Faculté de Médecine d’Oran - Département de Pharmacie
Laboratoire de Chimie Analytique
FICHE DE TD N°3
Méthodes Chromatographiques: Analyse quantitative
Exercice n°1:
On veut doser une amine secondaire A par CPG en utilisant la méthode de l’étalon interne.
On veut d’abord déterminer le débit optimal de la phase mobile, les essais effectués
donnent les résultats suivants :
Débit du gaz vecteur (ml/min) Distance de rétention (cm) Largeur du (mm)
17 6,4 8
20 5 5
25 4 4,2
− Calculer le débit optimal
On veut ensuite déterminer le coefficient de proportionnalité ou de réponse K pour une
solution étalon A à 5,4 10-2 M à laquelle on ajoute un étalon interne E :
− Dans 10 ml de solution étalon, on dissout 6 mg de l’étalon interne E, on obtient la
solution (1).
− Dans 10 ml de solution étalon, on dissout 12 mg de l’étalon interne E, on obtient la
solution (2)
− Dans 10 ml de solution étalon, on dissout 24 mg de l’étalon interne E, on obtient la
solution (3)
Sachant que les rapports des surfaces des pics sont SurfA/SurfE=14,9 pour la solution (1), 7,5
pour la solution (2) et 3,75 pour la solution (3).
− Comment choisit-on un étalon interne
− Calculer le coefficient K
Sachant que cette amine est un liquide dont la densité est égal à 1 ,080 .
− Quel volume faut-il prélever pour préparer 1 litre de solution étalon à 5,4 10-2 M.
On donne masse molaire de A=200g/mol .
TD N 3 | Troisième Année Pharmacie 2023-2024
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Laboratoire de Chimie Analytique
Exercice n°2 :
On souhaite doser le menthol, principal constituant de l'essence de menthe utilisée commearôme. On
réalise une extraction de celui-ci dans un solvantorganique. A partir de 10 ml de sirop, on ajoute 5 ml de
solvant organique. Après agitation, la phase organique est récupérée puis 5 ml d'une solution organique
de citronellol à 10 mg/100ml sont ajoutés, le rendement d’extraction est de94%..
L'analyse d'environ 5 μl par CGL de la solution ainsi obtenue donne : Aire citronellol =21120,aire
menthol= 35200. Par ailleurs on prépare une solution étalon en mélangeant 5 ml de la solution
organique de citronellol à 5 ml d'une solution organique du menthol (concentration : 5 mg/100ml).
On injecte environ 5 μl de cette nouvelle solution dans le CGL et on obtient les aires suivantes : Aire
citronellol = 21000 et aire menthol = 19 200.
• En déduire la concentration du menthol dans la solution d'extraction puis dans le sirop.
Exercice n°3 :
A la suite d'une intoxication aiguë par le méprobamate, le laboratoire procède au dosage de
cetranquillisant dans le sang par CPG.
Dans ce but 5 ml de sang total sont extraits par 50 ml de chloroforme. 45 ml de la phase
organiqueobtenue sont évaporés à sec et le résidu est repris par 100 μl d'une
solutionparadiméthylaminobenzaldéhyde (PDAB) de concentration C1, le PDAB jouant le rôle
d'étalon interne. 1 μl de solution de reprise, est injecté dans le chromatographe et les hauteurs des
deux pics obtenus de méprobamate et de PDAB sont mesurées.
On a par ailleurs, procédé à l'étalonnage en injectant d'une part 1 μl de solution étalon E1 de
méprobamate à 5g/l et de PDAB à concentration C1, d'autre part 1 μl d'une solution étalon E2 de
méprobamate à 10g/l et de PDAB à concentration C1.
En mesurant les hauteurs des pics obtenus, les valeurs suivantes ont été obtenues :
Hauteur en mm du pic de Hauteur en mm du pic de
méprobamate (HM) PDAB (HP)
Extrait à doser 65 100
Solution étalon E1 40.8 102
Solution étalon E2 88 108
L'étalonnage a permis d'obtenir une droite d'étalonnage de la forme y= ax+b passant par l'origine.
• Sachant que le rendement d'extraction chloroformique est de 90%, calculer la
concentrationsanguine en méprobamate en mgl1 et en mmol/l (Masse relative du
2
méprobamate : 218.3 g/mol).
• Quel est le rôle de l'étalon interne dans ce dosage ?
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Exercice n°4 :
On désire doser par chromatographie en phase gazeuse de l'eucalyptol dans des suppositoiresdont le
poids moyen est 2.85g.
Pour cela, on broie 5 suppositoires et on pèse 5g de la matière solide obtenue que l'on introduit dans
un bêcher avec de l'éthanol absolu. Après passage aux ultra-sons pour solubiliser l'eucalyptol, on
filtre dans une fiole jaugée de 50ml. On effectue tous les rinçages nécessaires et on complète au trait
de jauge avec de l'éthanol absolu. On fait deux dilutions successives au 1/25e dans ce même solvant
et on injecte 2μlde la dernière dilution dans le chromatographe. On obtient pour l'eucalyptol un pic
dont l'aire est égale à 198 000 (unités de surface).
On réalise un étalonnage avec une solution d'eucalyptol préparée à partir de deux dilutions
successives au 1/25 e d'une solution mère obtenue en dissolvant 100 μl d'eucalyptol de densité 0.92
dans 25ml d'éthanol absolue. On injecte 2μl de solution étalon dans le chromatographe. L'aire du pic
correspondant est 200 000.
• Calculer la quantité d'eucalyptol contenue dans un suppositoire.
• Sachant que la quantité théorique est de 120mg, comment expliquez-vous ce résultat ?
On propose alors de modifier la technique en rajoutant 100 μl de limonène (densité 0.84) aux 5g de
matière solide dans le bécher et 50 μl à la solution mère d'étalonnage.
On ne change rien aux différentes opérations et dilutions effectuées dans le 1er cas et on injecte2 μl
de chaque solution dans le chromatographe.
Les aires respectives des pics d'eucalyptol et de limonène sont, dans le cas de la solution à doser,
210 000 et 207 000, dans le cas de la solution étalon, 220 000 et 250 000.
On demande :
• Le nom de la méthode de dosage utilisée dans le 2e cas.
• L'intérêt d'utiliser cette méthode dans le cas présent.
• Les critères qui justifient le choix du composé ajouté (ici le limonène) dans ce type de
méthode.
• La quantité d'eucalyptol contenue dans un suppositoire par cette méthode.
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