoûtement

C’est une phase très importante qui assure la pérennité du cep et permet sa
multiplication végétative (GALET, 1993).
A partir du mois d’août, la base des sarments devient dure et brune, il s’agit d’une
lignification des bois accompagnée d’une accumulation des réserves d’amidon, ceci
confère au sarment une bonne résistance au froid hivernal et un débourrement normal
au printemps suivant (REYNIER, 1991).
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE - 12 -

[Link]/ La chute des feuilles

En automne, les feuilles commencent à se vider de leurs substances qui migrent vers le
bois ; la destruction de la chlorophylle entraîne l’apparition de pigments jaunes ou
rouges selon les cépages (Figure 14) ; une couche de liège cicatricielle se forme à la
base du pétiole et sous l’effet du vent ou de la pluie, les feuilles se détachent en
laissant une empreinte pétiolaire sur le rameau (REYNIER, 1991 ; CRESPY, 1992).

3.2.2/ La phase reproductrice

C’est pendant la phase de croissance que se produisent des étapes intermédiaires très
importantes qui caractérisent cette phase.

[Link]/ L’induction florale et l’initiation florale

L’induction florale est un phénomène physiologique de la perception du stimulus

déterminant la différenciation d’un méristème vers la constitution d’une inflorescence
et l’initiation florale proprement dite est un phénomène morphologique de la
différenciation de l’inflorescence et des fleurs, en effet c’est en fin d’été que les
premiers primordia des fleurs s’individualisent (REYNIER, 1991).

[Link]/ Floraison et fécondation

La floraison est l’ensemble des phénomènes physiologiques qui sont compris entre
l’ouverture de la fleur (anthèse) et la fécondation, elle correspond à l’épanouissement
de la fleur par l’ouverture de la corolle qui se dessèche et tombe (Figure 15)
(CHAUVET et REYNIER, 1979).
Elle se produit en moyenne deux mois après le débourrement, c’est une phase qui dure
environ dix jours sous une température de 18° C à 25° C et un climat bien ensoleillé,
qui permettent une fécondation parfaite (CALO, 1979).

Selon VIDAUD et al (1993), la pollinisation est anémophile ; cependant, l’allogamie

est obligatoire pour les cépages femelles.

[Link]/ La nouaison

C’est l’ensemble des phénomènes qui permettent à l’ovaire de la fleur de se

transformer en fruit (VIDAUD et al., 1993). Elle intervient quelques jours après la
floraison, elle correspond à l’évolution des fleurs fécondées en fruits verts, petits et
durs, qui sont riches en acide et pauvres en sucre. Ainsi, l’ovaire évolue pour donner
le fruit et les ovules évoluent pour donner les pépins (CHAUVET, 1979 ;
BRETANDEAU et FAURE, 1990).
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE - 13 -

[Link]/ La véraison

Quelques jours après la nouaison, les grains tout en grossissant commencent à changer
de couleur suivant les cépages, c’est la véraison (BRETANDEAU et FAURE, 1990).
Ainsi, l’épiderme de la baie change de couleur de vert au rouge (pour les cépages
rouges) ou au jaune (pour les cépages blancs) (Figure16).
Selon REYNIER (1991), la véraison correspond à une accumulation brusque et
importante des sucres dans la baie de raisin.

[Link]/ La maturation

La maturation est la période pendant laquelle le fruit subit des transformations

chimiques tels que l’accumulation des sucres et la diminution de l’acidité (GALET,
1993). Durant cette période, les pépins vont atteindre leur maturité physiologique et
seront apte à germer (CHAUVET, 1979).
Selon REYNIER (1991), l’évolution des composés phénoliques au cours de la
maturation permet la distinction entre les cépages blancs et les cépages noirs (Figure
17).
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE - 14 -

Figure 11 : Les pleurs de la vigne

(x 0.25) Figure 12 : Stade de débourrement
(x 0.7)

Figure 13 : Stade croissance des pousses Figure 14 : stade chute des feuilles
(x 0.4) (x 0.4)

La phase végétative du cycle de développement de la vigne

(www. [Link])
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE - 15 -

(A) (B)
Figure 15 : stade floraison (A) et fécondation (B). (x 0.3)

Figure 16 : stade Figure 17 : stade

véraison (x 0.3) maturation (x 0.15)

La phase reproductrice du cycle de développement de la vigne

(www. [Link])
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE - 16 -

4/ MULTIPLICATION DE LA VIGNE
4.1/ Multiplication par voie sexuée ou semis

Cette voie consiste à créer des hybrides, c’est à dire des ceps issus de semis de pépins
obtenus par fécondation sexuée (CRESPY, 1992)
Le semis ne permet pas de conserver les caractères de la plante qui a produit les
pépins. Ce procédé de multiplication est réservé aux sélectionneurs et aux hybrideurs
pour la création de variétés et de porte-greffes nouveaux (CLICHE, 1989 ; REYNIER,
1986).

4.2/ Multiplication par voie asexuée ou végétative

4.2.1/ Bouturage

Le bouturage consiste à placer dans un milieu favorable un fragment de sarment

détaché du cep, afin que se développent des racines et un système aérien identique à la
plante mère (VIDAUD et al., 1993).
Les racines qui se développent sur un sarment de vigne sont des racines adventives qui
apparaissent souvent prés de la base de la bouture et préférentiellement au niveau des
nœuds (CLICHE, 1989).
La naissance des racines dépend du milieu dans lequel se trouve la bouture
(température et humidité optimale) ; cependant la reprise au bouturage dépend de la
qualité des bois utilisés (aoûtement, état sanitaire), mais aussi des conditions de
conservation des boutures (REYNIER, 1986).
Depuis l’invasion phylloxérique, ce procédé a beaucoup perdu de son importance, il ne
peut être utilisé pour l’espèces Vitis vinifera que dans les sols où le phylloxera ne
pullule pas (sables, sols humides) ; mais il est couramment utilisé pour la production
de plants racinés de porte-greffes (REYNIER, 1986).

4.2.2/ Marcottage

Le marcottage consiste à coucher en terre, à 25-30 centimètres de profondeur, un

sarment qui reste attaché au cep jusqu’à ce qu’il ait reproduit un nouveau plant.
Au bout de deux ans lorsque les racines sont suffisamment développées, le nouveau
cep peut vivre seul après sevrage c’est à dire sectionnement du sarment qui rattachait
la marcotte au pied mère (REYNIER, 1986).
Ce procédé est utilisable pour remplacer les pieds manquants dans les vignes plantées
(CLICHE, 1989 ; REYNIER, 1986).

4.2.3/ Greffage

Le greffage des vignes est indispensable pour la culture de Vitis vinifera à cause de la
présence du phylloxera dans la plupart des sols (VIDAUD et al., 1993).
Le greffage consiste à fixer une portion de sarment appelée greffon, destiné à fournir
les rameaux, les feuilles et les fruits, sur une autre fraction de végétal, le porte greffe
ou sujet, qui produit le système racinaire et sert de support (REYNIER, 1986).
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE - 17 -

Ce procédé de multiplication végétative met en œuvre le phénomène physiologique de

la callogenèse qui permet la soudure entre le greffon et le porte greffe, il permet
d’associer la qualité des cépages et la résistance au phylloxera des vignes américaines
(REYNIER, 1986).
Les systèmes de greffage les plus employés sont le greffage en fente double ou
simple, le greffage à l’anglaise, et le greffage Oméga (Figure 18) (REYNIER, 1986).

Greffon

Porte-greffe

(A) (B) (C)

Figure 18 : système de greffage (ABDENNOUZ, 1995): (A) greffage à l’anglaise
(B) greffage omega
(C) greffage en fente.

4.3/ Multiplication par culture in vitro

La multiplication par culture in vitro des végétaux couvre des méthodes diverses
permettant les unes et les autres d’obtenir des plantes entières.
La culture des méristèmes, le microgreffage d’apex, le microbouturage aboutissent
généralement à une multiplication conforme des clones (MARGARA, 1989).

Les premières cultures in vitro de tissus de vigne furent établies par MOREL en 1944.
Cependant, la culture in vitro en tant que méthode rapide de multiplication de la vigne
fut mise au point par GALZY en 1961 ; depuis, plusieurs techniques on été définies
par plusieurs auteurs :

- le microbouturage (GALZY, 1969 ; NOZERAN et BANCILHON, 1972 ;

MARTIN, 1985).
- embryogenèse somatique (MULLINS et SRINIVASAN, 1976).
- La néoformation caulinaire (FAVRE, 1977).
- La culture de fragment d’apex (BARLASS et SKENE, 1978).
- La micropropagation par bourgeonnement axillaire (HARIS et STEVENSON,
1982).
- La sélection sanitaire in vitro (culture de méristèmes associée ou non à la
thermothérapie, le microgreffage d’apex) est utilisé pour la production de
matériel certifié (LEBRUN, 1985).
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE - 18 -

5/ EXIGENCES DE LA VIGNE
5.1/ Facteurs du milieu
5.1.1/ Nature du sol

La vigne est une plante qui peut pousser sur tous les types du sol, depuis les sols secs
caillouteux pauvre, jusqu’aux argilo-calcaire les plus fertiles (CLICHE, 1989 ;
VIDAUD et al, 1993). Selon VIDAUD et al (1993), les caractéristiques du sol
(profondeur, ressources hydriques …) confèrent une vigueur dont l’incidence est
importante sur les résultats agronomiques et commerciaux de la variété ; de ce fait, les
sols bien exposés sont favorables à une production précoce.

5.1.2 La température

La vigne est une plante de climat tempéré à chaud (HUGLIN, 1986) ; d’après
REYNIER (1991), la température influe quantitativement sur le métabolisme général
de la souche en favorisant la croissance des rameaux, le développement des bourgeons
et des organes floraux avant et après le débourrement.
Les travaux de CALO (1970) sur l’influence du climat et les conditions de nutritions
sur la fécondation et la nouaison des fruits de la vigne confirment que la fertilité croit
depuis 20°C jusqu’à 35°C.

5.1.3 La lumière

La vigne est une plante de plein soleil. Selon GALET (1993), l’éclairement favorise
l’augmentation de la fertilité et la qualité des fruits.
Selon HUGLIN (1986), l’initiation florale est conditionnée par l’éclairement des
bourgeons durant la période d’induction, par contre l’ombrage des souches au
printemps diminue l’induction florale.
De plus, le soleil assèche le feuillage après une pluie ou une rosée abondante, ce qui
diminue les dégâts des maladies dues aux champignons (CLICHE, 1989).

5.1.4 L’eau

Selon VIDAUD et al (1993), la vigne est assez bien adaptée à la sécheresse, elle
possède un système racinaire puissant susceptible de mobiliser les réserves profondes
du sol.
D’après GALET (1993), la vigne est moins exigeante en eau de pluie, elle peut
supporter un minimum de 250 mm à 350 mm de pluies bien réparties au cours du cycle
végétatif, notamment au printemps pour favoriser la croissance des pousses et
l’élongation des rameaux.
Selon BEN ABDRABOU (1972), les besoins en eau de la vigne varient avec le climat
local, la nature du sol, le cépage, le porte greffe, la vigueur de la plante et la répartition
des pluies qui se situe entre 500 mm d’eau par an pour les régions méditerranéennes et
800 mm d’eau par an pour les zones humides.
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE - 19 -

5.2/ Facteurs culturaux

Selon CHAUVET et REYNIER (1979), les travaux d’entretien de la vigne répondent

à quatre préoccupations :

5.2.1/ Entretien du sol

L’entretien du sol vise la maîtrise des mauvaises herbes, qui se comportent en effet
comme des véritables parasites établissant à l’égard de la culture une concurrence vis à
vis de l’alimentation en eau et en substances minérales (VIDAUD et al, 1993).
Selon CHAUVET et REYNIER (1979), le viticulteur s’applique à pratiquer quatre
sortes d’opérations culturales :

9 Chaussage ou buttage à l’automne : ayant pour but de ramener la terre vers les
cep, les protéger contre les gelées de l’hivers et enfuir les engrais.
9 Déchaussage ou débuttage au printemps : se pratique afin de créer une couche
meuble, en dégageant les ceps de la terre qui les recouvraient pendant l’hiver.
9 Binage ou travail du sol en cours de végétation : il permet d’ameublir le sol, de
le nettoyer en enfouissant les mauvaises herbes, de l’aérer et de favoriser la
circulation de l’eau.
9 L’enherbement et couverture du sol : dans certaines situations, l’occupation du
sol par un tapis végétal (exemple : la luzerne) est recherchée pour limiter
l’érosion et le ruissellement des eaux.

5.2.2/ La taille

La vigne est une liane qui acquière un grand développement ; la production de bois
prend alors le pas sur la production des fruits qui devient très irrégulière et faible par
rapport à l’espace occupé par la souche (REYNIER, 1991).
La taille consiste à supprimer totalement ou partiellement certains organes de la vigne
(rameaux, sarments, bourgeons, feuilles et grappes) pour régler l’allongement,
l’encombrement du cep et de régulariser une production annuelle. Elle permet
éventuellement la pérennité de la souche (CHAMPAGNOL, 1984).
En fait, la taille nécessite une extrême précision dans le choix des bois, le nombre des
yeux et leurs répartitions (RIBEREAU-GAYON et PEYNAUD, 1971).

5.2.3/ Fertilisation et alimentation minérale

La vigne est l’une des plantes les moins exigeantes en éléments fertilisants, elle peut
mettre en valeur des terres relativement pauvres (HUGLIN, 1986) ; indépendamment
de la fumure de fond (fumure organique : fumier, fumure minérale : phosphore et
potasse, engrais vert : fourrage à croissance rapide exemple : les légumineuses) qui
sera incorporée lors de la préparation du terrain, il serait indispensable de compléter
périodiquement (tous les ans ou les deux ans) par des fumures d’entretien
(différents éléments nécessaires au développement Exemple : azote ammonitrate)
(BRETANDEAU et FAURE, 1990).
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE - 20 -

5.2.4/ Protection du vignoble

Comme toutes les espèces cultivées, la vigne est aussi menacée par un certain nombre
d’accidents et ennemis divers, dont les dégâts sont parfois si importants qu’ils
affectent non seulement la production qui peut être altérée ou détruite mais aussi la
pérennité de la plante (VIDAUD et al, 1993).
Ainsi, dans le cadre de la recherche d’une production importante et de bonne qualité,
le viticulteur doit apporter tous les soins pour le choix des cultivars résistants aux
maladies et aux divers parasites qui menacent les vignobles (CRESPY, 1992).
La vigne peut être attaquée par :
3 les maladies à mycoplasmes (flavescence dorée) (CAUDWELL et LARRUE, 1979).
3 les maladies cryptogamiques (mildiou, oïdium, esca…etc.) (FARETRA, 1995).
3 les maladies bactériennes : Xanthomonas ampelina, Agrobacterium tumefaciens)
(GALET, 1977).
3 les parasites animaux (acariens, nématodes, pucerons …etc.) (LAFON et al., 1970).
3 les dégâts dus aux conditions météorologiques (gel, brûlures de soleil, sécheresse)
(BOVEY et al., 1980).
3 les carences en bore, en zinc, en fer, en manganèse …etc. (RYSER et BASLER,
1990).
Ainsi, dans le cadre de la recherche d’une production importante et de bonne qualité,
le viticulteur doit apporter tous les soins pour le choix des cultivars résistants aux
maladies et aux divers parasites qui menacent les vignobles (CRESPY, 1992).

6/ REPARTITION
6.1/ La viticulture dans le monde

La superficie totale du vignoble mondial est de neuf millions d’hectares réparties sur
35 états (EYNARD, 1990)
Selon REYNIER (1991), la production mondiale est d’environs 60 millions de
quintaux de raisins dont :
9 33 millions de tonnes sont vinifiées
9 8 millions de tonnes sont consommées frais
9 6 millions de tonnes sont séchées
9 le reste est destiné à différentes fabrications (jus et concentré de raisins)

Tableau 01 : Les principaux pays producteurs (VIDAUD et al, 1993)

Pays producteurs Production (en tonnes) Exportation (en tonnes)

ITALIE 1.400.000 400.000
CHILI 650.000 450.000
ETATS UNIS 550.000 200.000
ESPAGNE 470.000 90.000
GRECE 270.000 120.000
FRANCE 120.000 15.000
ALGERIE 150.000 réservés aux marchés
MAROC 150.000 intérieurs
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE - 21 -

6.2/ La viticulture en Algérie

6.2.1/ Origine

Depuis la haute antiquité, la vigne existait en Algérie, dans des collines préservées du
feu et des troupeaux, des vignes sauvages s’accrochaient aux arbres, leurs petites
grappes aux grains compacts, noirs étaient cueillies et consommées fraîches ou séchées
au soleil. (BIRBENT, 2001).
L’Algérie doit ses premiers plants de vignes aux phéniciens, lesquels au cours de leur
installation sur les côtes ont initié la culture de la vigne et introduit des cultivars
orientaux qui au cours des siècles ont donné naissance à des variétés locales
(BIRBENT, 2001).

6.2.2/ De 1830 à 1962

Selon AOUF (1984), la culture de la vigne a connu de grands moments en Algérie, dus
à un petit puceron (le phylloxera) qui aurait en 20 ans détruit plus de 150 000 hectares
du vignoble français, raison qui poussera les colons français installés en Algérie à
développer le vignoble algérien et l’orienter exclusivement vers la production du vin
destiné à l’approvisionnement du marché français.
La vigne à cette même époque était négligeable, ne couvrant que 5 000 hectares avec
une production de 30 000 tonnes dont 10 000 étaient exportées.

6.2.3/ Après l’indépendance

En 1962, l’Algérie ayant hérité d’un vignoble colonial, a adopté une nouvelle politique
viticole qui consiste à réduire la superficie viticole à moins de 50 000 hectares en
éliminant les vignes de cuves pour les remplacer par d’autres cultures stratégiques tel
que les céréales et les cultures maraîchères (AGGAD, 1988) et à développer la
production des raisins de table pour la consommation locale (KERBOUA, 1987).
Ainsi, de 1962 à 1985, le secteur viticole a connu des bouleversements profonds liés
aux nouvelles données politiques, économiques et sociales du pays. Cette situation
s’est caractérisée par une importante régression des vignobles dont les superficies sont
passées de 350 000 hectares en 1965 à 21 500 hectares en 1977 et 170 000 hectares en
1985 (ABROUS, 1993).
En 1989, la superficie occupée par le vignoble au niveau national est de l’ordre de
35 000 hectares avec un rendement de 88.5 quintaux par hectare, à cette réduction de
superficie s’ajoute la baisse constante de rendement en raison de vieillissement du
vignoble algérien qui date depuis l’époque coloniale et à la présence de problèmes
phytosanitaire (SAMADI et BOURDJIBA, 2002).
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LA VIGNE - 22 -

Actuellement, le vignoble algérien occupe une superficie de 81 550 hectares, soit 19%
de la superficie agricole. La majorité de ces terres est située à l’ouest (53%) (Ain
Temouchent, Mascara, Mostaganem, Sidi Bel Abbas, Tlemcen et Oran), alors que 40%
sont situées au centre (Médéa, Tizi Ouzou, Boumerdes, Blida, Chlef, Tipaza, Ain
Defla et Alger) et 7% dans la région est (Jijel, Skikda et Annaba) (STATISTIQUES
AGRICOLES, 2002).

Tableau 02: Statistiques agricoles, 2002

Vignes Superficies Production Rendement

(hectares) (quintaux) (quintaux/hectare)

Vigne de table 41 860 1 881 390 95.2

Vigne à vin 38 010 458 510 20.6

Vigne à raisin de
séchage 120 4 070 37
Plants de pieds
mères 1 560
CHAPITRE II : LES MALADIES VIRALES DE LA VIGNE - 23 -

1/ GENERALITES SUR LES MALADIES VIRALES DES PLANTES

Les maladies à virus présentent un grand intérêt économique chez les végétaux, car de
nombreuses plantes sont affectées.
C’est en 1886 que Mayer découvre la nature de l’agent pathogène en étudiant la
mosaïque du tabac, et c’est vers cette époque que le terme de virus a commencé à être
employé (GALET, 1977 ; CORBAZ, 1990).

Les recherches sur les maladies virales se sont poursuivies activement dans le monde
entre 1919 et 1939, période pendant laquelle de nombreuses maladies furent
identifiées. Après 1945, l’emploi du microscope électronique a permis d’obtenir des
micrographies montrant les structures variées des virus (particules géminées :
Géminivirus ; particules flexueuses allongées : Potyvirus ; particules en bâtonnet
rigides :Tobamovirus ; virus bacilliformes :Rhabdovirus) (LEVADOUX et al. , 1971 ;
GIRARD et al, 1989 ; CORBAZ, 1990).

Aujourd’hui de nombreux virus peuvent infecter de nombreuses plantes cultivées ;

certains d’entre eux ont une gamme d’hôte très restreinte : ils n’infectent en conditions
naturelles qu’une seule ou un nombre limité d’espèces végétales : c’est le cas du
GFLV (grapevine fanleaf virus) , l’un des virus du court noué de la vigne ; d’autres
virus sont capables d’infecter de nombreuses espèces végétales : c’est le cas de
l’ArMV (arabis mosaic virus) virus proche du GFLV qui provoque des symptômes de
court noué chez la vigne et qui infecte d’autres espèces telle que la betterave
(WALTER et al., 2000).

2/ CARACTERES MORPHOLOGIQUES ET PROPRIETES DES VIRUS DES

PLANTES

Les virus sont des agents infectieux, constitués par un matériel d’information
génétique, comprenant une molécule d’acide nucléique DNA ou RNA qui peut être
associée à des protéines. Ces particules sont entourées d’une coque protéique appelée
capside (CORBAZ, 1990 ; GALET, 1995).
Le virus est un parasite obligatoire, qui va obliger la cellule hôte à reproduire les
acides nucléiques et les autres constituants du virus qui vont s’assembler ensuite pour
donner de nouveaux virus (GIRARD et al., 1989, CORBAZ, 1990).
Le virus envahit la totalité de la plante infectée, en passant de cellule à cellule. Mais la
multiplication du virus et sa dissémination dans les tissus peuvent être plus lentes que
la multiplication cellulaire de la plante. C’est ainsi que les méristèmes apicaux sont
souvent exempts de virus (MOREL et MARTIN, 1952).

Le détournement par le virus du métabolisme cellulaire de la plante hôte et la

multiplication du virus dans certains tissus de cet hôte aboutissent à des perturbations
physiologiques qui peuvent affecter la plante infectée à des degrés divers ; ces
perturbations se traduisent par des symptômes qui se manifestent sur les organes de la
plante (symptômes externes) ou bien au niveau cellulaire (symptômes internes)
(GALET, 1995; WALTER et al., 2000).
CHAPITRE II : LES MALADIES VIRALES DE LA VIGNE - 24 -

3/ LES MALADIES VIRALES CHEZ LA VIGNE

Les maladies virales constituent le plus grand problème de la vigne dans le monde, car
aucune lutte chimique ne peut être envisagée (MARTELLI, 1985).
Ces viroses sont à l’origine de pertes importantes de récoltes et d’altérations
qualitatives des fruits (WALTER, 1988) ; ainsi elles diminuent la vigueur de la vigne,
sa longévité et sa productivité (MARTELLI, 1985).

La vigne est l’espèce ligneuse qui peut héberger le plus grand nombre de virus
(CLOQUEMIN et al., 1998) ; une cinquantaine de virus ont été identifiés, ils
appartiennent à des genres variés (WALTER et al. , 2000). Tableau 03
 CHAPITRE II : LES MALADIES VIRALES DE LA VIGNE - 25 -

Tableau 03: les virus de la vigne et leur classification systématique

(WALTER et al, 2000)
Famille Genre Espèce
VIRUS APPARTENANT A DES GENRES CLASSES EN FAMILLES
BROMOVIRIDAE Alfamovirus Alfalfa mosaic (AMV)
Cucumovirus Cucumber mosaic (CMV)
Ilarvirus Grapevine line pattern (GLPV)
BUNYAVIRIDAE Tospovirus Tomato spotted wilt (TSWV)
COMOVIRIDAE Fabavirus Broadbean wilt (BBWV)
Nepovirus Arabis mosaic (ArMV)
Artichoke Italian latent (AILV)
Blue berry leaf mottle (BBLMV)
Grapevine Bulgarian latent (GBLV)
Grapevine chrome mosaic (GVMV)
Grapevine fanleaf (GFLV)
Grapevine Tunisian ringspot (GTRV)
Peach rosette mosaic (PRMV)
Raspberry ringspot (RRV)
Tobacco ringspot (TRSV)
Tomato black ring (TBRV)
Tomato ringspot (ToRSV)
Strawberry latent ringspot (SLRSV)
TOMBUSVIRIDAE Tombusvirus Petunia asteroid mosaic (PAMV)
Grapevine Algerian latent (GALV)
Carmovirus Carnation mottle (CarMV)
Necrovirus Tobacco necrosis D (TNV-D)

CLOSTÉROVIRIDAE Closterovirus Grapevine leafroll associated- 2 (GLRaV-2)

Vinivirus Grapevine leafroll –1,3,4,5 (GLRaV-1,3,4,5)
Crinivirus Grapevine leafroll – 7 (GLRaV-7)

VIRUS APPARTENANT A DES GENRES QUI NE SONT PAS CLASSES EN FAMILLES

Sobemovirus Sowbane mosaic (SoMV)
Potexvirus Potato X (PVX)
Tobamovirus Tobacco mosaic (TMV)
Tomato mosaic (ToMV)
Trichovirus Grapevine berry internal necrosis (GBINV)
Vitivirus Grapevine A/B/C/D (GVA/B/C/D)
Foveavirus Grapevine rupestris stem pitting associated ( GRSPaV)
(genre à créer) Grapevine fleck (GFKV)
Grapevine asteroid mosaic associated (GAMV)
Grapevine redglobe (GRGV)

VIRUS QUI NE SONT PAS CLASSES TAXONOMIQUEMENT

Grapevine ajinashika (GAV)
Grapevine stunt (GSV)
Grapevine labile rod-shaped (GLRSV)
Unidentified isometric grapevine (UIGV)
CHAPITRE II : LES MALADIES VIRALES DE LA VIGNE - 26 -

3.1/ virus du court noué (GFLV)

3.1.1/ Symptômes

La dégénérescence infectieuse, appelée couramment court-noué, est la maladie qui

engendre le plus de dégâts sur la vigne. Elle est répandue dans le monde entier et peut
affecter tous les cépages de vignes (BOVEY et al. , 1974 ; HABERT, 1992 ;
BOUBALS, 2001).
Le court noué se manifeste par une série de symptômes repartis en trois syndromes
principaux et qui se manifestent sur les divers organes de la vigne infectée
(MARTELLI, 1992) :

[Link]/ Les malformations ou court-noué proprement dit

Elles sont causées par une souche déformante du virus du GFLV (MARTELLI,
1985).
™ Sur les feuilles
La maladie se manifeste par des déformations diverses :
- sinus pétiolaire élargi, nervures principales rapprochées donnant à la feuille l’aspect
d’un éventail ouvert d’où le terme anglais «fanleaf » (BOVEY et al. , 1980 ;
MARTELLI, 1992).
- les limbes sont souvent asymétriques, gaufrés, avec dentelures aiguës des bords
(WALTER et al., 2000).
- un accroissement du limbe par un dédoublement des nervures, qui vont passer
de 5 à 10 donnant alors une feuille double (GALET, 1977, 1983) ; Ou au contraire,
par un rétrécissement du limbe du à une diminution des écarts angulaires. Il s’agit
alors de feuilles en palmette (BRUGNON et BESSIS, 1968 ; RIVES, 1971,
REYNIER, 1991).

™ Sur les pousses

Le court-noué provoque un raccourcissement des entre-nœuds (BOVEY et
MARTELLI, 1992). Les rameaux malformés montrent des bifurcations anormales,
fasciations (= aplatissements), et développement en zigzag (GUGERLI et al. , 1990 ;
MORSLI, 1990 ; MARTELLI et SAVINO, 1990).
Cette virose peut affecter aussi les vrilles qui peuvent être fasciées ; de même la vrille
normalement située sur le nœud à l’opposé d’une feuille peut se déplacer jusqu’au
milieu d’un mérithalle (= entre-nœud) (GALET, 1995).
De plus, le rabougrissement des sarments (= branches lignifiées), donnent aux plantes
une forme buissonnante (CARLES, 1985).

™ Sur les grappes

D’après HABERT (1992), les grappes sont moins nombreuses et plus petites que chez les
vignes saines. Le virus du court- noué entraîne souvent le millerandage qui est dû à une
absence ou a une mauvaise fécondation des fleurs et la coulure qui est un avortement des
fleurs non fécondées (ABRACHEVA, 1992).
CHAPITRE II : LES MALADIES VIRALES DE LA VIGNE - 27 -

[Link]/ La mosaïque jaune ou panachure ordinaire

Elle est causée par une souche chromogène du virus du GFLV (MARTELLI et
SAVINO, 1990) ; c’est un symptôme caractérisé par un jaunissement total ou partiel
des feuilles, qui se développe au printemps et qui provoque des éclaircissements au
niveau du limbe (CARLES, 1985 ; GALET, 1983). Ce jaunissement concerne tous les
organes néoformés : feuilles, rameaux, vrilles et inflorescences (MARTELLI, 1992).

[Link]/ La panachure réticulée

Causée elle aussi par une souche chromogène du virus du GFLV (MARTELLI,
1985) ; ce symptôme est représenté par des petites taches jaunes chromes localisées
tout au long des nervures principales des feuilles adultes. Ces décolorations se
manifestent en début de l'été (BOVEY et MARTELLI, 1992 ; MARTELLI, 1992).

[Link]/ Nouvelle forme symptomatologique du court noué

Les symptômes concernent essentiellement la morphologie foliaire et l’architecture de

la tige : les déformations peuvent être symétriques ou pas, le sinus pétiolaire tend à
s’ouvrir d’avantage, avec réduction de croissance latérale, ce qui conduit à une forme
lancéolée caractéristique (TORREGROSA et al., 2000).
Les feuilles les plus touchées prennent une texture épaisse et craquante et une couleur
vert sombre.
D’après TORREGROSA et al. (2000), l’architecture de la tige et la disposition des
organes caulinaires sont affectées par le démarrage de nombreux entre cœurs à la base
desquels les bourgeons latents prennent un aspect surdimensionné.
La longueur des entre nœuds étant réduite par rapport à la normale, les ceps présentent
un aspect buissonnant et les rameaux ont des profils en « balai de sorcière ».

[Link]/ Symptômes internes

Au niveau interne, l’examen de coupes transversales effectuées dans des sarments de

vigne infectée révèle la présence de cordons endocellulaires qui sont plus abondants
dans les entres nœuds de la base des sarments et sont facilement observés dans les
vaisceaux du bois et qui apparaissent sous forme de filaments disposés radialement ;
leur absence n’est pas une preuve de l’absence de virus (BOVEY et al., 1980;
GALET, 1995 ).

3.1.2/ Agent causal et mode de transmission du virus

Douze virus différents sont responsables des syndromes de dégénérescence ou de

dépérissement (Tableau 04) (WALTER et al., 2000).
Le court noué, proprement dit est provoqué par le grapevine fanleaf népovirus GFLV
qui se transmit par les nématodes du genre Xiphinema (ESMENJAUD, 1983).
CHAPITRE II : LES MALADIES VIRALES DE LA VIGNE - 28 -

Deux espèces du genre Xiphinema ont été reconnues comme vectrices du virus du
court-noué : Xiphinema index (VUITTENEZ, 1984 ; MARTELLI, 1994) et avec
moindre efficacité le Xiphinema italiae (MARTELLI, 1985 ; 1994).
L’arabis mosaïque virus ArMV est un deuxième népovirus qui provoque des
symptômes souvent très semblables à ceux provoqués par le GFLV (WALTER et al,
1996) et qui se transmet par le nématode Xiphinema diversicaudatum (MARTELLI,
1994).

Les nématodes sont des vers microscopiques qui pour se nourrir, piquent les racines et
transmettent alors le virus des plants contaminés à des plants sains (VUITTENEZ et
al. , 1972 ; GIRARD et al. , 1989 ; HABERT, 1992).
La contamination par des nématodes est due soit à leur présence dans la parcelle au
moment de la plantation, soit qu’ils ont été apportés ultérieurement dans le sol de la
parcelle (VUITTENEZ, 1984).
Cependant les nématodes vecteurs du court noué peu mobiles par leurs propres
moyens, peuvent être entraînés sur de longues distances par les eaux de ruissellement,
les eaux souterraines et les transports de terre (par les travaux ou les inondations)
(BOVEY et al, 1980).

Le virus du court-noué est transmis aussi par le greffage ; ainsi l’utilisation de matériel
de multiplication contaminé (boutures de portes-greffes et de greffons) conduit à une
dissémination rapide de la maladie de vignoble à vignoble en favorisant le transport
du nématode (CARLES, 1985 ; GUGERLI et al. , 1990).
 CHAPITRE II : LES MALADIES VIRALES DE LA VIGNE - 29 -

Tableau 04: Népovirus infectant la vigne: court noué (dégénérescence et

dépérissement) (WALTER et al, 2000)

VIRUS NEMATODES LOCALISATION

VECTEURS
DEGENERESCENCE
Artichoke Italian latent (AILV) L. apulus Bulgarie
L. fasciatus
Arabis mosaic (ArMV) X. diversicaudatum Allemagne, Bulgarie, Croatie,
France, Hongrie, Israël, Italie,
Japon, Serbie, Suisse, Turquie,
Ukranie, USA
Blue berry leaf mottle (BBLMV) Inconnu USA
Grapevine Bulgarian latent (GBLV) Inconnu Bulgarie, Croatie, Hongrie,
Portugal
Grapevine chrome mosaic (GCMV) Inconnu Autriche, Croatie, Hongrie,
Tchécoslovaquie
Grapevine fanleaf (GFLV) X .index Monde
Raspberry ringspot (RRV) L. macrosoma Allemagne, Suisse
L. elongatus
[Link]
Strawberry latent ringspot (SLRSV) X. diversicaudatum Allemagne, Italie, Portugal,
[Link] Tchécoslovaquie, Turquie
Tomato black ring (TBRV) [Link] Allemagne, Canada, Croatie,
France, Grèce, Hongrie, Israël

DEPERISSEMENT
Peach rosette mosaic (PRMV) X. americanum Canada, USA
[Link]
[Link]

Tomato ringspot (ToRSV) [Link] Canada, USA

X. rivesi
Tobacco ringspot (TRSV) X. americanum Canada, USA

L. = Longidorus; P. = Paralongidorus ; X. = Xiphinema

CHAPITRE II : LES MALADIES VIRALES DE LA VIGNE - 30 -

3.1.3/ Les effets de la maladie sur les cultures

D’après MARTELLI (1992) et GALET (1995), Le court-noué détermine des effets

négatifs sur la vigne :

- production réduite en quantité et en qualité

- moindre endurance aux conditions climatiques
- raccourcissement de la vie productive des vignobles
- dépérissement progressif et mort des ceps.

De plus, le court-noué peut modifier certains processus physiologiques ; en effet la

réduction de la surface foliaire due à la présence du virus provoque des perturbations
au niveau de la photosynthèse (diminution de la teneur en chlorophylle) et de
l’intensité respiratoire (WALTER, 1988).

3.2/ Virus de l’enroulement foliaire (GLRaV)

3.2.1/ Symptômes

L’enroulement foliaire est l’une des plus importantes maladies à virus de la vigne.
Il est largement répandu dans tous les pays viticoles du monde. Toutes les
variétés de vigne à fruit ainsi que les portes-greffes peuvent être infectés. Mais
les symptômes sont surtout visibles sur les cépages rouges de Vitis vinifera (BOVEY
et al. , 1980).
Les symptômes de l’enroulement foliaire se manifestent d’abord au niveau des feuilles
de la partie inférieure des sarments par des taches rougeâtres pour les cépages rouges
et par des taches jaunâtres pour les cépages blancs (BOVEY et al. , 1974 ;
CRESPY,1992 ; WALTER et al, 1996).
La décoloration est internervaire puis s’étend progressivement à toute la surface du
limbe excepté les nervures principales qui restent vertes (BOVEY et al. , 1980). Les
feuilles des ceps attaqués s’épaississent, deviennent cassantes et s’enroulent vers la
face inférieure (OUERFELLI, 1989).
Selon GUGERLI et al (1990), sur les variétés de porte-greffes, les virus de
l’enroulement ne produisent généralement aucun symptôme. De ce fait, les risques de
dissémination à partir des porte-greffes sont élevés.
Au niveau interne, les observations cytologiques des coupes ultrafines des sarments de
vigne infectée par la maladie, montrent la dégénérescence des cellules de phloème
avec l’occlusion des éléments conducteurs et nécrose des cellules compagnes et
parenchymateuses (ROSCIGLIONE et al., 1983).

3.2.2/ Agent causal et mode de transmission du virus de l’enroulement foliaire

La propagation de l’enroulement foliaire dans le vignoble est le fait de l’intervention

de l’homme par l’emploi incontrôlé du matériel de multiplication (greffons et portes-
greffes infectés), ainsi que par la plantation de jeunes pieds contaminés (BRUGNON
et BESSIS, 1968).
CHAPITRE II : LES MALADIES VIRALES DE LA VIGNE - 31 -

D’après GAUTIER (1993) et BOSCIA et al. (1995), l’enroulement peut être induit
par un complexe du virus dont la majorité appartient au groupe des closterovirus.
Selon MARTELLI (1994), les cinq types de particules virales (GLRaV I, GLRaV II,
GLRaV III, GLRaV IV et GLRaV V ) sont transmis de manière efficace d’une vigne à
l’autre par deux cochenilles : Planococcus ficus et Pseudococcus longispinus.
Des études plus récentes confirment la présence de huit closterovirus qui ont été
décrits en association avec les symptômes d’enroulement (Tableau 05) (WALTER et
al., 2000).

Tableau 05: Les vecteurs des virus liés à l'enroulement (WALTER et al., 2000)

VIRUS COCHENILLES VECTRICES

Grapevine leafroll associated-1 (GLRaV-1) Heliococcus bohemicus, Neopulvinaria

innumerabilis,Parthenolecanium corni,
Phenanococcus aceris.
Grapevine leafroll associated-2 (GLRaV-2) Pseudococcus affinis, Pseudococcus
longispinus
Grapevine leafroll associated-3 (GLRaV-3) Phenanococcus aceris, Planococcus citri,
Planococcus ficus, Pseudococcus affinis,
Pseudococcus calcéolaria, Pseudococcus
longispinus, Pseudococcus maritimus,
Pulvinaria vitis
Grapevine leafroll associated - 4 à 8 inconnues
(GLRaV – 4 à 8)

3.2.3/ Les effets de la maladie sur les cultures

Les raisins des ceps infectés par l’enroulement foliaire mûrissent tardivement et de
façon irrégulière. Le retard a pu être estimé de deux à trois semaines (GUGERLI et al.
, 1990 ; ROBBE-DURAND et al. , 1990).
La présence de l’enroulement foliaire se traduit très souvent par une diminution
simultanée de la quantité de raisin produit et de la teneur en sucre (VUITTENEZ,
1984 ; MARTELLI, 1995 ; GUGERLI et al., 1997).
En outre, le virus de l’enroulement diminue le taux de reprise au greffage et
l’enracinement des plants (BOVEY et al. , 1974)

3.3/ La marbrure ou Fleck

3.3.1/ Symptômes

Cette virose est largement répandue à l’état latent sur tous les cultivars européens et les
portes-greffes américains, sauf sur Vitis rupestris et en particulier du lot ou Saint
Georges (BOVEY et al., 1980).
Les symptômes de la maladie sont observés pendant toute la période végétative chez
les jeunes feuilles du rupestris du lot (ABRACHEVA, 1992).
CHAPITRE II : LES MALADIES VIRALES DE LA VIGNE - 32 -

Ils se manifestent par un éclaircissement des nervures, avec un enroulement du limbe

vers la face supérieure et parfois d’importantes déformations foliaires (BOVEY et al.,
1980 ; WALTER et al, 1996).

3.3.2/ Agent causal et mode de transmission

La dissémination considérable du virus est probablement due au fait qu’il ne produit

pas de symptômes chez les Vitis vinifera (BOVEY et al., 1980).
D’après BOSCIA et al (1991), l’agent infectieux causal est le grapevine fleck virus
(GFKV), un virus à particules isométriques de 30 nm de diamètre, limité au phloème ;
ce virus n’est pas transmissible mécaniquement.
Le GFKV a des propriétés qui le rapprochent des virus des genres Tymovirus et
Marafivirus, mais il a été proposé récemment de créer un nouveau genre dont le
GFKV serait l’espèce type et qui pourrait comprendre deux autres virus proches du
GFKV décrits sur vigne en suisse et au Japon, le GAMaV (Grapevine asteroid –
associated virus) et le GRGV (Grapevine red globe virus) (WALTER et al., 2000).

3.3.3/ Effet de la maladie sur les cultures

La marbrure reste latente sur la quasi-totalité des cépages de Vitis vinifera, cependant
sur Vitis rupestris, elle induit une diminution de la rhizogénèse et la reprise au greffage
(WALTER et al., 2000). Selon le même auteur, l’infection simultanée par la marbrure
et l’enroulement peut avoir un effet dépressif très important.
CHAPITRE III : METHODES DE DIAGNOSTIC ET METHODES DE LUTTE - 33 -

1/ METHODES DE DIAGNOSTIC

Le diagnostic des maladies virales fait appel à une série de techniques conduisant à
l’identification du virus (WALTER, 1988; SEMAL, 1993)
- Description des symptômes observés au niveau du vignoble.
- Transmission des maladies à des plantes tests (herbacées et ligneuses).
- Sérologie associée à la microscopie électronique.
- L’électrophorèse et l’hybridation moléculaire.

1.1/ Détection par symptomatologie au champ

L’observation précise des symptômes chez la plante hôte constitue la première étape
du diagnostic. Cependant, la symptomatologie directe ne peut être considérée comme
une méthode générale de diagnostic car elle présente plusieurs insuffisances. Le plus
souvent elle se heurte à deux difficultés principales (SPIRE, 1988) :
- d’une part la latence de plusieurs virus sur certaines variétés de vigne qui
échappent aux inspections visuelles (GALET, 1977).
- d’autre part, une bonne connaissance est exigée pour les symptômes causés par
les agents pathogènes, par les carences, par les ravageurs et anomalies qui
peuvent être confondus avec ceux des maladies à virus (BOVEY et al., 1980 ;
LEPOIVRE et KUMMERT, 1993).

1.2/ Détection par indexage

L’indexage consiste à transmettre les virus par inoculation mécanique ou par greffage
sur une plante particulièrement sensible choisie pour sa capacité à extérioriser
rapidement les symptômes d’une virose donnée, cette plante est dite : Indicateur ou
plante test (BOVEY et al., 1974 ; GILES et VERHOYEN,1992 ; AUBERT et
VULLIN, 1997).

1.2.1/ l’inoculation mécanique sur indicateurs herbacés

C’est une technique mise au point par CADMAN, DIAS et HARISSON en 1960, qui
ont montré qu’il est très facile de transmettre le virus du court-noué (GFLV) à des
plantes herbacées, alors qu’auparavant, le virus était réputé intransmissible en dehors
du genre Vitis (GALET,1995).
L’utilisation des plantes indicatrices herbacées est très avantageuse vu qu’elles sont
très faciles à cultiver sous les conditions de milieu contrôlées. De plus elles se
distinguent par une croissance et une extériorisation des symptômes très rapides (durée
maximale 15 à 20 jours) (CORNUET, 1987 ; CLOQUEMIN, 1988; HANIM, 1991).
Selon GALET (1995), l’observation des symptômes commence à partir du sixième
jour jusqu’aux dixième jour de l’inoculation pour le court-noué.
CHAPITRE III : METHODES DE DIAGNOSTIC ET METHODES DE LUTTE - 34 -

Les plantes herbacées les plus utilisées pour la détection des virus de la vigne sont les
Chenopodiaceae (Chenopodium quinoa, C. amaranticolor) ; les Solanaceae
(Nicotiana glutinosa, [Link] L) ; les Amaranthaceae (Gomphrena globosa) et les
Cucurbitaceae (Cucumus sativus L) (BOVEY, 1981 ; MORSLI, 1995); les
Légumineuses (Phaseolus vulgaris, Vicia faba) (LAGHA, 1990).

1.2.2/ L’indexage par greffage sur indicateurs ligneux

C’est une technique utilisable surtout pour les virus latents et pour les virus qui ne se
transmettent pas mécaniquement (BOVEY, 1981).
La détection est basée sur les symptômes produits soit sur la variété elle-même, soit
sur une autre variété ou espèce sensible de Vitis ; l’efficacité de l’indexage implique le
choix de variétés indicatrices adéquates, réagissant à chaque type de virose par des
symptômes caractéristiques (BOVEY et al., 1980).

Ainsi, la maladie de la marbrure non repérable chez Vitis vinifera et de nombreux

portes-greffes, se révèle chez les variétés indicatrices appropriées Vitis rupestris du
lot et rupestris berlandieri 99R, De même la nécrose des nervures chez Rupestris
berlandieri 110R et l’écorce liégeuse sur LN 33 ( BOVEY et al, 1980).
Plusieurs variétés de vigne sont utilisées comme indicatrices du fait de leur sensibilité
à tel ou tel virus (tableau 06) (MARTELLI, 1985) :

Tableau 06: Indicateurs ligneux utilisés pour l'indexage des maladies

virales de la vigne (MARTELLI, 1985)

VARIETES INDICATRICES MALADIES

Vitis rupestris Saint George Court-noué, Marbrure

Vitis vinifera Mission Enroulement foliaire
110 R (Vitis rupestris x Vitis berlandieri) Nécrose des nervures
Kobber 5BB (Vitis berlandieri x Vitis riparia) Enation, Bois strié
LN 33 (Couderc 1613 x Vitis vinifera) Bois strié, Ecorce liégeuse

La lecture des résultats sur indicateurs ligneux demande un délai plus long que pour
les indicateurs herbacés. Ce délai peut aller de deux semaines à deux mois pour les
virus du court noué et de la marbrure, mais peut nécessiter une année pour
l’enroulement foliaire et le bois strié (MARTELLI, 1985 ; WALTER, 1998).
Cette durée de réponse très longue met en évidence l’intérêt de réduire la durée de
l’apparition des symptômes par de nouvelles méthodes : le greffage en vert et
l’indexage in vitro par le microgreffage de tige.
CHAPITRE III : METHODES DE DIAGNOSTIC ET METHODES DE LUTTE - 35 -

1.2.3/ Le greffage en vert

Actuellement, la détection rapide des maladies à virus de la vigne est établie par une
nouvelle technique de greffage en vert ; des boutures vertes des variétés à tester sont
greffées sur des boutures vertes du porte greffe (plante indicatrice) ; Les assemblages
sont maintenus à des conditions contrôlées d’humidité et de température élevées. Les
greffes sont ensuite transférées en serre pour l’extériorisation des symptômes qui aura
lieu après quatre à douze semaines selon la maladie (WALTER et al. , 1990 ;
MARTIN et COLLAS, 1992).

1.2.4/ L’indexage par microgreffage de tige in vitro

Cette méthode consiste à multiplier in vitro des microboutures herbacées de plantes

indicatrices et de plants candidats ; le microgreffage est effectué selon la technique de
la fente pleine (TANNE et al., 1996).

Des travaux réalisés par HASSANI et BOUBALS (1991) et D’KHILI et al. (1995) sur
la manifestation des symptômes du virus de la nécrose des nervures par microgreffage
in vitro du 110 Richter sur des variétés de Vitis vinifera ont permis de déceler des
symptômes de dépérissement, des nécroses foliaires et des taches noires sur les tiges et
les racines environ 40 à 50 jours après leur mise en culture.
D’autres travaux de TANNE et al.(1993) de détection du virus du bois strié par
microgreffage de variétés de vigne sur LN33 ont révélé les symptômes du bois strié 8
à 12 semaines après le microgreffage.

1.3/ Détection par la sérologie

Les méthodes sérologiques sont la base des tests de dépistage direct des vignes
infectées, applicables au contrôle sanitaire des clones de vigne en cours de sélection.
Les tests sérologiques présentent sur les autres techniques de diagnostic l’avantage
décisif d’être réalisables toute l’année, en utilisant des extraits de feuilles préparés
lorsque les vignes sont riches en virus au printemps. Ces extraits peuvent être stockées
au congélateur sans perdre leur pouvoir de réaction pendant une période prolongée
(VUITTENEZ, 1974).

Les méthodes sérologiques sont basées sur les propriétés de deux types de molécules
possédant une affinité l’une pour l’autre : l’antigène, partie protéique propre au virus,
et l’anticorps, spécifique de l’antigène élaboré par un animal auquel cet antigène a été
injecté (HILL, 1984 ; LEPOIVRE et KUMMERT, 1993).

1.3.1/ Le test Elisa

La méthode Elisa (Enzyme linked immuno-sorbent assay), comme son nom l’indique,
fait appel à une réaction immuno- enzymatique où la formation du complexe antigène-
anticorps est accompagnée et mise en évidence par une réaction enzymatique (CLARK
et ADAMS, 1977).
CHAPITRE III : METHODES DE DIAGNOSTIC ET METHODES DE LUTTE - 36 -

Cette méthode a permis de déceler plusieurs virus dans des vignes apparemment
saines. Elle s’impose comme une méthode de choix pour la détection et l’identification
de toutes les viroses dans le cas de la sélection de la vigne (BOUQUET et
DANGLOT., 1983 ; GUGERLI et al., 1984, WALTER et DEMANGEAT., 1994).
D’après WALTER et al (1984) ; LEPOIVRE et KUMMERT, (1993), cette méthode
est très pratique, rapide (réponse après 48 heures). Elle permet l’analyse d’un nombre
élevé d’échantillons et la détection de très faibles concentrations en virus ([Link]-
1
à 10 [Link]-1).
De plus, c’est une technique très fiable et précise du fait que les virus sont identifiés
spécifiquement par chaque sérum (CORBAZ, 1990 ; FUCHS et WALTER, 1990).

1.3.2/ Détection par la technique d’immuno-électromicroscopie (IEM)

La combinaison des techniques sérologiques et la microscopie électronique s’est

avéré particulièrement efficace pour la détection des virus (ROSCIGLIONE et al .,
1986).
En microscopie électronique, la sensibilisation des grilles par des anticorps spécifiques
permet de retenir les particules virales présentées dans un extrait végétal et observer le
précipité formé (GUGERLI et al., 1984 ; ZIMMERMANN et al., 1988 ; FOX ,1993).

1.4/ Détection par électrophorèse :

Cette technique se développe particulièrement pour les viroïdes qui ne peuvent pas être
détectés par la sérologie (LAGHA, 1990).
En plus de sa large diffusion dans le domaine de la purification des virus, son
application dans le diagnostic a permis la possibilité de révéler l’infection mixte par
des virus ou des viroïdes (ABOU GHANEM, 1993).
L’électrophorèse permet la migration des molécules chargées selon leur taille, leur
forme et leur structure tridimensionnelle. Le choix du gel (polyacrylamide, agarose ou
agar) joue un rôle primordial dans la séparation des composantes virales suivant leur
poids moléculaire (OUERFELLI, 1990 ; LAGHA, 1990).

1.5/ Détection basée sur l’hybridation des acides nucléiques (PCR)

Le développement des techniques moléculaires a permis de progresser sans cesse dans

la caractérisation de nouveaux agents pathogènes et la mise au point de nouveaux tests
de diagnostic (GENTIT, 2002).
Les techniques moléculaires par PCR permettent de répondre à une demande de
diagnostic fiable et rapide, en absence de tests biologiques précis basés sur
l’épidémiologie. Elles permettent d’établir un bilan sanitaire qui fait la distinction
entre les souches de virus sur la base de leurs propriétés moléculaires à l’aide
d’amorces spécifiques des souches virales suivi d’une digestion du produit amplifié
par des enzymes de restriction ( GENTIT, 2002).
CHAPITRE III : METHODES DE DIAGNOSTIC ET METHODES DE LUTTE - 37 -

Le recours à l’amplification moléculaire permet le séquençage des acides nucléiques

d’un pathogène et confère également de nouvelles perspectives de compréhension des
interactions hôte/parasite et l’identification des facteurs de virulence (FUCHS et al.,
1991).

Chez la vigne, cette technique a permis de détecter plusieurs virus en un seul test en
utilisant plusieurs couples d’amorces spécifiques ; c’est ainsi, des amorces dégénérées
qui amplifient une région génomique conservée permettant de détecter plusieurs
clostérovirus et vitivirus simultanément (MINAFRA et al., 1994 ; WALTER, 1998).

2/ METHODES DE LUTTE

Les virus sont à l’origine d’une diminution considérable de la quantité et de la qualité

des récoltes ; de ce fait, il est nécessaire d’utiliser des stratégies de lutte différentes de
celles qui sont pratiquées contre les champignons ou les bactéries (RIVES, 1971 ;
WALTER, 1996).
En effet, les virus utilisent pour se multiplier la machinerie cellulaire de la vigne qu’ils
infectent et qu’ils détournent à leur profit. Ainsi les maladies virales échappent à la
lutte chimique, dont l’action perturberait aussi le métabolisme des cellules végétales
(VIDAUD et al, 1993 ; WALTER, 1996).

2.1/ Sélection sanitaire

L’objectif de la sélection sanitaire est le choix des ceps non infectés par les virus les
plus néfastes (virus du court noué, de l’enroulement foliaire pour les variétés de vigne
et le virus de la marbrure pour les porte-greffes) et la multiplication de leurs
descendances clonales maintenues le plus longtemps possible à l’abri des
contaminations virales (RIVES, 1971 ; VIDAUD et al, 1993 ; WALTER et al., 2000).
La sélection sanitaire repose sur la sélection clonale qui a pour but de sélectionner et
de propager pour un cépage donné les clones les mieux adaptés aux contraintes
qualitatives et productives (RIBEREAU-GAYON et PEYNAUD, 1971 ; WALTER et
MARTELLI, 1996).
Selon WALTER et al. (2000), les étapes successives de la sélection clonale sont les
suivantes :
- détection des ceps intéressants appelés « têtes de clone »
- analyse sanitaire et génétique de chaque clone
- expérimentation des clones certifiés
- conservation et multiplication des clones.
CHAPITRE III : METHODES DE DIAGNOSTIC ET METHODES DE LUTTE - 38 -

2.2/ La lutte contre les vecteurs de virus

2.2.1/ la lutte contre les nématodes

La lutte contre les nématodes, vecteurs des virus du court noué est menée aujourd’hui
par le repos du sol et par la désinfection chimique (SEMAL et VANDERVEKEN,
1993).
Le repos du sol consiste à interrompre dans la parcelle la culture des espèces végétales
hôtes des espèces de nématodes vecteurs. Les hôtes principaux de Xiphinema index
sont en plus de la vigne : le figuier, le jasmin, le peuplier…etc. et pour Xiphinema
diversicaudatum ce sont : le fraisier, le framboisier, le rosier, le pêcher, le
cerisier…etc.(WALTER et al.,2000).
Après une période de 5 à 7 ans de repos, les nématodes tendent à disparaître de la
parcelle (SEMAL et VANDERVEKEN, 1993).Cependant, la désinfection du sol ne
permet pas d’éradiquer les nématodes, mais de retarder plus ou moins l’apparition
des symptômes viraux dans la parcelle (WALTER et al., 2000).
D’autant plus que, la désinfection à l’aide de nématicides n’est pas toujours efficace et
surtout comporte des risques non négligeables de contamination des eaux souterraines
(BOUQUET, 1983 ; MAUROS et al, 1994 ; WALTER, 1996).

2.2.2/ La lutte contre les cochenilles

La lutte contre les cochenilles nécessite une stratégie à base de traitement insecticide.
Cependant cette méthode n’est pas toujours efficace contre les vecteurs aériens qui
jouent un rôle significatif dans la dissémination des virus (SEMAL et
VANDERVEKEN, 1993).
En outre, des connaissances complémentaires sur la nature des espèces vectrices, sur
leur biologie, sur l’existence d’ennemis naturels, parasites ou prédateurs de ces
espèces et sur les situations climatiques dans lesquelles les insectes vecteurs n’existent
pas, permet d’envisager des méthodes de lutte plus efficaces (WALTER et al., 2000).

2.3/ La prémunition

La prémunition ou protection croisée repose sur l’utilisation d’isolats hypo-virulents

d’un phytovirus qui, en infectant une plante, induisent chez celle ci une protection vis
à vis d’une surinfection par des isolats hyper-virulents du même virus (CORBAZ,
1990 ; DUNEZ, 1996)
La prémunition a été utilisée en pratique à grande échelle contre les virus de la tomate,
des citrus et du papayer (LEPOIVRE et SEMAL, 1993).
Cette stratégie a été expérimentée pour la lutte contre les virus du court noué. Dans ce
cadre des isolats hypo-virulents d’ArMV et de GFLV ont été démontrés d’abord sur
un hôte herbacé : Chénopodium quinoa (DUNEZ, 1990 ; WALTER et al., 2000).
Des essais effectués sur des vignes atteintes de court noué ont montré que certains
isolats hypo-virulents peuvent induire un retard à l’infection par un isolat hyper-
virulent. Ceci se traduit par une atténuation des symptômes et un accroissement de la
récolte de raisin par comparaison avec des ceps non prémunis infectés par le même
isolat hyper-virulent (WALTER, 1998 ; WALTER et al., 2000).
CHAPITRE III : METHODES DE DIAGNOSTIC ET METHODES DE LUTTE - 39 -

2.4 /La recherche de porte-greffes résistants

L’utilisation de porte-greffes résistants à la transmission du virus du court noué

apporterait une garantie supplémentaire contre les risques de recontamination
(BOUBALS, 2001 ; GUGERLI et al, 1990).
Selon GALET (1977), les porte-greffes paraissant résistants ou tolérants étaient en
réalité des variétés peu multipliées : (333 EM, 44-53 M, 196-17 CL, GL…etc.), mais
possédant par conséquent un état sanitaire moyen supérieur aux variétés fortement
diffusées tels que : Riparia gloire, Rupestris du lot, 3309 C…etc.
En matière de résistance au court noué, les recherches se sont orientées vers la
sélection des porte-greffes possédant une bonne résistance ou une bonne tolérance à
Xiphinema index, notamment par le recours à des espèces telles que Vitis aizonica ou
Vitis rufotomentosa (BOUQUET, 1983 ; BOUQUET et DANGLOT., 1983).
En 1978, BOUBALS et PISTRE ont montré que l’immunité stricte à Xiphinema index
n’existait pas dans le genre Vitis, ni d’ailleurs dans les genres Parthenocissus et
Ampelopsis ; ils ont également noté que des plants de muscadine inoculés par le virus
au moyen de Xiphinema index infectieux, ne manifestaient cinq ans après, aucun
symptôme foliaire de court noué à la différence de toutes les espèces du genre vitis et
des porte-greffes inoculés dans les mêmes conditions.
Cependant selon BOUQUET (1978 ;1981) ; BOUQUET et al (2000), il est apparu que
l’espèce Muscadinia rotundifolia cultivée dans le sud-est des Etats unis, et connue
depuis longtemps pour sa résistance totale aux Phylloxéra, possédait également un
degré très élevé de résistance à Xiphinema index.

2.5/ Résistance induite par transfert de gènes

Les recherches pour la création de porte-greffes résistants aux court noué ont été
entreprises, il’ y a une vingtaine d’année. Les premières expérimentations de
transgenèse sur la vigne se développent dans différents laboratoires à travers le monde
dans le but d’ajouter aux porte-greffes et aux cépages un caractère nouveau, sans
modifier leurs autres propriétés (MAUROS et al, 1994 ; WALTER, 1996).

Dans cette optique, les chercheurs ont eu recours à la transgenèse, avec utilisation de la
stratégie dite « anti-sens » ou « résistance dérivée du pathogène », qui consiste à
insérer dans le génome de la plante une copie inverse du gène qui code pour la
protéine constituant la capside du virus (RIBA, 2001).

En Autriche, en France, en Israël, en Suisse et aux Etats Unis d’Amérique, la stratégie

de la « résistance dérivée du pathogène » est en cours d’expérimentation sur la vigne
(WALTER et al., 2000).
Ainsi, les gènes de la coque protéique de népovirus (ArMV, GFLV, GCMV) ont été
transférés dans divers cépages de Vitis vinifera et de porte-greffes. De même pour les
virus GVA, GVB et G GLRaV-3 (WALTER et al., 2000).
CHAPITRE IV : LA CULTURE IN VITRO - 40 -

1/ INTRODUCTION

La multiplication in vitro est un mode de reproduction asexuée (reproduction

végétative artificielle) (BOCCON-GIBBOD, 1989), qui s’applique autant à des plantes
entières qu’à des fragments de plantes (tissus ou organe) et aussi bien à des cellules
isolées (AUGE, 1989).
La culture in vitro représente un outil puissant aux perspectives industrielles et
économiques importantes. De même diverses techniques dérivées de la culture in vitro
ont un rôle important à jouer pour l’amélioration des performances agronomiques ou
horticoles des plantes cultivées (RAJNCHAPEL et GUERCHE, 1985).

C’est dans le concept de totipotence cellulaire que la culture in vitro doit toute son
extension. Selon HABERLANDT (1902), toute cellule végétale vivante qu’elle que
soit sa spécialisation, du moment qu’elle est vivante et possède un noyau, est capable
de reproduire la plante entière d’où elle provient.
En général, au cours du développement de l’embryon puis de la plante, les cellules
provenant des divisions successives se différencient en se spécialisant, alors que les
cellules des organes adultes cessent de se diviser. Mais chez les végétaux il persiste
toujours des méristèmes qui confère à la plante une organogenèse permanente ou
indéfinie qui l’oppose à l’ontogenèse des animaux, laquelle est définie par la mise en
place des organes que pendant la seule vie embryonnaire (MARGARA, 1989;
HELLER et al., 1995).

2/ HISTORIQUE

Les premiers travaux de la culture in vitro de tissus végétaux sont dus à

HABERLANDT (1902), qui énonce le concept de la totipotence cellulaire. Ainsi, il
réussit à faire survivre in vitro pendant quelques mois mais sans multiplication, de
petits amas cellulaires issus de cellules isolées de tissus palissadiques de feuilles de
Lamium purpureum.
Il a fallut attendre 1922, pour que de nouveaux espoirs apparaissent pour la culture de
tissus végétaux, grâce à ROBBINS, qui réussit à maintenir des pointes de racines en
survie prés de six mois et à obtenir des fragments qui passèrent de quelques
millimètres à six centimètres de long.
En 1934, WHITE réussit une culture indéfinie de racines de tomate. Ce succès fut sans
doute à l’origine des résultats obtenus par GAUTHERET (1939), qui réussit les
premières cultures indéfinies de tissus de carotte.
En 1944, BUVAT par les techniques de culture de tissus du tabac, met en évidence le
phénomène de dédifférenciation qui aboutit à une structure cytologique comparable à
celle des cellules des méristèmes.
En 1946, BALL obtient la régénération de plants de lupin à partir d’apex de grande
taille.
En 1957, SKOOG et MULLER régénèrent des racines et des tiges de tabac à partir de
cals sous l’influence d’auxines et de cytokinines.
CHAPITRE IV : LA CULTURE IN VITRO - 41 -

Une autre étape historique a été la guérison de plantes atteintes de maladies à virus à
l’aide de la culture in vitro de méristèmes ; en effet, les observations qui ont conduit à
la mise au point de cette technique ont débuté avec les travaux de WHITE en 1932, qui
a remarqué que dans les racines de tomates cultivées in vitro et provenant de plantes
infectées par le virus de la mosaïque du tabac, le nombre de particules virales diminue
régulièrement des extrémités des racines (BOXUS, 1978).
En 1949, LIMASSET et CORNUET ont montré le même phénomène dans les
méristèmes de tabac virosé.
En 1952, mettant à profit ces travaux, MOREL et MARTIN régénèrent des plantes
entières saines de dahlia à partir de culture de méristèmes de plants infectés par deux
virus : la mosaïque et le spotted wilt virus.
Deux ans plus tard, la même méthode permit de sauver la variété de pomme de terre
« la belle de Fontenay » atteintes des virus A, Y et X (BOXUS, 1978 ;
RAJNCHAPEL-MESSAI et GUERCHE, 1985).
Depuis lors, la culture de méristème a permis la régénération d’un grand nombre
d’espèces (la vigne, le framboisier…etc.) et l’élimination de beaucoup de viroses
(BOXUS, 1978 ; REGNER ET AL., 1995).

3/ TECHNIQUES DE MULTIPLICATION PAR CULTURE IN VITRO

La culture in vitro d’explants ou de fragments prélevés sur la plante permet différentes

applications :
3.1/ La micropropagation

La multiplication végétative in vitro ou micropropagation est une technique en plein

essor. Elle consiste à reproduire des plantes semblables à la plante mère à partir d’un
fragment plus ou moins grand (AUGE et BOCCON-GIBBOD, 1989).
La micropropagation in vitro peut suivre deux voix différentes (ZRYD et al., 1988 ;
REYNIER, 1991) :

3.1.1/ Multiplication par bourgeonnement axillaire

En provoquant le débourrement des bourgeons axillaires présents naturellement à

l’aisselle des feuilles ; un bourgeon de tige mis en culture ne développe en principe
qu’un seul axe par la croissance du méristème caulinaire principal, cette technique de
micropropagation fait donc accélérer le fonctionnement normal des méristèmes des
bourgeons déjà formés sur une plante.
Le même développement végétatif peut être provoqué à partir de fragments de tiges ou
d’inflorescences qui comportent des nœuds et par conséquent des bourgeons axillaires.

3.1.2/ Multiplication par bourgeonnement adventif

En provoquant l’apparition de bourgeons adventifs en des endroits inhabituels,

l’initiation de méristèmes peut être en principe induite sur n’importe quel type
d’organes ou de tissus, y compris sur ceux qui ne les produisent pas dans les
conditions naturelles.
CHAPITRE IV : LA CULTURE IN VITRO - 42 -

Le bourgeonnement adventif favorise soit une organogenèse directe qui permet

d’obtenir des pousses adventives en grand nombre directement sur les tissus mis en
culture sans le passage par le stade cal ; soit une organogenèse indirecte, qui nécessite
le passage par le stade cal, le plus souvent utilisée pour l’obtention de variation
somaclonale.

3.2/ L’embryogenèse somatique

L’embryon est défini comme étant une plante à son stade initial de développement. Il
s’agit en fait d’une structure bipolaire où s’individualisent rapidement et
simultanément deux méristèmes, l’un rhizogène, l’autre caulinaire, qui suite au
processus de germination donne naissance à une nouvelle plante (MARGARA, 1989).
L’embryon zygotique est un embryon issu de la fécondation de l’oosphère et du
spermatozoïde.
En culture in vitro, il est possible par des modifications de l’équilibre hormonal ou
physico-chimique d’induire l’expression d’un programme génétique différent qui
permet à une cellule de se diviser et de se différencier en cellules embryonnaires qui
peuvent être source de tissus ou cals embryogénes, qui produisent des embryons dits
embryons somatiques (GOACOLOU et PERDRIZET, 1988).
L’embryon somatique est un embryon issu du développement in vitro d’une cellule
somatique à 2n chromosomes.
L’intérêt essentiel des recherches sur l’embryon somatique a été de montrer que la
capacité de reproduire un nouvel individu est une aptitude fondamentale de la cellule
végétale (totipotence cellulaire) (ZRYD et al., 1988 ; MARGARA, 1989).

3.3/ La culture de méristèmes

La culture de méristèmes constitue une autre application importante de la culture in

vitro, notamment pour l’éradication des maladies à virus (MARTIN, 1985 ; REGNER
et al., 1995).
Les méristèmes sont formés de cellules non différenciées à l’origine de tous les tissus
de la plante. Leur mise en culture in vitro permet d’obtenir une plante identique à la
plante initiale ; l’intérêt des méristèmes réside dans le fait que ce sont des structures
indemnes de virus capables de donner des plantes saines (HELLER et al., 1995).

3.3.1/ Problèmes posés par la culture de méristèmes

3 La taille de l’explant
Il est généralement admis que le taux d’assainissement est lié à la taille du méristème
prélevé. Plus le méristème est petit plus le taux de réussite est élevé (BOXUS, 1978).
Cependant chez de nombreuses espèces l’obtention directe d’une plante à partir du
dôme apical reste très aléatoire ; ainsi, chez le fraisier le pourcentage de reprise est nul
pour des méristèmes de 0.1mm, et il est égal à 10 % lorsque leur hauteur est de 0.2
mm (ZRYD et al., 1988).
CHAPITRE IV : LA CULTURE IN VITRO - 43 -

En effet, le méristème étant très petit peut se dessécher, par contre le prélèvement des
méristèmes comportant plus de deux primordia foliaires peut entraîner des cellules
sous jacentes virosées (AUGE et BOCCON-GIBBOD, 1989).

3 L’état physiologique du pied mère

Chez les espèces herbacées, lorsque les méristèmes sont prélevés sur des axes en
croissance active, le taux de régénération ou de guérison atteint 80 à 90 % de l’effectif,
par contre ce taux peut descendre à 5 ou 10 % quand le prélèvement se fait sur des
rameaux en état de dormance (AUGE et BOCCON-GIBBOD, 1989).
Chez les espèces ligneuses, la reprise des méristèmes est d’autant plus difficile que
l’arbre est âgé, les méristèmes excisés brunissent rapidement dans le milieu et meurent
(ZRYD et al., 1988).

3 Brunissement des tissus

Il est à l’origine de l’oxydation des composés polyphénoliques excrétés par les
explants. Ces composés ainsi que les produits de leur oxydation sont connus pour
inhiber les activités enzymatiques des polyphénoloxydases, ce qui a pour effet
d’entraîner la mort des méristèmes (ZRYD et al., 1988).

4/ LES CONDITIONS DE CULTURE DES TISSUS IN VITRO

La technique in vitro est un mode de multiplication végétative artificielle des plantes.

Il s’agit d’un ensemble de méthodes faisant intervenir des conditions de culture
parfaitement contrôlées (milieux de culture définis pour chaque type de plante,
lumière, température, humidité,...).

4.1/ Le milieu de culture

Les milieux de culture sont adaptés aux exigences de la plante. Ils contiennent en
général de l’eau, des éléments minéraux, des éléments organiques, des régulateurs de
croissance et des vitamines.

4.1.1/ Les éléments minéraux

9 Les macro-éléments : Il s’agit de 6 éléments minéraux présents à des

concentrations élevées tels que l’azote (N), le calcium (Ca), le potassium (K), le
soufre (S), le magnésium (Mg) et le phosphore (P) (GAUTHERET, 1959)
9 Les micro-éléments : appelés aussi oligo-éléments, et bien qu’ils ne soient
nécessaires à la plante qu’en faibles concentrations, leur rôle est essentiel pour
l’équilibre nutritif de la culture ; les principaux d’entre eux sont le fer (Fe), le
cuivre (Cu), le zinc (Zn), le manganèse (Mn), le molybdène (Mo), le bore (B), le
chlore (Cl), le cobalt (Co) et le nickel (Ni) (GAUTHERET, 1959).
CHAPITRE IV : LA CULTURE IN VITRO - 44 -

4.1.2/ Les éléments organiques

9 Les sucres : dans le cas des tissus végétaux placés en culture in vitro,
l’assimilation chlorophyllienne est nulle ou insuffisante pour assurer la survie et le
développement de l’explant ; dès lors, l’adjonction des sucres (le plus souvent du
saccharose) dans le milieu de culture est nécessaire pour fournir à l’explant une
source de carbone (GAUTHERET, 1959).

9 Les vitamines : l’emploi de diverses vitamines favorise fréquemment le

développement des cultures in vitro, elles appartiennent surtout au groupe B, les
plus courante sont : la vitamine B1 (thiamine-HCl), la vitamine B6 (la
pyridoxine), la biotine, la pantothénate de calcium et le myo-inositol
(GAUTHERET, 1959).

4.1.3/ Les régulateurs de croissance

Appelés généralement hormones de croissance, ce sont des composés organiques

synthétisés dans un organe et transporté vers des cellules cibles dans lesquelles ils
déclenchent une réaction précise. Chez les végétaux on connaît actuellement 5 groupes
d’hormones qui agissent principalement sur la division cellulaire (donc la croissance
de la plante) et leur différenciation (la formation de divers organes) (HELLER et al.,
1995).
L’effet des hormones dépend à la fois de leur concentration, de leur site d’action, du
stade de développement de la plante.

9 Les auxines

L’auxine est un composé à noyau indole dont la formule brute est C10H9O2N , dont le
nom est Acide Indole B Acétique (AIA) ; la synthèse de l’auxine se situe au niveau des
très jeunes feuilles, dans les bourgeons en activité, au niveau des ébauches florales et
des jeunes fruits.
De nombreux composés de synthese présentent des propriétés similaires à celles de
l’auxine naturelle l’AIA : acide 2,4- dichlorophénoxyacétique (2,4-d), acide indole3
butyrique (AIB), acide1 naphtalène acétique (ANA).
Les auxines stimulent l’élongation des tiges, la différenciation et la croissance des
racines, la maturation des fruits et l’abscission des feuilles et des fruits (ZRYD et al.,
1988 ; AUGE, 1989 ; HELLER et al., 1995).
En culture in vitro, les auxines favorisent la croissance des cals, les divisions
cellulaires, l’élongation cellulaire et favorisent l’enracinement des explants
(ANONYME, 1999).
CHAPITRE IV : LA CULTURE IN VITRO - 45 -

9 Les cytokinines

Les cytokinines sont des adénines substituées dont la zéatine (Zéa) est naturelle ;
élaborée essentiellement par les racines et au niveau des embryons.
D’autres cytokinines de synthèse sont utilisées: la kinétine (Kin), la 6-
benzylaminopurine (BAP), la 2- isopentyl adénine (2IP). Elles sont synthétisées dans
les tissus en croissance active plus particulièrement dans les racines, les embryons et
les fruits.
Leurs principales propriétés physiologiques sont : la stimulation de la division
cellulaire, la néoformation des bourgeons, l’inhibition de la dominance apicale et la
levée de dormance de certaines semences (tabac, trèfle) et de certains bourgeons
(vigne) (ZRYD et al., 1988 ; HELLER et al., 1995).
En culture in vitro, les cytokinines stimulent les divisions cellulaires, régularisent la
morphogenèse (acquisition de la forme), stimulent la croissance des bourgeons
axillaires et contribuent au renouvellement de la chlorophylle (ANONYME, 1999).

9 Les gibbérellines

Les gibbérellines sont des hormones naturelles appartenant à la famille des diterpénes,
qui comporte un noyau gibbérellane (cycle pentagonal flanqué de deux cycles
hexagonaux).
Ces molécules sont produites dans les jeunes feuilles et les semences en
développement, elles favorisent la germination des graines, lèvent la dormance des
bourgeons, assurent l’élongation de la tige et la croissance des feuilles, stimulent la
floraison et la fructification (ZRYD et al., 1988 ; HELLER et al., 1995).
En culture de tissus, seul l’acide gibbérellique A3 (GA3) est utilisé, il favorise le
grandissement cellulaire, l’allongement des entre nœuds et lève la dormance des
graines (ANONYME, 1999).

9 L’acide abscissique (ABA)

Il est produit dans les bourgeons et est considéré comme un antagoniste des
gibbérellines qui inhibent et retardent la croissance des rameaux dont les entre nœuds
ne s’allongent pas. Il prolonge la dormance des bourgeons et des graines.
L’acide abscissique est une hormone de détresse qui permet à la plante de prendre des
dispositions de défense à l’égard des agressions comme la sécheresse dont la fermeture
des stomates et l’entrée en vie latente sont parmi les moyens mis en œuvre (HELLER
et al., 1995).
En culture in vitro, bien qu’il soit un inhibiteur de croissance, il peut avoir un effet
stimulant sur la croissance des cals (ZRYD et al., 1988).

9 L’éthylène

C’est une hormone végétale sous forme gazeuse. Son dégagement est observé sur des
graines en germination, sur des feuilles âgées, sur les fruits lors de leur maturation ; en
effet elle agit sur la chute des feuilles et l’abscission des fruits (HELLER et al., 1995).
CHAPITRE IV : LA CULTURE IN VITRO - 46 -

4.2/ Les facteurs physiques

4.2.1/ Les besoins en lumière

Les exigences en lumière des tissus cultivés in vitro sont moins importantes par
rapport à celles des plantes entières autotrophes ; la photosynthèse n’est pas une
activité nécessaire puisque l’énergie est fournie sous forme de sucre (BOCCON-
GIBBOD, 1989) ; par ailleurs, la lumière est indispensable pour réguler certains
processus morphogénétiques (ZRYD et al., 1988).
Dans la pratique, la plupart des salles de culture ont une durée d’éclairement de 16 à
18 heures par jour, les intensités lumineuses varient de 5 à 25 w.m-2 (1000 à 5000 lux)
(BOCCON-GIBBOD, 1989).

4.2.2/ L’influence de la température

La température des salles de culture est habituellement réglée de façon constante à 22-
25°C. Les plantes à bulbes multipliées in vitro entrent en dormance après leur transfert
en sol, si elles n’ont pas été préalablement soumises à une période de froid (2-5°C)
pendant 4 à 6 semaines à l’obscurité (ZRYD et al., 1988).

5/ CULTURE DE TISSUS, PHYTOPATHOLOGIE ET ASSAINISSEMENT DE LA

VIGNE

Les premières cultures in vitro de tissus de vigne furent établies par MOREL en 1944.
Cependant, la culture in vitro en tant que méthode rapide de multiplication de la vigne
fut mise au point par GALZY en 1961 ; depuis, plusieurs techniques ont été définies
par plusieurs auteurs :
- le microbouturage (GALZY, 1969 ; NOZERAN et BANCILHON, 1972 ; MARTIN,
1985).
- embryogenèse somatique (MULLINS et SRINIVASAN, 1976).
- la néoformation caulinaire (FAVRE, 1977).
- la culture de fragment d’apex (BARLASS et SKENE, 1978).
- la micropropagation par bourgeonnement axillaire (HARIS et STEVENSON, 1982).
- la culture des feuilles (LEBRUN, 1985).
- la culture d’inflorescence (POOL, 1975).
- la culture d’anthères (ZOU et LI, 1981).
- la culture d’ovules (BESSIS et LABROCHE, 1985).
- la sélection sanitaire in vitro utilisée pour la production de matériel certifié: la culture
de méristème associée ou non à la thermothérapie (GIFFORD et HEWITT, 1961 ;
GALZY, 1966 ; BASS et VUITTENEZ, 1977), le microgreffage d’apex (AYUSO,
1985).

5.1/ La culture in vitro de méristèmes

La culture de méristèmes dans des milieux nutritifs a été entreprise par GALZY (1972)
qui avait fait des recherches sur des milieux nutritifs plus favorables à la rhizogenèse
de plants issus de méristèmes de Vitis rupestris.
CHAPITRE IV : LA CULTURE IN VITRO - 47 -

En 1976, BINI suivant la même ligne de recherche a réussi à cultiver des méristèmes
de Vitis vinifera avec des résultats encourageants.
BARLASS et SKENE, 1978 ont été les premiers à mettre au point une méthode simple
et rapide permettant d’aboutir à la production industrielle de matériel de propagation
de la vigne, à partir d’un seul méristème mesurant 1 mm et comportant deux à trois
ébauches foliaires. Ils obtenaient un grand nombre de bourgeons adventifs.

5.2/ La thermothérapie

Le traitement par des températures élevées (37°C à 39°C) fut utilisé par KUNKEL en
1936 pour éliminer l’agent responsable du jaunissement du pêcher (CORNAGGIA,
1985). Lorsque des virus sont difficiles à éliminer par culture de méristèmes, il est
possible d’améliorer les rendements en prélevant les méristèmes sur des plants qui ont
subi préalablement la thermothérapie ; cette technique permet de prélever des explants
plus gros tout en conservant un taux de guérison élevé (CORNAGGIA, 1985).
De nombreuses espèces ont été débarrassées des virus qu’elles renferment : pommes
de terre, fraisiers, chrysanthèmes, œillets, arbres fruitiers, agrumes et vignes
(GRENAN, 1980 ; DESVIGNES, 1990).

La thermothérapie de la vigne appliquée à des cultures in vitro, a été mise au point par
GALZY (1963, 1966). Les premiers travaux ont essentiellement porté sur l’élimination
du virus du court noué chez la variété Rupestris du lot ; Des plantes cultivées sur un
milieu nutritif gélosé sont traitées pendant trois mois à 35°C dans une étuve éclairée
12 heures par jours, à la fin du traitement les boutures sont placées à 20°C pour être
multipliées et transférées en serre.
Une autre technique recourt à la culture in vitro dans une étuve où les tubes à essais
sont placés dans un bain-Marie qui assure une humidité proche de la saturation et
surtout qui permet de maintenir l’ensemble de la plante à la température désirée (35°C)
pendant toute la durée du traitement (MUR, 1979).

Cependant, la thermothérapie associée à la culture de méristèmes a permis d’assainir

un grand nombre de clones de divers cépages infectés par différentes viroses (VALAT
et al., 1979). Ainsi, la combinaison des deux techniques s’est avérée efficace contre le
court noué (GIFFORD et HEWITT, 1961 ; MONETTE, 1986), l’enroulement foliaire
(MUR, 1979 ; BALTHZARD, 1993), le bois strié (LEGIN et al., 1979) , la marbrure et
la nécrose des nervures (MUR, 1979).

5.3/ Microgreffage d’apex

Le microgreffage d’apex de citrus a été mis au point par NAVARRO et al (1975) pour
pallier les échecs de la reprise des méristèmes des espèces ligneuses. Selon BEN
ABDALLAH et al (1996), chez la vigne, cette technique constitue une alternative
rapide et efficace pour régénérer des lignées saines et conformes (maintien de la
stabilité génétique des plants obtenus in vitro).
CHAPITRE IV : LA CULTURE IN VITRO - 48 -

Les plantes de citrus obtenues par le microgreffage d’apex ne retournent pas à l’état
juvénile et ne présentent pas de changements morphologiques par rapport aux plants
mères dont elles sont issues (NAVARRO et al., 1975)

Chez la même espèce, les tentatives de régénérer des plantes à partir de culture de
méristèmes ont échoué. Cependant le greffage de dômes méristématiques sur des
semis sains de porte-greffes cultivés in vitro a fourni des plants microgreffés se
développant normalement et exempté des principaux virus (Tristeza) (LEPOIVRE et
SEMAL, 1993).

Chez la vigne, la nécessité depuis quelques années d’éliminer deux virus : l’écorce
liégeuse et le complexe cannelures du tronc, considérés comme thermorésistants, a
conduit à mettre en œuvre une autre méthode d’assainissement : le microgreffage
d’apex qui permet d’obtenir des plants indemnes de ces viroses (BENIN et GRENAN,
1984 ; AYUSO, 1985 ; BEN ABDALLAH, 1996).

5.4/ Cultures des cellules isolées

L’existence de cellules non infectées au sein des tissus d’une plante virosée, ainsi que
la totipotence des cellules végétales peuvent être exploitées pour produire des plantes
saines ; certains tymovirus induisent sur les feuilles des plantes infectées des zones
vertes individualisées qui se détachent sur un fond de couleur jaune (LEPOIVRE et
SEMAL, 1993).
Chez le chou chinois infecté par le virus de la mosaïque jaune de navet (TYMV), les
feuilles sont formées d’un ensemble de cellules saines qui constituent des îlots verts ;
des plantes régénérées à partir de ces îlots verts se sont avérées saines (LEPOIVRE et
SEMAL, 1993).

5.5/ Utilisation des inhibiteurs de la réplication virale

En 1977, LERCH a constaté que les parties apicales des plantes de tabac infectées par
le virus X de la pomme de terre et traité au virazole ne contenaient pas de virus après
plusieurs subcultures.

Le rivazole (ribavirine) est un analogue de nucléoside de synthèse, qui possède une

action viro-inhibitrice vis à vis d’une gamme étendue de virus pathogènes des plantes.
Ce composé n’est pas virocide, mais c’est un inhibiteur de la réplication virale
(LEPOIVRE et SEMAL, 1993).
Des résultats positifs ont été obtenus à partir de méristèmes de pommes de terre
infectées par les virus Y, X et S, dont l’incorporation de virazole au milieu de culture
augmente le taux de plantes assainies. Par ailleurs, à partir de protocormes d’orchidées
infectées par le virus des anneaux nécrotiques de l’odontoglossum et après quatre
subcultures en présence de virazole, les plantules obtenues se sont avérées saines sur
base de test Elisa (LEPOIVRE et SEMAL, 1993).
MATERIELS ET METHODES - 49 -

1/ MATERIEL VEGETAL
1.1/ Origine du matériel végétal

Le matériel végétal utilisé au cours de notre expérimentation est représenté par trois
variétés locales de vigne de table (Vitis vinifera L.) : Ahmar bou amar, Valensi et
Muscat de cherchell. La provenance de ces variétés est indiquée au Tableau 07

Tableau 07: variétés de vigne de table utilisées et régions d’origine

CLONE
VARIETE N° DE LA N° DE LA REGIONS D’ORIGINE
RANGEE SOUCHE
AHMAR BOU AMAR 21 33 Benchicao (Médéa) à
65 Km du sud d’Alger
VALENSI 10 09 Benchicao (Médéa) à
65 Km au sud d’Alger
MUSCAT DE 03 15 Cherchell (Tipasa) à 79
CHERCHAL Km à l’ouest d’Alger.

1.2/ Caractéristiques des variétés étudiées

1.2.1/ La variété Ahmar bou amar

- C’est un cépage autochtone cultivé dans toute la Kabylie, ainsi que dans la plupart
des régions montagneuses : Tlemcen, mascara et c’est à Médéa et au voisinage de
Jijel que se rencontrent les superficies les plus importantes.
- La culture de ce cépage n’est pas à recommander en plaine où il pourrit facilement.
- Sa maturité s’étend du 15 septembre au 15 novembre.
- C’est un beau cépage de table à grandes grappes, aux grains très gros d’une belle
couleur rose ou rouge vif (Figure 19), d’une saveur assez agréable pas trop sucrée.
Il ne devient réellement d’un beau rose qu’en altitude.
- Il est vigoureux à fertilité élevée, il donne des rendements appréciables.
- Il est sensible au mildiou, à l’oïdium et à la pourriture grise. (ITAFV, 2000).

1.2.2/ La variété valensi ou Mokrani

- C’est un cépage autochtone cultivé dans les régions de Tlemcen, mascara, Médéa,
Rélizane et Meghnia.
- Il est très apprécié par les viticulteurs pour sa rusticité, sa production régulière et sa
résistance au transport.
- Il est vigoureux et très fertile, d’une belle couleur jaune doré (Figure 20). Il demande
à être cultivé de préférence en zone de montagne où il acquiert sa beauté
caractéristique.
- Il est sensible au mildiou, à l’oïdium, mais résiste au transport et à la pourriture grise
grâce à sa peau épaisse. (ITAFV, 2000).
MATERIELS ET METHODES - 50 -

1.2.3/ Muscat de Cherchell.

- C’est un cépage originaire de la méditerranée orientale : Muscat d’Alexandrie.

- C’est un beau cépage blanc à grappe moyenne et à grains ovoïde (Figure 21), à
saveur musquée spéciale qui est très appréciée.
- Il n’acquiert toutes ses qualités qu’au voisinage immédiat de la mer : Ténès,
Cherchell, Tipasa et Dellys.
- Il arrive sur le marché entre le 10 août et le 20 septembre.
- C’est un cépage de vigueur moyenne, qui possède une bonne fertilité et qui assure
de bons rendements. (ITAFV, 2000).

Figure 19 : la variété Ahmar Figure 20 : la variété Valensi

bou amar (ITAFV, 2000), (x 0.3) (ITAFV, 2000), (x 0.2)

Figure 21 : la variété Muscat

de Cherchell (ITAFV, 2000), (x 0.15)
MATERIELS ET METHODES - 51 -

1.3/ Préparation du matériel végétal

1.3.1/ Prélèvement et conservation du bois

A la fin du mois de janvier 2002, pendant le repos végétatif (lors de la taille) ; des
baguettes de bois de vigne des trois variétés sont prélevées à partir des souches
marquées au vignoble.
Les baguettes de bois sont mises dans des sachets en plastique biens fermés, étiquetés
et conservés en chambre froide à + 4° C.

1.3.2/ Stratification

La stratification est une opération très importante dans la réussite de la reprise des
plants ; en effet la finalité de cette opération constitue le début de la vie active des
boutures, en stimulant la formation des racines à la base et le débourrement des
bourgeons.
Les baguettes de bois de vigne sont coupées en section de 3 à 4 nœuds selon la
longueur des entre nœuds à raison de 40 centimètres environ ; la taille à la partie
basale doit se faire le plus pré-possible sous le nœud.
Les boutures sont disposées dans des caisses contenant de la sciure humide (figure : 22
et 23). Les caisses sont ensuite stockées dans une chambre chaude à l’obscurité à une
température qui varie de 28°C à 30° C, une humidité de 70 % à 80 % et une aération
régulière.

1.3.3/ Forçage sous serre

Après 4 à 5 semaines de stratification, seuls les plants présentant un bon système

racinaire sont sélectionnés (figure : 24). Ces plants sont repiqués dans des sachets en
plastique remplis de substrat composé de 1/3 de sable, 1/3 de tourbe, 1/3 de terre, en
plus de marc de raisin et désinfecté par un générateur à vapeur (figure : 25),.
Les plants de vigne sont mis sous serre chauffée à 28 °C. Une solution nutritive à base
de KNOP (Annexe : 01) est apportée avec l’eau d’irrigation selon le besoin (1 à 2
arrosages par semaine).

1.3.4/ Défoliation

Après 3 à 4 semaines de forçage, les bourgeons débourrent et donnent de nouvelles

pousses (figure : 26).
Toutes les feuilles qui arrivent à maturité sont éliminées dans le but de lever la
dormance des bourgeons axillaires (figure : 27), une partie des feuilles éliminées est
destinée pour la détection des virus par le test sérologique Elisa et par inoculation
mécanique, alors que les pousses végétatives issues des bourgeons axillaires sont
destinées à la culture in vitro de méristèmes.
MATERIELS ET METHODES - 52 -

Figure 23 : stratification
Figure 22 : stratification des des boutures de vigne
boutures de vigne (x 0.07) (x 0.06)

Figure 24 : formation Figure 25 : forçage sous

des racines (x 0.08) Serre (x 0.08)

Figure 26 : débourrement Figure 27 : défoliation

des bourgeons (x 0.04) (x 0.2)
MATERIELS ET METHODES - 53 -

2/ METHODES EXPERIMENTALES
2.1/ Méthodes de détection des viroses
2.1.1/ Méthodes d’observation directes des symptômes

En juin 2002, plusieurs prospections visuelles des symptômes ont été effectuées au
vignoble, pour noter les symptômes sur feuilles et sur rameaux.
Les symptômes sont observés également et notés après un bon développement des
plants cultivés sous serre (40 jours après le repiquage) et jusqu’à la fin du cycle
végétatif (septembre- octobre).

2.1.2/ Méthode biologique : inoculation mécanique sur indicateurs herbacés

[Link]/ Principe

L’inoculation mécanique est une méthode biologique qui consiste à transmettre les
particules virales par voies mécaniques à des plantes indicatrices saines (CORNUET,
1987 ; CLOQUEMIN, 1988 ; GILES et VERHOYEN, 1992).

[Link]/ Préparation des plantes indicatrices

Pour la transmission mécanique du virus de l’enroulement foliaire (GLRaV), nous

avons opté pour l’utilisation de trois variétés appartenant à trois familles botaniques :
• Cucurbitacées
¾ Cucurbita sp. Variété : Quarantaine « courgette »
• Solanacées
¾ Lycopersicum esculentum Mill. Variété : Tres cantos « tomate »
• Légumineuses
¾ Pisum sativum. Variété : Onward « petit pois »

Les semences des plantes indicatrices ont été semées dans des pots remplis d’un
substrat désinfecté, composé de1/3 de terre, 1/3 de sable et 1/3 de tourbe ; nous avons
utilisé 15 semences pour chaque variété.

[Link]/ Préparation de l’inoculum

L’extraction du virus se fait dans un mortier préalablement maintenu au froid, par

broyage de 1g de feuilles de vigne virosée (variété Muscat de Cherchell) dans 5 ml de
tampon phosphate (qui a pour effet de stabiliser le virus) (Annexe 02), contenant de la
nicotine base en solution aqueuse à 2.5 % (qui permet la neutralisation et la
précipitation des tannins qui inactivent le virus dans le jus).
L’extrait obtenu est additionné de 100 [Link]-1 de charbon actif (pour absorber les
composés toxiques libérés lors de l’extraction).
MATERIELS ET METHODES - 54 -

[Link]/ Mode opératoire

L’inoculum obtenu est appliqué par légers frottements à l’aide d’une tige cotonnée sur
la surface des jeunes feuilles ou cotylédons, préalablement saupoudrés de célite à effet
abrasif, permettant la pénétration du virus.
Les plants inoculés sont rincés à l’eau courante pour éviter les lésions des feuilles ou
cotylédons par l’abrasif et sont conservés en serre à 25°C.
L’observation des symptômes est faite à intervalle de trois jours à partir du 6éme jour
et ce durant 15 jours.

Nous avons ainsi inoculé une souche de Muscat de Cherchell sur 3 espèces
indicatrices : Cucurbita sp au stade cotylédon, Lycopersicum esculentum Mill. au
stade 3 à 4 feuilles et Pisum sativum au stade 3 à 4 feuilles (3 répétitions ont été faites
pour chacune et pour chaque répétition nous avons inoculé 4 plants et un plant non
inoculé est gardé comme témoin, soit au total 45 plants) (Figure : 28).

I I I I I I I I I

I I I I I I I I I

I I I I I I I I I

I I I I I I I I I

TN TN TN TN TN TN TN TN TN

Cucurbita sp Lycopersicum Pisum sativum

esculentum Mill

I Plante indicatrice inoculée

TN Témoin négatif (plante indicatrice non inoculée)

Figure 28: dispositif expérimental utilisé pour l'inoculation mécanique

de Muscat de Cherchell
MATERIELS ET METHODES - 55 -

2.1.3/ Méthode sérologique

[Link]/ Matériels nécessaires au test Elisa
™ Matériel végétal

Le matériel végétal utilisé pour la détermination des virus par voie sérologique est
représenté dans le Tableau : 08

Tableau 08: matériel végétal utilisé pour le test Elisa

MATERIEL
VEGETAL VARIETE PERIODE DE PRELEVEMENT
Ahmar bou amar Printemps
VIGNES Valensi Printemps
Muscat de Cherchell Printemps
La courgette 15 jours après l’inoculation mécanique
PLANTES La tomate 15 jours après l’inoculation mécanique
INDICATRICES Le petit pois 15 jours après l’inoculation mécanique

™ Les sérums utilisés

Le test Elisa a été réalisé avec les trousses commercialisées par la firme française
Sanofi. Chaque trousse contient les plaques de microtitration et les produits
nécessaires à la détection d’un virus.
Nous avons utilisé le sérum anti- GFLV (le court-noué) et son conjugué dilué à
1/1000, le sérum anti-GLRVa type I et III (l’enroulement foliaire) et son conjugué
dilué à 1/1000 et le sérum anti-GFKV (la marbrure) et son conjugué dilué à 1/1000.

[Link]/ Principe du test Elisa

Le test Elisa (enzyme linked immuno sorbent assay) est une technique qui consiste à
inclure l’antigène viral entre deux couches d’anticorps dont la deuxième est conjuguée
à l’enzyme.
Pour la détection de nos échantillons, nous avons utilisé la méthode classique directe
DAS (double antibody sandwich) pour la mise en évidence des virus du court noué, de
l’enroulement foliaire et de la marbrure.

[Link]/ Mode opératoire

™ Fixation des anticorps sur la paroi de la plaque

- Déposer 200µl / puits de la solution de fixation (Annexe 03) contenant les

anticorps, ce qui facilite leur adsorption sur le polystyrène de la plaque.
- Couvrir les plaques et mettre en incubation dans une étuve à 37°C pendant 3 heures
(Figure : 30).
MATERIELS ET METHODES - 56 -

™ Préparation de l’antigène

Les échantillons à analyser (feuilles de vigne et des plantes indicatrices) sont découpés
en petits morceaux et mis dans des sachets en plastique numérotés.
Ils sont ensuite broyés dans un tampon d’extraction à raison de 5ml pour un gramme
de feuilles. Le broyat ainsi obtenu est centrifugé à 3000 tours de 5 à 10 mn, pour
permettre sa décantation.
L’extrait obtenu est maintenu à une température de 4°C jusqu'à son utilisation.

™ lavage des plaques

- Vider les plaques par retournement

- Remplir chaque puits avec la solution PBS-Tween (Annexe 03).
Trois lavages sont faits pendant 10 mn, la solution de lavage élimine les anticorps
non accrochés aux parois de la plaque.

™ Fixation des antigènes aux anticorps.

- Déposer 200µl de témoin négatif dans les puits indiqués TN, et 200µl de témoin
positif dans les puits indiqués TP.
- Déposer 200µl d’antigène (broyat de feuilles préalablement préparé) dans chaque
puits correspondant selon un schéma établi auparavant (Figure : 29).
- Après chaque dépôt des témoins et des échantillons, le cône de la micropipette
est jeté.
- Couvrir et incuber les plaques pendant une nuit à 4°C.
- Laver comme précédemment : la solution de lavage élimine les particules virales
non accrochées aux anticorps (Figure :30).

™ Fixation des anticorps conjugués à enzyme sur les antigènes

- Distribuer 200µl de la solution du conjugué (anticorps + enzyme : la

phosphatase alcaline) (Annexe 03) dans chaque puits de la plaque (témoins et
échantillons).
- Couvrir les plaques et mettre en incubation dans une étuve à 37°C pendant
3 heures.
- Laver comme précédemment : la solution de lavage élimine dans ce cas le
conjugué non accroché aux virus.

™ Dépôt du substrat

- Pour une plaque, dissoudre ½ pastille de P. Nitrophenyl-phosphate PNPP dans

21 ml de solution de substrat (Annexe 03).
- Distribuer 200µl de la solution finale dans chaque puits de la plaque (témoins et
échantillons) pour révéler la présence de l’enzyme et par conséquent du virus.
- Couvrir les plaques et mettre en incubation à température ambiante, cela permet à
MATERIELS ET METHODES - 57 -

la réaction chimique ( hydrolyse avec l’enzyme) de se réaliser.

La réaction chimique entre l’enzyme et le substrat incolore transforme ce dernier en un
produit coloré. De ce fait, la coloration n’apparaît que dans les puits où l’enzyme est
présent, donc où se trouve les échantillons virosés.

™ Lecture des résultats

Après 1 heure d’incubation à température ambiante, les plaques sont passées au

spectrophotomètre à 405nm de densité optique.
Le résultat des réactions du test Elisa est donné par l’intensité de la coloration évaluée
par la lecture de la densité optique qui est comparée à celle du témoin négatif.
Un échantillon est considéré positif (virosé) quand la densité optique du puits
correspondant est supérieure à celle du témoin négatif (sain).

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A
B H TP1 H TP2 H TP3 H TP4
C H TP1 H TP2 H TP3 H TP4
D V TN V V V
E V TN V V V
F M M M M
G M M M M
H

H : Ahmar bou amar TP1 : Témoin positif GFLV

V : Valenci TP2 : Témoin positif GFKV
M : Muscat de Cherchell TP3 : Témoin positif GLRaV (I)
TN : Témoin négatif TP4 : Témoin positif GLRaV (III)
Eau distillée

Figure 29: schéma de la plaque Elisa

MATERIELS ET METHODES - 58 -

- - - - -

Incubation / Lavage
3 h à 37°c 3fois / 10 mn
- - - - -

Fixation : dépôt de 200µl

d’anticorps / puit .

- - - - -

Incubation / Lavage
une nuit à 4°c 3fois/ 10mn
- - - - -

Dépôt de 200µl d’extrait

(Échantillon ) / puit .

- - - - -

Incubation / Lavage
3h à 37°c 3 fois/ 10mn
- - - - -

Dépôt de 200 µl de
conjugué / puit .

- - - -
Incubation à lecture de la

température densité optique au

- - ambiante/1h - - spectrophotomètre à
405 nm.
Dépôt de 200 µl de
substrat / puit .

( ) Anticorps. ( ) Echantillon. ( ) Conjugué. ( ) Substrat.

Figure 30 : Protocole utilisé pour le test Elisa direct dit «sandwich »

(CLARK et ADAMS, 1977).
MATERIELS ET METHODES - 59 -

2.2/ Méthodes d’assainissement et de régénération par culture in vitro de

méristèmes
2.2.1/Technique de stérilisation
[Link]/ Stérilisation du matériel du laboratoire

Le maintien des cultures en conditions aseptiques sous entend la stérilisation des

milieux de culture, d’instruments de manipulation et de dissection, de l’eau de
rinçage…etc. ainsi :
- toutes les manipulations se font sous hotte à flux laminaire horizontal.
- l’eau distillée servant au rinçage du matériel végétal est stérilisée à l’autoclave à
120 °C pendant 60 minutes.
- les pinces, scalpels, bistouris et toute la verrerie sont stérilisés à l’étuve à 180 °C
pendant une heure

[Link]/ Stérilisation des milieux de culture

Les milieux de culture distribués dans des tubes sont stérilisés à l’autoclave pendant 20
minutes à 120°C avant d’être distribué sous hotte.
Pour les cultures réalisées dans des boites de pétri stériles, le milieu de culture est
stérilisé à 120°C pendant 20 minutes avant d’être distribué sous hotte.

[Link]/ Stérilisation du matériel végétal

Nous avons prélevé l’extrémité apicale des pousses sur des jeunes plantes cultivées en
pots et maintenue sous serre. La stérilisation du matériel végétal est réalisée sous hotte
à flux laminaire.
Après élimination des feuilles et des vrilles, la désinfection des pousses végétatives est
réalisée selon 4 méthodes (Tableau 09) afin de retenir la plus appropriée à notre
matériel.

Tableau 09 : méthodes de désinfection du matériel végétal utilisées

1ERE METHODE 2EME METHODE 3EME METHODE 4EME METHODE

- lavage des pousses - lavage des pousses - lavage des pousses - lavage des pousses
à l’eau du robinet à l’eau du robinet à l’eau du robinet à l’eau du robinet
- trempage dans - trempage dans - trempage dans - trempage dans
l’alcool à 70 % l’alcool à 70 % l’alcool à 70 % l’alcool à 70 %
pendant 30 secondes pendant 30 secondes pendant 30 secondes pendant 30 secondes
- trempage dans - trempage dans - trempage dans - trempage dans
l’hypochlorite de l’hypochlorite de l’hypochlorite de l’hypochlorite de
sodium à 3 % sodium à 8 % calcium à 7 % calcium à 10 %
pendant 5mn, 10 mn pendant 5mn, 10 mn pendant 5mn, 10 mn pendant 5mn, 10 mn
et 15mn. et 15mn. et 15mn. et 15mn.
- rinçage à l’eau - rinçage à l’eau - rinçage à l’eau - rinçage à l’eau
distillée stérile 3 fois distillée stérile 3 fois distillée stérile 3 fois distillée stérile 3 fois
pendant 10 mn. pendant 10 mn. pendant 10 mn. pendant 10 mn.
MATERIELS ET METHODES - 60 -

2.2.2/ Milieux de culture

Les milieux de culture utilisés comprennent les sels minéraux (macro et micro-
éléments), de l’eau, des vitamines, une source de carbone ainsi que des régulateurs de
croissance.
Nous avons testé deux milieux de culture :
Milieu de MURASHIGE et SKOOG (1962) (Annexe : 04)
Milieu de CHEE et POOL (1987) (Annexe : 05).
Dans tous les essais, la source énergétique de carbone est le saccharose qui est ajouté
au milieu de culture à raison de 20 g.L-1.
Les principaux régulateurs de croissance utilisés sont les suivants :
Les auxines : l’acide indole butyrique (AIB)
l’acide naphtalène acétique (ANA)
Les cytokinines : la 6 benzylaminopurine (BAP)
Les gibbérellines : l’acide gibbérellique (GA3).

Les régulateurs de croissance ont été utilisés seuls ou associés à des concentrations
variables selon la phase de développement des cultures.
Le pH des milieux de culture est ajusté à 5,8 avec une solution de soude (NaOH) à
0,1N ou une solution d’acide chlorhydrique (HCl) de 0,1N, selon le cas.
Les milieux de culture sont ensuite solidifiés par 8 g.L-1 d’agar (milieu solide) et
distribués dans des tubes en pyrex (16 cm de longueur sur 2,5 cm de diamètre) ou dans
des bouteilles de jus ou des bocaux de conserve autoclavables, à raison de 20ml par
tube, 100 ml par bocal et 50 ml par bouteille.
Pour les boites de pétri (9 cm de diamètre), le milieu autoclavé au préalable est
distribué sous hotte à raison de 25 ml par boite.
Les tubes de cultures sont obturés au moyen de bouchon en polycarbonate, par contre
les boites de pétri sont scellées par du parafilm nettoyé à l’éthanol 70°.

[Link]/ Milieu de culture d’initiation

Nous avons testé deux milieux différents dans leurs composition en macro-éléments,
en micro-éléments et en vitamines (Annexe 04 et 05), dans le but de déterminer le
milieu le mieux adapté à notre matériel végétal (la vigne).

Tableau 10 : concentration en substances de croissance des

milieux d’initiation.

SUBSTANCES MILIEU MS (62) MILIEU CP (87)

DE CROISSANCE MS0 MS1 MS2 MS3 CP0 CP1 CP2 CP3
-1
CYTOKININE: BAP(mg.L ) / 1 1.5 1.5 / 1 1.5 1.5
-1
AUXINE : ANA (mg.L ) / / / 0.2 / / / 0.2
MATERIELS ET METHODES - 61 -

[Link]/ Milieu de multiplication

Après un séjour d’un mois dans le milieu d’initiation (Tableau 10), les explants
obtenus sont transplantés dans le milieu de multiplication CP2 (Tableau 11)

Tableau 11: milieu de multiplication et de bourgeonnement

MACROELEMENTS MICROELEMENTS VITAMINES CHELATES AUTRES

DE FER
CP (87) modifié : CP (87) MOREL et MARTIN CP (87) Saccharose: 30g.L-1
Diminution (52) BAP: 1.5 mg.L-1
de 1/3 des (Annexe 06) Agar: 8 g.L-1
macroéléments PH: 5.8

[Link]/ Milieu d’allongement et d’enracinement :

Après 3 à 4 subcultures, les vitroplants obtenus sont transplantés dans le milieu CP

(87) modifié, et avec 1mg.L-1 de GA3.

[Link]/ Phase d’acclimatation

Les vitroplants obtenus après l’étape d’enracinement sont retirés des tubes de culture
(bocaux ou bouteilles de jus). Les racines sont soigneusement lavées avec de l’eau
distillée stérile afin de les débarrasser du milieu de culture restant, puis sont placés en
mini-serre d’acclimatation sur un substrat stérile contenant un mélange de tourbe et de
perlite ; le substrat ayant été autoclavé pendant une heure à 120°C.
Les mini-serres restent fermées pendant au moins trois jours pour garder une
atmosphère saturée d’humidité. Ensuite nous procédons d’une façon progressive à
l’ouverture des fenêtres pour permettre aux vitroplants de s’adapter aux conditions
naturelles.
La température de la mini-serre est de 24°C le jour et 18°C la nuit ; les plantules ne
sont arrosées qu’au bout d’une semaine avec une eau contenant un fongicide.

2.2.3/ autres facteurs étudiés

[Link]/ type d’explant méristématique utilisé

Les méristèmes sont isolés aseptiquement sous la loupe binoculaire équipée de lumière
froide, à l’aide de fragments de lames de rasoirs montées sur des portes aiguilles
(Figure :31) ; pour cet essai, nous avons testé deux lots de 20 méristèmes de
constitution différentes :
T1 représente le dôme apical sans primordia foliaire.
T2 représente le dôme apical avec les deux dernières primordia foliaires.
MATERIELS ET METHODES - 62 -

Méristème
Pousse végétative
Scalpel

Plant de vigne

Mise en culture des

méristèmes dans le
milieu d’initiation

vitroplants obtenus
après 3 à 4 subcultures

Début de croissance des

méristèmes après 20
jours

Phase de
Phase d’allongement et
bourgeonnement
d’enracinement

Figure 31 : schéma des différentes étapes de la culture in vitro des

méristèmes de la vigne
MATERIELS ET METHODES - 63 -

Les méristèmes sont placés dans des boites de pétri contenant 25 ml de milieu de
culture MS (62) avec 1.5 mg.L-1 de BAP à raison de 5 méristèmes par boite pour
minimiser le nombre de contamination.
Après la mise en culture, les boites de pétri sont placées dans une salle de culture
équipée par des étagères éclairées donnant une intensité de lumière de 1800 lux, la
photopériode est de 16 heures d’éclairement et 8 heures d’obscurité.

[Link]/ Influence de la température du jour

Dans le but de déterminer la température favorable au développement des méristèmes

de vigne cultivés in vitro, nous avons cherché à tester l’effet de la température du jour
en fixant la température de nuit à 18°C ; à cet effet nous avons mis en culture trois lots
de 20 méristèmes sur le milieu MS (62) avec 1.5 mg.L-1 de BAP, à la température
20°C, 24°C et 28°C.

2.2.4/ Contrôle de l’état sanitaire des vitroplants obtenus

Après un séjour de 1 mois dans la mini-serre d’acclimatation, un contrôle de l’état
sanitaire des vitroplants obtenus par culture in vitro de méristème est effectué par le
test Elisa (Figure : 30), dans le but de déterminer le pourcentage de guérison.

3/TRAITEMENT STATISTIQUE DES DONNEES.

Les résultats ont été analysés statistiquement par le logiciel STATITCF.

Le type du dispositif expérimental adopté dans notre expérimentation est une
randomisation totale à un ou à deux facteurs. Chaque facteur comprend différents
niveaux ; ainsi le nombre de traitement de base correspond à la combinaison entre les
différents niveaux des facteurs étudiés et chaque traitement de base est répété plusieurs
fois selon les expériences (voir Annexe 07).
La signification des différences entre les traitements est exprimée en fonction de la
probabilité (p).
Erreur à 5 % : P > 0.05 : différence non significative
P < 0.05 : différence significative
P ≤ 0.01 : différence hautement significative
P ≤ 0.001 : différence très hautement significative.
Le test de NEWMAN et KEULS permet de constituer les groupes de traitements
homogènes en se basant sur les petites amplitudes significatives (PPAS) lorsque
l’amplitude observée entre les moyennes extrêmes d’un groupe de K moyennes sera
inférieure à la PPAS.
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RESULTATS ET DISCUSSIONS - 64 -

1/DETECTION DES VIROSES

1.1/Observation directe des symptômes
1.1.1/ Symptômes du court noué

™ Au vignoble
Au cours des prospections du vignoble, nous avons noté une gamme étendue de
symptômes du court noué sur les variétés Ahmar bou amar et Valensi :
Sur les feuilles, différentes déformations sont notées: limbes asymétriques et gaufrés
avec dentelure aiguë des bords et sinus pétiolaire élargi ; des taches jaunes sous forme
d’anneaux chlorotiques sont également observé (Figure: 32).
Sur les rameaux, présence d’entre-nœuds courts et double nœuds (Figure : 33 et 34),
avec un développement en zigzag, accompagné aussi de bifurcation anormale en
dichotomie et fasciation des rameaux (Figure : 35 et 36).
Chez la variété Muscat de Cherchell, aucun symptôme attribué à cette maladie n’a été
observé.

™ Sous serre
Sur les variétés Ahmar bou amar et Valensi des feuilles asymétriques sont observées
(Figure : 37), avec dentelures aiguës des bords ; des feuilles gaufrées et découpées sont
également rencontrées (Figure : 38).
Sur les rameaux, présence des entre nœuds courts (figure : 39) accompagnés d’un
développement en zigzag.
Chez Muscat de Cherchell, aucun symptôme de court noué n’a été révélé.

1.1.2/ Symptômes de la marbrure

™ Au vignoble
Les prospections effectuées au vignoble sur les trois variétés n’ont révélé aucun
symptôme accordé à cette maladie.

™ Sous serre
Sur les variétés Ahmar bou amar et Valensi, les plants montrent des éclaircissements
des nervures des feuilles du sommet (figure : 40), accompagnés par un enroulement
des feuilles vers la face supérieure (forme de gouttière) (figure : 41, 42 et 43).
Chez Muscat de Cherchell, les symptômes de la marbrure ne sont pas observés.

1.1.3/ Symptômes de l’enroulement foliaire

™ Au vignoble
La symptomatologie au vignoble de Benchicao, sur la variété Ahmar bou amar et la
variété Valensi n’a révélé aucun symptôme d’enroulement foliaire.
Chez Muscat de Cherchell, nous avons noté un jaunissement des feuilles accompagné
d’enroulement vers la face inférieure.

™ Sous serre
Aucun symptôme d’enroulement foliaire n’a été observé sur les trois variétés de vigne.
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 65 -

Figure 32 : feuilles asymétriques,

dentelure aigue des bords, Figure 33 : entre nœuds courts
(variété Ahmarbou amar) (X 0.3) (variété Ahmar bou amar) (x 0.2)

Figure 35 : fasciation et
Figure 34 : double nœud (variété bifurcation anormale (variété
Valensi) (x 0.2) Ahmar bou amar) (x 0.2)
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 66 -

Figure 36 : bifurcation anormale Figure 37 : asymétrie des

et entre nœuds courts feuilles (variété Valensi)
(variété Valensi) (x 0.15) (x 0.25)

Figure 38 : feuille asymétrique et Figure 39 : développement

déformée (variété Ahmar bou en zigzag (variété Ahmar
amar) (x 0.2) bou amar) (x 0.2)

Figure 32 – 39 : symptômes du court noué observés au vignoble et sous serre

sur les variétés Ahmar bou amar et Valensi
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 67 -

Figure 41 : enroulement des

Figure 40 : éclaircissement des feuilles vers la face supérieure
nervures (variété Ahmar bou amar) (variété ahmar bou amar) (X 0.15)
(x 0.25)

Figure 43 : enroulement des

feuilles vers la face superieure et
Figure 42 : enroulement des developpement en zigzag
feuilles vers la face supérieure (variete Ahmar bou amar) (x 0.15)
(variété Valensi) (x 0.15)

Figure 40-43 : symptômes de la marbrure observés au vignoble et sous serre

sur les variétés Ahmar bou amar et Valensi
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 68 -

Les symptômes caractéristiques du court noué observés sous serre sur les variétés
Ahmar bou amar et Valensi confirment les résultats obtenus au vignoble.

Pour la marbrure, des réponses positives sont notées sous serre pour les variétés
Ahmar bou amar et Valensi. Cependant, l’absence de la marbrure au vignoble
confirme les travaux de BOVEY (1992) qui signale la latence de ce virus sur les
variétés de vigne.

Concernant l’enroulement foliaire, l’absence des symptômes au vignoble chez les

variétés Ahmar bou amar et Valensi peut se traduire par la période des prospections
(mois de juin), alors que les symptômes d’enroulement se manifestent mieux en
automne.
Chez Muscat de Cherchell, les symptômes de l’enroulement foliaire ne sont pas bien
visibles sous serre par rapport à ce qui a été enregistré au vignoble.

Il ressort de tous les résultats obtenus que certains vignobles algériens sont dans un
état sanitaire inquiétant vis à vis des maladies virales. En effet, les résultats recueillis
dans ce diagnostic visuel concernant le court noué confirment les travaux de
BENCHIHA (1976) dans la région de Mostaganem et de BOUSALEM (1981) dans les
pépinières viticoles de Chebli et Khemis El Khachna sur les variétés de Dattier de
Beyrouth, Sultanine, Italia et Valensi.
MARTELLI (1985) rapporte que la dégénérescence infectieuse est présente dans tous
les vignobles algériens sur plusieurs variétés de table (Ahmar bou amar, Muscat
d’Alexandrie), de cuve (Alicante bouchet, Cinsaut, Carignan) et de porte greffes (41B,
99R et SO4).
En 1995, MORSLI a mis en évidence le virus du court noué dans plusieurs régions du
pays (Médéa, Mascara, Boumerdes et Tipaza) sur différentes variétés de vigne :
Ahmar bou amar, Dattier de Beyrouth, Muscat d’Alexandrie et Valensi ; et de porte
greffes : 41B et 99R.
De même, AMEDJKOUH (1999) a révélé la présence du court noué dans la pépinière
du GDSP située à El Harrach, sur la variété du Dattier de Beyrouth en enregistrant un
taux d’infection de 90.62%.

La symptomatologie ou le diagnostic visuel constitue la première étape de l’évaluation

sanitaire au vignoble ; cependant la latence de certains virus empêche la manifestation
des symptômes tels que l’enroulement foliaire qui a été révélé au vignoble de
Cherchell sur la variété de Muscat de Cherchell et dont les symptômes n’ont pas été
nets sous serre.
Cela nous a conduit à passer à une deuxième méthode de détection des virus :
l’inoculation mécanique sur des indicateurs herbacés.
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 69 -

1.2/ Indexage par inoculation mécanique sur indicateurs herbacés

Après inoculation mécanique effectuée sur la gamme d’hôtes herbacés, divers

symptômes sont apparus sur les trois espèces utilisées (la courgette, la tomate et le
petit pois).
Les symptômes sont apparus après trois jours pour la tomate et le petit pois et six jours
pour la courgette.
Les observations ont porté sur la nature des symptômes apparus et le pourcentage des
plantes atteintes quinze jours après l’inoculation (Tableau : 12) et (Figure 44 et 45).

Tableau 12 : pourcentage des plantes indicatrices présentant

des symptômes extériorisés

Symptômes Pourcentage des plants avec symptômes

La courgette La tomate Le petit pois
Enroulement des cotylédons (ENC) 53,33 % / /
Eclaircissement des cotylédons (ECC) 33,33 % / /
Gaufrage et Dessèchement des cotylédons (GDC) 20 % / /
Déformations des cotylédons (DC) 20 % / /
Enroulement des feuilles (EF) 86.66 % 53.33 % 0%
Eclaircissement des feuilles (ECF) 73,33 % 0% 0%
Asymétrie des feuilles (AF) 40 % 80 % 0%
Gaufrage et Dessèchement des feuilles (GDF) 0% 73.33 % 0%
Nanismes (N) 53.33 % 0% 0%
Flétrissement des feuilles (FF) 46.66 % 73.33 % 100 %
Déformation des feuilles (DF) 6.66 % 33.33 % 0%
Taches nécrotiques des feuilles (TNF) 0% 80 % 53.33 %

pourcentage
des plants
100%
avec 90%
symptômes 80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
ENC ECC GDC DC
symptômes

Figure 44 : histogramme des différents symptômes induits par le virus GLRaV

sur les feuilles cotylédonaires, chez la courgette.
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 70 -

La courgette
100%
pourcentage des plants
90% La tomate
avec symptômes
80% Le petit pois
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10% symptômes
0%
EF EcF AF GDF N FF DF TNF

Figure 45 : histogramme des différents symptômes induits par le virus GLRaV

sur les feuilles, chez les trois espèces indicatrices.
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 71 -

Ces résultats préliminaires montrent que les trois espèces inoculées (la courgette, la
tomate et le petit pois) réagissent différemment à la présence du virus ; cela nous a
permis de les classer selon leur sensibilité et selon l’importance des symptômes.

Sur la courgette (figure : 46 et 47), le virus a provoqué des symptômes à des taux
considérables : la moyenne des symptômes à la fois de l’enroulement et de
l’éclaircissement des feuilles cotylédonaires (43.33 %), celle des feuilles (80 %) et le
nanisme (53,33 %).

Pour la tomate (figure : 48), le virus a induit des symptômes à des taux très élevés :
taches nécrotiques (80 %), asymétrie des feuilles (80 %), gaufrage et dessèchement des
feuilles (73,33 %) et flétrissement des feuilles (73,33 %).

Sur le petit pois (figure : 49), le virus ne se manifeste que par deux symptômes mais
avec des taux très élevés : flétrissement des feuilles à 100 % et taches nécrotiques des
feuilles à 53,33 %.

D’après les symptômes extériorisés sur les trois espèces indicatrices, le virus
correspond au GLRaV.

Après avoir évalué les symptômes induits par le virus de l’enroulement foliaire sur les
plants testés, nous avons calculé les moyennes globales des pourcentages des
symptômes ; ainsi, nous avons constaté que la tomate et le petit pois sont plus
sensibles et réagissent à la présence du virus avec des taux considérables
respectivement 76,6 % et 65,55 %, mais avec peu de symptômes pour le petit pois .

Mais d’après la diversité et l’intensité des symptômes, nous avons remarqué que la
courgette réagit mieux à la présence du virus avec un taux moyen des symptômes de
43,33 %

Ces résultats obtenus par l’inoculation mécanique nous ont permis de déduire que
l’enroulement des feuilles qui est le symptôme typique du GLRaV et qui se manifeste
avec un taux très élevé chez la courgette (86,66 %), classe cette dernière comme
meilleure plante indicatrice.
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 72 -

Témoin
Figure 46 : enroulement des feuilles cotylédonaires, enroulement des
feuilles, taches chlorotiques et nanisme observés chez la
courgette. (x 0.16)

Figure 47 : enroulement des feuilles cotylédonaires et des feuilles

de la courgette (x 0.16)
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 73 -

Témoin
Figure 48 : taches nécrotiques, dessèchement et
flétrissement des feuilles observés chez la
tomate. (x 0.2)

Témoin

Figure 49 : flétrissement et dépérissement des

feuilles observé sur le petit pois. (x 0.25)
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 74 -

1.3/ Méthode sérologique : résultats du test Elisa

1.3.1/ résultat du test Elisa pour les trois variétés de vigne

Le résultat du test Elisa pour les trois variétés de vigne : Ahmar bou amar, Valensi et
Muscat de Cherchell sont regroupés dans le Tableau 13.

Tableau 13 : résultats du test de dépistage « Elisa » pour les trois variétés

de vigne

Virus du court noué (GFLV) Virus de la marbrure (GFKV)

Variétés de vigne Densité optique réaction Densité optique réaction
Ahmar bou amar - 0.006 + - 0.070 +
Témoin positif - 0.089 + - 0.104 +
Témoin négatif - 0.212 - - 0.216 -
Valensi 0.390 + - 0.168 +
Témoin positif - 0.089 + - 0.104 +
Témoin négatif - 0.212 - - 0.216 -
Muscat de Cherchell - 0.109 - - 0.106 -
Témoin positif 0.207 + - 0.050 +
Témoin négatif - 0.096 - - 0.101 -
Virus de l’enroulement foliaire (GLRVaI) Virus de l’enroulement foliaire
(GLRaV III)
Variétés de vigne Densité optique réaction Densité optique réaction
Ahmar bou amar - 0.212 - - 0.219 -
Témoin positif - 0.094 + - 0.140 +
Témoin négatif - 0.208 - - 0.211 -
Valensi - 0.216 - - 0.213 -
Témoin positif - 0.094 + - 0.140 +
Témoin négatif - 0.208 - - 0.211 -
Muscat de Cherchell - 0.106 - 0.187 +
Témoin positif 0.208 + 0.100 +
Témoin négatif - 0.056 - - 0.090 -

Il ressort de ces tableaux que les variétés Ahmar bou amar et Valensi réagissent
positivement vis à vis du virus du court noué (GFLV) et de la marbrure (GFKV) ;
et négativement pour le virus de l’enroulement foliaire (GLRaV I et GLRaV III).
Par contre, la variété Muscat de Cherchell a réagit positivement pour le virus de
l’enroulement (GLRaV III) et ne montre aucune réaction positive vis à vis du (GFLV,
GFKV et GLRaV I).
Le résultat du test Elisa nous a permis de confirmer les observations visuelles au
vignoble et sous serre ; ce test nous a même révélé la présence du virus de
l’enroulement foliaire (GLRaV III) chez la variété Muscat de Cherchell, bien quelle
n’ait pas extériorisé des symptômes d’enroulement foliaire sous serre.
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 75 -

1.3.2/ Résultat du test Elisa pour les plantes indicatrices :

Le résultat du test Elisa pour les trois espèces indicatrices : la courgette, la tomate et le
petit pois sont regroupés dans le Tableau 14.

Tableau 14 : résultats du test de dépistage « Elisa » pour les plantes indicatrices

Virus de l’enroulement foliaire (GLRaV I) Virus de l’enroulement foliaire (GLRVa III)

Variétés Densité optique réaction Variétés Densité optique réaction

Témoin positif 0,194 + Témoin positif 0,197 +
la courgette 0,138 - la courgette 0,206 +
Témoin négatif 0,165 - Témoin négatif 0,167 -
La tomate 0,129 - La tomate 0,203 +
Témoin négatif 0,169 - Témoin négatif 0,148 -
le petit pois 0,125 - le petit pois 0,177 +
Témoin négatif 0,138 - Témoin négatif 0,155 -

Les densités optiques obtenues par le test Elisa nous ont permis de comparer les
résultats à ceux obtenus par l’inoculation mécanique.
Les trois espèces : la courgette, la tomate et le petit pois ont réagit négativement vis à
vis du GLRaV I et positivement vis à vis du GLRaV III. Ces résultats confirment
aussi ceux obtenus par le test Elisa sur la variété Muscat de Cherchell.
Ainsi, l’observation visuelle, l’inoculation mécanique sur indicateurs herbacés et le
test Elisa sur la variété Muscat de Cherchell et sur les espèces indicatrices ont révélé
que la variété Muscat de Cherchell est atteinte du virus de l’enroulement foliaire
(GLRaV III).
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 76 -

2/ ASSAINISSEMENT ET REGENERATION PAR CULTURE IN VITRO

DE MERISTEMES
2.1/ La phase d’initiation et de croissance
2.1.1/ Stérilisation du matériel végétal

Les résultats obtenus sont illustrés par le tableau 15 et 16 ; et les figures 50 et 51 qui
montrent l’effet des solutions stérilisantes sur, à la fois l’état sanitaire et la reprise des
méristèmes.

Tableau 15 : influence de la durée de stérilisation et de la concentration de

l’hypochlorite de sodium sur la reprise de croissance des méristèmes introduits
in vitro.

Méthodes de Temps de Nombre de Nombre de Nombre de Nombre de Taux

désinfection désinfection méristèmes méristèmes méristèmes méristèmes de
mis en culture contaminés desséchés en croissance reprise
Hypochlorite 5mn 10 0 7 3 30%
de sodium 10mn 10 0 4 6 60%
(NaOCl) 3% 15mn 10 0 2 8 80%
Hypochlorite 5mn 10 0 8 2 20%
de sodium 10mn 10 0 5 5 50%
(NaOCl) 8%
15mn 10 0 3 7 70%

hypochlorite de
Taux de reprise 100% sodium 3%
90%
(%) hypochlorite de
80%
70% sodium 8%
60%
50%
40%
30%
20%
Temps (en minutes)
10%
5mn 10mn 15mn

Figure 50 : effet de l’hypochlorite de sodium à différentes concentrations et à des

temps de trempage variables sur le taux de reprise des méristèmes.
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 77 -

Tableau 16 : influence de la durée de stérilisation et de la concentration de

l’hypochlorite de calcium sur la reprise de croissance des méristèmes introduits
in vitro.
Méthodes de Temps de Nombre de Nombre de Nombre de Nombre de Taux de
désinfection désinfection méristèmes méristèmes méristèmes méristèmes reprise
mis en culture contaminés desséchés en croissance
Hypochlorite 5mn 10 0 5 5 50%
de calcium 10mn 10 1 3 6 60%
Ca (OCl)2
7% 15mn 10 0 3 7 70%
Hypochlorite 5mn 10 0 8 2 20%
de calcium 10mn 10 0 6 4 40%
Ca (OCl)2
10% 15mn 10 0 4 6 60%

Taux de hypochlorite de
reprise (%) 100% calcium 7%
90% hypochlorite de
80% calcium 10%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
Temps (en minutes)
0%
5 mn 10 mn 15mn

Figure 51 : effet de l’hypochlorite de calcium à différentes concentrations et à des

temps de trempage variables sur le taux de reprise des méristèmes.

Chez la plupart des cultures d’organes, la stérilisation consiste à éliminer de l’explant

les germes (champignons et bactéries) qui lui sont liés.
Dans le cadre de notre expérimentation, nous avons testé l’effet de deux solutions
désinfectantes à des concentrations différentes et à des temps de trempage variable.
La désinfection à base d’hypochlorite de sodium à 3 % et 8 % pendant 5, 10 et 15
minutes révèle l’absence de contamination quelle que soit la concentration
d’hypochlorite de sodium et la durée de temps de trempage.

Pour la désinfection à base d’hypochlorite de calcium à 7 % et 10 % pendant 5, 10 et

15 minutes, elle montre un faible taux de contamination (10 % en utilisant
l’hypochlorite de calcium à 7 % pendant 10 minutes) ; cette contamination peut avoir
une relation avec les conditions de travail ou le milieu de culture d’autant plus que
nous n’avons pas repéré d’autres contaminations quelle que soit la concentration
d’hypochlorite de calcium et la durée de temps de trempage.
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 78 -

Par contre, nous constatons un dessèchement des méristèmes en diminuant le temps de

trempage des pousses végétatives et en augmentant la concentration d’hypochlorite de
sodium. Ainsi, 70% des méristèmes se dessèchent en utilisant l’hypochlorite de
sodium à 3 % pendant 5 minutes et 80% des méristèmes se dessèchent en utilisant
l’hypochlorite de sodium à 8 % pendant 5 minutes
De même une augmentation de la concentration d’hypochlorite de calcium et une
diminution du temps de trempage : 10% pendant 5 minutes) provoque aussi un
dessèchement de 80% des méristèmes.

Certains auteurs (BOCCON-GIBOD, 1989) ont favorisé l’utilisation de l’hypochlorite

de calcium, car il ne pénètre pas dans les tissus, contrairement à l’hypochlorite de
sodium où les ions de sodium peuvent dans certains cas gêner la croissance d’où la
nécrose des cellules.
Selon BENIN et al. (1988), la vigne est parmi les espèces ayant dans leurs tissus des
quantités importantes des produits phénoliques de type orthophénols et les tannins. Ces
composés sont considérés comme des antagonistes aux substances de croissance et
inhibiteurs des réactions métaboliques.
D’après MARGARA (1989), le brunissement de l’explant du à l’excrétion des
composés phénoliques provoque une inhibition de la croissance. Ce phénomène est
assez souvent rencontré, en particulier avec les ligneux.
La présence de ces composés dans la vigne peut expliquer en partie la nécrose de nos
explants.

Pour notre étude, nous avons obtenu 70 % de reprise en utilisant l’hypochlorite de

calcium à 7 % pendant 15 minutes. Cependant l’hypochlorite de calcium étant peu
stable, son utilisation doit être immédiate après sa préparation. De ce fait, dans le cadre
de notre expérimentation, c’est l’hypochlorite de sodium à 3 % et à une durée de temps
de 15 minutes qui nous apporte satisfaction (80% de reprise).
En effet, selon (BOCCON-GIBOD, 1989), du fait que les méristèmes sont entourés
par les ébauches foliaires, ils ne nécessitent pas des méthodes de stérilisation trop
lourdes.
Ces résultats concordent avec ceux de CARRE et al (1979) sur framboisier qui montre
que le méristème suffisamment protégé par des ébauches foliaires est naturellement
stérile.
Dans la même optique, les travaux de WALKER et al (1985) sur le Sequoia
sempervirens, montrent que la culture de méristème même sans désinfection des
pousses permet l’obtention de plants non contaminés.
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 79 -

2.1.2/ Type d’explants méristématiques utilisé

Deux semaines après la mise en culture des méristèmes dans le milieu d’initiation
(MS2), nous obtenons les résultats illustrés dans le tableau 06 et la figure 21.

Tableau 17 : structure des méristèmes prélevés.

TYPE NOMBRE DE NOMBRE DE NOMBRE DE TAUX DE

D’EXPLANTS MERISTEMES MERISTEMES MERISTEMES REPRISE
MIS EN CULTURE DESSECHES REPRIS
T1 20 16 4 20 %
T2 20 2 18 90 %

T1 = dôme apical sans primordia foliaire.

T2 = dôme apical avec les deux dernières primordia foliaires

Taux de
reprise (%)
100% Taux de
reprise
80%
60%
40%
20%
0%
T1 T2 Type d'explant

Figure 52 : effet du type d’explant utilisé sur le taux de reprise

D’après l’analyse du tableau 17, la culture in vitro du dôme apical sans primordia
foliaire (T1) a connu un échec. Ainsi 80% des méristèmes se dessèchent et se
nécrosent. Par contre la culture in vitro du dôme apical avec les dernières primordia
foliaire (T2) a permis la croissance des méristèmes avec un taux de réussite de 90 %.

D’après MARGARA (1989), le terme culture de méristèmes devrait s’appliquer à la

culture du dôme apical lui-même ou à la rigueur à celle du méristème pourvu de
quelque primordiums foliaires.

Selon GALZY (1972), les méristèmes de vigne prélevés avec deux mrimordia foliaires
correspondent à une taille de 0.2 mm environ et présentent les dimensions
habituellement requise pour la culture de méristèmes pratiquée dans le but d’obtenir
des plants indemnes de virus à partir de clones virosés.
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 80 -

Nos résultats sont en accord avec ceux de JELLALI (1996). Selon cet auteur, le
dessèchement des méristèmes de la vigne de type T1 est dû aux blessures du dôme
apical par les instruments de dissection ; cependant, la présence des deux primordia
foliaire protège le dôme apical contre ces blessures.
L’étude de la relation « taille méristématique- assainissement viral » établit par BEN
ABDALLAH et al (1996) sur la vigne a démontré que seuls les méristèmes de taille
comprise entre 0.1 et 0.5 mm se sont avérés pertinents pour la production des plants
sains à partir de microgreffage d’apex de vigne.

Chez les Citrus, l’utilisation des méristèmes de 0.1 mm et ayant au maximum deux
primordia foliaires donne un taux de réussite de 100% (NAVARRO et JUARZ, 1977).
Selon les mêmes auteurs, chez le pêcher l’utilisation des méristèmes de 0.4-0.8 mm a
permis d’éliminer 72% des virus ; en outre, le nombre de plants indemnes de virus est
proportionnel à la taille des méristèmes (REGNER et al., 1995).
A l’issu de tous ces résultats, nous avons retenu pour le reste de notre expérimentation,
la culture de méristème T2, c’est le même type utilisé par GALZY (1972),
BENABDALLAH (1996) et JELLALI (1996).

2.1.3/ Influence de la température du jour

Dans le tableau 19 sont portés les résultats de l’effet de la température du jour sur la
croissance des méristèmes.

Tableau 19 : influence de la température du jour sur la croissance des méristèmes

Nombre de Temps de Nombre de Nombre de Taux de

Température méristèmes reprise méristèmes méristèmes reprise
mis en culture nécrosés repris
20°C 20 4 semaines 7 13 65%
24°C 20 20 jours 4 16 80%
28°C 20 10 jours 11 9 45%

Taux de 100% Taux de

reprise
reprise (%)
80%
60%
40%
20%
0%
20°C 24°C 28°C
Température du jour (°C)

Figure 54 : effet de la température du jour sur la reprise des méristèmes

RESULTATS ET DISCUSSIONS - 81 -

Le tableau 19 et la figure 54 font ressortir que les méristèmes qui séjournent à la

température de 20°C montrent un arrêt de croissance et un développement très lent qui
atteint 65% après 4 semaines de mise en culture dans le milieu d’initiation.
Placés à la température de 24°C, 80% des méristèmes acquièrent un développement
très rapide qui permet leur transfert dans un milieu neuf.
A la température 28°C, 55% des méristèmes mis en culture se nécrosent au bout de dix
jours.
Dans le cadre de notre recherche, nous avons opté pour la température 24°C. Cette
température est considérée comme la meilleure pour les méristèmes de la vigne et c’est
la même température utilisée par JELLALI (1996).

2.1.5/ Influence de la concentration en substances de croissance

[Link]/Milieu MURASHIGE et SKOOG (1962).

Les taux de reprise des méristèmes sur le milieu d’initiation (MS 62) en fonction de la
concentration des régulateurs de croissance sont regroupés dans le tableau 20.

Tableau 20 : influence de la concentration des régulateurs de croissance dans le

milieu de base MS (62).

Nombre de Temps Nombre de Nombre de Nombre de Taux

Variétés Milieux méristème de méristèmes méristèmes méristèmes de
de mis en reprise desséchés formant un repris reprise
culture culture cal
MS0 10 1 MOIS 9 0 1 10%
Ahmar bou

MS1 20 25 JOURS 5 0 15 75%

amar

MS2 20 20 JOURS 3 0 17 85%

MS3 20 20 JOURS 4 7 9 45%
MS1 20 25 JOURS 6 0 14 70%
Valensi

MS2 20 20 JOURS 3 0 17 85%

MS3 20 20 JOURS 3 9 8 40%
MS1 20 25 JOURS 7 0 13 65%
Cherchell
Muscat

MS2 20 20 JOURS 4 0 16 80%

de

MS3 20 20 JOURS 2 10 8 40%

MS0 : Milieu sans hormones (témoin)

MS 1 : 1 mg.L-1 BAP
MS 2 : 1.5mg.L-1 BAP
MS 3 : 1.5 mg.L-1 BAP + 0.2 mg.L-1 ANA
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 82 -

MS0 MS1
Taux de reprise (%) 100%
MS2 MS3
80%

60%

40%

20%

0%
ahmar bou amar valensi muscat de
cherchell
Milieu de culture

Figure 55: taux de reprise des méristèmes en fonction de la concentration des régulateurs de croissance
dans le milieu de base MS (62).
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 83 -

Sur le milieu dépourvu de régulateurs de croissance (MS0), les méristèmes ne montre

aucun développement. Seuls 10 % restent sous forme d’un point vert après un mois de
mise en culture.
Cultivés sur MS1 (1 mg.L-1 BAP), la croissance des méristèmes montre un retard de 10
-1
jours par rapport à ceux cultivés dans le milieu MS2 (1.5 mg.L BAP) avec un taux de
reprise de 75% pour la variété Ahmar bou amar, 70% pour Valensi et 65% pour
Muscat de Cherchell.
Dix jours après la mise en culture, les méristèmes placés sur MS2 présentent une
croissance homogène (absence de callogenèse) avec un taux de croissance
considérable ; 85% pour Ahmar bou amar et Valensi et 80% pour Muscat de
Cherchell.
Une semaine après la mise en culture des méristèmes sur MS3 (1.5 mg.L-1 BAP + 0.2
mg.L-1 ANA), un début de croissance est observé s’accompagnant de la formation de
cal, Ce milieu diffère des précédents par l’apport supplémentaire en auxine : l’ANA à
raison de 0.2 mg.L-1 , c’est pourquoi nous constatons des taux de callogenèse
importants : 35% pour la variété Ahmar bou amar, 45% pour Valensi et 50% pour
Muscat de Cherchell ; en même temps, le taux de croissance reste faible pour les trois
variétés de vigne : 45% pour Ahmar bou amar et 40% pour Valensi et Muscat de
Cherchell.

[Link]/ Milieu CHEE et POOL (1987).

Les taux de reprise des méristèmes sur le milieu d’initiation CP (87) en fonction de la
concentration des régulateurs de croissance sont regroupés dans le tableau 21.

Tableau 21 : influence de la concentration des régulateurs de croissance dans le

milieu de base CP (87).

Milieux Nombre de Temps de Nombre de Nombre de Nombre de Taux de

VARIETES de méristèmes mis reprise méristèmes méristèmes méristèmes reprise
culture en culture desséchés formant un cal repris
CP0 10 1 MOIS 10 0 0 0%
Ahmar bou

CP1 20 25 JOURS 5 0 15 75%

amar

CP2 20 15 JOURS 3 0 17 85%

CP3 20 20 JOURS 3 7 10 50%
CP1 20 25 JOURS 5 0 15 75%
Valensi

CP2 20 15 JOURS 2 0 18 90%

CP3 20 20 JOURS 6 6 8 40%
CP1 20 25 JOURS 7 0 13 65%
Cherchell
Muscat

CP2 20 15 JOURS 3 0 17 85%

de

CP3 20 20 JOURS 6 5 9 45%

CP0 : Milieu sans hormones (témoin)

CP 1 : 1 mg.L-1 BAP
CP 2 : 1.5 mg.L-1 BAP
CP 3 : 1.5 mg.L-1 BAP + 0.2 mg.L-1 ANA
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 84 -

Taux de reprise
CP0 CP1
100%
(%) CP2 CP3
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
ahmar bou valensi muscat de
amar cherchell
Milieu de culture

Figure 56: taux de reprise des méristèmes en fonction de la concentration des régulateurs
de croissance dans le milieu de base CP (87).
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 85 -

Sur le milieu dépourvu de régulateurs de croissance CP0, les méristèmes se

transforment en un point vert et après un mois de mise en culture ils se dessèchent.
Cultivés sur le milieu CP1 (1mg.L-1 BAP), les méristèmes présentent une faible
croissance et après 20 jours de mise en culture le taux de reprise atteint 75% pour les
variétés Ahmar bou amar et valensi et 65% pour la variété Muscat de Cherchell.
Après 5 à 6 jours de mise en culture sur le milieu CP2 (1.5 mg.L-1 BAP) les
méristèmes se développent rapidement et après deux semaines une croissance très
importante est remarquée avec un taux de reprise de 85% pour Ahmar bou amar et
Muscat de Cherchell et 90% pour Valensi.
Les méristèmes placés sur le milieu CP3 (1.5 mg.L-1 BAP + 0.2 mg.L-1 ANA)
présentent une faible croissance avec formation de cal ; ainsi les taux de reprise
enregistrés sont de 50% pour Ahmar bou amar, 40% pour Valensi et 45% pour Muscat
de Cherchell. De plus, les taux de callogenèse sont de 35% pour Ahmar bou amar,
30% pour Valensi et 25% pour Muscat de Cherchell.

Les résultats consignés dans le tableau 20 et 21 montrent que l’absence de régulateurs

de croissance ne favorise pas le développement des méristèmes. En effet toute cellule
végétale est capable de synthétiser des cytokinines mais de manière insuffisante pour
sa propre croissance (ZRYD et al., 1988).
L’examen des résultats montre l’aptitude des méristèmes à se développer est
influencée par la concentration en BAP. De bon résultas ont été obtenus avec de 1.5
mg.L-1 de BAP, 85% dans le milieu MS2 et 90% pour le milieu CP2
Nos résultats confirment les observations faites par BARLASS et SKENE (1978) qui
ont fait mention de l’effet bénéfique de l’utilisation de la BAP sur la croissance des
méristèmes de la vigne. Par ailleurs le phénomène de la callogenèse induit par
l’adjonction de 0.2 mg.L-1 de l’ANA à la BAP a été observé par JELLALI (1996).

2.1.6/ Influence des milieux de base sur la croissance des méristèmes

Les résultats de l’étude comparative entre les deux milieux de base MS (62) et CP (87)
sont portés sur le tableau 22.

Tableau 22 : étude comparative entre les milieux de base d’initiation MS (62) et CP (87).

Milieux de Nombre de Temps de Nombre de Nombre de Taux de

VARIETES culture méristèmes reprise méristèmes méristèmes reprise
mis en culture desséchés repris
MS2 20 20 jours 3 17 85%
Ahmar

amar
bou

CP2 20 15 jours 3 17 85%

MS2 20 20 jours 3 17 85%
Valensi

CP2 20 15 jours 2 18 90%

MS2 20 20 jours 4 16 80%

Cherchell
Muscat
de

CP2 20 15 jours 3 17 85%

RESULTATS ET DISCUSSIONS - 86 -

100%
MS2
Taux de 90%
reprise (%) 80% CP2
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
Ahmar bou Valensi Muscat de
amar cherchell

Variétés de vigne

Figure 57 : étude comparative entre les milieux de base MS (62) et CP (87) et leur
influence sur le taux de croissance des méristèmes.

L’examen des résultats des Tableaux 20 et 21 montre que l’aptitude des méristèmes à
se développer est influencée par la concentration en BAP. De bons résultats ont été
obtenus avec 1.5 mg.L-1 de BAP où nous enregistrons un taux de reprise de 85% dans
le milieu MS2 et un taux de reprise de 90% dans le milieu CP2. (Figure : 59, 60 et 61).
Ces résultats nous ont amené à faire une étude comparative des deux milieux de base
MS2 et CP2 (Tableau 22).

™ CONCLUSION
Au cours de cette première étape nous avons retenu les premiers résultats :
¾ Méthode de désinfection du matériel végétal : hypochlorite de sodium à 3% pendant
5 Mn.
¾ Méthode de prélèvement du méristème: T2 (dôme apical avec deux primordia
foliaires).
¾ Température du jour : 24°C.
¾ Milieu de culture de base : CP2 avec 1.5 mg.L-1 de BAP.
Ainsi, les autres milieux ont été abandonnés dans le reste de notre étude.
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 87 -

Figure 58 : croissance des méristèmes de la variété Ahmar bou amar

cultivés sur le milieu MS2 après un séjour de 20 jours. (x 1.5)

Figure 59 : croissance des méristèmes de la variété Ahmar bou amar

cultivés sur le milieu CP2 après un séjour de 15 jours.(x 1.5)

Figure 60 : croissance des méristèmes de la variété Ahmar bou amar cultivés sur
le milieu CP2 après un séjour de 20 jours. (x 2)
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 88 -

2.2/ La phase de multiplication

Après un séjour d’un mois dans le milieu d’initiation, les explants obtenus sont
transplantés dans le milieu de multiplication CP (87) modifié, pour cela nous avons
pensé à diminuer de 1/3 la concentration des macro-éléments et nous avons remplacé
les vitamines de CP par les vitamines de MOREL et MARTIN (1952) qui sont très
riches.
Les résultats obtenus sont représentés dans le Tableau 23.

Tableau 23 : résultats obtenus en milieu de culture de multiplication.

Nombre de Nombre de Nombre de Taux de Nombre de taux de

VARIETES méristèmes en méristèmes méristèmes reprise bourgeons multiplication
croissance contaminés repris néoformés
Ahmar

amar
bou

17 10 7 41.17% 35 500
Valensi

17 7 10 55.5% 52 520
Cherchel
Muscat

17 11 6 35.29% 47 780
de

Taux de 100 Taux de

croissance et reprise
de 80
Taux de
multiplication multiplication
(%) 60

40

20

0
Ahmar bou Valensi Muscat de
amar Cherchell
Variété de vigne

Figure 61 : effet du milieu de multiplication sur le taux de reprise et le taux de

multiplication
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 89 -

Concernant la variété Ahmar bou amar, les 17 méristèmes issus du milieu d’initiation
ont été transplantés dans le milieu de multiplication. Après 3 à 4 semaines tous les
méristèmes non contaminés se développent en produisant une feuille bien apparente au
dessous de laquelle il est possible d’observer la présence de 4 à 5 bourgeons adventifs.
Ces bourgeons repiqués dans leur milieu neuf donnent des tiges feuillées au sein
desquelles apparaissent de nouveaux 4 à 5 bourgeons (Figure 62 et 63).

Théoriquement il est possible d’obtenir 500 plants par méristème au bout de 3 à 4

subcultures. Mais vu les problèmes rencontrés durant l’été 2003 dus à la forte chaleur
et les coupures successives d’électricité, la nécrose des plants et la propagation d’une
bactérie a causé une perte considérable des plants obtenus.
Ainsi à partir de 17 méristèmes de la variété Ahmar bou amar, 35 plants sont obtenus à
partir de 7 méristèmes non contaminés avec un taux de reprise de 41.17% et un taux de
multiplication de 5 % (Figure 61).
Chez la variété Valensi, la taux de multiplication était de 5.2 % ; ainsi à partir de 17
méristèmes issus du milieu d’initiation, 55.5% ont donné 52 pousses (Figure 61).
Chez Muscat de Cherchell, parmi les 17 méristèmes issus du milieu d’initiation,
35.29% ont évolué pour donner 47 plants avec un taux de multiplication de 7.8%
(Figure 61).

2.2.1/ Effet du génotype sur le taux de multiplication

Les résultats obtenus montre que la variété Muscat de Cherchell donne les meilleurs
résultats avec un taux de multiplication de 7.8% suivie par les variétés Valensi et
Ahmar bou amar dont le taux de multiplication est de 5%.
Cependant nous avons observé une différence de comportement des variétés aux
stades d’initiation et de multiplication. Ainsi le stade d’initiation a favorisé la
croissance de la variété Valensi avec un taux de croissance de 90% suivie des deux
variétés Ahmar bou amar et Muscat de Cherchell avec un taux de croissance de 85%.

Selon CORTE (1985), la différence de comportement des plants de vigne cultivé in

vitro est liée à l’origine des méristèmes prélevés.
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 90 -

La variété Ahmar bou La variété Valensi La variété Muscat

amar (x 0.6) (x 0.6) de Cherchell (x 0.5)

Figure 62 : vitroplants des trois variétés obtenus au cours de la phase de

multiplication

La variété Ahmar bou La variété Valensi La variété Muscat de Cherchell

amar (x 0.5) (x 0.5) (x 0.7)

Figure 63 : 1ere subculture des vitroplants des trois variétés

issus de la phase de multiplication
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 91 -

2.3/ Phase d’allongement et d’enracinement

Le milieu d’allongement utilisé l’hormone d’allongement GA3 à une concentration de

1mg.L-1.
Après 3 semaines de séjour dans le milieu d’allongement, les plants évoluent très bien
pour atteindre une longueur de 2 à 3 cm, et à la fin de la 3eme semaine, nous avons
remarqué un début de formation des racines.
Au bout de deux semaines, les explants s’allongent pour atteindre 7 à 8 cm de
longueur avec formation de 5 à 6 feuilles accompagné d’un développement intense du
système racinaire jusqu’à 8 cm de longueur et qui atteint à la fin de la 3eme semaine 20
cm (Figure 64 et 65).
Selon MONCOUSIN (1991), l’enracinement in vitro peut être affecté par la
composition minérale du milieu de milieu de multiplication et la nature de la source de
carbone.
Par ailleurs, de nombreux auteurs montrent qu’un séjour des explants de vigne à
l’obscurité est favorable à l’apparition et au développement des racines CONG LINH
(1987) ; (LEBTAHI, 2001) sur le sapin de Numidie et (LAHCENE, 2003) sur le
Thuya de Berberie ; cependant, durant notre expérimentation les racines ont été
obtenues sans le passage par la phase d’obscurité.

Certains auteurs (GALZY, 1972 ; ZRYD et al, 1988) confirment que l’adjonction de
l’hormone d’allongement GA3 inhibe la formation des racines ; nos résultats sont en
désaccord avec ces observations. En effet nous avons réussi à obtenir des racines bien
développées pendant la phase d’allongement dont le milieu contient l’hormone
d’allongement GA3 (0.1 mg.L-1).
Au cours de la phase d’allongement et d’enracinement, les vitroplants obtenus ne
produisent pas de vrille, cette observation est déjà signalée par FOURNIOUX et
HELOIR (1999).
Selon NOZERAN et BANCILHON (1972) chez les Vitis, les caractères juvéniles
concernant l’absence de vrille se maintiennent au cours des repiquages successifs in
vitro et même pendant quelque temps après le rempotage.

De même, RIVES (1972), FAVRE et GRENAN (1973), GRENAN (1984),

BOUBALS (1991) et FOURNIOUX et HELOIR (1999) signalent que les technologies
qui utilisent la culture in vitro pour la production de plants de vigne conduisent
généralement à des modifications de ses caractères morphologiques et font apparaître
des traits de juvénilité comparables à ceux d’une plante issue de la germination d’un
pépin.
Cette variabilité concerne l’absence de vrille, la disposition des feuilles, leur forme
plus dentelées et l’augmentation des pigmentations anthocyaniques des rameaux
(MUR, 1979 ; GRENAN, 1983). Selon GRENAN (1994), les caractères de juvénilité
au niveau des plantules issues de la culture in vitro peuvent disparaître par un suivi
agronomique : taille longue, greffage des bourgeons de la partie terminale.
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 92 -

MARTINEZ et al (1994) ont pu affirmer que la persistance des caractères juvéniles

des vitroplants de la vigne n’est pas définitive et ils ont montré que la distinction entre
les vitroplants et les plantes in vivo est difficile après une saison de comportement in
vivo.

D’après MARGARA (1989) la plante peut présenter une succession de caractéristiques

morphologiques et physiologiques au cours de son développement qui affectent le plus
souvent la forme des feuilles et le type de croissance des rameaux. Dans l’exemple du
Fraisier, les nouvelles feuilles produites sont entières tandisque les feuilles de la
plante plus âgées sont trifoliées. Cependant ce caractère juvénile ne persiste pas après
arrêt de repiquage fréquent sur un milieu contenant une cytokinine.
Chez le palmier dattier cultivé in vitro, le caractère de jeunesse apparaît au niveau des
feuilles qui sont simples et entières au lieu d’être palmées (BOUGUEDOURA, 1991).
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 93 -

la variété Ahmar bou amar la variété Valensi (x 0.6)

(x 0.7)

Figure 64 : vitroplants obtenus au cours de la phase d’allongement et

d’enracinement.

Figure 65 : vitroplants de la variété

Muscat de Cherchell obtenus au cours de la
phase d’allongement et d’enracinement (x 0.6)
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 94 -

2.4/ Phase d’acclimatation

L’acclimatation est une étape très importante pour le succès de la multiplication

végétative in vitro.
Cette étape consiste à transférer les vitroplants du milieu gélosé vers un substrat
naturel (Figure 67) ; les racines sont préalablement lavées à l’eau pour éliminer toute
trace de gélose qui faciliterait la prolifération des champignons ou bactéries.
En effet, selon BIGOT et ANSTETT (1992), les plantules cultivées in vitro sont peu
lignifiées et souvent dépourvues de cuticule dont le rôle est de limiter la transpiration,
elles sont de ce fait très sensibles à toute attaque d’origine fongique ou bactérienne, de
même elles sont fragiles pour supporter directement l’environnement ambiant.
Afin d’habituer les vitroplants aux nouvelles conditions, nous avons procédé à
l’ouverture des bocaux ou des mini-serres de façon progressive.

Après le transfert des vitroplants sur le nouveau substrat constitué d’un mélange de
tourbe et de perlite, les feuilles sont restées vertes pendant une semaine. Puis les
feuilles les plus âgées (de la base) sont tombées, cette même observation a été
signalée aussi par JELLALI (1996).
Au bout de la troisième semaine d’acclimatation, de nouveaux bourgeons apparaissent.
Ils développent une activité intense permettant la formation de nombreuses [Link]
plants présentent alors un aspect vigoureux, avec croissance continue (Figure 68, 69,
70).
Le taux de reprise des vitroplants lors de cette phase est de 77.14% pour la variété
Ahmar bou amar, 80.76% pour la variété Valensi et 85.10% pour la variété Muscat de
Cherchell (Tableau 24, Figure 66).

Tableau 24 : taux de reprise des vitroplants en acclimatation

VARIETE NOMBRE DES NOMBRE DES NOMBRE DES TAUX DE

VITROPLANTS VITROPLANTS VITROPLANTS REPRISE
ACCLIMATES DESSECHES REPRIS
AHMAR BOU 35 8 27 77.14%
AMAR
VALENSI 52 10 42 80.76%
MUSCAT 47 7 40 85.10%
DE CHERCHELL
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 95 -

100%
Taux de reprise 90%
(%) 80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
Ahmar bou Valensi Muscat de Variété
amar Cherchell

Figure 66 : taux de reprise des vitroplants en acclimatation

D’après les résultats obtenus, nous avons constaté que cette étape d’acclimatation des
vitroplants de la vigne n’a pas présenté de difficultés majeures, contrairement au
travaux de JELLALI (1996) qui a obtenu un taux de reprise très faible (12.53%) des
vitroplants acclimatés.
Selon CHALUPA (1984), l’acclimatation des plantules enracinées constitue le
problème majeur à la réussite de la régénération du Chêne liège (Quercus suber) ,
cependant les essais de LAMRATI et EL KBIACH (2002) ont pu maintenir la survie
des vitroplants de Quercus suber acclimatées. Ces auteurs considèrent que le maintien
d’une humidité relative au début de l’acclimatation suivie d’une diminution
progressive de son degré permet l’obtention de plantes vigoureuses capables de
continuer une croissance normale.
Les essais d’acclimatation menés par LAHCENE (2003) sur les vitroplants de Thuya
de Berberie ont donné un taux de mortalité de 100%, selon ce même auteur, cette
phase nécessite de tester des substrats et des conditions de préacclimatation pour
arriver à une meilleure réussite de cette phase.
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 96 -

Figure 67 : vitroplants mis en miniserre

d’acclimatation (x 0.4)

Figure 68 : vitroplants de la variété Ahmar bou amar obtenus

après un mois et demi d’acclimatation (x 0.35)
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 97 -

Figure 69 : vitroplantsde la variété Valensi obtenus après un

mois et demi d’acclimatation (x 0.35)

Figure 70 : vitroplants de la variété Muscat de

Cherchell obtenus après un mois et demi
d’acclimatation (x 0.3)
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 98 -

3/ CONTROLE DE L’ETAT SANITAIRE DES VITROPLANTS OBTENUS

Après deux mois et demi d’acclimatation des vitroplants de la vigne, nous avons
procédé au contrôle de leur état sanitaire vis-à-vis des virus du court noué, de
l’enroulement foliaire et de la marbrure par le test sérologique Elisa. Les résultas
obtenus sont enregistrés sur les Tableaux : 25, 26 et 27.

Tableau 25 : résultats du test Elisa vis à vis du virus du court noué (GFLV) des
vitroplants des variétés Ahmar bou amar et valensi

VARIETE DENSITE REACTION VARIETE DENSITE REACTION

OPTIQUE (nm) OPTIQUE (nm)
H1 0.204 + V1 - 0.119 -
H2 0.083 + V2 0.069 +
H3 0.150 + V3 - 0.048 +
H4 - 0.032 + V4 - 0.045 +
H5 - 0.124 - V5 0.052 +
H6 - 0.094 + V6 - 0.122 -
H7 - 0.085 + V7 0.037 +
TP 0.089 + V8 - 0.100 +
TN - 0.121 - V9 - 0.111 +
V10 0.059 +
H = Ahmar bou amar TP = témoin positif
V = Valensi TN = témoin négatif

Tableau 26 : résultats du test Elisa vis à vis du virus de la marbrure (GFKV) des
vitroplants des variétés Ahmar bou amar et Valensi

VARIETE DENSITE REACTION VARIETE DENSITE REACTION

OPTIQUE (nm) OPTIQUE (nm)
H1 - 0.054 - V1 - 0.063 -
H2 - 0.065 - V2 - 0.065 -
H3 - 0.060 - V3 - 0.060 -
H4 - 0.067 - V4 - 0.061 -
H5 - 0.053 - V5 - 0.058 -
H6 - 0.063 - V6 - 0.062 -
H7 - 0.065 - V7 - 0.059 -
TP 0.169 + V8 - 0.058 -
TN - 0.050 - V9 - 0.051 -
V10 - 0.056 -

H = Ahmar bou amar TP = témoin positif

V = Valensi TN = témoin négatif
RESULTATS ET DISCUSSIONS - 99 -

Tableau 27 : résultats du test Elisa vis à vis du virus de l’enroulement foliaire (GLRaV)
des vitroplants de la variété Muscat de Cherchell

VARIETE DENSITE REACTION

OPTIQUE (nm)
M1 - 0.058 -
M2 - 0.066 -
M3 - 0.063 -
M4 - 0.065 -
M5 - 0.066 -
M6 - 0.062 -
TP 0.114 +
TN - 0.054 -

M = Muscat de Cherchell ; TP = témoin positif ; TN = témoin négatif

L’examen de ces tableaux montre que la culture in vitro des méristèmes à partir de
plants virosés nous a permis de guérir à 100% la variété Muscat de Cherchell qui a été
atteinte par le virus de l’enroulement foliaire (GLRVaIII).
Le test Elisa a révélé aussi que les deux variétés Ahmar bou amar et Valensi se sont
débarrassées du virus de la marbrure (GFKV) à 100%, par contre nous avons constaté
que 29 vitroplants de la variété Ahmar bou amar ont réagit positivement vis-à-vis du
virus du court noué avec un pourcentage de guérison de 17% et 43 vitroplants de la
variété Valensi ont réagit positivement vis-à-vis du virus du court noué avec un taux
de guérison de 17%.
Ainsi, le GFLV s’est révélé persistant, le taux d’assainissement étant de 17% pour les
deux variétés court nouées Ahmar bou amar et Valensi ; selon GALZY (1961;1963),
VALAT (1979) et GRENAN (1980), l’assainissement contre certains virus nécessite
un traitement de culture in vitro associé à la thermothérapie.
DISCUSSIONS ET CONCLUSIONS GENERALES - 101 -

DISCUSSIONS ET CONCLUSIONS GENERALES

Les maladies virales constituent le plus grand problème de la vigne dans le monde, car
aucune lute chimique ne peut être envisagée.
Ces viroses sont à l’origine de pertes importantes de récoltes, de vigueur et de
longévité de la vigne.

Le diagnostic des maladies virales repose sur une série de méthodes conduisant à
l’identification du virus.
La détection par symptomatologie constitue la première étape du diagnostic. Dans le
cadre de ce travail nous avons effectué des prospections visuelles au vignoble et sous
serre sur trois variétés de vigne de table : Ahmar bou amar, Valensi et Muscat de
Cherchell dans le but de détecter trois viroses : le court noué, la marbrure et
l’enroulement foliaire.
Cette méthode a permis de noter les symptômes du court noué et de la marbrure sur les
variétés Ahmar bou amar et Valensi alors que les symptômes de l’enroulement foliaire
ne se manifestent pas chez ces deux variétés.
Chez la variété Muscat de Cherchell, nous avons enregistré des légers symptômes
d’enroulement foliaire au vignoble de Cherchell.

La symptomatologie ou le diagnostic visuel constitue la première étape de l’évaluation

sanitaire au vignoble. Cependant, la latence de certains virus empêche la
manifestation des symptômes tel que l’enroulement foliaire qui a été révélé au
vignoble de Cherchell sur la variété de Muscat de Cherchell et dont les symptômes
n’ont pas été visibles sous serre.

Cela nous a conduit à passer à une deuxième méthode de détection des virus :
l’inoculation mécanique sur des indicateurs herbacés.
Dans ce cadre, nous avons inoculé la variété Muscat de Cherchell sur trois espèces
d’hôtes herbacés (la courgette, la tomate et le petit pois).
Les symptômes extériorisés sur les trois variétés indicatrices correspondent à ceux
provoqués par le virus de l’enroulement foliaire.
Les symptômes sont apparus après trois jours pour la tomate et le petit pois et six jours
pour la courgette.
Ce test a permis de montrer que les trois espèces inoculées réagissent différemment à
la présence du virus ce qui a permis de les classer selon leur sensibilité et selon
l’importance du virus avec des taux considérables respectivement 76% et 65%. Mais
d’après la diversité des symptômes, nous avons remarqué que la courgette réagit
mieux à la présence du virus avec un taux moyen des symptômes de 43%.
Cet essai d’indexage a permis de mettre en évidence l’intérêt de cette méthode de
diagnostic pour la détection des virus de la vigne. En effet, l’utilisation des plantes
indicatrices herbacées est très avantageuse vu qu’elles sont très faciles à cultiver ; de
plus elles se distinguent par une croissance et une extériorisation des symptômes très
rapide (durée maximale de 15 jours).
DISCUSSIONS ET CONCLUSIONS GENERALES - 102 -

Dans le but de mieux valoriser les résultats obtenus par symptomatologie au champ et
par inoculation mécanique sur indicateurs herbacés, il est préférable d’effectuer les
tests Elisa contre les virus du court noué, l’enroulement foliaire et la marbrure.
Ce test nous a permis de confirmer les observations visuelles au vignoble et sous serre
et il nous a même révélé la présence du virus de l’enroulement foliaire (GLRaV III)
chez la variété Muscat de Cherchell bien que les symptômes n’ont pas été extériorisés
sous serre.
Ainsi, il ressort des résultats du test Elisa que les variétés Ahmar bou amar et Valensi
sont atteintes de deux viroses : le court noué et la marbrure, alors que la variété Muscat
de Cherchell a réagit positivement vis-à-vis du virus de l’enroulement foliaire.
D’autre part, chez les espèces indicatrices herbacées (la courgette, la tomate et le petit
pois) les densités optiques obtenues par le test Elisa nous ont permis de comparer les
résultats à ceux obtenus par l’inoculation mécanique.
Ainsi, l’observation visuelle, l’inoculation mécanique sur indicateurs herbacés et le
test Elisa sur la variété Muscat de Cherchell et sur les espèces indicatrices ont révélé
que la variété Muscat de Cherchell est atteinte du virus de l’enroulement foliaire
GLRaV III. Ceci montre que les résultats du dépistage ne peuvent être sûrs qu’après
confirmation par le test sérologique Elisa qui est le plus sensible et détecte la présence
des virus à concentration très faible (WALTER et DEMANGEAT., 1994).

D’après tous les résultats obtenus nous pouvons retenir que le test sérologique Elisa
précédé par des prospections visuelles et l’indexage biologique par inoculation
mécanique sur indicateurs herbacés peut être recommandé dans le cadre de la sélection
sanitaire.

A la lumière des résultats de la première partie concernant les méthodes de diagnostic

des maladies virales de la vigne, nous avons entamé le deuxième volet de notre
travail : l’assainissement par culture in vitro des méristèmes de vigne virosés.
En commençant ce travail, nous sommes passés par plusieurs étapes dans le but
d’aboutir à la propagation d’un matériel végétal excepté de virus.
Par rapport à cet objectif nous avons obtenu un certain nombre de résultats qui seront
discutés en plusieurs parties :

Concernant, le choix de la technique de désinfection du matériel végétal, nous avons

testé l’effet de deux solutions désinfectantes à base d’hypochlorite de sodium et
d’hypochlorite de calcium à des concentrations différentes et à des temps de trempage
variables et c’est l’hypochlorite de sodium à 3% à une durée de temps de 15 minutes
qui nous apporte satisfaction. En effet du fait que les méristèmes sont entourés par les
ébauches foliaires ils ne nécessitent pas des méthodes de stérilisation trop lourdes ;
c’est ce qui a été signalé par BOCCON-GIBBOD (1989).

Concernant le type de méristème, les résultats obtenus au cours de nos essais montrent
que les méristèmes de vigne prélevés sans primordia foliaire (T1) se nécrosent et
n’aboutissent pas à terme à cause de leur taille réduite, par contre le prélèvement des
méristèmes avec deux primordia foliaires s’est avéré la meilleure méthode de
régénération et la production de plants indemnes de viroses.
DISCUSSIONS ET CONCLUSIONS GENERALES - 103 -

A l’issu de ces résultats, les méristèmes de type T2 ont été retenus comme explants ;
ces résultats concordent avec ceux de GALZY (1972), BENABDALLH (1996) et
JELLALI (1996).

L’influence de la température du jour sur la croissance des méristèmes a été montrée

et c’est 24°C qui semble la température la plus appropriée au développement des
méristèmes de la vigne. Ceci est confirmé aux résultats de JELLALI (1996) ,

Pour compléter cette étude, nous avons testé l’influence de la concentration en

substances de croissance et l’effet du milieu de base d’initiation sur la croissance des
méristèmes.
En effet, il existe une relation directe entre la composition du milieu et le
comportement des plants cultivés in vitro. C’est ainsi, que nous avons conçu
l’utilisation de deux milieux de base MS (62) et CP (87), à des concentrations en
substances de croissance différentes.
Dans un premier temps, nous avons tenté de voir l’effet de la BAP seule ou associée à
une auxine : l’ANA à différentes concentrations les résultats obtenus montrent que
l’absence des régulateurs de croissance ne favorisent pas la croissance des méristèmes.
Par contre, l’aptitude des méristèmes à se développer est influencée par la
concentration en BAP.
Les trois variétés de vigne : Ahmar bou amar, valensi et Muscat de Cherchell donnent
les meilleurs pourcentages de reprise : 85% pour Ahmar bou amar et valensi et 80%
pour Muscat de Cherchell, sur le milieu MS2 contenant 1.5 mg.L-1 de BAP et 85%
pour Ahmar bou amar et Muscat de Cherchell et 90% pour la variété Valensi, sur le
milieu CP2 contenant 1.5 mg.L-1 de BAP..
BARLASS et SKENE (1978) ont fait mention de l’effet bénéfique de l’utilisation de 2
mg.L-1 de BAP sur la croissance des méristèmes de la vigne.

L’action du milieu de base sur la croissance des méristèmes indique que c’est le milieu
CP2 qui est le plus favorable bien que le MS2 reste aussi valable. Ainsi, 90% de taux
de reprise de croissance ont été observés chez la variété Valensi et 85% pour les deux
variétés Ahmar bou amar et Muscat de Cherchell, en une durée de temps qui ne
dépasse pas 15 jours de séjour dans le milieu de culture.

Ainsi, pour la première étape de la culture in vitro nous retenons :

¾ la méthode de désinfection du matériel végétal : hypochlorite de sodium à 3%
pendant 15 Mn.
¾ la méthode de prélèvement du méristème: type T2 (dôme apical avec deux primordia
foliaires).
¾ la température du jour : 24°C.
¾ le milieu de culture de base : CP2 avec 1.5 mg.L-1 de BAP.
Ainsi, les autres milieux ont été abandonnés dans le reste de notre étude.

Après 3 à 4 semaines de séjour dans le milieu d’initiation, les méristèmes se

développent en produisant 4 à 5 bourgeons adventifs qui à leurs tour repiqués dans leur
DISCUSSIONS ET CONCLUSIONS GENERALES - 104 -

milieu neuf donnent des pousses feuillées au sein desquelles apparaissent de nouveaux
4 à 5 bourgeons.
Ainsi, nous avons obtenu 35 pousses de la variété Ahmar bou amar à partir de 7
méristèmes issus de la phase d’initiation, avec un taux de reprise de 41,17% et un taux
de multiplication de 5%.
Chez la variété Valensi, le taux de multiplication était de 5,2% avec un pourcentage de
reprise de 55,5%.
Chez Muscat de Cherchell, 47 pousses ont évolué pour atteindre un taux de reprise de
35,29% et un taux de multiplication de 7,8%.
Ces résultas obtenus au cours de la phase de multiplication permettent de montrer que
la variété Muscat de Cherchell donne les meilleurs résultats, suivi par les variétés
Valensi et Ahmar bou amar.
Au bout de 3 à 4 subcultures, les pousses obtenues sont transférées sur le milieu
d’allongement CP2. Après un mois de séjour dans ce milieu, les pousses s’allongent
bien pour atteindre 7 à 8 cm de longueur avec formation de 5 à 6 feuilles. A ce stade
nous avons constaté la formation spontanée des racines qui peuvent atteindre 20 cm de
longueur.

Enfin l’acclimatation est une étape déterminante pour la réussite de la technique

d’assainissement par culture in vitro des méristèmes.
Pour notre part, la phase d’acclimatation réalisée sur les vitroplants des trois variétés a
donné un pourcentage de reprise très important 77.14% pour la variété Ahmar bou
amar, 80.76% pour la variété Valensi et 85.10% pour Muscat de Cherchell.

Les travaux entrepris ont conduit à la guérison des plants atteints de la marbrure et de
l’enroulement foliaire reconnues comme économiquement graves. Les premiers tests
sanitaires réalisés sur le matériel ainsi obtenu tendent à montrer que les deux virus ont
été éliminé à 100%, tandis que le virus du court noué reste persistant avec un taux de
guérison de 17%.

Enfin, il n’en demeure pas moins que les recherches doivent être poursuivies, étant
donné la dégradation sanitaire du vignoble algérien. Il est temps d’entreprendre un
programme rigoureux de sélection sanitaire en donnant la priorité aux variétés
autochtones adaptées à nos conditions climatiques.
La poursuite et l’amélioration de ces travaux, permettront d’entamer un programme de
lutte appropriée, pour tenter de minimiser et de remédier aux dommages observés.