UNIVERSITE CHEIKH ANTA DIOP DE DAKAR

FACULTE DE MEDECINE, DE PHARMACIE ET D’ODONTOLOGIE

Département des Sciences Biologiques et Pharmaceutiques Appliquées

REPLICATION
Cours de Biologie moléculaire
Licence 2 Pharmacie, FPMO, UCAD, 2024-2025

Pr B. FAYE, PharmD/PhD
Biologie Moléculaire

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 PLAN
Introduction

I. Caractéristiques générales

II. Principaux Acteurs

III. Mécanismes de la réplication

IV. Applications

Conclusion
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 Introduction
Définition

La réplication correspond à un dédoublement de l’ADN par

synthèse lors du cycle cellulaire; deux molécules filles d’ADN
qui doivent être les copies exactes de la molécule mère pour
conserver le patrimoine génétique.
Elle concerne les procaryotes et les eucaryotes.

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 Introduction
Intérêt
L’étude de la réplication a un double intérêt:

Fondamental: la réplication permet une conservation du patrimoine génétique et sa

transmission au sein d’une population, conservation de la spécificité d’espèces.

Les informations contenues dans l’ADN, en particulier la synthèse des protéines doivent
être rigoureusement conservée pour éviter une variabilité dans le métabolisme des
êtres vivants.

Médical: la connaissance de la réplication a permis de mettre au point la PCR qui est

une réplication in vitro, techniques aux multiples applications diagnostiques,
thérapeutiques et préventives. Elle a permis de mieux comprendre le mécanisme des
4
cancers.
 INTRODUCTION
Réplication: Duplication de l’ADN

Alberts et al, Biologie moléculaire

de la cellule, 6eme édition, 2017
5
I-1.Propriété semi-conservative

6
 I-1.Propriété semi-conservative
Cette propriété est issue de l’expérience de Meselson et Stahl, en 1958
sur l’ADN bactérien (E. coli)
On dit que la réplication est semi-conservative parce que sur les deux brins
de toute molécule d’ADN il y a toujours:
• Un brin ADN ancien provenant de l’ADN parental
• Un brin néoformé (ADN fils)

Chaque brin de l’ADN parental sert de modèle (matrice) pour synthétiser un

nouveau brin

Après la réplication et la mitose, chaque cellule fille hérite d’un brin parental et
un brin néoformé.
7
 I-2-Complémentarité de la réplication
La polymérisation se fait de 5’ vers 3’ sur le brin néoformé selon
l’appariement A-T et C-G
3’
5’

Nouveau
brin Matrice

• Complémentaire
• Antiparallèle
• 5’ vers 3’ (brin fils)

Incorporation d’un nucléotides

Alberts et al,
Biologie moléculaire de la cellule , 6eme édition 8
 I-2.Complémentarité de la réplication
• La condensation des nucléotides par l’ADN polymérase se fait dans
le sens 5’ vers 3’ sur le brin néoformé et en respectant la complémentarité
A-T et C-G.

• Les brins d’ADN parental servent de modèle pendant la réplication.

• La réplication se fait de manière complémentaire, antiparallèle et dans la

direction 5’ vers 3’.

• Le nouveau brin est complémentaire et antiparallèle au brin parental

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 I-3-Bidirectionnalité de la réplication

• La propagation de la réplication se fait dans les deux sens

Origine de Réplication: OriC

La symétrie représentée ici démontre que la réplication s’est effectuée de part et d’autre
de l’origine de réplication (ORIC).Cette propriété s’applique aux procaryotes et eucaryotes
10
 II-Principaux Acteurs
Pour se réaliser, la réplication a besoin:

ADN, modèle

Nucléotides

Nombreuses protéines (Topoisomérase, Hélicase, Primase, ADN

polymérase, protéines SSB...)

Mg2+

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II-1-ADN

Brin S

Brin S
Nouveau Brin S’

Nouveau Brin S
Brin S’

Brin S’ matrice
L’ADN sert de Modèle
pendant la réplication
Alberts et al,
Biologie moléculaire de la cellule , 6eme édition
12
 II-1-ADN

• Il faut un modèle pour créer une réplique.

• L’ADN est constitué de deux brins complémentaires. Chacun des deux

brins va servir de modèle et constitue «matrice» (template) pour la
synthèse d’un nouveau brin complémentaire.

• Ainsi, le brin d’ADN qui sert de modèle, sera conservé dans la nouvelle
molécule d’ADN: propriété semi-conservative

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 II-2.Nucléotides
• L’ ADN étant un polymère de nucléotides, la synthèse des nouveaux brins
nécessite des nucléotides, types désoxyribonucléosides triphosphates
• dATP
• dGTP
• dTTP
• dCTP
• Ces désoxyribonucléosides triphosphates apportent l’énergie et sont
incorporés sous forme monophosphatée (dAMP, dGMP, dCMP, dTMP)

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II-3.Protéines/Enzymes
Nombreuses protéines,
• Hélicases: ouverture des deux brins par clivage de liaisons hydrogènes

• Topoisomérases/gyrases: écarter et modifier l’état d’enroulement les deux

brins parentaux

• Primases: synthétiser les amorces

• RNAse H: élimination les amorces d’ARN

• Ligase: souder les fragments d’Okazaki

• Protéines SSB (single strand binding Proteins)

• ADN Polymérsases: condensation des nucléotides 15

II-3.Protéines/Enzymes

ADN Polymérases
• Elles utilisent comme substrats
• désoxyribonucléosides triphosphates (dATP, dCTP, dGTP et dTTP)
• amorces d’ARN synthétisées par une primase.

• Elles synthétisent l’ADN nouveau par fragments

• Elles ont aussi une activité exonucléasique 16

 II-3.Protéines/Enzymes

ADNs Polymérases, Procaryotes

• ADN POL I, Remplacement des amorces ARN et réparation de l’ADN

• ADN POL II, Réparation de l’ADN

• ADN POL III, Réplication de l’ADN

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 II-3.Protéines/Enzymes

ADNs Polymérases, eucaryotes

ADN POL α , allongement des amorces ARN

• ADN POL β, processus de réparation de l’ADN (BER)

• ADN POL γ, réplication et réparation de l’ADN mitochondrial

• ADN POL δ, Synthèse du brin discontinu (exonuclease 3’-5’,

NER,BER)

• ADN POL ε, Synthèse du brin continu (exonuclease 3’-5’, NER,BER)

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 II-3.Protéines/Enzymes de la réplication
Fonctions E. coli Eucaryote
ADN Hélicase Dna B Complexe MCM

Topoisomérase Gyrase , Topo I Topo I, Topo II

Protéines SSB SSB RPA

Primase DnaG ADN Polyméraseα/Primase
Synthèse brin précoce ADN pol III ADN pol ε
Synthèse brin tardif ADN pol III ADN Pol δ

Dégradation amorces Rnase H et ADN Pol I FEN I

Remplacements amorces ADN pol I ADN pol ε et δ

Ligature ADN ligase ADN ligase I

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II-4-ions Mg2+

• Activation des enzymes de la réplication

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 III-Mécanisme de la réplication

3 étapes sont communes:

 Initiation
 Elongation
 Terminaison

• La réplication de l’ADN présente des différences selon le modèle

procaryote ou eucaryote.

• Le mécanisme chez les procaryotes est plus étudié chez E coli.

21
 III-1. Mécanisme chez les procaryotes
 Initiation

22
 III-1. Mécanisme chez les procaryotes
 Initiation

• Il y a une seule origine de réplication (OriC). Ce site méthylé permet la fixation

de la protéine initiatrice DnaA sur l’OriC.
• Ensuite, recrutement d’un complexe initiateur:
• DNaB (hélicase)
• DNaC poseur d’hélicase
• D’une gyrase (déroule les brins)
• Protéine SSB (fixe le simple brin)

• Une fois le double brin séparé, il y aura 2 complexes initiateurs (1 chaque brin)

• La primase synthétise l’amorce ARN en 3’ du brin matrice et l’ADN polymérase

III peut débuter la réplication de l’ADN du chromosome bactérien, c’est-à-dire
l’élongation. 23
 III-1. Mécanisme chez les procaryotes
Elongation
• Extension du brin en 3’ # Brin continu, brin retardé

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 III-1. Mécanisme chez les procaryotes
Elongation

La réplication se fait:

• dans le sens 5’ vers 3’ ( ADN fils)
• de façon complémentaire ( A-T et C-G)
• selon un mode antiparallèle
• de manière bidirectionnelle
• Elle progresse à une vitesse de 1000 nucléotides/S de façon:
• continue pour un brin (direct) à partir de l’amorce ARN à l’extrémité 3’ et
l’élongation se fait dans le sens de la réplication
• discontinue pour l’autre brin par synthèse de fragments de 1000 à 2000
nucléotides à reculons (fragments de Okazaki).
• Cette synthèse discontinue est légèrement en retard par rapport à la
synthèse continue de l’autre brin, d’où les notions de brins «retardé» ou
«avancé» 25
 III-1. Mécanisme chez les procaryotes
Elongation Synthèse et Remplacement des amorces
Actions des enzymes (synthèse complète du nouveau brin d’ADN)

Edition de l’ADN

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 III-1. Mécanisme chez les procaryotes
Elongation
Synthèse et Remplacement des amorces
• Après la mise en place des complexes de réplication, la primase, (ARN Polymérase, DNaG)
synthétise les amorces ARN d’environ 10 nucléotides s’hybridant en 3’ matrice

• L’ADN polymérase III allonge le brin par condensation désoxyribonucléotides à partir de

l’amorce (synthétise de brin ADN fils)

• A la fin de la synthèse de l’ADN fils, les amorces ARN sont hydrolysées par la Rnase H et
l’activité 5’-3’ exonucléasique de l’ADN polymérase I

• L’ ADN polymérase I digère le reste de l’amorce et remplace l’amorce par de l’ADN

• Les fragments d’ADN contigus sont soudés par une ligase

• Les ADN polymérase I et III ont une propriété 3’-5’ exonucléasique et une fonction d’édition
en cas d’incorporation de nucléotide inapproprié (fidélité de la réplication)
27
 III-1. Mécanisme chez les procaryotes
Terminaison

Le chromosome bactérien est circulaire et

dispose:

• Origine de réplication, OriC

• Des sites de terminaison (Ter)
• Ter fixant la protéine TUS

28
 III-1. Mécanisme chez les procaryotes
Terminaison

La réplication se termine lorsque les deux fourches de réplication se rejoignent.

Le chromosome des bactéries est circulaire et la région d’arrêt est en face de l’origine

de réplication (OriC).

Il y a des sites de terminaison (Ter) qui servent de signaux pour l’arrêt de la réplication

Une protéine TUS (substance d’utilisation des terminateurs) se fixe sur les séquences

terminateurs et bloque l’hélicase DNaB et la fourche de réplication.

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 Résumé de la réplication procaryote
• Fixation de DnaA sur OriC
• Déroulement de la double hélice
• (Hélicase,DNaB),
• Gyrase
• protéines SSB
• Synthèse amorces ARN, Primase (DNaG)
• Primosome= helicase +primase
• Synthèse des brins fils ADN (ADN polymérase III)
• Hydrolyse Amorces ARN et remplacement par ADN
• RNaseH,
• ADN Pol I
• Edition (ADN Pol I et Pol III)
• Terminaison ( Ter et TUS) 30
 II-2. Synthèse de l’ADN Proviral

Concerne les rétrovirus

• Rétrotranscription
• Hydrolyse ARN
• Réplication de l’ADN simple brin en
double brin

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 III-3. Mécanisme chez les eucaryotes

• Des similitudes existent entre les mécanismes de réplication de l’ADN

chez les eucaryotes et les procaryotes.

• Des différences résultent de la complexité de la structure de l’ADN en

nucléosomes et chromatine

• La réplication constitue une partie du cycle cellulaire et est décomposée

en trois étapes identiques

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III-3. Mécanisme chez les eucaryotes

 Cycle cellulaire

La réplication se passe pendant la phase S (dédoublement ADN 4N)

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 III-3. Mécanisme chez les eucaryotes
Cycle cellulaire
• La réplication de l’ADN chez les eucaryotes est inclus dans le cycle
̈ et chaque gène est représenté en deux
• La phase G1 où le génome est diploide
exemplaires.

• La phase S où commence la réplication de l’ADN

• La phase G2 où chaque gène est représenté en quatre exemplaires (tétraploïdie).

• La mitose, qui donne naissance à deux cellules filles génétiquement identiques

(diploïdes). 34
 III-3. Mécanisme chez les eucaryotes
La réplication de l’ADN chez les eucaryotes est comparable à
celui des procaryotes.
Elle se fait de manière:
• Bidirectionnelle
• Complémentaire
• Antiparallèle
• Dans le sens 5’-3’
• Discontinue pour un brin et continue pour l’autre
• Nécessite des amorces ARN
 débute en plusieurs points initiation du même chromosome
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 III-3. Mécanisme chez les eucaryotes
Initiation
Cette réplication s’initie à partir de plusieurs origines de réplication

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 III-3. Mécanisme chez les eucaryotes
 Initiation

Recrutement des polymérases

Alberts et al, Biologie moléculaire de la cellule, 6eme édition Réplication pendant la cycle cellulaire 37
 III-3. Mécanisme chez les eucaryotes
 Initiation
• Formation d’un complexe pré-réplicatif (complexe de reconnaissance de
l’Origine (ORC)

• Recrutement de l’hélicase MCM (Complexe de maintenance du

minichromosome)

• Phosphorylation de l’hélicase et d’ORC permet le recrutement de la

machinerie de réplication (Primase, ADN polymérases, α, δ, ε ) pour la
synthèse de l’ADN

• En présence de désoxyribonucléotides, l’élongation peut commencer38

 III-3. Mécanisme chez les eucaryotes
Elongation

39
 III-3. Mécanisme chez les eucaryotes
Elongation
le processus est similaire cependant les acteurs sont différents:
• ADN polymérases
• ADN POL δ, Synthèse du brin discontinu
• ADN POL ε, Synthèse du brin continu

• autres protéines et enzymes

• Les molécules d’ADN fils contiennent un mélange aléatoire
d’histones parentales et d’histones néosynthétisées, formées à
l’arrière de la fourche .
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 III-3. Mécanisme chez les eucaryotes
Terminaison
Lors que les 2 complexes de réplication de chaque brin se rejoignent, les
fourches de réplication se détachent de l’ADN.

Le mécanisme de synthèse du brin retardé rencontre une difficulté quand

la fourche atteint la fin du chromosome linéaire: ce sont les télomères aux
extrémités.

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 III-3. Mécanisme chez les eucaryotes
 Réplication des Télomères
• La synthèse du brin avancé se déroule jusqu’au bout, tandis que le brin retardé
sera incomplet après l’élimination des amorces ARN
• Pour éviter le raccourcissement des extrémités télomériques, un mécanisme est
mis en place par les cellules eucaryotes.
• La télomérase est une enzyme ADN polymérase avec une amorce ARN
• L’extrémité 3’ du brin parental est allongé par synthèse d’ADN sur une matrice
ARN et cette phase peut être terminée par une ADN polymérase coventionnelle
• Cette activité télomérasique est présente chez les eucaryotes unicellulaires et
les cellules à prolifération rapide ( cellules embryonnaires et souches).
• Elle est absente dans les cellules différenciées où les télomères se
raccourcissent à chaque division cellulaire.
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 IV- APPLICATIONS

• La connaissance du mécanisme de réplication a permis de mettre au point la

Polymerase chain reaction (PCR) qui est une réplication in vitro.
• Cette technique a révolutionné les sciences du vivant en particulier la biologie
et la médecine humaine par ses multiples applications.

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 IV- APPLICATIONS

IV-1-Diagnostic
Diagnostic des maladies génétiques (Drépanocytose) par PCR

IV-2-Thérapeutique
Production de protéine recombinante par clonage après PCR
 Vaccinologie (Vaccin Hépatite B)
 Insuline

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 Conclusion
• La réplication est un processus complexe qui permet la conservation de l
information génétique à travers des générations et le renouvellement
cellulaire.

• Son étude a ouvert des perspectives importantes avec la mise au point

de la PCR qui est une réplication in vitro et présentant de nombreuses
applications biotechnologiques et médicales.

Elle a permis des avancées dans la recherche sur le cancer, le

vieillissement et la génétique des populations.
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 III-3. Mécanisme chez les eucaryotes
 Réplication des Télomères

Greider, Blackburn, 1989, Prix Nobel,2009

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