THÈSE

En vue de l’obtention du

Doctorat de l’Université de Toulouse

Délivré par : l’Université Toulouse III Paul Sabatier
Spécialité : Génie des Procédés et de l’Environnement

Présentée et soutenue par

William RICHARD
Le vendredi 08 novembre 2013

Titre

Nouvelle stratégie de fonctionnalisation de surfaces d'électrodes à base de sels

de diazonium : application aux capteurs à antioxydants

Ecole doctorale
Mécanique, Energétique, Génie civil et Procédés (MEGeP)

Unité de recherche
Laboratoire de Génie Chimique UMR 5503

Composition du jury
Directeurs de thèse Pierre GROS Professeur des Universités, Université Toulouse III
David EVRARD Maître de conférences, Université Toulouse III
Rapporteurs Fethi BEDIOUI Directeur de Recherche CNRS, ChimieParisTech
Benoît LIMOGES Directeur de Recherche CNRS, Université Paris VII
Examinateurs Frédéric LEMAITRE Maître de Conférences, Ecole Normale Supérieure
Nadine PEBERE Directrice de Recherche CNRS, ENSIACET
Membre invité Bertrand BUSSON Chargé de Recherche CNRS, Université Paris Sud
Je dédie cette thèse à ma moitié sans qui je ne serais pas rien.

Merci pour tout, Andréïna.

Merci de m’avoir appris que l’important dans la vie, ce n’est pas le temps que l’on met pour aller au
summum, mais le temps que l’on perd à devenir un homme.
Remerciements
 Remerciements

Les remerciements ont été, de mon point de vue, parmi les pages les plus difficiles à écrire dans ce
manuscrit. Parce que d’une part, ils clôturent plus de trois ans d’une expérience enrichissante d’un
point de vue humain et scientifique et constituent la transition vers un nouveau départ et de nouvelles
aventures. Et parce que, d’autre part, ils doivent représenter l’expression de ma gratitude envers les
personnes qui m’ont aidé de près ou de loin, chose loin d’être aisée quand on dit au revoir à une partie
marquante de sa vie.

Dans un premier temps, je souhaite remercier les membres du jury qui m’ont fait l’immense honneur
de se porter comme juges de mes travaux, un rôle qu’ils ont sans surprise tenu et qui a permis une
discussion scientifique très intéressante lors de la soutenance. Je tenais donc à remercier:
 Dr. Nadine PEBERE pour avoir présidé dans les règles de l’art le jury lors de la soutenance.
 Dr. Fethi BEDIOUI et Dr. Benoît LIMOGES pour leurs rôles de rapporteurs ainsi que pour
leurs critiques pertinentes.
 Dr Fréderic LEMAITRE pour son analyse experte et son élocution légendaire

Je profite de l’occasion pour remercier Dr. Bertrand BUSSON pour avoir accepté l’invitation au jury
et de manière générale, lui et son équipe (Dr. Christophe HUMBERT et Dr. Abderrahmane
TADJEDDINE plus particulièrement) pour leur accueil au sein du Laboratoire de Chimie Physique
d’Orsay et tout le travail qu’ils ont abattu avec plus ou moins de succès et de (mal)chance à l’aide de
la spectroscopie SFG-DFG. Ce fut un plaisir de travailler avec des gens ayant à la fois des grandes
qualités humaines et de larges compétences scientifiques.

Parce qu’une thèse sans d’excellents encadrants aurait été un supplice, je souhaiterais remercier Pierre
GROS et David EVRARD pour avoir mené ce travail. Ils y sont pour beaucoup si j’ai pris du plaisir à
venir au laboratoire tous les jours. Quand on a des directeurs compétents, intelligents et doté d’un
excellent état d’esprit, on ne peut que faire le maximum pour que sa thèse soit de qualité. Donc, merci
à eux d’avoir su m’aider à naviguer dans les eaux troubles de la science sans jamais lâcher prise, le
tout en distillant leur bonne humeur pour me galvaniser (normal pour des électrochimistes…). Avec ce
duo de choc à sa tête, l’équipe « Capteurs électrochimiques et Procédés » a de beaux jours devant elle.

Ensuite, mes remerciements s’adressent à la Team Roger (prononcé Rogeur) et les doctorants qui la
composent : Guillaume « Gag » GOTTI, mon compagnon de galère, avec qui j’ai commencé et fini la
thèse, Mickaël KERGOAT a.k.a. le Karl Lagerfeld du pauvre et Luca PUJOL, le « petit » nouveau
(2m02 quand même…) qui devra me rendre toutes les barres céréalières qu’il a gentiment et
unilatéralement empruntées. Merci à eux trois pour les moments de haut niveau intellectuel (…) que
ce soit au labo et en dehors.

Merci également à tous les membres ponctuels de l’équipe « Capteurs électrochimiques et Procédés »
qu’ils soient post-doctorants (notamment Teddy HEZARD, notre papa scientifique et son obsession
des sacs plastiques) ou stagiaires (Caroline, Clémence, Eugénie, Fanny et JC entre autres) pour les
bons moments passés dans la salle 123 et/ou 127.

Parce qu’il ne faut pas oublier d’où l’on vient, je remercie tous les doctorants que j’ai connus au
laboratoire. Qu’ils aient soutenu avant (Charlotte, Anne-Laure, Dancheng, Cyril, Jérôme…), qu’ils
soient de la même génération que moi (Bastien, Clélia, Magalie) ou qu’ils représentent les futurs
docteurs du labo (Joseph, Arthur, Alessio…), ce fut un réel plaisir de les côtoyer de manière plus ou
moins ponctuelle. Au terme de mon parcours universitaire (enfin !), j’ai une pensée pour mes
collègues de promotion, notamment ceux qui ont fait le choix comme moi d’opter pour une thèse avec
des fortunes diverses et variées : Alexandre, Mathieu, Stan et Raphaël.

Je tiens également à remercier l’ensemble du personnel permanent du laboratoire (professeurs, maîtres

de conférences, ingénieurs et techniciens) pour leur accueil et leur bonne humeur.

J’en profite également pour remercier ma famille qui m’a toujours encouragé dans mes choix
universitaires. Je remercie également aux amis du lycée (toujours là plus de 8 ans après) et les
McPotes (Palapapapaaaa c’est tout qu’on aime) qui m’ont fait chaud au cœur en se déplaçant pour ma
soutenance ou en y étant mentalement.

J’ai gardé le meilleur pour la fin. Ces quelques lignes sont pour Andréïna, à la fois ma force et ma
faiblesse. Je souhaite te remercier pour son soutien indéfectible tout au long de la thèse (et notamment
pendant la rédaction), soutien qui avait commencé bien avant ces trois années. Merci aussi pour ton
abnégation et ton don de soi, des qualités très rares de nos jours et qui font de toi une superbe
personne. Même s’il est loin de ton domaine de compétences (bien loin même…), je te dédie ce
manuscrit qui, je l’espère, constitue l’un des premiers rayons de l’avenir brillant que nous allons
désormais construire ensemble.
Avant-propos
 Avant-propos

Les travaux de cette thèse ont été réalisés au sein de l’équipe « Capteurs électrochimiques et
Procédés » du Laboratoire de Génie Chimique UMR 5503, dans le cadre d’une bourse ministérielle.

Ces travaux ont donné lieu aux publications et communications suivantes :

Publication

 William RICHARD, David EVRARD et Pierre GROS, “New insight into 4-nitrobenzene
diazonium reduction process : Evidence for a grafting step distinct from NO2 electrochemical
reactivity”. Journal of Electroanalytical Chemistry, Vol. 685, 2012, p. 109.

Communications orales

 William RICHARD, David EVRARD et Pierre GROS. “Co-electrodeposition of PEDOT and

thiophenylbenzene diazonium: En route towards improved lifetime and reliability of an
antioxidative compounds sensor. 64th ISE Annual Meeting, Santiago de Queretaro (Mexique)
8-13 septembre 2013

 William RICHARD, David EVRARD et Pierre GROS. “Electrodeposited 4-nitrobenzene

diazonium as a powerful tool for the fine tuning of surface properties”. 13th ISE Topical
Meeting, Pretoria (Afrique du Sud) 7-10 avril 2013.

 William RICHARD, David EVRARD et Pierre GROS. “4-nitrobenzene diazonium

electrochemical reduction mechanism: Does grafting process occur separately from NO2
reduction?” XVIIèmes Rencontres Transfrontalières Capteurs et Biocapteurs, Tarragona
(Espagne) 20-21 septembre 2012.

 William RICHARD, David EVRARD et Pierre GROS. “Surface grafting by 4-nitrophenyl

diazonium. Effect of functional groups redox state on the electrochemical properties”.
XVIèmes Rencontres Transfrontalières Capteurs et Biocapteurs, Toulouse 29-30 septembre
2011.
Communications par affiche

 William RICHARD, David EVRARD, Bertrand BUSSON, Christophe HUMBERT,

Abderrahmane TADJEDDINE et Pierre GROS. “Identification of the three-step reduction
mechanism of 4-nitrobenzene diazonium by electrochemistry and spectroscopies”. 64th ISE
Annual Meeting, Santiago de Queretaro (Mexique) 8-13 septembre 2013.

 William RICHARD, David EVRARD et Pierre GROS. “Formation d’un film de PEDOT
initié par un greffage de thiophénylbenzène diazonium pour l’élaboration d’un capteur à
molécules antioxydantes”. Journées d’Electrochimie, Paris 8-12 juillet 2013.

 William RICHARD, David EVRARD et Pierre GROS. “Elucidation of the 4-nitrobenzene

diazonium whole electrochemical reduction mechanism”. Echems 8th, Bertinoro (Italie), 28
juin - 1er juillet 2012.

 William RICHARD, David EVRARD et Pierre GROS. “Fonctionnalisation d’électrode par le

4-nitrobenzène diazonium. Influence de l’état redox du groupement fonctionnel sur les
propriétés électrochimiques”. Journées d’Electrochimie, Grenoble 4-8 juillet 2011.
Introduction
générale
 Introduction générale
__________________________________________________________________________________

Introduction générale

De nos jours, le terme d’antioxydants est de plus en plus usité pour vanter les bienfaits de

nombreux produits alimentaires, pharmaceutiques et cosmétiques. Yaourts, compléments alimentaires

et crèmes anti-âge pour la peau se targuent ainsi de propriétés antioxydantes censées conférer moult

bénéfices au consommateur devenu acteur de sa santé. Pour mieux comprendre ce nouvel attrait

commercial pour ces molécules réductrices dont l’efficacité est sujette à caution, il est nécessaire de se

tourner vers une étape-clé de la recherche biomédicale.

La course au renforcement de l’efficacité des traitements médicaux antioxydants a pris un

tournant décisif dans les années 1960. C’est à cette période qu’a été réellement prise en considération

l’hypothèse de D. Harman, publiée dès 1956 dans le Journal of Gerontology, qui postulait que la

dégradation des constituants cellulaires était due à l’action de radicaux libres et d’espèces oxydantes

générés au sein de notre organisme. Cette théorie, liée au désormais célèbre « paradoxe de

l’oxygène », a dès lors entraîné un engouement pour le développement de nombreux protocoles,

thérapies et régimes alimentaires visant à maintenir l’équilibre métabolique entre oxydants d’une part

et molécules antioxydantes nutritionnelles ou endogènes d’autre part, toute rupture de cet équilibre

donnant naissance à une situation où les composants cellulaires sont détériorés par les attaques

radicalaires et oxydantes. Ce processus biologique, dénommé « stress oxydant », est aujourd’hui

reconnu comme principal précurseur de nombreuses pathologies telles que les cancers, le diabète, les

maladies cardiovasculaires et neurodégénératrices et bien d’autres encore.

Dans un souci constant d’amélioration de la qualité de vie, il apparaît d’un intérêt majeur

d’être en mesure de détecter et doser les espèces oxydantes et antioxydantes présentes dans

l’organisme, non seulement pour mieux prévenir les situations de stress oxydant mais également pour

comprendre le mécanisme des pathologies qui en découlent. La médecine a donc besoin de méthodes

analytiques fiables et simples d’utilisation pour parvenir à répondre à ces enjeux majeurs en termes de

17
 Introduction générale
__________________________________________________________________________________

santé publique. A l’heure actuelle, la détection des molécules antioxydantes et des radicaux libres

passe par des appareillages souvent onéreux, volumineux et complexes, tels que les chromatographies

ou les spectrométries. Outre le fait qu’elles nécessitent une main-d’œuvre qualifiée, ces analyses

exigent des phases préalables de préparation d’échantillon incluant souvent des étapes de biopsie, de

séparation et de purification. Les résultats sont par conséquent différés dans le temps, ce qui condamne

toute analyse en temps réel et toute étude dynamique des processus biologiques.

Comparativement, l’électrochimie apparaît comme une solution alternative crédible pour

proposer des méthodes de mesures bien moins coûteuses alliant simplicité, rapidité, sensibilité et

spécificité. Dans le domaine de l’analyse en biologie clinique, les capteurs électrochimiques ont reçu

un intérêt grandissant depuis la deuxième moitié du vingtième siècle. Bien que l’adaptation à une

échelle industrielle reste limitée à quelques exemples particuliers, tels que les capteurs à glucose ou les

sondes lambda, la quête de l’amélioration de leurs performances analytiques, notamment leur

sélectivité et leur sensibilité, est toujours d’actualité. Le renforcement des normes de sécurité, la

recherche de diagnostics toujours plus précoces, le souci d’une meilleure traçabilité des procédés

industriels et l’évolution des mentalités des citoyens exigent des mesures de plus en plus précises et

fiables de concentrations de plus en plus faibles, voire à l’état de trace. Pour répondre à cette

problématique qui bien souvent tient du défi, l’élaboration de capteurs tire profit d’une large panoplie

de fonctionnalisations de surface d’électrodes qui leur confèrent de nouvelles propriétés. Depuis plus

de dix ans, l’équipe « Capteurs Electrochimiques et Procédés » du Laboratoire de Génie Chimique

s’est inscrite dans cette dynamique de recherche pour parvenir aux meilleurs résultats dans la détection

et le dosage d’antioxydants dans des milieux biologiques complexes (peau, sang, urine, actifs

pharmaceutiques).

Savoir d’où l’on vient, c’est comprendre où l’on va. Les travaux de cette thèse s’inscrivent

dans un projet de longue haleine dédié à l’élaboration de capteurs électrochimiques à antioxydants.

Les derniers travaux réalisés au laboratoire se sont attachés à mettre au point le dosage de deux

antioxydants hydrophiles majeurs que sont l’acide urique et l’acide ascorbique. Leur détection

simultanée dans un même échantillon est impossible sur matériau massif du fait de leurs potentiels

18
 Introduction générale
__________________________________________________________________________________

d’oxydation très proches. Ce manque de sélectivité constitue un obstacle réel dans l’analyse de

milieux biologiques complexes, où l’acide ascorbique et l’acide urique coexistent. Pour répondre à

cette problématique, la fonctionnalisation d’électrode d’or par un polymère organique conducteur, le

poly[3,4-éthylènedioxythiophène] (PEDOT) a permis de réaliser des mesures sélectives et sensibles.

Le capteur ainsi conçu a été éprouvé dans les conditions physiologiques où il a fourni des résultats en

tout point équivalent à ceux obtenus avec les méthodes analytiques de référence, i.e. chromatographie

liquide à hautes performances et dosage enzymatique. Le principe du capteur a également été transféré

avec succès sur des substrats silicium par des procédés de fabrication collective en microtechnologie,

première étape vers une production industrielle. En revanche, aucune étude de fiabilité n’a été menée

jusqu’alors.

Dans la continuité des recherches menées dans l’équipe, le travail détaillé dans ce manuscrit a

pour ambition de consolider le procédé analytique sur trois aspects : d’une part, remplacer le matériau

d’électrode en or utilisé jusqu’à présent par un substrat moins onéreux, à base de carbone. D’autre

part, élargir la palette des procédures de fonctionnalisation de l’interface électrochimique en utilisant

des sels de diazonium, une méthode en plein essor et porteuse de promesses. Enfin, élaborer un

capteur affichant des performances analytiques comparables à celles obtenues dans les travaux

précédents, et qui présente en outre une stabilité opérationnelle et au stockage lui octroyant une plus

grande fiabilité sur les moyens et long termes.

Trois chapitres composent le corps de ce manuscrit :

Le premier chapitre expose le processus biologique du stress oxydant. Il en précise les acteurs

majeurs et leurs rôles respectifs : les molécules pro-oxydantes d’un côté et les espèces antioxydantes

de l’autre. Un intérêt particulier est porté sur les acides ascorbique et urique, deux antioxydants

hydrophiles présents en plus grande concentration dans l’organisme. Le chapitre se poursuit par

l’examen des effets du stress oxydant aux échelles cellulaire et humaine et se clôture par une

présentation succincte des méthodes d’évaluation des attaques oxydantes et de détection des

antioxydants.

19
 Introduction générale
__________________________________________________________________________________

Le deuxième chapitre traite de la modification de surface d’électrode par les sels de

diazonium. A l’appui d’éléments bibliographiques, une première partie détaille le principe de ce mode

de fonctionnalisation et ses champs d’application. L’accent est mis sur le nitrobenzène diazonium, un

composé largement utilisé grâce à son groupement nitro électroactif et la possibilité de réduire

électrochimiquement les fonctions de la couche déposée une fois le greffage effectué. La deuxième

partie présente pas à pas une étude méthodique visant à lever les zones d’ombre du mécanisme

d’électrodépôt du diazonium. Elle est complétée d’une approche cinétique permettant de comprendre

les modulations des propriétés de surface.

Le troisième et dernier chapitre de ce manuscrit est consacré à l’élaboration de capteurs pour

le dosage simultané de l’acide ascorbique et de l’acide urique. Deux stratégies de fonctionnalisation

impliquant des sels de diazonium sont retenues. La première utilise le film de nitrobenzène diazonium

introduit dans le chapitre II et exploite la modulation électrochimiquement assistée des propriétés

redox des fonctions nitro greffées. La seconde stratégie met en jeu une fonctionnalisation mixte

diazonium-PEDOT ; elle bénéficie de la stabilité et de la polyvalence du thiophénylbenzène diazonium

combinées aux propriétés électrocatalytiques du PEDOT. Les performances analytiques, les

caractéristiques métrologiques et la stabilité opérationnelle et au stockage du capteur ainsi conçu sont

déterminées expérimentalement et comparées à celles résultant du protocole de fonctionnalisation par

le seul film de PEDOT.

20
Sommaire
 Sommaire
__________________________________________________________________________________

Sommaire

Chapitre I :
Le stress oxydant

A. Radicaux libres et stress oxydant ________________________________________ 33

I. Définition et origine ________________________________________________________ 33

II. Qu'est-ce qu'une espèce réactive de l’oxygène ? _______________________________ 34

III. D’où proviennent les espèces réactives de l’oxygène ? __________________________ 34

a. Apport endogène ________________________________________________________________ 34
b. Apport exogène _________________________________________________________________ 35

IV. Quel est le rôle physiologique des espèces réactives de l’oxygène ? _______________ 37

V. Autres molécules favorisant le stress oxydant __________________________________ 38

B. Présentation du système antioxydant _____________________________________ 39

I. Comment agissent les antioxydants ? _________________________________________ 40

II. Présentation des principaux antioxydants ___________________________________ 40

a. Les antioxydants exogènes ________________________________________________________ 40
1. Les caroténoïdes et la vitamine A _________________________________________________ 40
2. La vitamine E ________________________________________________________________ 42
3. Les polyphénols ______________________________________________________________ 43
4. Le glutathion _________________________________________________________________ 43
5. Autres antioxydants exogènes. ___________________________________________________ 46
b. Cas particulier d’un antioxydant exogène : l’acide ascorbique _____________________________ 46
1. Présentation __________________________________________________________________ 46
2. Action dans l’organisme ________________________________________________________ 47
3. L’acide ascorbique dans le domaine de la santé ______________________________________ 48
4. Acide ascorbique et stress oxydant ________________________________________________ 49
c. Les antioxydants endogènes _______________________________________________________ 50
1. La superoxyde dismutase _______________________________________________________ 50
2. La catalase ___________________________________________________________________ 51
3. La glutathion peroxydase _______________________________________________________ 52
4. La glutathion réductase _________________________________________________________ 53

23
 Sommaire
__________________________________________________________________________________

5. La bilirubine _________________________________________________________________ 54
6. Les œstrogènes _______________________________________________________________ 54
7. Le coenzyme Q _______________________________________________________________ 55
8. Les mélanines ________________________________________________________________ 56
9. La mélatonine ________________________________________________________________ 58
10. L’acide lipoïque ______________________________________________________________ 58
d. Cas particulier d’un antioxydant endogène : l’acide urique________________________________ 59
1. Présentation __________________________________________________________________ 59
2. Action dans l’organisme ________________________________________________________ 59
3. L’acide urique dans le domaine de la santé __________________________________________ 60
4. Acide urique et stress oxydant ____________________________________________________ 60
e. Quels autres systèmes métaboliques antioxydants existe-t-il ? _____________________________ 61

C. Le stress oxydant et ses conséquences ____________________________________ 61

I. Le stress oxydant à l’échelle cellulaire_________________________________________ 61

II. Implication dans de nombreuses pathologies _________________________________ 62

III. Méthodes d’évaluation du stress oxydant ____________________________________ 64

a. Mesurer la concentration en radicaux libres. ___________________________________________ 64
b. Mesurer les marqueurs des produits d’oxydation des composants cellulaires. _________________ 65
c. Mesurer la concentration en antioxydants. ____________________________________________ 66

IV. Quelles conclusions tirer et comment lutter contre le stress oxydant ? ____________ 68

D. Quelle est la place du sujet de thèse dans ce contexte ? ______________________ 70

E. Références bibliographiques ____________________________________________ 71

Chapitre II :
Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface

A. Présentation générale ___________________________________________________ 85

I. Historique ________________________________________________________________ 85

II. Principe de modification par un sel de diazonium _____________________________ 86

III. Avantages et inconvénients ________________________________________________ 88

IV. Synthèse de diazonium ___________________________________________________ 90

a. Génération in situ_______________________________________________________________ 90
b. Génération ex situ ______________________________________________________________ 91

24
 Sommaire
__________________________________________________________________________________

V. Réduction électrochimique du diazonium ______________________________________ 92

VI. Caractérisation de surface ________________________________________________ 94

VII. Applications ____________________________________________________________ 96

B. Approche de la fonctionnalisation de substrat par le nitrobenzène diazonium ____ 98

I. Pourquoi ce choix de diazonium ? ____________________________________________ 98

II. Applications du nitrobenzène diazonium ___________________________________ 100

III. Réactivité électrochimique du nitrobenzène diazonium _______________________ 101

IV. Incertitudes autour du mécanisme réactionnel_______________________________ 103

C. Produits chimiques et solutions ________________________________________ 107

I. Produits chimiques _______________________________________________________ 107

II. Préparation des solutions ________________________________________________ 108

D. Appareillage et méthodes _____________________________________________ 109

I. Appareillage _____________________________________________________________ 109

II. Méthodes _____________________________________________________________ 109

a. Polissage des électrodes _________________________________________________________ 109
b. Détermination de la surface active ________________________________________________ 109

E. Etude mécanistique de la réduction du nitrobenzène diazonium ______________ 112

I. Différenciation entre greffage et hydroxylamination ____________________________ 115

a. Influence de l’état de surface du carbone vitreux et du solvant ________________________ 115
b. Influence du potentiel de greffage ________________________________________________ 117
c. Caractérisation par spectrométrie photoélectronique X ______________________________ 127
d. Greffage et hydroxylamination : deux processus distincts _____________________________ 128

II. Etude du phénomène conjoint d’hydroxylamination et d’amination _______________ 129

a. Mise en place du protocole opératoire _____________________________________________ 129
b. Etude dynamique de l’hydroxylamination _________________________________________ 131
c. Etude dynamique de l’amination _________________________________________________ 132
d. Influence de l’épaisseur de la couche organique _____________________________________ 136

III. Proposition de mécanisme réactionnel de réduction __________________________ 140

IV. Etude cinétique ________________________________________________________ 143

a. Choix des électrodes et des sondes électrochimiques _________________________________ 143
1. Électrodes __________________________________________________________________ 143
2. Sondes électrochimiques ______________________________________________________ 145

25
 Sommaire
__________________________________________________________________________________

b. Etude qualitative ______________________________________________________________ 146

1. Hexacyanoferrate (III) ________________________________________________________ 146
2. Hexaamine ruthénium ________________________________________________________ 148
3. Ferrocène méthanol __________________________________________________________ 149
4. Analyse des phénomènes observés _______________________________________________ 150
c. Etude quantitative _____________________________________________________________ 151
1. Détermination du coefficient de transfert électronique ______________________________ 151
(i) Méthode de Tafel corrigée ___________________________________________________ 152
(ii) Méthode de Koutecky-Levich ________________________________________________ 154
2. Hexacyanoferrate(III) ________________________________________________________ 157
3. Hexaamine ruthénium ________________________________________________________ 161
4. Ferrocène méthanol __________________________________________________________ 163
d. Effet de la couche organique _____________________________________________________ 164
e. Effet du pH ___________________________________________________________________ 167
f. Bilan de l’étude cinétique _______________________________________________________ 170

V. Apport de l’étude cinétique dans l’élucidation du mécanisme ____________________ 170

F. Références bibliographiques ___________________________________________ 172

Chapitre III :
Elaboration de capteurs pour le dosage d'antioxydants

A. Pourquoi modifier les surfaces d’électrodes ? _______________________________ 187

I. Objectifs de la modification de surface _______________________________________ 187

II. Dosage simultané des acides ascorbique et urique ______________________________ 188

III. Exemples de fonctionnalisations __________________________________________ 189

IV. Utilisation des diazoniums pour l’évaluation du stress oxydant _________________ 189

B. Produits chimiques et appareillage _______________________________________ 190

I. Produits chimiques _______________________________________________________ 190

II. Appareillage _____________________________________________________________ 191

C. Films de nitrobenzène diazonium pour la détection de marqueurs du stress oxydant 192

I. Influence de la fonction du film _____________________________________________ 192

II. Utilisation du couple NO/NHOH ____________________________________________ 194

26
 Sommaire
__________________________________________________________________________________

a. Détection de l’acide urique ______________________________________________________ 194

b. Détection de l’acide ascorbique __________________________________________________ 196
1. Mise en évidence de la réduction irréversible de la fonction NO _______________________ 196
2. Elaboration d’un capteur basé sur le couple NO/NHOH _____________________________ 198

III. Bilan : nitrobenzène diazonium et antioxydants _____________________________ 203

D. Polymères conducteurs et poly[3,4-éthylènedioxythiophène] ___________________ 203

I. Avantages des polymères conducteurs _______________________________________ 204

II. Présentation du poly[3,4-éthylènedioxythiophène] _____________________________ 204

a. Historique et applications _______________________________________________________ 204
b. Electropolymérisation __________________________________________________________ 205
c. Stabilité ______________________________________________________________________ 207

III. Poly[3,4-éthylènedioxythiophène] et capteur à acides ascorbique et urique _______ 207

a. Effet électrocatalytique _________________________________________________________ 207
b. Synthèse des travaux antérieurs de l’équipe ________________________________________ 208

E. Fonctionnalisation mixte diazonium-polymère ______________________________ 211

I. Stratégie et principe ______________________________________________________ 211

II. Greffage du thiophénylbenzènediazonium ____________________________________ 212

a. Synthèse du diazonium _________________________________________________________ 212
b. Modification par le thiophénylbenzènediazonium ___________________________________ 212

III. Electropolymérisation du poly[3,4-éthylènedioxythiophène] ___________________ 214

IV. Détermination des méthodes électrochimiques optimales de dépôts _____________ 217

a. Mode opératoire_______________________________________________________________ 217
b. Influence du mode de dépôt du poly[3,4-éthylènedioxythiophène] ______________________ 219
1. Polymérisation sans précurseur thiophène ________________________________________ 219
2. Polymérisation avec des précurseurs thiophène ____________________________________ 222
(i) Thiophénylbenzène diazonium greffé par voltammétrie cyclique _____________________ 222
(ii) Thiophénylbenzène diazonium greffé par électrolyse à potentiel constant ____________ 224
(iii) Thiophénylbenzène diazonium greffé par électrolyse à courant constant _____________ 226
c. Bilan ________________________________________________________________________ 229

V. Influence des densités de charge des dépôts ___________________________________ 229

a. Influence de la charge d’électropolymérisation du poly[3,4-éthylènedioxythiophène] ______ 229
b. Influence de la charge de greffage de diazonium ____________________________________ 231

VI. Utilisation de la microscopie électrochimique à balayage ______________________ 233

a. Origine de la microscopie électrochimique à balayage ________________________________ 233
b. Principe de fonctionnement _____________________________________________________ 233

27
 Sommaire
__________________________________________________________________________________

c. Comment utiliser la microscopie électrochimique à balayage ? ________________________ 234

d. Applications de la microscopie électrochimique à balayage ___________________________ 236
e. Etude de la fonctionnalisation mixte ______________________________________________ 236
1. Mode opératoire _____________________________________________________________ 236
2. Analyse de la couche organique diazonium-polymère _______________________________ 238

VII. Utilisation du capteur fonctionnalisé _______________________________________ 242

a. Dosage séparé des acides ascorbique et urique ______________________________________ 242
b. Dosage simultané des acides ascorbique et urique ___________________________________ 246
c. Etude de la stabilité ____________________________________________________________ 247
1. Stabilité au stockage __________________________________________________________ 247
2. Stabilité opérationnelle ________________________________________________________ 249
d. Comparaison des performances analytiques ________________________________________ 250
e. Essais en milieu biologique réel __________________________________________________ 251

F. Bilan et perspectives du capteur __________________________________________ 253

G. Références bibliographiques ___________________________________________ 255

Abrévitaions et symboles

Abréviations _____________________________________________________________ 269

Constantes _______________________________________________________________ 273
Symboles ________________________________________________________________ 273

28
 Chapitre I :
Le stress oxydant
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

Chapitre I : Le stress oxydant

A. Radicaux libres et stress oxydant ________________________________________ 33

I. Définition et origine ________________________________________________________ 33

II. Qu'est-ce qu'une espèce réactive de l’oxygène ? _______________________________ 34

III. D’où proviennent les espèces réactives de l’oxygène ? __________________________ 34

a. Apport endogène ________________________________________________________________ 34
b. Apport exogène _________________________________________________________________ 35

IV. Quel est le rôle physiologique des espèces réactives de l’oxygène ? _______________ 37

V. Autres molécules favorisant le stress oxydant __________________________________ 38

B. Présentation du système antioxydant _____________________________________ 39

I. Comment agissent les antioxydants ? _________________________________________ 40

II. Présentation des principaux antioxydants ___________________________________ 40

a. Les antioxydants exogènes ________________________________________________________ 40
1. Les caroténoïdes et la vitamine A _________________________________________________ 40
2. La vitamine E ________________________________________________________________ 42
3. Les polyphénols ______________________________________________________________ 43
4. Le glutathion _________________________________________________________________ 43
5. Autres antioxydants exogènes. ___________________________________________________ 46
b. Cas particulier d’un antioxydant exogène : l’acide ascorbique _____________________________ 46
1. Présentation __________________________________________________________________ 46
2. Action dans l’organisme ________________________________________________________ 47
3. L’acide ascorbique dans le domaine de la santé ______________________________________ 48
4. Acide ascorbique et stress oxydant ________________________________________________ 49
c. Les antioxydants endogènes _______________________________________________________ 50
1. La superoxyde dismutase _______________________________________________________ 50
2. La catalase ___________________________________________________________________ 51
3. La glutathion peroxydase _______________________________________________________ 52
4. La glutathion réductase _________________________________________________________ 53
5. La bilirubine _________________________________________________________________ 54
6. Les œstrogènes _______________________________________________________________ 54
7. Le coenzyme Q _______________________________________________________________ 55
8. Les mélanines ________________________________________________________________ 56
9. La mélatonine ________________________________________________________________ 58
10. L’acide lipoïque ______________________________________________________________ 58

31
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

d. Cas particulier d’un antioxydant endogène : l’acide urique________________________________ 59

1. Présentation __________________________________________________________________ 59
2. Action dans l’organisme ________________________________________________________ 59
3. L’acide urique dans le domaine de la santé __________________________________________ 60
4. Acide urique et stress oxydant ____________________________________________________ 60
e. Quels autres systèmes métaboliques antioxydants existe-t-il ? _____________________________ 61

C. Le stress oxydant et ses conséquences ____________________________________ 61

I. Le stress oxydant à l’échelle cellulaire_________________________________________ 61

II. Implication dans de nombreuses pathologies _________________________________ 62

III. Méthodes d’évaluation du stress oxydant ____________________________________ 64

a. Mesurer la concentration en radicaux libres. ___________________________________________ 64
b. Mesurer les marqueurs des produits d’oxydation des composants cellulaires. _________________ 65
c. Mesurer la concentration en antioxydants. ____________________________________________ 66

IV. Quelles conclusions tirer et comment lutter contre le stress oxydant ? ____________ 68

D. Quelle est la place du sujet de thèse dans ce contexte ? ______________________ 70

E. Références bibliographiques ____________________________________________ 71

32
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

A. Radicaux libres et stress oxydant

I. Définition et origine

C’est en 1956 que le stress oxydant est évoqué pour la première fois quand le chercheur américain

Denham Harman émet l’hypothèse que le vieillissement peut être accéléré par une accumulation de

dommages cellulaires et moléculaires provoqués par les espèces réactives de l’oxygène

(ROS : Reactive Oxygen Species)[1, 2]. Par la suite, la notion de stress oxydant devient plus globale[3] et

peut désormais être définie comme un déséquilibre local entre ROS et défenses antioxydantes, ayant

pour conséquence la dégradation de composants cellulaires (lipides, protéines, glucides, ADN)[4].

Le stress oxydant est une des conséquences du paradoxe de l’oxygène[5]. En effet, il est indispensable

au fonctionnement de notre organisme mais est aussi la première cause de stress oxydant.

Dans toutes les cellules du corps humain se trouvent les mitochondries, un composant cellulaire (ou

organite) dont le rôle physiologique primordial est de produire l’énergie indispensable au métabolisme

cellulaire.

Lors de la respiration mitochondriale, l’oxygène est réduit en eau selon la réaction I.1 :

Réaction I.1 O2 + 4 H+ + 4 e- → 2 H2O

Cependant, une réduction incomplète du dioxygène entraîne la génération de molécules très réactives,

les espèces réactives de l’oxygène. Les ROS regroupent tous les radicaux libres dérivés de O 2 ainsi

que quelques composés non radicalaires ayant des propriétés fortement oxydantes. De par leur forte

réactivité et bien que certaines ROS soient nécessaires au fonctionnement métabolique, ces molécules

oxydantes sont à même de détériorer certains composants de la cellule et de l’endommager.

33
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

II. Qu'est-ce qu'une espèce réactive de l’oxygène ?

Parmi les ROS, on dénombre une majorité de radicaux libres. Un radical libre est une espèce chimique

oxydante possédant un électron célibataire, ce qui la rend très fortement réactive. Cette réactivité est

cependant variable suivant la nature du radical et des biomolécules qui en sont la cible. Généralement,

sa durée de vie est extrêmement courte (de l’ordre de la milliseconde voire de la nanoseconde)[6].

Plus récemment, en 2001, les espèces réactives de l’azote (RNS : Reactive Nitrogen Species) ont été

définies comme un sous-groupe d’oxydants[7]. Ceci a amené certains auteurs à parler de RONS

(RONS : Reactive Oxygen and Nitrogen Species) pour englober l’ensemble des espèces réactives

oxydantes, radicalaires ou non.

III. D’où proviennent les espèces réactives de l’oxygène ?

a. Apport endogène

La réaction de réduction de l’oxygène dans la chaîne respiratoire mitochondriale (où 85% de

l’oxygène est métabolisé) s’effectue selon le mécanisme réactionnel suivant [8] :

Réaction I.2 O2 + e- → O2•-

Réaction I.3 O2•- + 2 H+ + e- → H2O2

Réaction I.4 H2O2 + e- → •OH + OH-

•
Réaction I.5 OH + H+ + e- → H2O

Au cours de ce mécanisme, sont libérées deux formes de radicaux libres (réactions I.2 et I.4) : le

radical anion superoxyde O2•- et le radical hydroxyle •OH. Lors du cycle respiratoire, les réactions ont

une cinétique très lente et se font majoritairement en régime d’activation d’où la conversion de 2 à 5 %

34
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

d’oxygène en ROS[9, 10]

. Différents systèmes enzymatiques présents dans les cellules de notre

organisme comme la SOD, la XO et la NOs produisent en permanence des ROS.

D’autres cellules produisent des ROS telles que les neurones, les cellules endothéliales ou les cellules

du système immunitaire, qui utilisent le peroxyde d’hydrogène comme armes létales contre les

bactéries. Des radicaux libres sont également produits au cours de réactions biochimiques [10] telles que

l’oxydation de la dopamine, l’adrénaline ou l’hydroquinone, dont l’un des produits de réaction est le

radical anion superoxyde O2•-.

Le peroxysome, autre organite cellulaire intervenant dans la détoxification du foie et du rein, est aussi

une source importante de H2O2 du fait des nombreuses réactions enzymatiques qui s’y produisent. Il se

dismute normalement au niveau local par l’action de la catalase mais une faible partie peut s’échapper

et atteindre d’autres parties de la cellule[11].

Des carences ou des excès d’ions métalliques ou des ischémies (diminution de l’apport sanguin artériel

à un organe) sont également sources d’espèces pro-oxydantes. Une anomalie génétique aboutissant à

un mauvais codage protéinique peut de même accroître la production de radicaux libres[12].

Le tableau I.1 dénombre les principales RONS, issues de la respiration mitochondriale et de la réaction

de ces radicaux avec des entités biochimiques cellulaires (représentées par R) [13].

b. Apport exogène

L’environnement dans lequel nous vivons tout comme notre mode de vie sont à l’origine d’une

augmentation de la production de ROS dans notre organisme et sont générateurs du stress oxydant.

Nous pouvons citer[5-7, 9, 14] :

 L’exposition aux rayons UV, aux ultrasons, aux micro-ondes et à des champs magnétiques.

 L’exposition aux métaux lourds.

 Le contact avec des agents cancérigènes.

35
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

Potentiels standards et Principaux effets

Formule Nom Formation Commentaires
couples redox[15] délétères
Oxydation de :
2% de l’oxygène réduit lors Durée de vie ≈ 10 s
SOD*
•- de la respiration Peu réactif vis-à-vis des molécules biologiques[16]
Radical anion E° O2 /H2O2 = 0,93 V Cytochrome C**
O2•- mitochondriale Précurseur de •OH via la réaction d’Haber-Weiss
superoxyde E° O2/O2•-= -0,33V Acide ascorbique
Réaction avec O2 catalysée (réaction I.8)
Fe3+
par la NOX* ou la XO* Forme du ONOO- en réagissant avec NO•
Glucides
Forme protonée de O2•- (pKa
HO2• Radical perhydroxyle E° HO2•/H2O2 = 1,48 V Oxydation des lipides Sa dismutation forme du H2O2
HO2•/O2•- = 4,8)
Dégradation des
E° O2/H2O2 = 0,3V protéines
Précurseur de •OH et de HOCl
E° O2•-/H2O2 = 0,93 V Dismutation de O2•- sous Libération de fer
Soluble dans l’eau, il pénètre facilement dans la
H2O2 Peroxyde d’hydrogène E° HO2•/H2O2 = 1,48 V l’action de la SOD* Inactivation d’enzymes
cellule
E° H2O2/•OH = 0,3 V Réduction électronique de O2 Oxydation d’ADN, de
Dangereux même à faible concentration
E° H2O2/H2O = 1,32 V lipides ou de thiols
Oxydation des glucides
Oxydation de :
Réaction de Fenton (réaction
Hémoglobine**
• I.6)
• E° H2O2/ OH = 0,3 V Cystéine*** Courte durée de vie ≈ 1ns
OH Radical hydroxyle Réaction de Haber-Weiss
E° •OH/H2O = 2,34 V Albumine** ROS la plus réactive
Rayons X ou 
(réaction I.8)
Lipides
Glucides
Oxydation de l’ADN
Réaction entre l’arginine*** Peu réactif mais peut se combiner avec O2•-pour
• Monoxyde d’azote Inhibition de la
NO et O2 sous l’action de la former du ONOO-, un RONS très toxique[18-20] ou
radicalaire respiration
NOs**[17] avec H2O2 pour former NO2- ou NO3-
mitochondriale
Produit de réaction de O2•- ou
RO •
Radical alkoxyle de •OH avec une
biomolécule RH
RO2• Radical peroxyle E° RO2•/RO2H = 1.00 V Oxydation des lipides Très réactif
Les potentiels standards sont donnés par rapport à l’électrode standard à hydrogène (ESH).
* La SOD (superoxyde dismutase), la XO (xanthine oxydase), la NOX (nicotinamide adénine dinucléotide phosphate oxydase) et la NOs (NO synthase) sont
des enzymes.
** Le cytochrome C, l’hémoglobine et l’albumine sont des protéines.
*** L’arginine et la cystéine sont deux des vingt principaux acides aminés constitutifs des protéines.
D’autres RONS ne figurent pas dans ce tableau du fait d’un rôle plus mineur (l’oxygène singulet 1O2, l’ozone O3, le dioxyde d’azote •NO2, l’acide
hypochloreux HOCl).

Tableau I.1 – Liste des principaux RONS

36
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

 Le tabagisme et l’alcool.

 La prise de médicaments et de la pilule contraceptive.

 La pratique trop intense ou mal gérée d’un sport.

 Le stress intellectuel ou émotionnel.

 La pollution.

IV. Quel est le rôle physiologique des espèces réactives de l’oxygène ?

Il est important de souligner que les ROS n’ont pas qu’un rôle délétère pour l’homme. En effet, grâce

à leur haute réactivité dès les faibles concentrations, elles jouent un rôle dans l’apoptose des cellules

cancéreuses, dans la réponse immunitaire[2] et font office de messager dans la génération des enzymes

antioxydantes[14].

Elles jouent également un rôle bénéfique dans la synthèse de l’ADN, des hormones stéroïdes, des

acides gras insaturés et dans la biosynthèse des mitochondries.

Leur capacité oxydante est utilisée également dans des fonctions de signalisation et de transcription

essentielles pour le fonctionnement normal et la survie des cellules[21]. Par exemple, l’implication du

peroxyde d’hydrogène H2O2 dans le cycle de Krebs, la croissance, la dépolarisation membranaire ou la

régulation du calcium a été récemment démontrée[22].

Les RNS présentent aussi un rôle ambivalent puisqu’on les retrouve comme signaux pour activer la

vasodilatation et réguler la tension artérielle[23]. Elles peuvent aussi contribuer à l’interruption de la

chaîne d’oxydation des lipides, jouant ainsi le même rôle qu’un antioxydant. Le •NO est impliqué dans

le système nerveux et les phénomènes de transmission de la douleur, dans les processus de sommeil et

de thermorégulation… etc.[18-20]. Le peroxynitrite ONOO-, RNS très toxique, joue aussi un rôle dans la

signalisation cellulaire[24]

37
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

V. Autres molécules favorisant le stress oxydant

Les ROS et les RNS ne sont pas les seules molécules à participer au stress oxydant. Certains métaux

de transition (Fe, Cu, Cr…) réduisent le peroxyde d’hydrogène H2O2, molécule oxygénée stable, en

une ROS beaucoup plus réactive selon la réaction de Fenton[25, 26] :

Réaction I.6 Mn+ + H2O2 → M(n+1)+ + •OH + OH-

Dans les conditions physiologiques normales, les métaux de transition sont sous leur forme ionique

libre M(n+1)+ et ne participent pas à la réaction de Fenton. Cependant, quand ils sont exposés aux ROS,

notamment le radical anion superoxyde O2•-, ils se réduisent selon la réaction I.7 :

Réaction I.7 O2•- + M(n+1)+ → O2 + Mn+

En combinant les réactions I.6 et I.7, on obtient la réaction d’Haber-Weiss (réaction I.8) conduisant à

la formation du très réactif radical hydroxyle OH• à partir du peroxyde d’hydrogène[27, 28] :

Réaction I.8 O2•- + H2O2 → O2 + OH• + OH-

La figure I.1 récapitule l’origine des principales ROS et RNS ainsi que leurs effets biologiques.

38
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

Figure I.1 – Formation et action des principales RONS

B. Présentation du système antioxydant

Le métabolisme a mis en place de nombreuses stratégies antioxydantes visant à lutter contre les

agressions radicalaires. Parmi celles-ci, on peut citer l’utilisation d’antioxydants moléculaires et

enzymatiques[29].

Les antioxydants sont des agents qui réagissent spontanément avec les oxydants de manière à les

inactiver, les éliminer ou diminuer leur concentration, faisant ainsi office de bouclier cellulaire partiel

ou total.[30] Ils peuvent être soit exogènes (provenant essentiellement des apports alimentaires) soit

endogènes (produits directement par l’organisme). Leur caractère hydrophobe ou hydrophile leur

permet d’avoir une zone d’action étendue à la fois dans les milieux lipidiques et dans les liquides

physiologiques.

39
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

I. Comment agissent les antioxydants ?

Les agents antioxydants interviennent directement sur la molécule oxydante par un échange

d’électrons, ou en chélatant les métaux de transition, court-circuitant ainsi la réaction de Fenton.

Certaines molécules antioxydantes ont pour action de dismuter les ROS ou de les piéger pour former

des composés stables. Ces dernières sont d’ailleurs appelés piégeurs (scavenger en anglais).

Grâce à leur petite taille, les antioxydants non enzymatiques ont la faculté de pénétrer facilement au

cœur des cellules et d’être à proximité des cibles biologiques

II. Présentation des principaux antioxydants

a. Les antioxydants exogènes

Notre régime alimentaire joue un grand rôle dans la lutte contre le stress oxydant. Dans cette partie

sont présentés les principaux antioxydants fournis par l’alimentation.

1. Les caroténoïdes et la vitamine A

Les caroténoïdes sont notamment connus pour être des pigments rouges et oranges de nombreux fruits

et légumes. Parmi les 600 caroténoïdes identifiés, 50 d’entre eux sont reconnus pour être des

précurseurs de la vitamine A (figure I.2), le plus connu étant le -carotène (figure I.3).

40
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

Figure I.2 – Formule de la vitamine A

Figure I.3– Formule du -carotène

La vitamine A et les caroténoïdes réagissent avec l’oxygène singulet 1O2 et sont d’excellents piégeurs

de radicaux peroxyles RO2• et alkyles R• issus de l’oxydation des lipides[31]. Toutes ces propriétés

confèrent aux caroténoïdes un rôle prépondérant dans la protection cardiovasculaire [32] et dans la

prévention de l’apparition de cellules cancéreuses[33].

Des études ont montré que le -carotène agit en complément de la vitamine E (cf. section B.II.a.2. de

ce chapitre) pour protéger les membranes cellulaires[12].

Le tableau I.2 présente les taux en -carotène de quelques aliments.

Aliment Teneur (mg pour 100 g)

Pomme de terre 11,5
Carotte 9,4
Epinards 9,3
Citrouilles 6,9

Tableau I.2 – Teneur en -carotène de divers aliments

41
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

2. La vitamine E

L’appellation Vitamine E (VitE) est un terme générique qui regroupe tous les tocophérols et

tocotriénols, dont on dénombre 8 espèces. Le plus abondant est l’-tocophérol[34] (figure I.4).

Figure I.4 – Formule de l’-tocophérol

De nature liposoluble, la VitE est le principal antioxydant des membranes cellulaires à forte teneur

lipidique.

Elle a pour principal effet de réagir avec les radicaux peroxyles, arrêtant ainsi la chaîne d’oxydation

lipidique[35].

Réaction I.9 VitE + RO2• → Vit E• + RO2H

Le radical vitaminique formé est peu réactif, même s’il peut présenter un caractère pro-oxydant aux

fortes concentrations[36]. Il est généralement réduit par une autre molécule antioxydante, comme la

vitamine A, le glutathion, l’ubiquinol ou encore l’acide ascorbique (cf. sections B.II.a.1.,a 4., b. et c.7.

de ce chapitre). Il est aussi capable de piéger chimiquement 1O2.

La VitE augmente l’activité de la superoxyde dismutase SOD et de la catalase CAT (cf. sections

B.II.c.1. et 2. de ce chapitre). Elle joue aussi un rôle de régulateur dans le fonctionnement de la cellule.

Cependant, sa faible concentration ne lui permet pas d’être un antioxydant majeur et son utilisation à

cet effet compromet le bon fonctionnement cellulaire[37].

Le tableau I.3 présente les taux en vitamine E de quelques aliments.

42
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

Aliment Teneur (mg pour 100 g)

Huile de germe de blé 133
Huile d’argan 90
Huile de tournesol 48,7
Huile de palme 25,6

Tableau I.3 – Teneur en vitamine E de divers aliments

3. Les polyphénols

Les polyphénols[38, 39] sont des substances chimiques ayant au moins un cycle aromatique portant une

ou plusieurs fonctions OH. Ils présentent une activité antioxydante importante, bien plus élevée que la

VitE (cf. section B.II.a.2. de ce chapitre). Ils sont naturellement capables de piéger l’oxygène singulet
1
O2 et le radical anion superoxyde O2•- en le dismutant en H2O2[40]. Ils sont particulièrement présents

dans certaines boissons (thé, vin rouge, bière…) ou les fruits et légumes (agrumes, carottes…). Leur

effet protecteur est notamment connu dans le système cardiovasculaire où ils préviennent l’oxydation

des protéines[12]. Ils augmentent le pouvoir antioxydant du plasma[41]. Le tableau I.4 rassemble les

principales familles des composés polyphénoliques.

4. Le glutathion

Le glutathion (GSH, figure I.5) est un antioxydant abondant dans l’organisme où il joue un rôle de

protection des tissus et de protéines (comme l’hémoglobine, la ferrine ou l’albumine) [42]. Il est

principalement fourni par l’alimentation (brocolis, avocats, choux, carottes…) même si l’organisme

est aussi capable d’en produire. Sous l’action de la glutathion peroxydase (Gpx, cf. section B.II.c.3. de

ce chapitre), il réagit avec H2O2, ONOO- et RO2•[12, 43]… et forme du glutathion oxydé (GSSG, figure

I.6).

43
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

Classe Exemple Formule Origine

Phénols simples Hydroquinone Thé

Acides Acide Epices

hydroxybenzoïques parahydroxybenzoïque Fraises

Acides
Acide p-coumarique Tomates Ail
hydroxycinnamiques

Carottes
Coumarines Ombelliférone
Coriandre

Naphtoquinones Juglon Noix

Stilbénoïdes Trans-resvératrol Raisins

Flavonoïdes Fraises
Isoflavonoïdes Kaempférol Agrumes
Soja

Raisins
Anthocyanes Dalphiniol Aubergines
Fruits rouges

Bactéries
Ligones Entérodiol
intestinales

Tanins Epicatéchine Raisins

Tableau I.4 – Exemples et sources de polyphénols naturels. 44

 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

Figure I.5 – Formule du GSH

Figure I.6 – Formule du GSSG

En plus de réagir avec les ROS et les RNS, le GSH est également capable de régénérer l’acide

ascorbique et la vitamine E (cf. section B.II.a.2. et b. de ce chapitre) et de se lier aux métaux toxiques

inducteurs de stress oxydant (Hg, As…).

Connu notamment pour être l’antioxydant le plus abondant dans l’œil, la diminution de sa

concentration est le premier facteur de la cataracte.

Son action ne se limite pas à une fonction antioxydante : le GSH participe aussi à la synthèse des

protéines et de l’ADN ainsi qu’au transport des acides aminés.

45
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

5. Autres antioxydants exogènes.

Nombre d’autres molécules peuvent être utilisées par l’organisme pour la régulation des ROS.

On peut citer les oligo-éléments (zinc, sélénium, manganèse…) qui jouent un rôle de cofacteur

métallique dans de nombreuses réactions enzymatiques. Ils réagissent également de façon directe avec

les ROS. Ils inhibent la réaction de Fenton (réaction I.6), protègent les protéines et peuvent stopper

l’oxydation des lipides avec l’aide de l’AA[44](cf. section B.II.b. de ce chapitre). Cependant, à fortes

concentrations, les oligo-éléments ont un rôle pro-oxydant.

En court-circuitant la réaction de Fenton et d’Haber-Weiss (réactions I.6 et I.8) grâce à leur capacité à

chélater des ions métalliques, certaines protéines du plasma constituent une voie majeure de défense

antioxydante[12] : la transferrine, la lactoferrine, l’albumine…

La vitamine B joue aussi un rôle protecteur non négligeable. Par exemple, la vitamine B2 est un

cofacteur essentiel dans l’élimination du H2O2 par le GSH (cf. section B.II.a.4. de ce chapitre). La

vitamine B3 est quant à elle impliquée dans de nombreuses réactions rédox cellulaires alors que la

vitamine B9 participe au maintien de la balance antioxydante.

Les composés soufrés s’opposent également au stress oxydant. Par exemple, le sulfure d’allyle

(présent dans l’ail) piège les ROS et augmente l’activité catalytique des antioxydants enzymatiques

telles que la SOD, la CAT et la GPx[45] (cf. sections B.II.c.1., 2. et 3. de ce chapitre).

b. Cas particulier d’un antioxydant exogène : l’acide ascorbique

1. Présentation

L’acide ascorbique (AA) a pour formule brute C6H8O6 (figure I.7) et est notamment connu sous le nom

de vitamine C. Sa nomenclature IUPAC est l’acide 3,4-dihydrophénylacétique. La forme lévogyre est

sa forme naturelle et est communément appelée vitamine C. Cette molécule est hydrosoluble et a une

46
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

masse molaire de 176 g.mol-1. Elle se présente sous la forme de cristaux ou de poudre, de couleur

blanche ou jaunâtre.

Figure I.7 – Formule de l’AA

Très fragile en solution, l’AA est oxydé au contact de l’air ou dégradé sous exposition aux ultraviolets.

La vitesse de dégradation est fonction du pH, de la température, de la concentration en oxygène et en

cations métalliques[46].

L’AA fut isolé pour la première fois en 1928 par Albert Von Szent-Györgyi[47], qui obtint le prix

Nobel de Médecine en 1937. Elle fut ensuite synthétisée en 1933 par Tadeusz Reichstein[48], puis en

1934 par Walter Norman Haworth qui reçut le prix Nobel de chimie en 1937. De nos jours, on l’utilise

couramment comme conservateur des aliments sous le code E300.

2. Action dans l’organisme

L’AA est un cofacteur enzymatique dans plusieurs réactions physiologiques d’hydroxylation. Il est

également requis dans la synthèse du collagène et des globules rouges. Il joue aussi un rôle dans la

croissance des cellules. Il participe au système immunitaire, notamment en contribuant à l’élimination

de cellules cancéreuses[49]. Ses propriétés antioxydantes lui permettent de contrer l’action néfaste des

oxydants présents dans le corps humain.

L’homme est inapte à produire l’AA car le gène encodant la L-gulonolactone oxydase (enzyme

catalysant la dernière étape de la biosynthèse de l’AA) ne fonctionne pas.

47
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

Cette incapacité nécessite un apport nutritionnel d’AA, l’apport recommandé quotidien au niveau

européen étant de 75 mg pour la femme et de 90 mg pour l'homme. On en trouve surtout dans les

agrumes (citrons, ananas, pamplemousse, orange…), le lait, certains légumes frais et les jus de fruits

conservés dans des briques.

Le tableau I.5 regroupe les teneurs en AA de quelques aliments[46] :

Aliment Teneur (mg / 100 g)

Goyave 243
Persil 170
Navet 139
Poivron 120
Citron 65
Orange, fraise 60
Epinard 50
Cerise 10

Tableau I.5 – Teneur en AA de divers aliments

3. L’acide ascorbique dans le domaine de la santé

Les concentrations normales plasmatiques varient entre 40 et 100 µmol.L-1.

Une carence en AA est un facteur important de scorbut[50, 51], maladie qui se traduit chez l'être humain,

dans sa forme grave, par le déchaussement et la purulence des gencives, des hémorragies, puis la mort.

L’AA joue aussi un rôle dans la prévention de certaines maladies telles que la goutte[52], le rhume[53], le

cancer… Il est également présent dans la régulation du cholestérol et dans la synthèse du glutathion

(cf. section B.II.a.4. de ce chapitre).

48
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

4. Acide ascorbique et stress oxydant

L’AA est l’antioxydant hydrophile le plus puissant en termes de réactivité avec une cinétique

d’oxydation des plus rapides.

Le couple redox de l’AA est C6H6O6/C6H8O6 et a pour E° 0,42 V/ESH:

Réaction I.10

La molécule C6H6O6 est l’acide déhydroascorbique (ADH).

Au pH physiologique, l’AA est très majoritairement sous sa forme anionique ascorbate, que nous

appellerons AH- par la suite, selon la réaction acido-basique suivante :

Réaction I.11

Comme pour la réaction redox, ce sont les deux fonctions alcool sur l’hétérocycle qui sont

concernées[54]. Le second couple acide/base C6H7O6-/C6H6O62- a pour pKa 11,6.

L’oxydation de l’AA au pH physiologique se déroule en 2 étapes[54]:

Réaction I.12 AH- → A•- + H+ + e- E°’= 0,69 V/ESH

Réaction I.13 A•-→ ADH + e- E°’= -0,17V/ESH

Le rôle de l’AA dans la lutte contre les radicaux libres est double. D’une part, il réduit directement

avec les ROS, en particulier O2•- et RO2• selon les réactions I.14 et 15[34] :

49
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

Réaction I.14 AH-+ O2•- + H+ → A•- + H2O2

Réaction I.15 AH-+ ROO•→ A•-+ ROOH

Le radical anion ascorbate A•- produit est ensuite réduit par un autre antioxydant pour régénérer l’AA,

ou s’oxyde irréversiblement en ADH. D’autre part, l’AA assure la régénération de la vitamine E (cf.

section B.II.a.2. de ce chapitre) à l’interface eau-lipide après que celle-ci ait été oxydée en radical

tocophéryl.

Réaction I.16 AH- + VitE•→ A•- + VitE

Cependant, à haute concentration, l’AA a un rôle pro-oxydant car il réagit avec Fe3+ pour former Fe2+.

Réaction I. 17 AA + 2 Fe3+ → ADH + 2 Fe2+ + 2 H+

Cette réaction favorise la production de radicaux libres à travers la réaction de Fenton[55] (réaction I.6).

c. Les antioxydants endogènes

Le corps humain est capable de synthétiser des espèces antioxydantes, enzymatiques ou moléculaires,

afin de lutter contre les attaques oxydantes. Les principaux antioxydants endogènes sont présentés

dans le paragraphe suivant.

1. La superoxyde dismutase

Il existe 3 types de superoxyde dismutase (SOD) : la SOD1 (figure I.8A), la SOD2 (figure I.8B) et la

SOD3 (figure I.8C). Chacune possède un ion métallique comme cofacteur [56-58]. La SOD1 et la SOD3

ont pour cofacteur des ions Cuivre ou Zinc tandis que la SOD2 utilise des ions Manganèse[59].

50
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

(A) (B) (C)

Figure I.8 – Structures de la (A) SOD1, (B) SOD2 et (C) SOD3.

Leur principale fonction consiste à catalyser la décomposition du radical anion superoxyde en

peroxyde d’hydrogène moins toxique selon la réaction I.18[60] :

Réaction I.18 2 O2•- + 2 H+ → O2 + H2O2

H2O2 reste cependant une espèce potentiellement dangereuse et une seconde enzyme, la catalase, relaie

l’action de la SOD (cf. section B.II.c.2. de ce chapitre).

En absence de SOD, la concentration en 1O2 et ONOO- augmente (à cause de la présence excessive de

O2•-) tandis que celle d’autres antioxydants exogènes diminue car impliqués à sa place dans l’arsenal

de défense. Ceci est la preuve que l’enzyme agit de manière efficace en évitant une surconcentration

en RONS et en permettant l’utilisation d’antioxydants à d’autres fins[22].

2. La catalase

L’action de la catalase (CAT, figure I.9) est de catalyser la dismutation du H2O2 selon la réaction I.19 :

Réaction I.19 2 H2O2 → 2 H2O + O2

La catalase est l’une des enzymes antioxydantes les plus efficaces étant donné qu’elle n’est pas

victime d’un phénomène d’inhibition aux fortes concentrations de H2O2[61].

51
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

Figure I.9 – Structure de la CAT

La catalase diminue également la présence de •OH en catalysant sa décomposition quasi-

instantanément après sa génération[62].

3. La glutathion peroxydase

Catalysant la dismutation de H2O2, la glutathion peroxydase (GPx, figure I.10) est considérée comme

un agent protecteur de l’hémoglobine[63]. Son action, similaire à celle de la CAT (cf. section B.II.c.2.

de ce chapitre), est toutefois beaucoup plus efficace pour les faibles concentrations de H2O2.

Figure I.10 – Structure de la Gpx

Elle catalyse également l’élimination des radicaux lipidiques par le glutathion réduit [64] (cf. section

B.II.a.4. de ce chapitre).

52
 Chapitre I : Le stress oxydant
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4. La glutathion réductase

La glutathion réductase (GR, figure I.11) est une enzyme qui catalyse la régénération du glutathion

réduit (GSH) par le cofacteur NADPH (nicotinamide adénine dinucléotide phosphate).

Réaction I.20 GSSG + NADPH + H+ → 2 GSH + NADP+

Figure I.11 – Structure de la GR

Cette enzyme est pleinement intégrée dans le cycle d’élimination de H2O2 utilisant les couples redox

GSSH/GSH, NADP+/NADPH et la Gpx.

Figure I.12 – Cycle d’élimination de H2O2 par le GSH

53
 Chapitre I : Le stress oxydant
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5. La bilirubine

La bilirubine (figure I.13) est un produit terminal de dégradation de l’hémoglobine. Ce composé

liposoluble est capable de piéger les radicaux peroxyle RO2• et l’oxygène singulet 1O2. Il est le

principal protecteur de l’albumine[65]

Figure I.13 – Formule de la bilirubine

6. Les œstrogènes

Connues pour être les hormones sexuelles femelles, l’œstrone (E1, figure I.14), l’œstradiol (E2, figure

I.15) et l’œstriol (E3, figure I.16) sont également capables d’inhiber l’oxydation des lipides. Le produit

de la réaction entre œstrogènes et ROS est un radical RO• peu toxique.

54
 Chapitre I : Le stress oxydant
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Figure I.14 – Formule de l’œstrone (E1)

Figure I.15 – Formule de l’œstradiol (E2)

Figure I.16 – Formule de l’œstriol (E3)

L’E1 (principale hormone féminine) et l’E2 sont produites essentiellement par conversion

enzymatique de stéroïdes tandis que l’E3 est produite à partir de l’E1 et l’E2.

7. Le coenzyme Q

Le coenzyme Q (ou ubiquinol, figure I.17) est un composé hydrophile essentiel dans la chaine

mitochondriale de transport d’électrons. Il est présent dans les membranes cellulaires et les

55
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

lipoprotéines où il joue un rôle antioxydant en piégeant les radicaux RO2•, inhibant ainsi l’oxydation

lipidique, selon la réaction I.21 :

Réaction I.21 CoQH2 + RO2• → ROOH + CoQH•

Figure I.17 – Formule du coenzyme Q

L’ubiquinol participe également à la régénération de la vitamine E[66, 67]

(cf. section B.II.a.2. de ce

chapitre).

8. Les mélanines

Ces pigments sont présents sous deux formes (la phéomélanine (figure I.18) et l’eumélanine (figure

I.19) et résultent d’une oxydation et d’une polymérisation de la tyrosine (figure I.20).

56
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

Figure I.18 – Formule de la phéomélanine

Figure I.19 – Formule de l’eumélanine

Figure I.20 – Formule de la tyrosine

L’eumélanine, présente dans la peau, protège des rayons UV. En se comportant comme piégeurs des

radicaux (notamment O2•-) et en chélatant les métaux de transition, les mélanines remplissent

parfaitement le rôle d’antioxydant cutané[68, 69].

57
 Chapitre I : Le stress oxydant
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9. La mélatonine

Aussi appelée hormone du sommeil, la mélatonine (figure I.21) a des propriétés antioxydantes qui ont

été démontrées pour des concentrations un million de fois supérieures à celles présentes dans le corps

humain[70]. Toutefois, cela ne l’empêche pas d’être un antioxydant deux fois plus efficace que la

vitamine E et cinq fois plus que le glutathion (cf. sections B.II.a.2. et 4. de ce chapitre) dans les mêmes

conditions opératoires. Elle est capable de piéger des ROS (•OH, H2O2, 1O2) et aussi des RNS (•NO,

ONOO-). Elle réagit également avec les radicaux peroxyle RO2• mais sa capacité à limiter l’oxydation

lipidique est faible[70].

Figure I.21– Formule de la mélatonine

10. L’acide lipoïque

L’acide lipoïque (figure I.22) est un cofacteur essentiel dans nombre de réactions enzymatiques. Cet

antioxydant est capable de piéger •OH, RO2•, HOCl et 1O2[71]. Sa capacité à se lier aux cations

métalliques, notamment Fe2+ et Cu2+, les empêche de participer à la réaction de Fenton (réaction I.6).

Figure I.22 – Formule de l’acide lipoïque

58
 Chapitre I : Le stress oxydant
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d. Cas particulier d’un antioxydant endogène : l’acide urique

1. Présentation

L’acide urique (AU, figure I.23) a pour formule brute C5H4N4O3 et une masse molaire de 168 g.mol-1.

Sa nomenclature IUPAC est 7,9-dihydro-1H-purine-2,6,8(3H)-trione. Cette molécule hydrophile a

l’apparence de cristaux blancs et est faiblement soluble dans l’eau (60 mg.L-1)[72].

Figure I.23 – Formule de l’AU

2. Action dans l’organisme

L’AU est avant tout le produit de dégradation et d’excrétion des purines telles que l’adénine et la

guanine de l’ADN ou de l’ARN. C’est donc un déchet du métabolisme protéinique. Cet acide provient

également de la digestion de certains aliments riches en acides nucléiques (foie, ris de veau, certains

poissons et volailles).

L’homme ne possède pas l’enzyme permettant de le dégrader sous sa forme soluble. L’AU doit donc

être filtré par les reins et éliminé via les urines. De cette façon, l’uricémie (taux d’AU dans le sang)

peut être maintenue dans des limites acceptables dans l’organisme.

Dans le sang, au pH physiologique, l’AU est sous forme de sel soluble (urate) de formule C5H3N4O3-.

Cet équilibre acido-basique a pour pKa 5,4.

Réaction I.20

59
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

Il existe une seconde forme anionique de l’AU, sa constante d’acidité étant de 9,8. Pour cette forme

basique, le proton de la seconde amine secondaire du cycle à 6 est concerné.

3. L’acide urique dans le domaine de la santé

En raison d’une solubilité réduite dans l’eau, un taux élevé d’AU entraîne sa cristallisation ce qui est à

l’origine des crises de goutte. Cette hyperuricémie est également associée à plusieurs maladies rénales

et à l’hypertension[73, 74]. À l’opposé, certaines études ont démontré qu’un taux élevé d’AU dans le

sérum réduit le risque de la maladie de Parkinson et que les patients atteints de la maladie d’Alzheimer

ont une faible uricémie[75, 76].

L’AU contribue à la physiopathologie des maladies cardiovasculaires et à la morbidité cognitive mais

il joue un rôle dans la prévention oxydante des dommages cérébraux[77].

Les concentrations normales plasmatiques sont comprises entre 150 et 420 µmol.L-1.

4. Acide urique et stress oxydant

L’oxydation de l’AU forme en milieu neutre de l’allantoïne[78] (All) de formule brute C4H6N4O3 :

Réaction I. 21

+ CO2 + 2 H+ + 2 e-

En milieu acide, le produit d’oxydation de l’AU est l’urée.

Comme pour l’oxydation de l’AA, il existe une première étape radicalaire[79]:

60
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

Réaction I. 22 C5N4O3H3¯ → C5N4O3H2•+ H+ +e- E°=1 V/ESH

Réaction I.23 C5N4O3H2•→ C4H6N4O3 + CO2 + H+ + e- E°=0,1 V/ESH

L’AU joue un rôle important dans le système antioxydant. Il apparaît comme étant l’antioxydant

plasmatique le plus réactif avec les ROS, contribuant à lui seul à 60 % de la capacité antioxydante du

plasma grâce à sa concentration élevée[80]. Toutefois, ses produits d’oxydation, comme l’allantoïne ou

l’urée, peuvent facilement s’oxyder en générant à leur tour des espèces toxiques de l’oxygène.

Des scientifiques japonais ont mis en exergue la capacité de l’AU à stopper les réactions d’oxydation

en chaîne des lipides, en réagissant avec les radicaux lipidiques formés[81]. L’AU réagit également

avec les radicaux OH•, ROO• et R•[82] (réaction I.24).

Réaction I. 24 C5N4O3H3¯ + R•+ H+→ C5N4O3H2•+RH.

e. Quels autres systèmes métaboliques antioxydants existe-t-il ?

Le métabolisme a également mis en place un système de réparation de l’ADN ou d’élimination des

molécules dégradées. Ces systèmes sont souvent considérés comme une dernière ligne de défense.

Paradoxalement, les enzymes utilisées pour la réparation sont activées par les ROS.

C. Le stress oxydant et ses conséquences

I. Le stress oxydant à l’échelle cellulaire

Chaque cellule possède un système antioxydant pour neutraliser la production de ROS. Il peut

toutefois arriver, pour des raisons propres ou étrangères au métabolisme, que la quantité de ROS

produites soit supérieure à la capacité antioxydante de la cellule, conduisant ainsi à une situation de

stress oxydant.

61
 Chapitre I : Le stress oxydant
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L’équilibre local entre anti et pro-oxydants est très fragile. Toute modification (causée par une

surproduction de radicaux libres, une déficience d’antioxydants ou les deux phénomènes cumulés)

entraîne des dégâts cellulaires importants tels que la dégradation de l’ADN cellulaire, l’oxydation et

donc l’inactivation de protéines, d’enzymes, de sucres ou de lipides[83-86].

En effet, les ROS, notamment •OH, sont capables de détériorer et de modifier l’ADN. Dans les cas les

plus extrêmes, de fortes lésions entraînent de graves altérations du matériel génétique, comme des

mutations à l’origine de cancers[12].

Les protéines peuvent également être dénaturées par les attaques oxydantes. Les cibles préférentielles

sont les cycles aromatiques (comme ceux de la phénylalanine ou de l’histamine) et les acides aminés

soufrés[12]. Les protéines de reconnaissance cellulaire telles que les enzymes, les anticorps ou les

récepteurs membranaires sont aussi des cibles privilégiées des ROS.

Les ROS sont aussi à l’origine d’une cascade d’oxydations des lipides ayant, entre autres

conséquences, l’altération de la fluidité cellulaire qui, associée à leur désorganisation totale, peut

conduire à leur désagrégation[12].

La notion d’équilibre entre antioxydants et oxydants est d’autant plus importante dans ce contexte

qu’un taux trop élevé en antioxydants peut être également néfaste pour l’organisme.

II. Implication dans de nombreuses pathologies

Que ce soit par une production excessive d’espèces à caractère oxydant et/ou un débordement des

systèmes de défenses antioxydants, le stress oxydant est considéré comme une des premières étapes

conduisant à de nombreuses pathologies.

De nombreuses études ont établi la corrélation entre des groupes de population et des risques de stress

oxydant élevé. Nous pouvons citer comme exemples[87] :

62
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

 les femmes ménopausées

 les personnes âgées
 les fumeurs
 les personnes obèses

De plus, il est communément admis que le stress oxydant est un des facteurs du vieillissement.

Plusieurs études ont prouvé qu’il existait une relation entre baisse de l’activité métabolique,

diminution de l’espérance de vie et accumulation des produits d’oxydation des composants

cellulaires[88].

L’implication du stress oxydant dans l’athérosclérose (dépôt de lipides sur les parois des artères à

l’origine des maladies cardiovasculaires) apparait de plus en plus évidente. Ce sont les lipides oxydés

par les ROS qui, en modifiant l’équilibre intracellulaire et en se solidifiant, causent directement cette

pathologie[89]. D’une manière plus générale, le stress oxydant est clairement reconnu comme un

facteur des rhumatismes et des maladies cardiovasculaires[90-92].

Dans le cas de la cataracte, un stress photo-induit par les radiations solaires entraîne l’oxydation des

protéines du cristallin de l’œil et peut causer à terme la cécité[93]. L’équipe de Kluzny a montré que la

concentration en AU dans l’œil est moins élevée chez les patients atteints de cataracte, suggérant un

rôle important de cet antioxydant dans la prévention de cette affection [94] alors même que l’œil a une

concentration en GSH et en AA dix fois supérieure à la concentration plasmatique.

Des enquêtes épidémiologiques ont aussi associé ROS et réactions allergiques, notamment dans les cas

d’allergies cutanées[95] ou d’asthmes où le système immunitaire produit du O2•- afin de contrer les

agents allergènes[96].

D’autres études ont prouvé qu’en contrôlant le taux en AA, vitamine E et caroténoïdes, le

développement de cancers peut être freiné[97, 98]. Cependant, leur présence à des concentrations trop

élevées peut paradoxalement conduire à une augmentation du risque de cancer[99].

Le stress oxydant est enfin reconnu comme un des facteurs initiateurs des maladies d’Alzheimer et de

Parkinson. La piste oxydante dans ces maladies neurodégérénatives est évoquée depuis plusieurs

63
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

années[100]. Des chercheurs américains ont montré que des protéines oxydées et nitrées sont présentes

au niveau des lésions cérébrales neurodégénératrices, du fait de leur combinaison avec des RONS.

Ceci identifie le stress oxydant comme une étape préalable au développement de ces maladies [101, 102].

Dans la maladie d’Alzheimer, la formation des dépôts de protéines inactives est accélérée par la

présence d’oxygène[103, 104] tandis que la capacité antioxydante cérébrale est diminuée[105].

III. Méthodes d’évaluation du stress oxydant

Déterminer le niveau de stress oxydant à l’aide de marqueurs sensibles et spécifiques est un enjeu

important en recherche biologique. La mise en évidence d’un stress oxydant élevé permet d’envisager

le développement des stratégies thérapeutiques dans la prévention et le traitement de certaines

pathologies qui en découlent (cf. section C.II.). Cette évaluation peut se faire à trois niveaux. De

nombreux ouvrages résument les différentes techniques utilisables[106-109]. Cependant, l’interprétation

des résultats est relativement subjective puisqu’au-delà des limites et des spécificités inhérentes à

chaque technique, les valeurs de référence restent souvent mal définies[110].

a. Mesurer la concentration en radicaux libres.

La concentration en radicaux libres peut être mesurée par deux méthodes : la Résonance

Paramagnétique Electronique (RPE) ou la chimiluminescence.

La RPE mesure la quantité d’énergie absorbée par un électron sous un fort champ magnétique. Cette

technique permet donc de détecter et doser des substances avec un électron non apparié. Des mesures

in vivo ont pu être effectuées[111, 112]

et ont permis la détermination de concentration de l’ordre de

0,1 nmol.L-1. Cette méthode nécessite un équipement lourd et reste de ce fait surtout utilisée dans la

recherche.

64
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

La chimiluminescence mesure la lumière émise par les électrons excités lors de leur retour à l’état

fondamental. La concentration en radicaux libres est donc indirectement accessible par cette méthode.

Cette technique a notamment été utilisée pour la détection des O2•- [113].

L’électrochimie est en passe de devenir une nouvelle voie pour la détection des radicaux libres dans un

contexte d’évaluation du stress oxydant. En effet, des travaux récents ont démontré la faisabilité d’une

mesure simultanée des ROS et des RNS dans des milieux biologiques complexes tels que des cultures

de macrophages[114], de synapses[115] et dans des éléments cellulaires, les fibroblastes[116]. De plus,

l’équipe du Dr. Bedioui a étudié la potentialité d’une mesure électrochimique simultanée de NO • et

O2•- et obtient des résultats encourageants[117], faisant ainsi suite à une longue série de travaux visant à

détecter les RNS en milieu biologique[118].

b. Mesurer les marqueurs des produits d’oxydation des composants cellulaires.

En raison de leur courte durée de vie, l’évaluation de la concentration des radicaux libres nécessite une

technique de mesure adaptée et/ou souvent onéreuse. Une alternative est de doser les produits

d’oxydation cellulaire, témoins de l’interaction entre les ROS et les substrats biologiques.

La voie la plus courante se focalise sur les produits d’oxydation des lipides. Le dosage s’effectue sur

les produits de scission, tels que les substances volatiles : acides acétique, formique, cétones, alcools

etc., détectables par chromatographie sur couche mince, en phase gazeuse ou liquide ou par

spectrométrie IR.

Le malondialdéhyde (MDA), une des dernières molécules de scission, est un de ces marqueurs et est

très largement utilisé de par sa forte réactivité conférée par ses deux fonctions aldéhydes. Sa réaction

avec l’acide thiobarbiturique (ATB) forme un complexe MDA-ATB que l’on peut doser afin de

quantifier l’état d’oxydation lipidique[119]. La mesure est simple et très sensible mais est facilement

perturbée par des interférents (acides gras polyinsaturés, 4-hydroxynonénal…) et nécessite des

conditions opératoires relativement drastiques (séparation du complexe MDA-ATB par

65
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

chromatographie liquide et détection fluorimétrique). De ce fait, de nouveaux marqueurs ont été plus

récemment utilisés comme les F2-isoprostanes[120-122], composés issus de l’oxydation des lipides par les

ROS.

La spectrométrie permet de doser les produits d’oxydation des protéines. Cette méthode nécessite au

préalable un prélèvement de cellules ou de tissus mais elle peut être aussi appliquée au plasma

sanguin. Difficile à mettre en œuvre, elle nécessite des concentrations élevées de molécules-cibles

mais il est possible d’augmenter sa sensibilité par catalyse enzymatique[123].

Les produits d’oxydation de l’ADN (comme le thymidine glycol et la 8-OH-2-désoxyguanosine)

peuvent également être utilisés comme marqueurs de l’état d’avancement du stress oxydant.

Cependant, ces mesures nécessitent des appareillages onéreux tels que la spectrométrie de masse ou

une HPLC couplée à une détection électrochimique. En outre, l’extraction des marqueurs nécessite des

conditions drastiques qui ne sont accessibles qu’aux laboratoires spécialisés[108].

c. Mesurer la concentration en antioxydants.

Deux solutions existent afin d’estimer la capacité antioxydante : évaluer l’activité des enzymes

antioxydantes ou doser les antioxydants de plus faible masse molaire.

Des kits sont commercialisés pour estimer les activités enzymatiques d’échantillons biologiques.

Essentiellement basées sur des dosages colorimétriques et sur la capacité de l’enzyme ciblée à influer

sur des réactions impliquant l’oxygène, ces mesures ont l’avantage d’être relativement rapides (30

minutes au maximum). Une alternative basée sur la méthode de Paglia utilise la spectrométrie IR pour

suivre l’oxydation de la NADPH catalysée par la GSH-Px[124] ou la dismutation de H2O2 catalysée par

la CAT[125].

Le glutathion est utilisé comme marqueur du stress oxydant. En effet, le ratio GSH/GSSG (10/1 dans

des conditions normales) permet d’évaluer l’état d’oxydation de la cellule [126-128]. Il en est de même

pour le rapport ubiquinol/ubiquinone.

66
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

Pour détecter et doser efficacement l’AA, plusieurs méthodes sont couramment utilisées telles que

l’HPLC avec détection électrochimique ou colorimétrique[129]. Des kits utilisant la méthode

colorimétrique pour une mesure rapide de sa concentration sont commercialisés à grande échelle. On

peut également utiliser des méthodes spectrophotométriques ou enzymatiques[130, 131].

Comme pour l’AA, les méthodes les plus généralement usitées pour doser l’AU sont la colorimétrie

(mais il y a des interférences avec l’AA et d’autres agents réducteurs) ou les méthodes enzymatiques

(par exemple celle basée sur l’uricase[80]) avec détection par spectrophotométrie. Néanmoins, cette

dernière méthode s’avère coûteuse et accuse des limites de détection variables.

Une autre alternative consiste à évaluer le stress oxydant total. Cette méthode repose sur la mesure du

pouvoir antioxydant total procuré par toutes les substances antioxydantes de l’échantillon considéré[107]

(AU, vitamines antioxydantes, glutathion…). Des kits couplant une solution à mélanger avec

l’échantillon à analyser et un simple appareillage de détection sont commercialisés comme le TEAC

(Trolox Equivalent Antioxidant Capacity), l’ORAC (Oxygen Radical Absorbance Capacity) ou le test

DPPH (DiPhenylPicrylHydrazyl). Ces méthodes, basées sur le même principe mais différant selon la

nature du radical généré, des antioxydants impliqués et de la méthode de détection (colorimétrie ou

fluorométrie), permettent des mesures rapides et relativement précises[132-134].

67
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

IV. Quelles conclusions tirer et comment lutter contre le stress oxydant ?

La figure I.24 résume le phénomène du stress oxydant :

Figure I.24 – Schéma-bilan du stress oxydant

Considéré comme un précurseur de nombreuses maladies, le stress oxydant se doit d’être maîtrisé.

Toutefois, vu l’ambigüité et la complexité du phénomène, difficile d’être simpliste. Étant donné que le

stress oxydant est à l’origine des premières anomalies responsables des détériorations irréversibles de

la cellule et que c’est longtemps après que les pathologies se déclarent, l’action la plus facilement

68
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

envisageable est la prévention nutritionnelle (dans la limite des apports recommandés et en diversifiant

les antioxydants ingérés).

Les niveaux d’action pour une lutte efficace contre le stress oxydant peuvent se situer à plusieurs

points stratégiques du métabolisme :

 Éviter la surconcentration locale en O2

 Empêcher la pénétration des radiations

 Détruire les ROS les plus dangereuses (O2•-, OH• et ONOO- notamment)

 Complexer les métaux impliqués dans la réaction de Fenton ou d’Haber-Weiss

 Freiner les enzymes génératrices de NO• et activer celles qui dismutent le H2O2 (SOD, CAT, GPx)

 Piéger les radicaux

 Protéger les biomolécules

 Stopper l’oxydation des lipides

 Réparer l’ADN

 Réparer les protéines détériorées ou les détruire

Cette liste non exhaustive montre une fois de plus la complexité du phénomène de stress oxydant et les

nombreuses stratégies antioxydantes susceptibles de prévenir la formation de radicaux libres ou de

permettre leur destruction.

Les perspectives d’avenir de la lutte contre le stress oxydant tendent vers la synthèse de molécules

modulant l’expression des gènes antioxydants (afin de donner à l’organisme la capacité d’avoir une

plus large palette de défenses antioxydantes) ou vers la recherche d’une utilisation à meilleur escient

des radicaux libres (combat contre l’infection virale, apoptose de cellules cancéreuses…).

69
 Chapitre I : Le stress oxydant
__________________________________________________________________________________

D. Quelle est la place du sujet de thèse dans ce contexte ?

Les acides urique et ascorbique sont deux antioxydants hydrophiles majeurs dans le système de

défense contre les attaques radicalaires au sein de notre organisme. De par leurs fortes réactivités qui

leur confèrent un rôle important dans la lutte contre le stress oxydant, il est d’un intérêt primordial

d’être en mesure de déterminer de manière simple et efficace leurs concentrations dans les milieux

biologiques. Bien qu’elles possèdent des sensibilités et sélectivités satisfaisantes, les méthodes

analytiques, majoritairement chromatographique ou spectrométrique, impliquent des matériels coûteux

et des protocoles opératoires fastidieux avec des phases de préparation longues, empêchant une mesure

instantanée. Étant donné que le stress oxydant met en jeu des réactions de transfert d’électrons,

l’électrochimie s’impose comme la méthode alternative la plus adaptée pour l’étude de ce type de

réactions. Les techniques électrochimiques présentent l’avantage d’être peu coûteuses, simples à

mettre en œuvre, rapides et sensibles. De plus, la réactivité électrochimique et les concentrations

physiologiques des acides urique et ascorbique rendent leurs dosages possibles par voie

électrochimique. Dans ce contexte, l’équipe « Capteurs électrochimiques et Procédés » du Laboratoire

de Génie Chimique possède une expertise reconnue en matière de détection électrochimique

d’antioxydants dans des milieux complexes. En effet, après des travaux portant sur l’évaluation de la

capacité antioxydante de la peau[135, 136] et de produits dermocosmétiques[137-139], l’équipe s’est penchée

sur l’élaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants dans le sérum sanguin[140-142]. Elle a plus

récemment examiné la potentialité d’intégrer le capteur dans un système de fabrication collective en

collaboration avec le Laboratoire d’Analyse et d’Architecture des Systèmes[143]. Ces derniers travaux

se sont attachés à la fonctionnalisation d’une électrode d’or par un polymère conducteur. Cette

modification de surface accroît la sélectivité et la sensibilité du capteur vis-à-vis des acides ascorbique

et urique. Cependant, l’étude préliminaire de la stabilité opérationnelle et au stockage du polymère

électrodéposé n’a pas donné de résultats probants. Les travaux de cette thèse s’inscrivent donc dans la

continuité de ces travaux mais en privilégiant une nouvelle approche par la fonctionnalisation par des

70
 Chapitre I : Le stress oxydant
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sels de diazoniums, réputée très stable et polyvalente. Ils permettront également d’élargir la palette de

modifications envisageables dans l’élaboration d’un capteur à antioxydants.

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80
 Chapitre II :
Le diazonium : un outil de
modulation de propriétés de
surface
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Chapitre II :
Le diazonium : un outil de modulation de
propriétés de surface
A. Présentation générale ___________________________________________________ 85

I. Historique ________________________________________________________________ 85

II. Principe de modification par un sel de diazonium _____________________________ 86

III. Avantages et inconvénients ________________________________________________ 88

IV. Synthèse de diazonium ___________________________________________________ 90

a. Génération in situ_______________________________________________________________ 90
b. Génération ex situ ______________________________________________________________ 91

V. Réduction électrochimique du diazonium ______________________________________ 92

VI. Caractérisation de surface ________________________________________________ 94

VII. Applications ____________________________________________________________ 96

B. Approche de la fonctionnalisation de substrat par le nitrobenzène diazonium ____ 98

I. Pourquoi ce choix de diazonium ? ____________________________________________ 98

II. Applications du nitrobenzène diazonium ___________________________________ 100

III. Réactivité électrochimique du nitrobenzène diazonium _______________________ 101

IV. Incertitudes autour du mécanisme réactionnel_______________________________ 103

C. Produits chimiques et solutions ________________________________________ 107

I. Produits chimiques _______________________________________________________ 107

II. Préparation des solutions ________________________________________________ 108

D. Appareillage et méthodes _____________________________________________ 109

I. Appareillage _____________________________________________________________ 109

II. Méthodes _____________________________________________________________ 109

a. Polissage des électrodes _________________________________________________________ 109
b. Détermination de la surface active ________________________________________________ 109

E. Etude mécanistique de la réduction du nitrobenzène diazonium ______________ 112

83
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

I. Différenciation entre greffage et hydroxylamination ____________________________ 115

a. Influence de l’état de surface du carbone vitreux et du solvant ________________________ 115
b. Influence du potentiel de greffage ________________________________________________ 117
c. Caractérisation par spectrométrie photoélectronique X ______________________________ 127
d. Greffage et hydroxylamination : deux processus distincts _____________________________ 128

II. Etude du phénomène conjoint d’hydroxylamination et d’amination _______________ 129

a. Mise en place du protocole opératoire _____________________________________________ 129
b. Etude dynamique de l’hydroxylamination _________________________________________ 131
c. Etude dynamique de l’amination _________________________________________________ 132
d. Influence de l’épaisseur de la couche organique _____________________________________ 136

III. Proposition de mécanisme réactionnel de réduction __________________________ 140

IV. Etude cinétique ________________________________________________________ 143

a. Choix des électrodes et des sondes électrochimiques _________________________________ 143
1. Électrodes __________________________________________________________________ 143
2. Sondes électrochimiques ______________________________________________________ 145
b. Etude qualitative ______________________________________________________________ 146
1. Hexacyanoferrate (III) ________________________________________________________ 146
2. Hexaamine ruthénium ________________________________________________________ 148
3. Ferrocène méthanol __________________________________________________________ 149
4. Analyse des phénomènes observés _______________________________________________ 150
c. Etude quantitative _____________________________________________________________ 151
1. Détermination du coefficient de transfert électronique ______________________________ 151
(i) Méthode de Tafel corrigée ___________________________________________________ 152
(ii) Méthode de Koutecky-Levich ________________________________________________ 154
2. Hexacyanoferrate(III) ________________________________________________________ 157
3. Hexaamine ruthénium ________________________________________________________ 161
4. Ferrocène méthanol __________________________________________________________ 163
d. Effet de la couche organique _____________________________________________________ 164
e. Effet du pH ___________________________________________________________________ 167
f. Bilan de l’étude cinétique _______________________________________________________ 170

V. Apport de l’étude cinétique dans l’élucidation du mécanisme ____________________ 170

F. Références bibliographiques __________________________________________ 172

84
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

A. Présentation générale

I. Historique

La modification électrochimique d’électrodes de carbone par les sels de diazonium est une méthode

relativement récente. En effet, la première étude remonte à 1990[1], qui a mis en exergue la génération

électrochimique d’un radical initiateur d’une liaison covalente entre une électrode de carbone vitreux

(CV) et une amine. Cette formation continue de radicaux, par voie anodique, induit la croissance d’un

film organique très stable à la surface de l’électrode. Par la suite, ce principe a été repris avec les sels

de diazonium[2], notamment grâce à une réaction de greffage cathodique qui nécessite moins d’énergie

que l’oxydation d’amines.

Auparavant, les sels de diazonium ont été surtout exploités en chimie organique où leur pouvoir

oxydant permet la synthèse de composés aryles, généralement par la réaction de Heck-Matsuda[3]. Par

la suite, le nombre de travaux utilisant un diazonium a connu une croissance très nette (figure II.1) de

manière concomitante avec la part de ceux concernant un protocole de modifications d’électrode

(figure II.2). Cette évolution traduit donc une méthode en pleine expansion[4, 5].

Nombre de publications

700
1ère modification
600 covalente d’électrode

500

400

300

200

100

0
1970 1980 1990 2000 2010 Année

Figure II.1 - Evolution du nombre annuel de publications ayant « diazonium » pour mot-clé
(Source : SciFinder)

85
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Publications (%)
40
1ère modification
35 covalente d’électrode
30

25

20

15

10

5
Année
0
1970 1975 1980 1985 1990 1995 2000 2005 2010 2015

Figure II.2 - Evolution de la part des travaux utilisant un diazonium comme agent de modification
d’électrode (Source : SciFinder).

L’immobilisation de couches organiques par le biais d’amines, de polyalcènes, de carboxylates et

d’azotures s’est avérée moins efficace que par les diazoniums, à cause d’une plus faible réactivité

conduisant à des couches moins denses[6-8]. Plus récemment, les sels d’iodonium ont été utilisés dans

le même objectif mais l’efficacité du greffage moins forte et le manque de polyvalence de la

modification en font une alternative intéressante essentiellement dans des conditions moins

drastiques[9] (pH neutre, milieu ne détériorant pas le matériau d’électrode…).

II. Principe de modification par un sel de diazonium

Le principe communément admis repose sur la réduction d’un cation phényldiazonium en son radical

phényl correspondant (réaction II.1) qui, après élimination de l’azote, réagit à la surface carbonée pour

former une liaison covalente[10] (réaction II.2) :

86
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Réaction II.1

Réaction II.2

Outre la réduction à la surface de l’électrode, le radical phényl formé peut subir deux réactions

compétitives : une dimérisation ou un transfert de charges avec le solvant[10]. Les travaux d’Allongue

et al. ont estimé la proportion de radicaux réagissant à l’électrode à 84% pour le CV et 70% pour le

HOPG[11] (highly oriented pyrolytic graphite). Il est intéressant de noter que la réduction du cation

peut aussi se faire à l’aide d’ultrasons, induisant un dépôt organique aux propriétés similaires à celles

d’un dépôt electrochimiquement assisté[12]. Certains travaux ont également mis en évidence l’existence

d’un greffage spontané où une fine couche organique se dépose sur le substrat quand celui-ci est

immergé dans une solution contenant des ions diazoniums[13-17]

87
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

III. Avantages et inconvénients

La réduction par voie électrochimique de phényldiazonium sur un substrat carboné est intéressante car,

contrairement à la génération de radicaux à partir d’amines, le protocole opératoire s’affranchit de

conditions d’oxydations trop drastiques qui pourraient détériorer la surface à modifier.

De plus, la grande variété de groupements fonctionnels R que peut porter le phényldiazonium (COOH,

NO2, OH ...) élargit les potentialités de modification. Ce groupement fonctionnel a une influence sur le

potentiel à partir duquel la réaction de greffage se produit et sur le nombre d’unités moléculaires dans

la couche. Plus la surtension cathodique est importante, moins il y a de molécules dans le film[18]. Des

études ont montré qu’il était possible de cumuler les propriétés de plusieurs groupements fonctionnels

en utilisant une solution électrolytique contenant les différents diazoniums correspondants [19-22]. La

couche mixte résultante induit des interactions entre les groupements fonctionnels [23], élargissant

encore le champ d’action de l’électrode modifiée.

Enfin, en raison de la nature covalente de la liaison formée, la couche organique est très stable [24]. Les

seuls moyens de la retirer restent le polissage abrasif ou des attaques radicalaires[25, 26].

L’inconvénient majeur réside dans la nécessité de synthétiser le diazonium à partir de son amine

correspondante. Cette étape requiert donc un savoir-faire certain et un matériel approprié. En outre, il

est difficile de contrôler la croissance de la couche organique. Ceci est principalement dû au fait que

les radicaux formés par électrochimie peuvent réagir avec la couche déjà déposée, conduisant ainsi à

des revêtements à la morphologie très irrégulière[27, 28]. Un moyen de pallier ce problème et d’assurer

un meilleur contrôle de la croissance du film est de travailler avec des groupements fonctionnels R à

fort encombrement stérique[29, 30] ou de bloquer les positions en ortho du groupement R, par exemple

avec des groupements méthyles, comme dans le cas du travail proposé par Pinson et al.[31].

La croissance de la multicouche est en effet due aux attaques radicalaires des radicaux phényles

formés sur les cycles aromatiques déjà greffés[31]. Cette réaction est connue sous le nom de substitution

aromatique homolytique. Après une attaque radicalaire sur le cycle aromatique greffé à l’électrode

88
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

(réaction II.3), le radical formé doit perdre un radical hydrogène (ou un proton et un électron) pour

retrouver son aromaticité. Cette réaction est possible par un transfert d’électron vers l’électrode ou par

l’oxydation du radical greffé par un diazonium (réaction II.4).

Réaction II.3

Réaction II.4

A l’heure actuelle, ce type de modification a été étudié sur de nombreux substrats carbonés, que ce soit

sur du CV[9, 32]

, du HOPG[33, 34]
, du graphite[34-36], de la poudre[37-39]ou du feutre[40] de carbone, des

électrodes sérigraphiées[41-43], du diamant[44], du graphène[45-48] ou encore sur les fibres de carbone[49-51].

En outre, la modification de surface par les sels de diazonium a aussi été employée sur une large

gamme de métaux (or[27, 52-54]

, fer[13, 55, 56]
, cuivre[13, 17, 57]
, nickel[13, 17, 57]
, platine[58, 59]
, chrome[60],

titane[61], zinc[13, 57] ou même inox[55, 62]) et semi-conducteurs[12, 63-66] et dans divers solvants aqueux,

organiques ou même ioniques[67, 68].

Le caractère covalent de la liaison entre le film et des substrats non carbonés prête aujourd’hui à

discussion : des liaisons métal-N ont été mises en évidence par spectroscopie[17] alors que d’autres

89
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

travaux plaident pour une liaison covalente métal-C[55, 69]. Un élément clé du débat réside dans la plus

grande stabilité électrochimique des fonctions greffées sur carbone que sur métal [70, 71]
. Certains

travaux avancent ainsi l’hypothèse d’une délocalisation d’électrons plus marquée sur Au que sur C [70-
72]
. Cela n’empêche pas les films de diazonium d’être très stables sur métal et de résister à des

traitements extrêmes[54, 73].

IV. Synthèse de diazonium

Il existe deux moyens de travailler avec les diazoniums : in situ et ex situ.

a. Génération in situ

La génération in situ consiste à former les diazoniums à partir d’une solution acide contenant l’amine

de départ, un composé nitrite (nitrite de sodium en général) et éventuellement un électrolyte support.

La réaction de formation de diazonium est une variante incomplète de la réaction de Sandmeyer[74]

(réaction II.5) :

Réaction II.5

Cette réaction dite de diazotation est également possible en milieu organique. Elle a l’avantage d’être

extrêmement rapide puisqu’on atteint le rendement maximal en moins d’une minute[75]. Le mélange

ainsi obtenu est laissé sous agitation (pendant 1 heure minimum) avant d’être utilisé comme

électrolyte pour la réduction électrochimique des diazoniums formés[76, 77]. On peut assurer un meilleur

90
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

contrôle de la cinétique en refroidissant le milieu réactionnel. L’inconvénient de cette méthode est que

les concentrations finales de diazoniums sont calculées en fonction d’un rendement théorique de

synthèse égal à 100 %. Or, il existe une réaction parasite entre amines et diazoniums formant du

triazène[77, 78] dont il est toutefois possible de minimiser l’importance en se plaçant en excès de nitrite.

Cela ne fait pour autant que renforcer l’incertitude des valeurs de concentration et rendre plus ardue

l’évaluation de la reproductibilité de la méthode.

b. Génération ex situ

L’autre moyen de génération des diazoniums implique la synthèse d’un sel de diazonium. En effet, si

la réaction de diazotation est rapide, la réaction de décomposition des ions diazonium l’est tout

autant[79]. En une heure, plus de 75 % des ions diazonium sont hydrolysés[79, 80]. C’est pourquoi il est

intéressant de travailler à partir d’un sel synthétisé au préalable pour préparer des solutions à usage

limité dans le temps. On peut alors parler de génération ex situ.

Le schéma réactionnel est le même que pour la génération in situ hormis qu’après un certain temps,

une solution concentrée de BF4- (ou de PF6-) est ajoutée afin de précipiter le diazonium formé en

tétrafluoroborate de diazonium non soluble dans le milieu réactionnel (réaction II.6). Des opérations

de filtration et de purification sont alors nécessaires pour récupérer le sel de diazonium.

Réaction II.6

91
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

L’avantage majeur de cette méthode est que l’on peut accéder au rendement de synthèse connaissant

les quantités initiale d’amine et finale de sel de diazonium. On a donc une meilleure appréciation des

quantités de matière de diazonium disponibles.

Que la génération soit in situ ou ex situ, pour un diazonium donné, les courbes électrochimiques sont

toutefois très comparables et les dépôts ont des propriétés similaires[18, 77].

Il est également possible d’acheter quelques sels de diazoniums directement dans le commerce : le

nitrobenzène diazonium, le formylbenzène diazonium, le bromobenzène diazonium…

V. Réduction électrochimique du diazonium

La réduction électrochimique de sels de diazonium s’effectue généralement dans une solution

d’acétonitrile (ACN) ou une solution aqueuse acide contenant 0,1 mol.L-1 d’électrolyte support et le

diazonium à des concentrations de l’ordre du mmol.L-1. Pour les générations in situ, l’électrolyte de

modification est le même que la solution de synthèse.

Contrairement à la génération des diazoniums, la nature organique ou aqueuse de la solution

d’électrolyse a une influence directe sur la morphologie du film résultant[77]. Même si les courbes de

dépôt sont les mêmes dans le cas d’un groupement R non ionisable [18], un film formé en milieu non

aqueux est plus compact et imperméable que celui formé en milieu aqueux acide[18, 81, 82]. Dans le cas

de groupements R avec un fort encombrement stérique, la structure finale du film est désordonnée

quand celui-ci est généré en milieu organique et proche d’une monocouche en milieu aqueux[83].

La technique généralement adoptée pour la réduction électrochimique du diazonium est la

voltammétrie cyclique, car elle permet d’observer au mieux les phénomènes réactionnels lors de la

fonctionnalisation de surface. On peut ainsi voir, à une vitesse de balayage relativement faible (50 à

100 mV.s-1), un ou plusieurs pics de réduction à des potentiels variables selon le type de diazonium.

Les intensités de ces pics diminuent drastiquement dès le second cycle et restent à peu près identiques

92
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

lors des cycles suivants (figure II.3). Cette inhibition est caractéristique de la formation de couche

organique sur la surface carbonée lors du premier cycle : on parle alors d’auto-inhibition de la couche

ou de couche auto-inhibitrice. Cela permet d’avoir un film à croissance autolimitée bien que certains

travaux aient prouvé que cet aspect inhibiteur est influencé par les fonctions de la couche organique [84].

i (unités arbitraires)
Phénomène d’inhibition

E (V/ref)

Figure II.3 – Voltammogrammes cycliques tracés avec une électrode de carbone vitreux dans une
solution aqueuse ou organique contenant du diazonium. ( ‒ ) 1er cycle, ( - - )2ème cycle, (∙∙∙)nième cycle.

Il est également possible d’effectuer la réduction par électrolyse à potentiel constant[11, 57, 85-88] ce qui

confère un meilleur contrôle de l’énergie de surface octroyée à la réaction.

Les travaux de Ceccato et de Gui ont montré avec une microbalance électrochimique à quartz

(Electrochemical Quartz Crystal Microbalance ou EQCM) que les dépôts réalisés avec des méthodes

de balayage de potentiel donnent lieu à une croissance continue. Au contraire, des électrolyses à

potentiel ou intensité constants induisent des films organiques à croissance limitée [62, 70, 71, 89]
.

L’explication avancée pour une telle différence de comportement entre voltammétrie cyclique et

méthodes potentiostatique et galvanostatique vise la distribution homogène ou hétérogène de l’énergie

apportée à la réaction de dépôt. L’utilisation de l’EQCM a aussi permis d’identifier deux étapes dans

le mécanisme de dépôt : une première étape de formation d’une monocouche et une seconde étape,

93
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

plus lente que la première, correspondant à la croissance d’une multicouche, que ce soit par greffage

électroassisté[53] ou spontané[15, 16].

L’ordre de grandeur de l’épaisseur de couche organique est d’environ 10 à 100 nm selon la durée

d’électrolyse et le potentiel ou l’intensité mis en jeu.

Quand il y a un greffage spontané, la couche organique résultante a une croissance plus lente (10 nm

en 6 h)[13] et est bien moins stable que celle générée électrochimiquement[15, 16].

VI. Caractérisation de surface

La surface modifiée peut être étudiée par des techniques électrochimiques ou spectroscopiques.

Parmi les techniques spectroscopiques disponibles, on dénombre la spectrométrie photoélectronique X

(X-ray Photoelectron Spectrometry ou XPS), la spectroscopie de rétrodiffusion de Rutherford

(Rutherford Backscattering Spectrosopy ou RBS), la spectrométrie infrarouge réflexion-adsorption par

modulation de la polarisation (Polarization Modulation-Infrared Reflection-Adsorption Spectroscopy

ou PMIRRAS), la spectrométrie UV-visible ou encore la spectrométrie de résonance magnétique

nucléaire (Nuclear Magnetic Resonance ou NMR). Les mesures effectuées par ce type d’appareillage

permettent de prouver la présence des diazoniums sur l’électrode à l’aide des signaux caractéristiques

des groupements fonctionnels, ou la capacité isolante de la couche organique. La microscopie à force

atomique (Atomic Force Microscopy ou AFM) est quant à elle utilisée pour déterminer l’épaisseur de

la couche organique. On peut citer aussi la spectroscopie Raman ou la microscopie à effet tunnel

(Scanning Tunneling Microscopy ou STM). Toutes ces techniques permettent d’étudier l’influence des

paramètres de dépôt sur la morphologie du film résultant[90].

En plus de donner des informations sur la cinétique de la réaction de dépôt, l’électrochimie, et plus

particulièrement la voltammétrie cyclique, permet une étude approfondie du caractère bloquant de la

couche organique formée. En effet, l’activité rédox de couples électrochimiques tels que celui du

ferrocène, de l’hexacyanoferrate ou de l’hexaaminoruthénium est influencée par l’état de surface de

94
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

l’électrode. Le voltammogramme cyclique obtenu est différent selon que la surface est modifiée ou

non et selon les groupements fonctionnels de la couche. Ainsi, on peut observer une vague

d’oxydoréduction amplifiée, inchangée, amoindrie ou absente selon les cas de figures [27, 28, 32, 86, 88, 91, 92]

et en déduire les paramètres cinétiques de transfert électronique[86, 89, 93, 94]. Il a d’ailleurs été démontré

que la cinétique des réactions électrochimiques de couples rédox sur une électrode modifiée par un

film de diazonium est significativement meilleure après une forte polarisation cathodique [95].

L’hypothèse de la formation de trous dans la couche après ce traitement ayant été écartée, les travaux

ont conclu à l’amélioration de la conductivité de la couche. L’épaisseur de la couche de surface, sa

charge et celle de l’espèce rédox considérée sont autant de paramètres influençant les propriétés de

barrière de la couche organique.

Lorsque des espèces électroactives sont présentes au sein de la couche organique, il est possible de

vérifier la présence du film et même d’accéder de la concentration surfacique (variant autour de 10-10

mol.cm-2) selon les conditions de dépôt[84, 96-100]. Il a d’ailleurs été montré que ces couches organiques

présentent une conductivité homogène dans tout leur volume. En effet, les fonctions actives du film

déposé participent au transfert électronique, et dans certains cas (en présence d’un oxydant ou d’un

réducteur suffisamment fort), le squelette carboné est associé au transfert de charges [101, 102]
. A

l’inverse, les groupements inertes rendent l’électrode similaire à un réseau de microélectrodes. Ce

comportement est expliqué par un film qui ne participe pas (ou très peu) au transfert électronique, ce

dernier ayant lieu préférentiellement dans les interstices de la couche [101]. Ce comportement est connu

dans la bibliographie sous le nom de pinhole effect[88].

La spectroscopie électrochimique d’impédance (Electrochimical Impedance Spectroscopy ou EIS) est

une autre méthode électrochimique intéressante pour caractériser les couches organiques formées [82, 86].

Elle permet de mesurer la résistance au transfert de charge en assimilant l’interface électrode-solution

à un condensateur.

La microscopie électrochimique à balayage (Scanning ElectroChemical Microscopy ou SECM) est

également de plus en plus utilisée pour mettre en évidence la réactivité locale de substrats

95
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

fonctionnalisés[34, 58, 59, 93, 96]. De plus, en se servant de la sonde du dispositif SECM, il est possible

d’induire une formation locale d’ions diazonium qui réagissent avec le substrat à l’endroit précis où ils

sont générés, que ce soit par le biais d’une polarisation cathodique ou d’un greffage spontané [58, 103].

Par ailleurs, il est possible d’utiliser la sonde pour procéder à une attaque radicalaire sur la couche

organique déjà greffée et déterminer son épaisseur[29, 30]

, ou de changer sa conductivité de manière

locale[26, 104].

VII. Applications

La fonctionnalisation covalente agit directement sur les propriétés électrochimiques de l’électrode. En

effet, une électrode modifiée par une couche organique de diazonium voit son domaine

d’électroactivité augmenter, l’oxydation et la réduction du solvant nécessitant de plus grandes

surtensions[105]. De même, il est possible de moduler les propriétés de barrière diffusionnelle des

couches organiques selon le pH de la solution en jouant sur les phénomènes d’attraction/répulsion

entre les fonctions de la couche organique et une sonde rédox[51]. La couche organique constitue aussi

une protection efficace contre la corrosion des métaux[55, 56].

Les diazoniums trouvent également leur utilité dans le captage du CO2[37], dans l’amélioration de la

qualité de résines epoxy[106] et dans le stockage de l’énergie[48], avec par exemple l’élaboration de

supercondensateurs[39] ou de batteries lithium-ion[107]. Plus récemment, les sels de diazonium ont été

utilisés pour le greffage de biofilms dans le cas de piles à combustible microbiennes[108].

En adaptant le groupement fonctionnel, il est possible de fonctionnaliser l’électrode par une grande

variété de composés et ainsi assurer une meilleure stabilité de la liaison électrode-composé par le biais

de la couche de diazonium préalablement greffée. Peuvent être cités en exemple : les nanoparticules

d’or[45, 69, 98, 109-111], de fer[63], des complexes métalliques[20, 84, 96, 97, 99, 100], des polymères[112, 113], des

gels[114], des enzymes[115-117], des anticorps[109], des protéines[118], d’autres biomolécules[119] ou des

96
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

molécules d’ADN[98, . L’emploi de diazoniums dans le domaine médical émerge également,

120, 121]

notamment dans des méthodes de délivrance des médicaments[47].

La modification covalente se conjugue aussi avec la chimie click[44, 97, 122, 123]. Ce concept, introduit par

Sharpless et al.[124] et Meldal et al.[125], se sert de réactions chimiques à rendements élevés. En couplant

les deux procédés, il est ainsi possible de greffer chimiquement des composés une fois la formation de

la couche organique réalisée. Un autre exemple est l’utilisation de films organiques pour améliorer les

propriétés électrochimiques de photorésines[65] ou la catalyse de l’oxydation du méthanol[45].

La réduction de l’oxygène peut également être catalysée en immobilisant des groupements

fonctionnels spécifiques comme l’anthraquinone[126] ou des enzymes[115]. Cet effet catalytique a

également été appliqué à la conception d’un biocapteur pour doser le lactose [116] et le glucose[117] (ou

même sans action complémentaire enzymatique[127]) ou à l’élaboration d’un immonucapteur[109].

D’autres applications analytiques peuvent être envisagées telles que le dosage de contaminants (par

exemple le trichloroéthane[35]), du cuivre[128] (avec ajout de glutathion dans la couche), du plomb par

redissolution anodique[41], de l’hydrazine[96], de l’ADN[98], du paracétamol[101], de l’ammoniac[129] ou

tout simplement la mesure du pH[51, 130].

Les diazoniums ont enfin été intégrés dans le dépôt de couche mixte pour concevoir des systèmes de

purification de l’eau, où sont employées les propriétés piégeuses de différents groupements

fonctionnels envers divers cations métalliques[131].

97
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

B. Approche de la fonctionnalisation de substrat par le nitrobenzène

diazonium

I. Pourquoi ce choix de diazonium ?

La fonctionnalisation par les sels de diazonium passe dans la grande majorité des cas par une étape

préalable de synthèse du diazonium et ce, que ce soit pour un usage immédiat ou en le cristallisant

pour un usage différé. Il est donc nécessaire de maîtriser cette étape afin de ne pas induire d’erreurs

dans le protocole de modification.

Cependant, pour une étude préliminaire, il est préférable de s’affranchir de cette étape et de travailler

avec un sel de diazonium commercialisé. Dans ce contexte, le 4-nitrobenzène diazonium (NBD, figure

II.4) apparaît comme le candidat idéal. Largement utilisé, il possède un groupement nitro (NO 2)

électroactif, rendant possible sa caractérisation électrochimique et spectroscopique une fois la couche

organique greffée.

Figure II.4 – Structure du 4-nitrobenzène diazonium (NBD)

Une fois immobilisé, le groupement nitro participe au transfert électronique au sein de la couche

organique. Ce phénomène permet une réduction plus facile des fonctions diazoniums et favorise la

croissance du dépôt sur une épaisseur importante (figure II.5)[62].

98
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Figure II.5 – Représentation schématique du transfert électronique au sein de la couche organique

Quand la couche est en milieu organique, la fonction nitro est suffisamment stable pour ne pas être

réduite par l’eau résiduelle. Cependant, il faut que le potentiel de l’électrode soit fortement cathodique

(inférieur à -1 V/Electrode au Calomel Saturée (ECS) en milieu organique) (figure II.6) pour que

l’effet catalytique du groupement sur le greffage soit effectif[62].

99
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Figure II.6 – Variation de l’épaisseur de la couche organique de NBD à la surface d’une électrode
d’Au modifiée à partir d’une solution d’ACN contenant du tétrafluoroborate de tétrabutylammonium
(TFBTBA) à 0,1 mol.L-1 en tant qu’électrolyte support et du NBD à 2 mmol.L-1 par 10
voltammogrammes cycliques successifs à 1 V.s-1 en fonction de la limite cathodique de modification
Emodification[62]

En milieu aqueux, la catalyse du dépôt par les fonctions NO2 est possible mais il peut en résulter une

réduction irréversible des fonctions ayant servi au transfert électronique.

II. Applications du nitrobenzène diazonium

Lors des premiers essais de fonctionnalisations de surface par les sels de diazonium, le NBD a surtout

été utilisé pour mener des études fondamentales. Ce diazonium fut notamment employé lors des

travaux précurseurs de Pinson et al.[2] et il devint le diazonium majoritairement utilisé afin de mieux

comprendre les mécanismes mis en jeu lors de la fonctionnalisation. C’est pour cette raison que de

nombreuses publications références d’immobilisation covalente de couches organiques utilisent ce

diazonium[4, 5, 132].

100
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Depuis quelques années, les applications du NBD concernent notamment sa fonction en tant que sonde

électrochimique ou en tant que modificateur des propriétés de surface. D’une part, il a été retenu pour

mettre en évidence la différence de réactivité entre des monocouches et des multicouches de

graphène[133], pour identifier les terminaisons de surface d’une électrode de diamant et évaluer la

densité d’atomes d’hydrogène liés à la surface[134], ou encore pour l’élaboration de microstructures

électrochimiques sur carbone[135]. D’autre part, le NBD est connu pour modifier les propriétés

électriques de transistors à effet de champ en graphène[136] ou pour aider à l’immobilisation covalente

de modèles organométalliques d’enzymes sur des surfaces de carbone vitreux[137].

III. Réactivité électrochimique du nitrobenzène diazonium

La réaction de greffage du NBD est la même que pour tout greffage de sels de diazonium (réaction

II.7).

Réaction II.7

Cependant, il a été mis en évidence que la réduction des fonctions nitro NO2 en milieu acide mène à la

formation de groupes hydroxylamine NHOH[81, 85, 138]

(réaction II.8) qui participent au couple

réversible nitroso/hydroxylamine (NO/NHOH) (réaction II.9). De plus, une réduction supplémentaire

conduit à l’amination des groupements hydroxylamine préalablement formés pour générer des

groupements amine NH2 (réaction II.10).

101
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Réaction II.8

Réaction II.9

Réaction II.10

Certains travaux ont qualifié les fonctions NHOH d’intermédiaire dans l’amination de NO2, émettant

l’hypothèse qu’il existe une réaction à 6 électrons menant aux fonctions NH2[85] (réaction II.11).

Réaction II.11

102
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

En milieu organique, NO2 est réduit en son radical anion NO2•-, espèce particulièrement instable. A des

vitesses de balayage élevées, il est toutefois possible d’observer son oxydation à 1,2 V/ECS[5] (réaction

II.12 et figure II.7).

Réaction II.12

Figure II.7 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution d’ACN contenant du TFBTBA à
0,1 mol.L-1 en tant qu’électrolyte support avec a) une électrode de CV modifiée par un film de NBD b)
une électrode de CV non modifiée[5].

IV. Incertitudes autour du mécanisme réactionnel

Il existe donc quatre formes possibles en milieu acide pour les groupements fonctionnels dérivés

de l’azote (figure II.8) : NO2, NO, NHOH et NH2. Ils représentent tout autant de possibilités de

moduler les propriétés de surface de la couche organique.

103
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Figure II.8 – Fonctions formées à partir de la fonction nitro

Malgré de nombreux travaux comparatifs concernant l’influence du substrat ou de l’électrolyte

support[71, 77, 81] sur la réduction électrochimique du NBD, le mécanisme global reste encore incertain et

donne lieu à des interprétations contradictoires.

En effet, en examinant la courbe typique que rapportent l’ensemble des publications sur la réduction

du NBD en milieu acide, un ou deux pics peuvent être observés de manière aléatoire, aux potentiels de

0,4 V/ECS et de 0,05 V/ECS (figure II.9) sans qu’aucune raison claire ne soit invoquée pour justifier

de cette différence.

104
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
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i (unités arbitraires)

E (V/ECS)

-0,3 -0,2 -0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7

Figure II.9 – Exemples de voltammogrammes cycliques tracés avec une électrode de CV dans une
solution acide contenant du NBD. ( ‒ ) courbe n°1, ( - - )courbe n°2.

L’équipe de Downard a remarqué que le premier pic à 0,4 V (courbe n°1) n’est pas toujours présent et

que le courant correspondant varie d’une expérience à l’autre[81]. Au contraire, Baranton et Bélanger

ont systématiquement observé ce pic à 0,4 V sans l’identifier et attribué à la réduction du diazonium le

pic à 0,05 V (courbes n°1 et n°2)[18, 77]. Etant donné que l’origine du premier pic à 0,4 V est restée

inconnue, beaucoup de chercheurs ont opté pour des valeurs de potentiels de dépôt inférieures à 0 V.

La couche résultante contenant à la fois des fonctions NO2 et NHOH, il fut supposé que le greffage du

NBD et la réduction du groupement NO2 en NHOH arrivaient de manière simultanée[5, 81, 106, 138-140].

Très récemment, Cline et al. ont suggéré pour la toute première fois un processus de greffage

s’effectuant à des potentiels moins cathodiques sans fournir davantage d’explications sur les espèces

greffées[87].

La détermination du mécanisme exact de réduction du NO2 revêt un intérêt majeur pour maîtriser au

mieux les propriétés de la couche organique, étant donné que la nature oxydée ou réduite du

105
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

groupement fonctionnel, i.e. NO2, NO, NHOH ou NH2, influence grandement les propriétés de

surface.

C’est pourquoi la première partie de ces travaux a consisté à élucider ce mécanisme encore trop obscur

pour utiliser au mieux les potentialités de la fonctionnalisation par les diazoniums.

106
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
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C. Produits chimiques et solutions

I. Produits chimiques

Le tableau II.1 regroupe l’ensemble des produits chimiques utilisés lors de cette étude.

Nom Formule Fournisseur Rôle

Eau distillée MilliQ
H 2O Solvant aqueux
18 Mcm
Désaération de toutes
Azote gazeux N2
les solutions
Tétrafluoroborate de 4-
Fonctionnalisation de
nitrobenzène C6H4N3O2BF4 Aldrich
la surface de CV
diazonium (NBD) 97%
Hexacyanoferrate (III)
K3Fe(CN)6 Sigma – Aldrich Sonde rédox
de potassium 99%
Trichlorure
Ru(NH3)6Cl3 Alfa Aesar Sonde rédox
d’hexaaminoruthénium
Ferrocèneméthanol
C11H12FeO Acros Organics Sonde rédox
97% (FcMeOH)
Tétrafluoroborate de
Electrolyte support
tétrabutylammonium C16H36BF4N Acros Organics
dans solvant organique
(TFBTBA)
Tampon phosphate
Dihydrogénophospate
KH2PO4 Acros Organics PBS (Phosphate Buffer
de potassium 99%
Solution)
Tampon phosphate
Hydrogénophosphate
K2HPO4 Acros Organics PBS (Phosphate Buffer
de di-potassium 99%
Solution)
Tampon carbonate
Hydrogénocarbonate
NaHCO3 Fischer Chemical CBS (Carbonate
de sodium 99%
Buffer Solution)
Solution acide par
Acide chlorhydrique
HCl VWR dilution dans eau
37%
Milli-Q
Hexafluorophosphate
KPF6 Alfa Aesar Electrolyte support
de potassium 97 %
Réactif de synthèse du
Aniline
C6H7N Fluka phényldiazonium
99,5%
(PhD)
Réactif de synthèse du
Nitrite de sodium
NaNO2 Sigma phényldiazonium
99,5%
(PhD)

Tableau II.1 – Listes des produits chimiques

107
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II. Préparation des solutions

La solution de tampon phosphate est obtenue en mélangeant des solutions de KH2PO4 à 0,1 mol.L-1 et

de KH2PO4 à 0,1 mol.L-1. Le pH est fixé à 7.

Les solutions de tampon carbonate sont préparées à partir d’une solution de NaHCO3 à 0,1 mol.L-1

additionnée de HCl concentré. Deux solutions sont préparées, à pH 5 et à pH 6.

108
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
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D. Appareillage et méthodes

I. Appareillage

Le tableau II.2 présente le matériel essentiel utilisé pour ces travaux.

II. Méthodes

a. Polissage des électrodes

Avant chaque utilisation, les embouts et les plaques de carbone vitreux utilisés comme électrodes de

travail sont manuellement polis avec de la poudre de diamant de granulométrie 9 µm, 3 µm et 1 µm,

provenant de Presi. Après chaque étape, les électrodes sont consciencieusement rincées avec de l’eau

Milli-Q puis passées aux ultrasons dans l’éthanol pendant 5 minutes de manière à retirer toutes les

impuretés.

Après chaque fonctionnalisation, les électrodes sont également rincées et passées aux ultrasons dans

l’éthanol pendant 5 minutes de manière à éliminer les parties de la couche organique faiblement

adsorbées et qui ne sont pas vraiment liées de manière covalente au substrat.

b. Détermination de la surface active

Après chaque polissage, la surface active de l’électrode est déterminée. Pour ce faire, plusieurs

voltammogrammes à balayage linéaire de potentiel sont tracés pour différentes vitesses de rotation de

l’électrode dans une solution de Fe(CN)63- de concentration connue (entre 1 et 10 mmol.L-1). On

observe une vague de réduction (figure II.10) correspondant à la réaction II.13 :

Réaction II.13 Fe(CN)63- + e- → Fe(CN)64-

109
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
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Informations
Nom Illustration
supplémentaires

Potentiostat piloté par un

µAutolab II
ordinateur équipé du
Metrohm (Pays-
logiciel NOVA version
Bas)
1.7.

Electrode
tournante
Corps d’électrode de
Radiometer +
travail.
Commande de
vitesse de rotation

Électrode au
Calomel Saturée Electrode de référence,
(ECS) séparée de la cellule par
(Hg/Hg2Cl2/Cl-) un capillaire de Luggin.
Radiometer
Electrode de
Electrode auxiliaire
Platine Metrohm
Plaque de
Carbone Vitreux
Electrode de travail fixée
(CVp)
sur l’électrode tournante
diamètre = 5,5 mm
par un porte-échantillon
Origalys

Embout Carbone
Vitreux (CV) de
Electrode de travail
diamètre = 3 mm
Radiometer

Spectromètre K
Appareil pour faire les
alpha de Thermo
mesures de XPS
Scientific

Tableau II.2 – Liste des appareils

110
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Le courant limite obtenu pour chaque courbe est donné par la loi de Levich :

Equation II.1

Avec :

ilim = courant limite de diffusion (A)

n = nombre d’électrons échangés

F = constante de Faraday = 96500 C.mol-1

A = surface d’électrode (cm²)

D = coefficient de diffusion de l’espèce en solution (cm².s-1)

= viscosité cinématique du solvant (cm².s-1) = 10-10 cm2.s-1 pour l’eau

= vitesse de rotation de l’électrode (rad.s-1)

C = concentration de l’espèce en solution (mol.cm-3)

0,00E+00
0 i (µA)

-50
-5,00E-05

-100
-1,00E-04

1000
1000tours
rpmpar minute
-150
-1,50E-04
1500
1500tours
rpmpar minute
2000tours
2000 rpmpar minute
-200
-2,00E-04
2500tours
2500 rpmpar minute
3000tours
3000 rpmpar minute
-250
-2,50E-04

E (V/ECS)
-300
-3,00E-04
-0,5 -0,4 -0,3 -0,2 -0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4

Figure II.10 – Voltammogrammes linéaires tracés avec une électrode à disque tournant de CV dans une
solution aqueuse de KPF6 à 0,1 mol.L-1 (pH 3,5) contenant du Fe(CN)63- à 5 mmol.L-1. v = 0,005 V. s-1.
Influence de la vitesse de rotation de l’électrode.

111
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

En connaissant les valeurs de D (5,5 10-6 cm².s-1)[141], de n (1 électron) et de C, la surface active de

l’électrode peut être calculée à partir de la pente de la droite ilim = f( 1/2

) (figure II.11).

ilim (µA)
300
3,00E-04
y = 1.39E-05x + 7.69E-06
R² =1

2,00E-04
200

100
1,00E-04

ω1/2 (rad1/2.s-1/2)
0
0,00E+00
10 12 14 16 18 20

Figure II.11 – Variation de la valeur absolue du courant limite cathodique ilim mesuré à E = -0,3
V/ECS en fonction de la racine carrée de la vitesse de rotation de l’électrode de CV.

Dans ce cas, on obtient A = 7,81 10-2 cm² (soit un diamètre de 0,32 cm) de alors que Agéométrique = 7,06

10-2 cm² (et un diamètre de 0,30 cm).

Cette différence peut s’expliquer par la rugosité de la surface du carbone vitreux qui augmente la

surface réelle de l’électrode. Ici, le facteur de rugosité est donc de 1,1.

E. Etude mécanistique de la réduction du nitrobenzène diazonium

La figure II.12 représente les deux premiers balayages successifs enregistrés sur une électrode de CV

plongée dans une solution d’acide chlorhydrique de pH 1 contenant du NBD à 2,5 mmol.L-1. Le

balayage commence au potentiel à courant nul de 0,65 V/ECS et est effectué vers les potentiels

cathodiques.

112
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

30 i (µA)

20
IV
10 VII

0
V

I
-10 VI
II
Potentiel de départ
-20

-30

-40

-50
III
-60
E (V/ECS)
-70
-1 -0,8 -0,6 -0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

Figure II.12 – Voltammogrammes cycliques tracés sur une électrode de CV dans une solution aqueuse
de HCl 0,1 mol.L-1 (pH 1) contenant du NBD à 2,5 mmol.L-1. ( – )1er cycle, ( - - ) 2ème cycle. v = 0,1
V.s-1.

Au premier cycle, trois pics de réduction distincts sont observés aux potentiels respectifs de 0,4V (pic

I), 0,05 V (pic II) et -0,6 V (pic III). Au balayage retour, deux pics d’oxydation apparaissent à 0,27 V

et 0,45 V (pic IV et VII respectivement). Au second cycle de potentiel, les pics V et VI, situés à 0,35

et 0,17 V respectivement, apparaissent, tandis que le pic III diminue fortement. En oxydation, le pic

IV voit son intensité diminuer. Cette courbe de dépôt est comparable avec les données reportées dans

la bibliographie pour le NBD (cf. section B.3 de ce chapitre). Ainsi, en tenant compte de ces

informations, chaque pic peut être attribué à une réaction électrochimique comme le montre le tableau

II.3 :

113
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Attribution
Cycle de Potentiel
Pic Evolution (issue des données
potentiel (V/ECS)
bibliographiques)
I 1 0,4 Disparait dès le second balayage Inconnu[8, 77]
Réduction de la
fonction
II 1 0,05 Disparait dès le second balayage
diazonium[10]
(réaction II.7)
Réduction des
fonctions NO2 en
Diminue au fur et à mesure des
III 1 et 2 -0,6 NHOH et NH2[85,
cycles jusqu’à disparaitre 138]
(réactions II.8,
II.10 et II.11)
Oxydation des
Diminue au fur et à mesure des fonctions NHOH
IV 1 et 2 0,27
cycles jusqu’à disparaitre en NO[81]
(réaction II.9)
Réduction du
groupe quinonique
du CV formé lors
V 2 0,35 Reste constant
de fortes
polarisations du
substrat[142]
Réduction des
Diminue au fur et à mesure des fonctions NO en
VI 2 0,17
cycles NHOH[81]
(réaction II.9)
Oxydation du
groupe quinonique
du CV formé lors
VII 1 et 2 0,45 Reste constant
de fortes
polarisations du
substrat [142]
Tableau II.3 – Caractéristiques et attributions des pics observés à la figure II.12

Dans un premier temps, notre attention s’est portée sur les pics I et II qui font débat au sein de la

communauté scientifique (cf. paragraphe B IV). Dans l’optique d’une meilleure maîtrise des fonctions

de surface, le mécanisme de réduction électrochimique du NBD doit être élucidé. Cette exigence passe

par une étude approfondie de l’origine du pic I, souvent observé mais jamais identifié.

114
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

I. Différenciation entre greffage et hydroxylamination

a. Influence de l’état de surface du carbone vitreux et du solvant

Les figures II.13 et II.14 présentent les courbes enregistrées sur une électrode nue de CV dans une

solution de NBD en milieu acide et organique, respectivement. Deux cas de figures sont présentés,

l’un avec une électrode polie de manière consciencieuse comme décrit dans la partie D.II.a. de ce

chapitre, appelée « CV poli » (courbes en trait plein), et l’autre avec une seconde électrode

grossièrement polie avec la poudre de diamant la plus abrasive, 9 µm, appelée « CV non poli »

(courbes en pointillés).

2 i (µA)

-1

-2

-3

-4

-5
E (V/ECS)
-6
-0,3 -0,2 -0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7

Figure II.13 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution aqueuse de HCl 0,1 mol.L-1 (pH
1) contenant du NBD à 2,5 mmol.L-1 sur une électrode de CV polie ( – ) et non polie ( - - ).
v = 0,1 V.s-1. Ei = 0,5 V/ECS, balayage vers les potentiels cathodiques.

115
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

2 i (µA)

-1

-2

-3

-4

E (V/ECS)
-5
-0,3 -0,2 -0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7

Figure II.14 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution d’ACN contenant du TFBTBA à
0,1 mol.L-1 et du NBD à 2,5 mmol.L-1 sur une électrode de CV polie ( – ) et non polie ( - - ). v = 0,1
V.s-1. Ei = 0,5 V/ECS, balayage vers les potentiels cathodiques.

Sur une électrode de CV polie, un signal cathodique est systématiquement présent aux alentours de 0,4

V quel que soit le milieu dans lequel est tracée la courbe. De plus, un second pic est visible à 0,05 V

sur une électrode bien polie en milieu HCl (figure II.13, courbe trait plein), prouvant ainsi que deux

réductions distinctes ont lieu en milieu aqueux. En comparaison, aucune réduction supplémentaire

n’est observée dans l’ACN dans la même gamme de potentiel (figure II.14, courbe trait plein). Bien

que la valeur du potentiel de ce second pic soit proche de celle calculée par Andrieux et Pinson pour la

formation du radical phényl (E°’ = 0,05 V, réaction II.1), cette réaction ne fut observée qu’à -0,63

V/ECS (loin de la gamme de potentiels utilisée pour cette expérience) dans un milieu aprotique [10]. De

plus, la vitesse de balayage des potentiels utilisée est trop lente pour être propice à l’observation

d’espèces radicalaires. Ces observations sont en accord avec le fait que la réduction du NO 2 en milieu

aprotique ne permet pas la formation de NHOH mais de son anion radicalaire NO 2•- à des potentiels

très cathodiques[11]. On peut en déduire qu’en milieu ACN, le pic à 0,4 V correspond au seul greffage

du NBD.

116
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Sur les électrodes grossièrement polies, un seul pic cathodique, très large, est observé à 0,05 V (figure

II.13 et II.14, courbes en pointillés). Ce résultat confirme que la présence du pic à 0,4V est fortement

corrélée à l’état de surface, comme Cline et al. l’ont précédemment suggéré[87]. Leur hypothèse se base

sur des rugosités de la surface de carbone qui initie deux pics durant le greffage. Cette proposition

trouve toutefois sa limite dans les différences observées en milieux organique et aqueux.

La question qu’il devient légitime de se poser peut donc être formulée de la manière suivante :

puisqu’en milieu aqueux (figure II.13), un pic est observé à 0,05 V quel que soit l’état de surface du

CV, quelle est la nature de la réaction se produisant à 0,4 V ? En d’autres termes, des électrolyses

différentes, réalisées à ces 2 potentiels (0,4 V et 0,05 V), mènent-elles à la même couche organique

greffée ?

Pour répondre à ces questions, plusieurs expériences de dépôt ont été menées.

b. Influence du potentiel de greffage

Pour identifier la réaction qui a lieu à 0,4 V, une électrolyse à potentiel constant de 0,3 V a été

effectuée pendant 300 s dans une solution de HCl 0,1 mol.L-1 (pH 1) contenant du NBD concentré à

2,5 mmol.L-1 avec une électrode fraîchement polie. Ce potentiel a été choisi de manière à ce que la

réaction étudiée soit contrôlée par la diffusion (d’après la figure II.13).

Les deux premiers voltammogrammes cycliques enregistrés dans une solution de HCl à 0,1 mol.L-1

(pH 1) avec l’électrode ainsi modifiée sont représentés à la figure II.15.

117
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

2 i (µA)

1
NHOH → NO

NHOH ← NO
-1

-2

-3

NHOH ← NO2
-4

E (V/ECS)
-5
-0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

Figure II.15 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1
(pH 1) sur une électrode de CV non-modifiée (en noir) et de CV modifiée par électrolyse à 0,3 V
pendant 300 s dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1) contenant du NBD à 2,5
mmol.L-1 (1er cycle en bleu, 2ème cycle en rouge). v = 0,1 V.s-1.

En débutant l’expérience à 0.4 V et en balayant les potentiels dans le sens cathodique, un pic de

réduction est observé à -0,1 V (courbe bleue). Au balayage retour, un pic d’oxydation est visible à 0.3

V. Par comparaison, aucun signal n’est observé sur une électrode de CV ayant subi la même

électrolyse dans une solution de HCl ne contenant pas de NBD (courbe noire). On peut donc en

déduire que l’électrolyse réalisée à 0,3 V dans la solution de NBD induit un greffage de fonctions

électrochimiquement actives à la surface de l’électrode. Au deuxième cycle, le pic de réduction situé à

-0.1 V disparaît en partie, tandis qu’un système quasi-réversible centré à 0,21 V devient visible

(courbe rouge), qui inclut le pic d’oxydation à 0.3 V observé précédemment. Ce système peut être

associé au couple rédox NO/NHOH[11] (réaction II.9).

Il est intéressant de noter qu’avant le pic de réduction à -0,1 V lors du premier cycle (courbe bleue),

aucun autre signal cathodique n’est observé. Par conséquent, aucune fonction NHOH n’est produite

118
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

par l’électrolyse à 0,3 V. De ce fait, la réduction de NO2 en NHOH se produit bien à -0,1 V. Le fait

que le pic correspondant ne disparaît pas complètement lors du second balayage (courbe rouge)

semble indiquer que seules les fonctions les plus accessibles sont réduites durant le premier cycle.

Cette hypothèse sera d’ailleurs vérifiée ultérieurement dans ce chapitre (cf. section E.II.b.).

Tous ces résultats montrent de façon claire que le greffage du NBD a lieu pendant l’électrolyse à 0,3

V, potentiel moins cathodique que ceux reportés dans la bibliographie[11, 18, 77, 81, 85, 138]. D’autre part, à

ce potentiel, les fonctions NO2 ne sont pas réduites en NHOH.

Il est donc possible de distinguer le greffage de NBD (à 0,3V) de la réduction des fonctions NO2

greffées (se produisant à -0,1 V). Cette observation est contraire à ce que suggéraient les équipes de

Downard[81] ou de Savéant[11] qui effectuent des greffages à des potentiels plus cathodiques que

nécessaires (à respectivement -0,3 et -0,2 V/ECS) induisant de manière concomitante au greffage la

réduction des fonctions NO2 et la formation de fonctions NHOH au sein de la couche.

Pour valider les conclusions issues de ces premiers résultats, une série d’expériences complémentaires

a été effectuée. En tenant compte des conditions expérimentales et des potentiels des pics I et II de la

figure II.12, plusieurs types d’électrodes ont été définis. Les protocoles de préparation de ces

électrodes sont indiqués dans le tableau II.4.

Nom Protocole expérimental

CV Polissage + Ultrasons
Electrolyse à 0,3 V pendant 300 s dans une solution aqueuse de HCl à 0,1
CV-NO2
mol.L-1 (pH 1) contenant du NBD à 2,5 mmol.L-1
CV plongé pendant 300 s dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1
CV-NO2 (sp)*
(pH 1) contenant du NBD à 2,5 mmol.L-1
CV-NO2 polarisé à -0,1 V dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1
CV-NHOH
(pH 1)
CV-NO2 (sp) polarisé à -0,1 V dans une solution aqueuse de HCl à 0,1
CV-NHOH (sp)*
mol.L-1 (pH 1)
*Les électrodes avec l’appellation (sp) correspondent aux électrodes de CV avec une couche organique induite
par un greffage spontané. Les utiliser permet de différencier une réduction spontanée du diazonium de celle
réalisée par électrolyse.

Tableau II.4 – Protocole expérimental des électrodes fonctionnalisées

119
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
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La figure II.16 montre les voltammogrammes cycliques enregistrés dans une solution de HCl à 0,1

mol.L-1 (pH 1) en l’absence de NBD avec les électrodes CV, CV-NO2 et CV-NHOH.

1,5
i (µA)

0,5

-0,5

E (V/ECS)
-1
-0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9

Figure II.16 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1
(pH 1) sur une électrode CV (en noir), CV-NO2 (en bleu) et de CV-NHOH (en rouge). v = 0,1 V.s-1.

Le signal enregistré avec l’électrode CV-NO2 (courbe bleue) est plus capacitif que celui observé sur

CV nue (courbe noire), confirmant ainsi qu’un greffage se produit durant l’électrolyse à 0,3 V. Par

ailleurs, aucun signal correspondant au couple NO/NHOH n’est observé (réaction II.9). En effet, la

borne maximale du potentiel choisi est 0 V. Ce potentiel n’est pas suffisamment cathodique pour

réduire efficacement les fonctions NO2 en NHOH (figure II.15). Seul un signal de faible intensité

centré à 0,3 V est observé sur CV et CV-NO2. Cette activité électrochimique est caractéristique des

fonctions quinone et est souvent observée sur CV après polarisation [142-144]. Tous ces résultats sont

similaires quand CV-NO2 est généré dans l’ACN.

Ces observations confirment qu’un greffage se produit par électrolyse à 0,3 V dans une solution de

NBD et donne ainsi naissance à une couche organique avec des fonctions NO2.

120
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Afin d’obtenir des informations supplémentaires sur la couche organique, l’électrode CV-NO2 est

polarisée au potentiel de -0,1 V pendant 300 s dans une solution de HCl à 0,1 mol.L-1 pour obtenir

l’électrode CV-NHOH (tableau II.4). La courbe enregistrée avec cette nouvelle électrode dans un

milieu acide sans NBD montre une activité rédox centrée à 0,21 V (courbe rouge). Les expériences

suivantes ont été effectuées pour confirmer l’identité de ce couple rédox.

La figure II.17 montre l’influence de la vitesse de balayage des potentiels (comprise entre 5 et 200

mV.s-1) sur l’intensité des pics centrés à 0,21 V, en réduction (en rouge) et en oxydation (en bleu).

1 i pic (µA)

0,8

0,6

0,4

0,2
v (V.s-1)
0
0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25
-0,2

-0,4

-0,6

-0,8

-1

Figure II.17 – Variation de l’intensité des pics d’oxydation (en bleu) et de réduction (en rouge) du
couple centré à 0,21 V observé avec CV-NHOH dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1
(pH 1) en fonction de la vitesse de balayage des potentiels v.

Les courants des pics anodique et cathodique varient linéairement avec la vitesse de balayage. Cela

suggère que les espèces électroactives impliquées dans la réaction sont situées à la surface de

l’électrode[145].

121
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

La figure II.18 montre quant à elle l’influence de la vitesse de balayage sur le potentiel des pics

anodique et cathodique. Deux séries de voltammogrammes ont été tracées, l’une dans une solution de

HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1), l’autre dans une solution de PBS à 0,1 mol.L-1 (pH 7).

0,4 Epic (V/ECS)

0,3

0,2

0,1
v (V.s-1)
0
0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25

-0,1

-0,2

-0,3

Figure II.18 – Variation du potentiel des pics d’oxydation (•) et de réduction (x) du couple observé sur
CV-NHOH dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1 (en bleu) ou de PBS à 0,1 mol.L-1 (en
rouge) en fonction de la vitesse de balayage des potentiels v.

Les valeurs des potentiels de pic varient très peu avec la vitesse de balayage des potentiels puisqu’à

pH 1, le pic anodique étant situé à 278 ± 7 mV/ECS et le pic cathodique à 198 ± 14 mV/ECS. De la

même façon, à pH 7, le pic anodique est observé à -73 ± 14 mV/ECS et le pic cathodique à -207 ± 30

mV/ECS. L’écart moyen entre les pics anodique et cathodique est donc de 80 mV à pH 1 et de 134

mV à pH 7. Ces observations sont cohérentes avec la présence d’un couple dont la cinétique de

transfert de charge est favorisée à pH acide, ce qui suggère la participation de protons dans la réaction

électrochimique. De plus, le potentiel des pics est relativement constant quelle que soit la vitesse de

balayage. Le couple rédox étudié présente des caractéristiques cinétiques proches de celles d’un

122
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

système rapide[145]. Enfin, la différence de potentiel de pic (ca. 80 mV à pH 1) suggère un couple quasi

réversible[145].

La figure II.19 rapporte la variation du potentiel des pics d’oxydation (en bleu) et de réduction (en

rouge) en fonction du pH de la solution.

0,4 E pic(V/ECS)

0,3

0,2

0,1

pH
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8

-0,1

-0,2

-0,3

Figure II.19 – Variation du potentiel des pics d’oxydation (en bleu) et de réduction (en rouge) du
couple rédox observé sur CV-NHOH en fonction du pH de la solution. Solutions préparées : HCl à 1
mol.L-1 (pH 0), 0,1 mol.L-1 (pH 1) et à 0,01 mol.L-1 (pH 2), KPF6 à 0,1 mol.L-1 (pH 3,5), CBS à 0,1
mol.L-1 (pH 5 et pH 6) et PBS 0,1 mol.L-1 (pH 7). v = 0,1 V.s-1.

Les pentes des deux droites obtenues (-50 et -63 mV par unité pH pour l’oxydation et pour la

réduction respectivement) ont des valeurs très proches de la valeur théorique de 60 mV par unité pH

attendue dans le cas d’une réaction électrochimique impliquant un nombre identique de protons et

d’électrons[145]. Ces résultats obtenus confirment donc la présence d’un processus rédox qui est le siège

d’échange de proton(s).

123
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Pour résumer :

 La figure II.16 montre qu’une électrolyse réalisée à 0,3 V dans une solution de NBD induit la

présence d’une couche organique à la surface (courbe bleue). Polariser à -0,1 V l’électrode

ainsi modifiée dans une solution de HCl à 0,1 mol.L-1 fait apparaître un nouveau couple rédox

centré à 0,21 V à pH 1 (courbe rouge).

 La figure II.17 démontre que le couple rédox en question est immobilisé à l’électrode.

 La figure II.18 montre que le couple considéré est quasi-réversible avec une cinétique de

transfert de charge rapide en milieu acide.

 La figure II.19 suggère que la réaction rédox implique autant de protons que d’électrons.

Toutes ces données sont en accord avec la présence du couple NO/NHOH (réaction II.9) à la surface

de l’électrode. En effet, il s’agit d’un système réversible et rapide échangeant 2 protons et 2 électrons.

Par ailleurs, le potentiel standard apparent de 0,21 V à pH 1 est très proche de la valeur de 0,19 V

mentionnée dans la bibliographie[81].

Rappelons que l’électrode CV-NHOH a été obtenue par électrolyse d’une solution ne contenant pas de

NBD à partir de CV-NO2. Cela montre irréfutablement que les fonctions NO2 étaient présentes à la

surface de l’électrode dès après la première électrolyse à 0,3 V. L’ensemble de ces résultats prouve

donc que la réduction de la fonction diazonium (réaction II.7) se produit à 0,3 V et ce, sans altérer les

fonctions NO2. Ces dernières, immobilisées à l’électrode, sont ensuite réduites en NHOH (réaction

II.8) au potentiel de -0,1 V.

La quantité de fonctions NHOH ou NO électroactives au sein de la couche organique peut être estimée

par le calcul de la valeur de la concentration surfacique des fonctions NO et NHOH. Cette

concentration est déterminée à l’aide de l’intégration du pic cathodique observé avec l’électrode CV-

NHOH (figure II.16, courbe rouge) entre 0 et 0,3 V, après soustraction du courant résiduel. La valeur

QNHOH obtenue permet ensuite d’estimer NO/NHOH selon l’équation II.2 :

Equation II.2 

124
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Avec :

NO/NHOH = concentration surfacique de fonctions NO et NHOH (mol.cm-2)

QNHOH = charge électrique correspondant à la réduction de NO en NHOH (réaction II.9) (C)

n = 2 pour la réaction II.9

On obtient une concentration surfacique de  = 1,5 × 10-10 mol.cm-2, valeur proche de celles

trouvées dans la bibliographie pour la formation de multicouches[11, 81]. Cependant, des durées de dépôt

supérieures à la dizaine de secondes induisent la formation de multicouches organiques. De ce fait, il

est possible que certaines fonctions NO2 et/ou NHOH ne soient plus actives électrochimiquement et

que la concentration  obtenue ne corresponde qu’aux fonctions NHOH accessibles. Cette

valeur est donc minorée par la présence éventuelle de fonctions NHOH inertes et le fait que des

fonctions NO2 n’ont pas été réduites lors de la préparation de l’électrode de CV-NHOH.

La figure II.20 montre les voltammogrammes cycliques tracés en milieu HCl à 0,1 mol.L -1 avec une

électrode de CV, de CV-NHOH (sp) et de CV-NHOH. Cette dernière électrode a été obtenue par deux

électrolyses successives de 300 s chacune, aux potentiels de 0,3 V et -0,1 V dans une solution aqueuse

de HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1) contenant du NBD à 2,5 mmol.L-1.

1,5
i (µA)

0,5

-0,5

-1

E (V/ECS)
-1,5
-0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9

Figure II.20 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1
(pH 1) avec une électrode CV (en noir), CV-NO2 (sp) (en bleu) et de CV modifiée par 2 électrolyses
successives de 300 s à 0,3 V et -0,1 V dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1)
contenant du NBD à 2,5 mmol.L-1 et du HCl à 0,1 mol.L-1 (en rouge). v = 0,1 V.s-1. 125
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Il est intéressant de constater que lorsque l’électrode de CV est simplement plongée dans la solution de

NBD (formation de CV-NO2 (sp), voir Tableau II.4) puis polarisée à -0,1 V dans HCl à 0,1 mol.L-1

(formation de CV-NHOH (sp), voir Tableau II.4), le couple NO/NHOH est également observé au

potentiel de 0,21 V (courbe bleue), mais de manière moins prononcée que dans le cas de CV-NHOH

(figure II.16, courbe rouge). La concentration surfacique NO/NHOH calculée est de 0,35 × 10-10 mol.cm-
2
, valeur en accord avec celles reportées dans la bibliographie pour un greffage spontané[15, 57, 146]. Cette

valeur est plus faible que dans le cas d’un greffage électroassisté utilisé pour la préparation de CV-

NHOH (1,5 × 10-10 mol.cm-2). La comparaison de ces deux valeurs de concentrations surfaciques

obtenues prouve donc que l’électrolyse de la solution de NBD effectuée au potentiel de 0,3 V induit le

greffage de davantage de fonctions NO2. De plus, le signal mesuré sur CV-NHOH (sp) témoigne d’un

courant capacitif similaire à celui sur CV (courbe noire) et moins important que celui sur CV-NHOH

(figure II.16, courbe rouge). Cette observation est en accord avec la présence d’une couche organique

de plus faible épaisseur que dans le cas de CV-NHOH. Cela permet une nouvelle fois de montrer

qu’un greffage électrochimique a bien lieu lors de l’électrolyse à 0,3V.

Lorsque les deux électrolyses successives à 0,3 V et -0,1 V sont réalisées dans la solution de NBD, le

système NO/NHOH est également présent (courbe rouge). Un autre système relativement mal défini

est également visible à 0,36 V. Ce dernier peut être expliqué par la présence de fonctions NO/NHOH

dans un environnement électronique différent. En effet, la succession des deux électrolyses induit un

greffage hétérogène. Cette méthode de dépôt conduit à la formation d’une couche organique plus

épaisse et plus désordonnée, augmentant les différences locales de structure [139]. C’est pourquoi il

semble judicieux de séparer le dépôt du diazonium (réaction II.7) et l’hydroxylamination des fonctions

NO2 greffées (réaction II.8) afin de rendre les électrolyses plus efficaces. Ceci n’est toutefois possible

que sur des électrodes de CV bien polies où le premier pic de réduction de NBD apparaît à 0,4 V

(figure II.13, courbe bleue).

126
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

c. Caractérisation par spectrométrie photoélectronique X

La spectrométrie photoélectronique X (XPS ou X-Ray photoelectron spectrometry) est une méthode

analytique qui consiste à irradier un échantillon par un faisceau de rayons X et provoquer l’ionisation

de ses atomes par effet photoélectrique. L’échantillon émet des électrons dont l’énergie est

caractéristique des liaisons atomiques. Cet outil apparaît comme une alternative intéressante à

l’électrochimie pour étudier des couches organiques formées à partir de NBD et corroborer les

résultats exposés dans la partie précédente.

La figure II.21 présente les spectres XPS obtenus avec les électrodes CV (spectre A), CV-NO2 (spectre

B) et CV-NHOH (spectre C).

Intensité (unités arbitraires)

Intensity / arbitrary units

412 410 408 406 404 402 400 398 396 394 392 390

Binding
Energie energy /(eV)
de liaison eV

Figure II.21 – Spectres XPS pour une électrode de CV (spectre A), CV-NO2 (spectre B) et de CV-
NHOH (spectre C)

Sur CV-NO2 (spectre B), 2 pics à 400 et 406 eV sont observés. Par comparaison, un seul pic à 400 eV

est observé sur CV (spectre A). D’après les données bibliographiques, le pic à 406eV est clairement

127
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

attribuable aux fonctions NO2[147, 148]. La comparaison des deux spectres A et B prouve une nouvelle

fois qu’un greffage se produit lors de l’électrolyse à 0,3 V de la solution de NBD puisque des

fonctions NO2 sont bien présentes à la surface de l’échantillon B. Le pic à 400 eV a une intensité plus

importante sur CV-NO2 que celui sur CV. Bien qu’il soit plus difficile à identifier, il peut être imputé à

plusieurs groupements chimiques comprenant des fonctions azotées. Ortiz et al. suggèrent une

contribution complexe de plusieurs formes réduites de l’azote[85] comme NH2, NHOH ou des groupes

azo (R-N=N-R’). Dans le cas de l’électrode de CV-NO2, l’hypothèse d’une présence de groupements

NHOH actifs est réfutée par l’analyse voltammétrique qui ne montre pas d’activité rédox dans la zone

correspondant au couple NO/NHOH (figure II.16, courbe bleue). On peut envisager que la durée

d’électrolyse conséquente (300 s) favorise la formation de groupements azo comme le prouvent les

travaux de Doppelt et al.[149]. Une autre hypothèse est que les groupements nitro puissent avoir été

réduits en fonctions NH2 ou NHOH sous l’effet du faisceau de l’XPS[13, 150]. La présence du pic à 400

eV sur CV a déjà été mentionnée dans la bibliographie mais son origine n’a jamais été clairement

établie[11]. Enfin, sur CV-NHOH (spectre C), le pic à 406 eV caractéristique des fonctions NO2 a

fortement diminué d’intensité, en accord avec la réduction des groupements NO2 en NHOH.

Ces spectres XPS confirment donc bien :

 qu’un greffage de fonctions NO2 se produit par électrolyse à 0,3 V de la solution de NBD.

 qu’une réduction des fonctions NO2 greffées se produit lorsque l’électrode CV-NO2 est

polarisée au potentiel de -0,1 V.

d. Greffage et hydroxylamination : deux processus distincts

La première partie de ce travail de thèse a clairement démontré à la fois par voies électrochimique et

spectroscopique que le greffage du NBD (réaction II.7) se produit à 0,3 V et ce, sur une électrode de

CV consciencieusement polie. La réaction de dépôt est d’ailleurs fortement corrélée à l’état de surface

de l’électrode. La valeur du potentiel de greffage utilisée durant ces travaux est moins cathodique que

128
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

celles reportées dans la bibliographie dans le cas d’un greffage à potentiel constant. Les spectres XPS

ont aussi prouvé qu’un greffage à 0,3 V donnait lieu à une couche organique avec des fonctions NO 2.

Par conséquent, il est possible de distinguer le greffage du NBD d’une part, et la réduction des

fonctions NO2 greffées, d’autre part. Une polarisation cathodique de l’électrode CV-NO2 à -0,1 V est

suffisante pour former des fonctions NHOH (réaction II.8). Cette vision décorrélée du greffage et de la

réduction des groupements nitro constitue une première pour les utilisateurs du NBD qui

fonctionnalisent systématiquement l’électrode par électrolyse à des potentiels fortement cathodiques et

obtiennent ainsi une couche mixte contenant à la fois du NO2 et du NHOH. Cette première partie de

l’étude mécanistique a d’ores et déjà fait l’objet d’une publication dans the Journal of

Electroanalytical Chemistry[151].

II. Etude du phénomène conjoint d’hydroxylamination et d’amination

a. Mise en place du protocole opératoire

La seconde partie de l’étude mécanistique de réduction du NBD concerne le pic III de la figure II.12.

Ce pic est généralement attribué dans la bibliographie à la réduction des fonctions NO2 en NHOH et

NH2[85, 138] (réactions II.8, II.10 et II.11). Il est donc d’un intérêt majeur puisqu’il permet de moduler

les propriétés de la couche organique greffée. Cependant, malgré les nombreux travaux traitant de la

réduction du NO2 en NHOH, aucun d’entre eux ne s’est intéressé aux conditions selon lesquelles est

favorisée la formation de NHOH ou de NH2. Seules Brooksby et Downard émettent l’hypothèse que

l’accessibilité des protons conditionne la forme réduite de NO2[81].

Dans l’optique d’une étude complète du mécanisme du NBD, quatre électrolyses ont été réalisées aux

potentiels indiqués sur la figure II.22. Cette figure reprend le premier cycle aller de la figure II.12

d’une électrode de CV dans une solution de NBD :

129
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

 Electrolyse d’une solution de HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1) contenant du NBD à 2,5 mmol.L-1

sur CV à 0,3 V (pic I) : ce potentiel correspond à la formation de CV-NO2 (réaction II.7)

permettant la formation d’une couche de groupements nitro sans autre forme réduite visible.

 Electrolyse d’une solution de HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1) sur CV-NO2 à-0,1 V (pic II) :

comme démontré dans la section E.I., ce potentiel est celui de la formation des premières

fonctions NHOH (réaction II.8) et de l’électrode CV-NHOH.

 Electrolyse d’une solution de HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1) sur CV-NHOH à -0,6 V (pic III) :

ce potentiel correspond au pic attribué dans la bibliographie à la réduction des fonctions NO 2

en NHOH ou NH2[85, 138] (réactions II.8, II.10 et II.11).

 Electrolyse d’une solution de HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1) sur CV-NHOH à -0,8 V : cette

valeur correspond au potentiel le plus cathodique pouvant être atteint dans les conditions

opératoires sans réduire le solvant. Ce choix permet de voir l’influence de la surtension

apportée aux réactions II.8, II.10 et II.11.

E (V/ECS)
0
-1 -0,8 -0,6 -0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6
I
-10
II

-20

-30

-40

-50 III

-60

-70
i (µA)

Figure II.22– Voltammogramme linéaire tracé dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1)
contenant du NBD à 2,5 mmol.L-1 sur une électrode de CV (cycle aller uniquement). v = 0,1 V.s-1

130
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

b. Etude dynamique de l’hydroxylamination

Une électrode CV-NO2 (voir Tableau II.4) formée par une électrolyse à 0,3 V pendant 300 s d’une

solution de NBD à 2,5 mmol.L-1, est polarisée à 20 reprises au potentiel de -0,1 V pendant 15 s dans

une solution de HCl à 0,1 mol.L-1. Entre chaque électrolyse, un voltammogramme cyclique de

l’électrode est tracé dans la même solution de HCl afin de mettre en évidence l’évolution de l’activité

du couple NO/NHOH (réaction II.9) et quantifier l’avancement de la réduction des fonctions NO2.

La figure II.23 montre les voltammogrammes cycliques obtenus avec CV-NO2 (courbe bleue), les

courbes tracées après les électrolyses successives (courbes en pointillés rouges) et celle tracée à la fin

de l’expérience après 300 s d’électrolyse cumulées (courbe en trait plein rouge).

1,5 i (µA)

0,5

-0,5

-1

E (V/ECS)
-1,5
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5

Figure II.23 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1
(pH 1) sur une électrode de CV-NO2 électrolysée dans la même solution à -0,1 V pendant n fois 15 s (n
= 1 à 20). v = 0,1 V.s-1. n=0 : courbe bleue, n = 1 à 19 : courbe en pointillés rouges, n = 20 : courbe
rouge en trait plein.

131
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Pendant la première phase d’électrolyses successives (de la 1ère à la 10ème), l’intensité des pics du

couple NO/NHOH augmente de manière bien marquée. De la 10ème à la 15ème électrolyse,

l’augmentation est plus faible, sans doute en raison du fait que les fonctions les plus accessibles ont été

réduites pendant les premières électrolyses. Enfin, de la 15ème à la 20ème électrolyse, les

voltammogrammes cycliques sont clairement superposables. La valeur de (NO/NHOH)CV-NHOH obtenue

par intégration du pic cathodique observé sur la dernière courbe (équation II.2) est égale à 1,15 × 10 -10

mol.cm-2, ce qui est cohérent avec les valeurs reportées dans la bibliographie dans des conditions

expérimentales similaires de formation de multicouche[77, 85, 135, 138].

c. Etude dynamique de l’amination

Des expériences similaires ont été réalisées partir d’une électrode CV-NHOH obtenue par 20 fois 15 s

d’électrolyse de CV-NO2 à -0,1 V dans une solution de HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1). Ici, les électrolyses

successives sont effectuées au potentiel de -0,8 V. La figure II.24 montre l’évolution de l’activité du

couple NO/NHOH.

132
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

1,5 i (µA)

0,5

-0,5

-1

E (V/ECS)
-1,5
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5

Figure II.24 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1
(pH 1) sur une électrode de CV-NHOH électrolysée dans la même solution à -0,8 V pendant n fois 15 s
(n = 1 à 20). v = 0,1 V.s-1. n=0 : courbe rouge, n = 1 : courbe verte en trait plein, n = 2 à 20 : courbe
en pointillés verts.

La courbe initiale de CV-NHOH (rouge) correspond à celle de la figure II.23 (rouge). Après la

première électrolyse à -0,8 V, les valeurs des intensités de pics anodique et cathodique du couple

NO/NHOH augmentent sensiblement (courbe en trait plein vert), témoignant de ce qu’il reste des

fonctions NO2 à réduire. Ceci conforte notre hypothèse sur la réduction des fonctions NO2 les plus

accessibles en NHOH lors de l’électrolyse à -0,1 V. La valeur de  correspondante obtenue

(équation II.2) est de 2,22 × 10-10 mol.cm-2 et est presque le double de la valeur obtenue avec

l’électrode CV-NHOH (figure II.23, courbe en trait plein rouge). Par la suite, toutes les fonctions

NHOH sont progressivement réduites en fonctions NH2 durant les électrolyses suivantes (courbes en

pointillés verts). Les groupements amine étant électroinactifs, cela se traduit par une extinction

progressive du signal du couple NO/NHOH jusqu’à l’obtention d’une valeur nulle. Ce résultat prouve

que les fonctions NHOH présentes dans le film de diazonium sont totalement réduites en NH2.

133
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

La figure II.25 résume l’évolution de la concentration surfacique NO/NHOH, valeur normalisée par

rapport celle enregistrée avec l’électrode CV-NHOH obtenues à l’issue des 20 électrolyses successives

à -0,1 V durant les électrolyses 1 à 20 à -0,1 V, et de 20 à 40 à -0,8 V.



2,5

1,5 Electrolyses à -0,1 V

Electrolyses à -0,8 V

0,5

Nombre d'électrolyses
de 15 s
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40

Figure II.25 – Variation de NO/NHOH (normalisée par rapport à la valeur (NO/NHOH)CV-NHOH sur CV-NHOH)
en fonction du potentiel et du nombre d’électrolyses.

Quinze électrolyses réalisées au potentiel de -0,1 V (soit 165 s) suffisent pour atteindre la valeur

maximale de . Une seule électrolyse à -0,8 V double la concentration surfacique, conséquence

de la réduction des fonctions NO2 situées dans la(les) couche(s) plus profondes du dépôt. Cette

augmentation confirme à nouveau le fait que seules les fonctions superficielles sont réduites lors de la

polarisation à -0,1 V, et que les autres groupements moins accessibles nécessitent une surtension

cathodique plus importante pour réagir. Les électrolyses suivantes à -0,8 V réduisent progressivement

toutes les fonctions NHOH en NH2. Brooksby et Downard expliquent la possibilité de réduire NO2 en

NHOH ou NH2 par la disponibilité locale des protons au sein même de la couche organique [81]. Cette

hypothèse peut être complétée par l’influence de l’énergie apportée à la réaction, représentée ici par la

surtension cathodique qui permet d’atteindre des fonctions plus ou moins profondes dans la couche.

134
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Une dernière série d’expériences est menée en réalisant 20 électrolyses intermédiaires pendant 15 s au

potentiel de -0,6 V correspondant au pic III d’amination (réactions II.10 et II.11), portant à 60 le

nombre total d’électrolyses effectuées sur l’électrode. Les 20 premières sont donc à -0,1 V,

correspondant à l’hydroxylamination des fonctions NO2 superficielles (réaction II.8), les 20 suivantes

sont réalisées à -0,6 V et les 20 dernières sont effectuées à -0,8 V, pour une amination complète. La

figure II.26 récapitule l’évolution relative de la valeur de NO/NHOH obtenue à partir de l’équation II.2 et

normalisée par rapport à la valeur de NO/NHOH sur CV-NHOH.

2,5 

Electrolyses à -0,6 V
2
Electrolyses à -0,8 V

1,5
Electrolyses à -0,1 V

0,5

Nombre d'électrolyses
de 15 s
0
0 10 20 30 40 50 60

Figure II.26 – Variation de NO/NHOH (normalisée par rapport à la valeur (NO/NHOH)CV-NHOH sur CV-
NHOH) en fonction du potentiel et du nombre d’électrolyses.

Comme dans la figure II.25, on observe ici une croissance de NO/NHOH au cours des électrolyses à -0,1

V jusqu’à atteindre une valeur limite (1,4 × 10-10 mol.cm-2) dès la 15ème électrolyse. Quand le potentiel

d’électrolyse passe à -0,6 V, la concentration de surface atteint 2,61 × 10-10 mol.cm-2 dès la première

135
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

électrolyse. On observe le même phénomène de réduction des fonctions NO2 plus profondément

enfouies dans la couche et non accessibles avec une réduction à -0,1 V. Les électrolyses suivantes à -

0,6 V et à -0,8 V provoquent une diminution progressive de la concentration surfacique mais avec une

efficacité bien moindre, puisqu’au bout de ces 60 électrolyses, NO/NHOH est proche de la valeur

enregistrée avec l’électrode CV-NHOH avec 1,33 × 10-10 mol.cm-2. Or, dans les conditions

précédentes (figures II.24 et II.25), 300 s d’électrolyses à -0,8 V sont suffisantes pour réduire

l’ensemble des fonctions NHOH en NH2 (réaction II.10). La diminution de l’efficacité de la réaction

d’amination peut ici être due à la couche organique qui se compacte lors des polarisations cathodiques

intermédiaires, rendant plus difficile l’accessibilité aux fonctions internes[89]. Cela est corrélé avec un

courant capacitif plus grand observé sur CV-NHOH que sur CV-NO2 (figure II.23, courbe bleue et

courbe rouge). Quand une électrolyse intermédiaire est effectuée à -0,6 V, il y a un phénomène

conjoint « d’imperméabilisation » de la couche organique et de réduction des fonctions NO2. Cela rend

alors l’amination des fonctions NHOH à -0,8V plus difficile car le transfert électronique est plus lent

au sein de la couche organique.

d. Influence de l’épaisseur de la couche organique

Pour valider les conclusions issues de l’exploitation des figures II.23 à II.26, une autre série

d’électrolyses successives est menée avec une électrode préalablement modifiée à 0,3 V pendant 10 s

dans une solution de HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1) contenant du NBD à 2,5 mmol.L-1 (nommée CV-NO210
s
). De cette manière, le film organique déposé sur CV-NO210 s est moins épais que celui de l’électrode

CV-NO2 (obtenue après 300 s d’électrolyse, voire tableau II.4) et proche d’une monocouche.

La figure II.27, réalisée dans les mêmes conditions que celles de la figure II.25 mais avec l’électrode

CV-NO210 s au lieu de CV-NO2, suit l’évolution relative de la valeur de NO/NHOH (équation II.2) et

normalisée par rapport à la valeur de NO/NHOH sur CV-NHOH10 s

(électrode correspondante à

l’électrode CV-NO210 s après 20 fois 15 s d’hydroxylamination à -0,1 V dans HCl à 0,1 mol.L-1).

136
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

1,2 


0,8 Electrolyses à -0,8 V

0,6

Electrolyses à -0,1 V
0,4

0,2
Nombre d'électrolyses
de 15 s
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40

Figure II.27 – Variation de NO/NHOH (normalisée par rapport à la valeur (NO/NHOH)CV-NHOH sur CV-
NHOH) en fonction du potentiel et du nombre d’électrolyses.

Après 2 électrolyses à -0,1 V (soit 30 s), la concentration surfacique atteint une valeur maximale de

3,35 × 10-10 mol.cm-2. Cette valeur, plus élevée que celle obtenue avec un dépôt épais, prouve que les

fonctions sont beaucoup plus accessibles car elles sont majoritairement superficielles. Cette

accessibilité plus aisée rend l’hydroxylamination plus efficace qu’avec CV-NO2 où les fonctions

enfouies ont plus de mal à se réduire. La série d’électrolyses à -0,8 V se traduit dans un premier temps

par une chute rapide de la concentration de surface, puis une diminution plus lente à partir de

l’électrolyse n°22. Contrairement à CV-NO2, l’évolution de la concentration de surface NO/NHOH ne

tend pas vers 0 de manière aussi rapide. Cette observation est à première vue surprenante si l’on tient

compte du fait que les fonctions sont plus accessibles dans le cas d’un dépôt moins épais. Toutefois,

cette différence de comportement entre CV-NO2 (dépôt épais) et CV-NO210s (dépôt moins épais) peut

être due à des fonctions NHOH plus stables pour une couche plus fine.

137
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

La figure II.28, effectuée dans les mêmes conditions que celles de la figure II.26 mais avec l’électrode

CV-NO210 s au lieu de CV-NO2, suit l’évolution relative de la valeur de NO/NHOH et normalisée par

rapport à la valeur de NO/NHOH sur CV-NHOH10 s (électrode correspondante à l’électrode CV-NO210 s

après 20 fois 15 s d’hydroxylamination à -0,1 V dans une solution de HCl à 0,1 mol.L-1). Ici, trois

séries de 20 électrolyses de 15 s chacune sont effectuées aux potentiels de -0,1 V, -0,6V et -0,8

respectivement.



1,4

1,2
Electrolyses à -0,8 V
1

0,8 Electrolyses à -0,6 V

Electrolyses à -0,1 V
0,6

0,4

0,2
Nombre d'électrolyses
de 15 s
0
0 10 20 30 40 50 60

Figure II.28 – Variation de NO/NHOH (par rapport à la valeur (NO/NHOH)CV-NHOH sur CV-NHOH) en
fonction du potentiel et du nombre d’électrolyses.

Durant la série d’électrolyses effectuées à -0,1 V, la concentration surfacique atteint une valeur

maximale de 2,95 × 10-10 mol.cm-2 dès la deuxième électrolyse. Ces résultats confirment que, dans le

cas de dépôts fins, les fonctions NO2 sont plus facilement réduites. Dès que le potentiel d’électrolyse

est porté à -0,6 V, la concentration surfacique NO/NHOH augmente légèrement jusqu’à 3,66 × 10-10

mol.cm-2 puis décroit lentement. La légère augmentation peut correspondre à la réduction de quelques

138
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

fonctions NO2 plus profondes. Le fait qu’on n’observe pas ce phénomène quand la polarisation passe

directement à -0,8 V (figure II.27) signifie que des fonctions NO2 non accessibles à -0,1 V sont peut-

être directement réduites en NH2. Une électrolyse intermédiaire à -0,6 V permet d’atteindre ces

fonctions et les réduire partiellement en NHOH. Par la suite, la série d’électrolyses à -0,8 V induit la

même évolution que celle observée dans la figure II.27, i. e. deux phases de diminution : une première

des électrolyses n°40 à 42 correspondant à une amination efficace des fonctions NHOH, et une

seconde au-delà de l’électrolyse n°42 avec une diminution moins marquée.

139
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

III. Proposition de mécanisme réactionnel de réduction

La figure II.29 reprend de manière synthétique les observations et les hypothèses émises pour proposer

un mécanisme de réduction de NBD.

Figure II.29 – Proposition de mécanisme de réduction du NBD.

En partant d’une électrode de CV (électrode 1), les expériences décrites dans la section E.I de ce

chapitre démontrent clairement par voies électrochimique et spectroscopique qu’effectuer une

électrolyse à 0,3 V une solution de NBD induit la formation d’une couche organique avec une majorité

de fonctions NO2 (électrode 2). De la même façon, électrolyser à -0,1 V une solution de HCl à 0,1

mol.L-1 induit l’apparition de fonctions NHOH au sein de la couche (électrode 3). En approfondissant

l’étude dans la section F.II.b. de ce chapitre, l’existence de fonctions NO2 non réduites par

140
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

l’électrolyse à -0,1 V a été mise en évidence par des électrolyses à -0,6 V (électrode 4) et -0,8 V

(électrode 5). Les fonctions NHOH de l’électrode 4 sont plus difficiles à réduire en NH 2, prouvant

qu’une électrolyse intermédiaire à -0,6 V imperméabilise la couche. Les expériences ont aussi

confirmé que l’accessibilité des fonctions (et l’efficacité des électrolyses) est dépendante de

l’épaisseur de la couche organique formée.

Toutefois, l’électrochimie montre ses limites en termes de caractérisation sur plusieurs points. Tout

d’abord, il est impossible d’évaluer directement et de manière fiable le rapport entre fonctions NO2 et

NHOH dans le cas des électrodes 3, 4 et 5. Une première approche consiste à calculer le rapport de la

quantité de charge QNHOH (équation II.2) sur la quantité de charge de dépôt Qdépôt. Dans le cas de

dépôts épais et d’une électrolyse à -0,1 V (figures II.23, II.25 et II.26), est égal à 32, soit

l’équivalent de 1 fonction NHOH pour 32 fonctions NO2. Dans le cas de dépôts plus fins et

d’électrolyses à -0,1 V (figures II.27 et 28), le même calcul aboutit à un ratio de 1 fonction NHOH

pour 10 fonctions NO2. Cette estimation n’est valable que si le rendement de l’électrolyse à 0,3 V dans

la solution de NBD (réaction II.7) est de 100 % et si toutes les fonctions NHOH sont

électrochimiquement actives (réaction II.9). Pour les fonctions NH2 électrochimiquement inactives,

l’estimation du rapport dans le cas des électrodes 4 et 5 est plus difficile puisque des fonctions NO 2

peuvent être directement réduites en NH2 (réaction II.11). D’autres méthodes peuvent être envisagées

afin de déterminer la composition réelle de la couche. Les techniques spectroscopiques, par exemple,

permettent la quantification plus précise des fonctions NO2 de la couche, grâce aux bandes

caractéristiques très marquées émises par le groupement nitro[139]. Dans ce contexte, une collaboration

a été initiée entre le Laboratoire de Génie Chimique et le Laboratoire de Chimie Physique d’Orsay

pour utiliser la spectroscopie SFG (génération de la fréquence somme ou Sum Frequency Generation)

afin d’analyser les couches organiques déposées. Cette méthode physique d’analyse est basée sur la

somme d’un faisceau IR et d’un faisceau visible à une interface et sur l’observation du faisceau

diffracté (figure II.30A). Elle permet, entre autres, de caractériser de manière précise des espèces

déposées à la surface d’une électrode (comme des nanoparticules d’Au[152, 153]) et peut être envisagée

dans le cadre de l’étude de la réduction du NBD. Au cours d’expériences préliminaires, des spectres

141
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

ont été obtenus avec les électrodes CV-NO2 et CV-NHOH (figure II.30B) immergées en milieu

aqueux. La signature spectroscopique caractéristique de la fonction NO2 à 1350 cm-1 n’est plus

présente sur l’électrode CV-NHOH, preuve de la réduction des fonctions nitro. Des études

complémentaires devraient avoir lieu lors d’une prochaine campagne de mesures, qui devraient cette

fois se focaliser sur des bandes caractéristiques des groupements NHOH et NH2. Le caractère réactif

de NH2 peut, lui aussi, être utilisé pour faire de la chimie click et greffer sur les fonctions amine des

composés électrochimiquement actifs[96, 123].

(A)

Intensités (unités arbitraires)

(B)
CV-NO2

CV-NHOH

 (cm-1)

Figure II.30 – (A) Principe de la spectroscopie SFG.(B) Spectres SFG obtenus avec CV-NO2 (en bleu)
et CV-NHOH (en rouge) dans une solution aqueuse d’HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1).

142
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

IV. Etude cinétique

La cinétique de réaction électrochimique de certaines espèces rédox est directement influencée par

l’état de surface de l’électrode considérée. Greffer une couche de NBD sur une électrode de CV

permet donc de moduler électrochimiquement les fonctions présentes dans le film organique résultant.

Pour compléter l’étude mécanistique, la cinétique électrochimique de trois espèces rédox sur

différentes épaisseurs et fonctionnalités du dépôt est étudiée ici de manière qualitative et quantitative.

a. Choix des électrodes et des sondes électrochimiques

1. Électrodes

En tenant compte des résultats issus de l’étude mécanistique, 4 types d’électrodes ont été définis. Elles

diffèrent par leur prétraitement électrochimique et, de ce fait, par la fonctionnalité majoritaire présente

dans la couche organique ou à sa surface. Le tableau II.5 détaille le protocole pour chaque électrode :

Nom Protocole expérimental

CV Polissage + ultrasons
CV modifié par électrolyse à 0,3 V pendant tdépôt (entre 1 et 300 s) dans
CV-NO2
HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1) contenant NBD à 2,5 mmol.L-1
CV-NHOH CV-NO2 polarisé à -0,1 V dans HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1) pendant 300 s*
CV-NHOH polarisé à -0,8 V dans HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1) pendant 900
CV-NH2
s*
*Les durées d’électrolyse ont été choisies de manière à ce que l’activité du couple rédox NO/NHOH
ne varie plus (maximale après l’électrolyse à -0,1 V et nulle à -0,8 V).

Tableau II.5 – Protocole expérimental des électrodes fonctionnalisées

Comme la présence de fonctions NH2 superficielles n’est pas écartée après les électrolyses à -0,6 et -

0,8 V, -0,1 V est le potentiel utilisé pour l’hydroxylamination des fonctions NO2 (réaction II.9). Ainsi,

les fonctions les plus accessibles seront sous la forme voulue, i.e. NHOH dans ce cas. De plus,

l’épaisseur du film ayant une influence sur le comportement de l’électrode, elle a été intégrée comme

143
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

paramètre à travers la variation du temps de dépôt (tdépôt) compris entre 1 s (film très fin) à 300 s (film

très épais).

La variation de la densité de charge de dépôt qdépôt en fonction du temps de dépôt tdépôt pour une

polarisation de l’électrode de CV à 0,3 V dans une solution de NBD est représentée dans la figure

II.31.

16 qdépôt (C.m-2)

14

12

10

2
tdépôt (s)
0
0 50 100 150 200 250 300 350

Figure II.31 – Variation de qdépôt en fonction de tdépôt pour une électrode de CV polarisée à 0,3 V dans
une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1 contenant du NBD à 2.5 mmol.L-1.

Dans un premier temps, la densité de charge augmente de façon très rapide avec la variation du temps

de dépôt. Lorsque la durée d’électrolyse atteint 60 s, la densité de charge croît de manière moins nette.

Ce phénomène est dû à l’inhibition de la croissance du film par les cycles aromatiques déjà greffés.

Pour des temps de dépôt dépassant la minute, les films déposés sont très épais et leur croissance est

fortement ralentie. Le temps de dépôt est un paramètre influant de manière non négligeable sur la

charge de dépôt et donc sur l’épaisseur de la couche organique résultante.

144
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

2. Sondes électrochimiques

Trois espèces rédox ont été choisies :

 l’hexacyanoferrate(III) Fe(CN)63-, complexe métallique anionique qui se réduit selon une

réaction monoélectronique (réaction II.13) :

Réaction II.13 Fe(CN)63- + e- → Fe(CN)64-

 l’hexaamine ruthénium Ru(NH3)63+, complexe métallique cationique qui se réduit selon une

réaction monoélectronique (réaction II.14) :

Réaction II.14 Ru(NH3)63+ + e- → Ru(NH3)62+

 le ferrocèneméthanol FcMeOH, complexe métallique neutre qui s’oxyde selon une réaction

monoélectronique (réaction II.15) :

Réaction II.15 FcMeOH → FcMeOH+ + e-

Le choix de ces sondes s’explique par leur cinétique de transfert électronique très rapide sur une

électrode de CV nue. La charge globale (anionique, cationique et neutre) et la nature de la réaction

(oxydation et réduction) sont également prises en compte. Enfin, elles ne réagissent pas à l’électrode

de la même manière puisque l’hexacyanoferrate se réduit selon un mécanisme de sphère interne (où

l’électron est transmis via les ligands) alors que le ferrocèneméthanol et l’hexaamine ruthénium

réagissent en suivant un mécanisme de sphère externe (où l’échange électronique se fait à travers la

couche de solvatation)[154, 155](figure II.32).

Figure II.32 – Mécanisme de réduction de sphère externe et de sphère interne.

145
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

b. Etude qualitative

Une première série d’expériences a été effectuée avec le dépôt le plus épais (t dépôt = 300 s), pour lequel

les fonctionnalités de la couche sont les plus nombreuses et où leur effet est théoriquement le plus

visible. Le pH de l’étude est égal à 3,5, valeur pour laquelle les fonctions NHOH et NH2 sont sous leur

formes protonées NH2OH+ et NH3+, si l’on considère que leurs constantes d’acidité sont les mêmes

que celles de la phénylhydroxylamine[156] et de l’aniline[157] (pKa = 6,0 et 4,6 respectivement). Les

interactions avec des sondes anioniques sont donc privilégiées. A l’inverse, la fonction NO 2 possède

une haute densité électronique qui favorise les affinités avec les sondes cationiques.

1. Hexacyanoferrate (III)

La figure II.33 représente les voltammogrammes cycliques obtenus dans une solution de Fe(CN) 63-

avec les électrodes CV, CV-NO2, CV-NHOH et CV-NH2.

146
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

60 i (µA)

40

20

-20

-40

E (V/ECS)
-60
-0,6 -0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8

Figure II.33 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution aqueuse de KPF6 à 0,1 mol.L-1
(pH 3,5) contenant du Fe(CN)63- à 5 mmol.L-1 sur une électrode de CV (en noir), CV-NO2 (en bleu),
CV-NHOH (en rouge) et de CV-NH2 (en vert). v = 0,1 V.s-1.

Sur CV (courbe noire), la courbe obtenue est un voltammogramme bien symétrique, caractéristique

d’un système rédox rapide et réversible. La réduction électrochimique est en revanche très fortement

ralentie sur CV-NO2 (courbe bleue) puisqu’aucun pic anodique ou cathodique n’est observé dans la

gamme des potentiels utilisés. A contrario, l’effet barrière est moindre sur CV-NHOH (courbe rouge)

et CV-NH2 (courbe verte) puisque l’on retrouve le signal électrochimique, avec des courants de pics

du même ordre de grandeur que ceux observés sur CV. D’autre part, l’écart entre les potentiels de pics

anodique et cathodique n’est augmenté que d’environ 25%. L’intensité des pics anodique et

cathodique sur CV-NHOH est un peu plus élevée par rapport aux valeurs d’intensité sur CV-NH2. Il

faut toutefois considérer que d’après la figure II.19, le potentiel standard du couple NO/NHOH est à

0,15 V à pH 3,5 (pH de la solution de KPF6 0,1 mol.L-1). Il y a donc certainement une additivité des

courants de réduction de l’hexacyanoferrate(III) (réaction II.13) et du NO en NHOH (réaction II.9)

dans la même zone de potentiel.

147
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

2. Hexaamine ruthénium

La figure II.34 représente les voltammogrammes cycliques obtenus dans une solution de

Ru(NH3)63+ avec les électrodes CV, CV-NO2, CV-NHOH et CV-NH2.

15 i (µA)

10

-5

-10

-15

-20

-25
E (V/ECS)
-30
-0,6 -0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8

Figure II.34 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution aqueuse de KPF6 à 0,1 mol.L-1
(pH 3,5) contenant du Ru(NH3)63+ à 5 mmol.L-1 sur une électrode de CV (en noir), CV-NO2 (en bleu),
CV-NHOH (en rouge) et de CV-NH2 (en vert). v = 0,1 V.s-1.

Sur CV (courbe noire), on observe un voltammogramme clairement résolu, caractéristique là aussi

d’uns système Ru(NH3)63+/2+ rapide et réversible. Pour les électrodes CV-NO2, CV-NHOH et CV-NH2

(courbes bleue, rouge et verte, respectivement) la cinétique est plus ou moins ralentie avec un écart

entre les pics anodique et cathodique variable. Si l’on considère les intensités des pics, on constate que

l’électrode de CV-NO2 est la plus proche de l’électrode de CV. Ces résultats démontrent que les

interactions entre la couche organique et l’espèce électrochimique modifient la cinétique de la

148
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

réaction. On observe également sur CV-NHOH le signal électrochimique correspondant au couple

rédox NO/NHOH, centré à 0,19 V.

3. Ferrocène méthanol

La figure II.35 représente les voltammogrammes cycliques obtenus dans une solution de FcMeOH

avec les électrodes CV, CV-NO2, CV-NHOH et CV-NH2.

30 i (µA)
25

20

15

10

-5

-10

-15

-20
E (V/ECS)
-25
-0,6 -0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8

Figure II.35 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution aqueuse de KPF6 à 0,1 mol.L-1
(pH 3,5) contenant du FcMeOH à 5 mmol.L-1 sur une électrode de CV (en noir), CV-NO2 (en bleu),
CV-NHOH (en rouge) et de CV-NH2 (en vert). v = 0,1 V.s-1.

La courbe obtenue sur CV (courbe noire) a une allure similaire à celles obtenues avec le Fe(CN) 63- et

le Ru(NH3)63+ sur électrodes nues. Elle traduit le comportement électrochimique d’un système rédox

rapide et réversible. Sur CV-NO2, CV-NHOH et CV-NH2 (courbes bleue, rouge et verte

respectivement), l’effet barrière est présent de manière plus ou moins prononcée selon les fonctions

mises en jeu par les trois électrodes. Comme pour les ions hexacyanoferrate(III), l’intensité des pics

149
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

anodique et cathodique est un peu plus élevée sur CV-NHOH, en raison de la réaction du couple

NO/NHOH (réaction II.9) qui a lieu dans la même gamme de potentiel.

4. Analyse des phénomènes observés

Les résultats obtenus dans cette première série d’expériences sont reprise dans le tableau II.6 en

qualifiant de manière qualitative et relative l’effet barrière des différents films de diazonium sur la

détection des trois sondes redox.

Fe(CN)63- Ru(NH3)63+ FcMeOH

CV 0 0 0
CV-NO2 +++ + +
CV-NHOH + + +
CV-NH2 + ++ +
Tableau II.6 – Importance de l’effet barrière des groupes fonctionnels du diazonium sur la réponse
électrochimique des espèces rédox.

Pour le Fe(CN)63-, l’effet barrière est maximal avec CV-NO2 en raison des répulsions électrostatiques

entre cette espèce anionique et le groupe NO2 à haute densité électronique. Quand les fonctions de la

couche organique sont protonées (NH2OH+ et NH3+), l’effet barrière est fortement amoindri car la

sonde et les groupes fonctionnels sont de charge opposée. Cependant, cette attraction électrostatique

est contrebalancée par une répulsion due à l’encombrement stérique induit par les cycles aromatiques

de la couche. Il en résulte alors un ralentissement, faible mais réel, de la cinétique.

Pour le Ru(NH3)63+, l’effet barrière, présent quelle que soit la fonctionnalisation de la couche

organique, est maximal pour CV-NH2, où la répulsion entre la fonction amine protonée et le complexe

cationique est la plus importante.

Pour le FcMeOH, l’impact de la modification de surface sur la cinétique électrochimique est à peu

près identique selon les fonctions mais il est moins visible pour NH2. Etant donné le caractère neutre

150
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

du complexe, ce phénomène peut être rattaché à l’encombrement stérique moins prononcé de la

fonction NH2.

Les phénomènes observés sont en accord avec ceux mentionnés dans la bibliographie concernant

l’étude de l’effet barrière de différents types de couches organiques déposées à partir du NBD[88].

Il est intéressant de noter que l’électrolyte joue un rôle dans la cinétique des réactions. En effet, il est

constitué d’anions PF6- qui, par leur taille importante, augmentent la perméabilité de la couche et

diminuent la répulsion électrostatique que peuvent subir les espèces. Le mécanisme des réactions a lui

aussi un impact puisque les mécanismes de sphère externe (transfert électronique passant par la couche

de solvatation) sont moins perturbés par le dépôt que lorsque le complexe réagit via un ligand

(mécanisme de sphère interne).

c. Etude quantitative

Pour compléter l’étude qualitative précédente et quantifier les phénomènes observés, de nouvelles

courbes intensités-potentiels sont tracées à l’était stationnaire avec les différentes électrodes modifiées.

La cinétique des réactions de réduction de Fe(CN)63-, du Ru(NH3)63+ et d’oxydation du FcMeOH est

évaluée via la détermination des coefficients de transfert cathodique β et anodique α, respectivement.

Les méthodes de calculs sont détaillées dans le paragraphe suivant.

1. Détermination du coefficient de transfert électronique

Afin de caractériser la cinétique d’une réaction de transfert électronique d’un oxydant ou d’un

réducteur à la surface d’une électrode, il est possible de calculer le coefficient de transfert électronique

anodique  ou cathodique Ce coefficient, compris entre 0 et 1, traduit la facilité qu’a l’espèce à

échanger les électrons. Deux méthodes de calcul de ces coefficients sont présentées [145] : la méthode de

Tafel corrigée et la méthode de Koutecky-Levich.

151
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

(i) Méthode de Tafel corrigée

La méthode de Tafel corrigée repose sur l’exploitation de la relation de Butler-Volmer. Celle-ci établit

l’expression du courant d’électrolyse à l’état stationnaire qui traverse une électrode portée au potentiel

E et à la surface de laquelle a lieu une réaction de transfert de charge (Ox + n e- Red). Dans le

cas particulier d’un régime cinétique mixte d’activation-diffusion, on aboutit à l’expression modifiée

de Butler-Volmer :

α β
Equation II.3 °

avec

i = courant (A)

i° = courant d’échange (A)

ilim,a = courant limite de diffusion anodique (A)

ilim,c = courant limite de diffusion cathodique (A)

R = constante des gaz parfaits = 8,314 J.mol-1.K-1

T = température (K)

= surtension (V) = E - Ei=0

Quand la surtension est fortement positive (ou respectivement fortement négative), on peut faire une

approximation et négliger la contribution cathodique (ou respectivement anodique).

- Si est fortement positive (surtension anodique) :

α
Equation II.4 °

Par analogie avec les lois empiriques de Tafel[158], une relation linéaire est établie entre le courant et la

surtension.

α
°

152
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

α
Sa représentation est une droite de pente et d’ordonnée à l’origine °.

- Si est fortement négative (surtension cathodique) :

β
Equation II.5 °

β
soit : °

β
En traçant en fonction de on obtient une droite de pente et d’ordonnée à

l’origine °. La figure II.36 montre un exemple de représentation de Tafel de courbes intensité-

potentiel tracées à l’état stationnaire avec une électrode de CV dans une solution contenant de

l’hexacyanoferrate(III) (figure II.10).

η (V)
0
-0,45 -0,4 -0,35 -0,3 -0,25 -0,2 -0,15 -0,1 -0,05 0
-2

-4

-6

-8

-10

-12

-14

-16

Figure II.36 – Courbe de Tafel obtenue à partir d’un voltammogramme linéaire tracé sur une
électrode de CV dans une solution aqueuse de KPF6 à 0,1 mol.L-1 (pH 3,5) contenant du Fe(CN)63- à 5
mmol.L-1. ω =1000 tours par minute (voir figure II.10).

Concrètement, cette représentation définit un domaine de potentiel où la variation est linéaire. Le

domaine est situé de part et d’autre du potentiel de demi-vague de la courbe i-E, où le régime cinétique

est mixte (activation-diffusion) et où la composante anodique du courant est négligeable. De la pente

153
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

est tirée la valeur du coefficient cathodique β. L’exploitation des courbes i-E tracées à différentes

vitesses de rotation de l’électrode aboutit à une valeur moyenne du coefficient β :

Tafel = 0,44 ± 0,04

(ii) Méthode de Koutecky-Levich

Cette méthode repose sur l’exploitation de la relation de Koutecky-Levich[145]. Celle-ci décompose le

courant en tout potentiel de la courbe i-E en deux termes : un courant cinétique ik (ik = nFAkC) et un

courant diffusionnel il ( il = donné par l’équation de Levich (équation II.1) :

Equation II.6

Avec

constante de vitesse de transfert de charge

anodique ou cathodique (cm.s-1)

k° = constante de vitesse intrinsèque de transfert de charge (cm.s-1)

E°’ = potentiel standard apparent du couple rédox étudié (V/ref)

En posant , il vient :

Equation II.7

154
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

La représentation graphique de la fonction est une droite de pente et d’ordonnée à

l’origine . La figure II.37 montre les droites obtenues à partir des courbes i-E de la figure II.10 pour

des potentiels d’électrode compris entre 0,08 V et 0,126 V/ECS.

ω-1/2 (rad-1/2.s1/2)
-6000
0,07 0,08 0,09 0,1 0,11 0,12 0,13 0,14

-8000

-10000
0,126 V/ECS

0,121 V/ECS
-12000
0,116 V/ECS
0,107 V/ECS

-14000
0,102 V/ECS

0,089 V/ECS
-16000
0,080 V/ECS

-18000 i-1 (A-1)

Figure II.37 – Relation de Koutecky-Levich. Variation de i-1en fonction de mesurée sur une
électrode de CV dans une solution aqueuse de KPF6 à 0,1 mol.L-1 (pH 3,5) contenant du Fe(CN)63- à 5
mmol.L-1 pour les valeurs de potentiels de 0,126, 0,121, 0,116, 0,107, 0,102, 0,089 et de 0,080 V/ECS

L’intégration de l’expression de k dans ik aboutit aux équations II.8 et II.9 :

α
Equation II.8 pour la partie anodique

Equation II.9 pour la partie cathodique.

155
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Si l’on considère E°’ constant au cours des manipulations, la variation de ln ik est une fonction linéaire

α
du potentiel. Sa représentation graphique est une droite de pente pour la partie anodique et de

pour la partie cathodique. La figure II.38 rapporte les résultats obtenu pour la réduction des ions

Fe(CN)63-.

De cette manière, on peut en déduire le coefficient de transfert électronique anodique  ou cathodique



-8,5
0,06 0,07 0,08 0,09 0,1 0,11 0,12 0,13
E (V/ECS)
-8,6

-8,7

-8,8

y = -9,8762x - 7,7439
-8,9

-9

-9,1 ln ik

Figure II.38 – Variation de ln ik en fonction du potentiel

Dans ce cas :

Koutecky-Levich = 0,48

Comme

Tafel = 0,44 ± 0,04

La valeur moyenne non pondérée qui intègre les résultats issus des deux méthodes, est :

cv = 0,45 ± 0,04

156
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Par la suite, la moyenne des valeurs obtenues par la méthode de Tafel et de Koutecky-Levich est

considérée pour le calcul du coefficient de transfert électronique.

2. Hexacyanoferrate(III)

La figure II.39 montre les voltammogrammes linéaires tracés avec une électrode CV-NO2 dans une

solution de KPF6 à 0,1 mol.L-1 (pH 3,5) contenant les ions Fe(CN)63- à 5 mmol.L-1. Les différentes

courbes correspondent à des temps de dépôt de film de diazonium variables. Le voltammogramme

linéaire obtenu avec CV nue est indiqué à titre de comparaison.

50 i (µA)

-50 300 s

-100

tdépôt
-150

-200 1s

E (V/ECS)
-250
-0,5 -0,4 -0,3 -0,2 -0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4

Figure II.39 – Voltammogrammes linéaires tracés dans une solution aqueuse de KPF6 à 0,1 mol.L-1
(pH 3,5) contenant du Fe(CN)63- à 5 mmol.L-1 sur une électrode de CV (en noir) et de CV-NO2 formée
à partir d’une électrolyse à 0,3 V dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1) contenant du
NBD à 2,5 mmol.L-1 (en bleu) à tdépôt variable (1, 5, 10, 30, 60, 120, 180 et 300 s). v = 0,005 V. s-.1,
ω =1500 tours par minute.

157
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Le dépôt d’une couche de NO2 perturbe fortement la cinétique de réduction du Fe(CN)63- et ce, dès le

plus faible temps de dépôt de 1 s. Quand tdépôt augmente, la cinétique est ralentie et le courant limite

n’est plus atteint dans la gamme de potentiels utilisés. Les résultats apportent la preuve que l’effet

barrière de la couche organique et des fonctions NO2 grandit avec l’épaisseur du film.

La figure II.40 montre les différents voltammogrammes linéaires obtenus dans les mêmes conditions

opératoires avec une électrode CV-NHOH. Le voltammogramme linéaire obtenu sur CV nue est

indiqué à titre de comparaison.

50 i (µA)

-50

-100

-150
300 s

-200 tdépôt

1s E (V/ECS)
-250
-0,5 -0,4 -0,3 -0,2 -0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4

Figure II.40 – Voltammogrammes linéaires tracés dans une solution aqueuse de KPF6 à 0,1 mol.L-1
(pH 3,5) contenant du Fe(CN)63- à 5 mmol.L-1 sur une électrode de CV (en noir) et de CV-NHOH
formée à partir d’une électrode de CV-NO2 à tdépôt variable électrolysée à -0,1 V pendant 300 s dans
une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1) (en rouge). v = 0,005 V. s-.1, ω =1500 tours par
minute. tdépôt = 1, 5, 10, 30, 60, 120, 180 et 300 s

Pour les temps de dépôt courts générant des groupements NHOH majoritairement à la surface, la

cinétique de réduction de l’hexacyanoferrate est très proche de celle observée sur CV. L’attraction

électrostatique entre les fonctions NHOH protonées et le complexe anionique favorise la réaction. On

158
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

observe également un palier de diffusion avec une intensité légèrement supérieure à celle obtenue sur

CV, sans doute en raison du courant supplémentaire de réduction du NO en NHOH. Pour les t dépôt

supérieurs à 180 s, l’effet barrière de la couche organique prend le dessus sur l’attraction

électrostatique et réduit de manière visible la cinétique de la réaction.

La figure II.41 montre les différents voltammogrammes linéaires obtenus dans les mêmes conditions

opératoires avec une électrode CV-NH2. Le voltammogramme linéaire obtenu sur CV nue est indiqué

à titre de comparaison.

50 i (µA)

-50

-100

-150
300 s

-200 tdépôt

1s E (V/ECS)
-250
-0,5 -0,4 -0,3 -0,2 -0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4

Figure II.41 – Voltammogrammes linéaires tracés dans une solution aqueuse de KPF6 à 0,1 mol.L-1
(pH 3,5) contenant du Fe(CN)63- à 5 mmol.L-1 sur une électrode de CV (en noir) et de CV-NH2 formée
à partir d’une électrode de CV-NO2 à tdépôt variable électrolysée à -0,1 V pendant 300 s puis à -0,8 V
pendant 300 s dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1) (en rouge). v = 0,005 V. s-.1, ω
=1500 tours par minute. tdépôt = 1, 5, 10, 30, 60, 120, 180 et 300 s

Pour les temps de dépôt courts générant des groupements NH2 majoritairement à la surface, la

cinétique de la réaction de réduction est là-aussi très proche de celle observée sur CV, tout comme

dans le cas de fonctions NHOH. Le courant limite observé est même supérieur pour les électrodes

modifiées. Cela peut s’expliquer par l’attraction électrostatique entre les fonctions NH 2 protonées et le

159
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

complexe anionique. De plus, cette attraction est bien plus marquée que dans le cas de NHOH (figure

II.39) car le volume stérique occupé par la fonction NH2 est plus faible. Pour les tdépôt élevés

(supérieurs à 120 s), la cinétique commence à être impactée par l’épaisseur du film.

La détermination des valeurs de coefficients de transfert cathodique β est effectuée pour chaque tdépôt et

fonctionnalité de surface (i.e. NO2, NHOH ou NH2) en utilisant les méthodes de Koutecky-Levich et

de Tafel corrigée (cf. section E.IV.c.1 de ce chapitre). Chaque valeur est normalisée par rapport à la

valeur obtenue sur CV, βCV égale à 0,45 ± 0,04. Cette valeur est donc supérieure à 1 en cas de

coefficient de transfert plus élevé sur électrode modifiée (cinétique améliorée) et inférieure à 1 en cas

de coefficient de transfert moins élevé (cinétique ralentie). Les valeurs obtenues sont répertoriées dans

le tableau II.7 :

tdépôt (s) CV-NO2 CV-NHOH CV-NH2

1 0,70 ± 0,02 0,85 ± 0,01 0,99 ± 0,14

5 0,57 ± 0,08 0,90 ± 0,11 1,00 ± 0,05

10 0,55 ± 0,12 0,73 ± 0,10 0,92 ± 0,02

30 0,32 ± 0,10 0,77 ± 0,08 1,05 ± 0,04

60 0,37 ± 0,04 0,73 ± 0,09 1,04 ± 0,08

120 0,33 ± 0,05 0,79 ± 0,04 1,05 ± 0,03

180 0,31 ± 0,04 0,72 ± 0,06 1,08 ± 0,08

300 0,32 ± 0,08 0,63 ± 0,07 0,80 ± 0,10

Tableau II.7 – Valeurs du rapport calculées à l’aide des méthodes de Tafel et de Koutecky-Levich
à partir de voltammogrammes linéaires tracés dans une solution aqueuse de KPF6 à 0,1 mol.L-1 (pH
3,5) contenant du Fe(CN)63- à 5 mmol.L-1 sur différents types d’électrodes et de valeurs de tdépôt.

160
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

βCV = 0,45 ± 0,04

La fonction NO2 réduit fortement le coefficient de transfert électronique qui atteint 30 % de sa valeur

sur CV (soit 0,12) pour les dépôts les plus épais. Pour les dépôts les plus fins (moins de 30 s), est

compris entre 0,5 et 0,7, puis reste stable à 0,3 pour des durées de dépôts supérieures à 30 s. Les

fonctions nitro induisent donc un effet barrière très important et ce, dès les plus faibles t dépôt.

La fonction NHOH réduit également le coefficient de transfert cathodique de Fe(CN)63- (entre 63 et

90% de sa valeur obtenue sur CV). Cet effet barrière augmente avec l’épaisseur du dépôt.

La fonction NH2 induit deux tendances distinctes. Pour les dépôts les plus fins (jusqu’à 180 s), sa

valeur passe de 1 à 1,08, preuve d’une cinétique inchangée voire légèrement améliorée. Pour des

dépôts plus épais, l’encombrement stérique devient conséquent, ce qui se traduit par une diminution de

jusqu’à 0,8, en accord avec l’allure des voltammogrammes de la figure II.41.

Le temps de dépôt a donc clairement une influence sur l’effet des fonctionnalités de la couche. Pour

les faibles épaisseurs, la cinétique de réduction de l’hexacyanoferrate(III) est sensible à la nature du

groupement fonctionnel majoritairement présent. Aux plus fortes épaisseurs, l’effet barrière de la

couche organique est prépondérant et diminue l’influence des groupes fonctionnels.

3. Hexaamine ruthénium

Des expériences similaires ont été menées avec le Ru(NH3)63+. Les valeurs du coefficient de transfert

obtenues pour les différentes électrodes sont répertoriées dans le tableau II.8. Elles sont normalisées

par rapport au coefficient calculé sur CV nue, 0,53 ± 0,04.

161
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

tdépôt (s) CV-NO2 CV-NHOH CV-NH2

1 0,96 ± 0,14 0,97 ± 0,04 0,95 ± 0,10

5 0,87 ± 0,06 0,96 ± 0,12 1,05 ± 0,08

10 0,81 ± 0,10 0,87 ± 0,11 0,73 ± 0,03

30 0,77 ± 0,11 0,83 ± 0,05 0,92 ± 0,08

60 0,68 ± 0,09 0,52 ± 0,10 0,49 ± 0,13

120 0,48 ± 0,12 0,49 ± 0,07 0,45 ± 0,12

180 0,52 ± 0,08 0,49 ± 0,10 0,39 ± 0,10

300 0,41 ± 0,06 0,48 ± 0,15 0,52 ± 0,11

Tableau II.8 – Valeurs du rapport calculées à l’aide des méthodes de Tafel et de Koutecky-Levich
à partir de voltammogrammes linéaires tracés dans une solution aqueuse de KPF6 à 0,1 mol.L-1 (pH
3,5) contenant du Ru(NH3)63+ à 5 mmol.L-1 sur différents types d’électrodes et de valeurs de tdépôt.
βCV = 0,53 ± 0,04

Sur CV-NO2, la valeur de diminue lorsque le dépôt augmente, mais de façon plus linéaire que pour

l’hexacyanoferrate(III) (tableau II.7). Entre 1 et 60 s, le coefficient de transfert électronique passe de

100 % à 70 % de sa valeur sur CV. Pour les dépôts les plus épais, il se stabilise autour de 50 %.

L’évolution de en fonction de tdépôt est globalement la même sur CV-NHOH et sur CV-NH2 que

sur CV-NO2. Le coefficient de transfert β se stabilise à 0,27 pour les films les plus épais.

La fonctionnalité de surface a peu d’influence sur la cinétique de réduction de Ru(NH 3)63+. On peut

toutefois s’attendre à ce que les variations soient les mêmes pour NHOH et NH2, qui induisent des

répulsions électrostatiques semblables vis-à-vis de l’espèce rédox. Le fait qu’on observe le même

phénomène sur CV-NO2 est sans doute dû au fait que Ru(NH3)63+ se réduit selon un mécanisme sphère

externe (figure II.32).

162
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

L’épaisseur du dépôt est le paramètre le plus influent pour la réduction de Ru(NH3)63+. En effet, pour

des valeurs de tdépôt > 60 s, le coefficient de transfert est maintenu à 50% environ de sa valeur initiale

quelle que soit l’électrode modifiée considérée.

4. Ferrocène méthanol

Des expériences similaires ont été menées avec le FcMeOH. La valeur moyenne calculée sur CV nue

de αCV est 0,52 ± 0,05. Les valeurs du rapport sont répertoriées dans le tableau II.9 :

tdépôt (s) CV-NO2 CV-NHOH CV-NH2

1 0,75 ± 0,04 0,82 ± 0,07 0,92 ± 0,04

5 0,72 ± 0,08 0,81 ± 0,08 0,90 ± 0,02

10 0,73 ± 0,09 0,63 ± 0,05 0,77 ± 0,10

30 0,64 ± 0,10 0,66 ± 0,06 0,63 ± 0,06

60 0,53 ± 0,10 0,67 ± 0,03 0,59 ± 0,05

120 0,55 ± 0,03 0,50 ± 0,04 0,64 ± 0,08

180 0,54 ± 0,04 0,54 ± 0,04 0,62 ± 0,10

300 0,56 ± 0,06 0,46 ± 0,06 0,69 ± 0,05

Tableau II.9 – Valeurs du rapport calculées à l’aide des méthodes de Tafel et de Koutecky-Levich
à partir de voltammogrammes linéaires tracés dans une solution aqueuse de KPF6 à 0,1 mol.L-1 (pH
3,5) contenant du FcMeOH à 5 mmol.L-1 sur différents types d’électrodes et de valeurs de tdépôt.
αCV = 0,52 ± 0,05

163
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

Quelle que soit la fonctionnalisation d’électrode, le comportement du ferrocène méthanol connaît la

même variation en fonction de l’épaisseur du dépôt, i.e. une diminution de qui passe de 0,8 - 0,9 à

0,5. Ce résultat prouve que seule la couche organique a un effet barrière, indépendamment des

fonctions de surface. Le complexe neutre est donc tout autant repoussé par des fonctions anioniques

(ou à forte densité électronique type NO2) que par des fonctions cationiques (NH2OH+ et NH3+).

d. Effet de la couche organique

Afin d’avoir une idée plus précise de l’influence de la couche organique elle-même et des fonctions

présentes à sa surface sur la cinétique des réactions électrochimiques des sondes rédox, un film de

phényldiazonium (PhD, figure II.42) ne portant aucune fonction, a été greffé à l’électrode de CV.

Figure II.42 – Structure du phényldiazonium (PhD)

Le PhD est généré in situ (cf. section A.IV.b. de ce chapitre) en milieu HCl à 0,1 mol.L-1 par mélange

d’un léger excès de NaNO2 et d’aniline pendant 1 h à 4°C. Le milieu réactionnel est ensuite utilisé

comme solution électrolytique. La figure II.43 représente le voltammogramme cyclique enregistré

avec une électrode de CV dans la solution obtenue.

164
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

4 i (µA)

-2

-4

-6

-8

E (V/ECS)
-10
-0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

Figure II.43 – Voltammogramme cyclique tracé avec une électrode de CV dans une solution aqueuse
de HCl à 0,1 mol.L-1 (pH 1) contenant du PhD à 2,5 mmol.L-1.
v = 0,1 V.s-1.

On observe un pic de réduction à 0,02 V, caractéristique de la réduction du PhD et donc du dépôt de la

couche organique. Le potentiel de réduction du PhD est plus cathodique que celui du NBD car la

fonction diazonium est plus stable sans fonction nitro en para. Elle nécessite donc une plus grande

surtension cathodique.

Afin de conserver la même cinétique de greffage que celle adoptée pour le dépôt de NBD, le dépôt de

PhD est effectué au potentiel constant de -0,1 V pendant des temps de dépôt compris entre 1 à 300 s.

L’électrode ainsi modifiée est nommée CV-PhD. Une étude cinétique a été menée pour déterminer la

valeur du rapport (pour le Fe(CN)63- et le Ru(NH3)63+) et de (dans le cas du FcMeOH) en

fonction de tdépôt. Les valeurs obtenues sont répertoriées dans le tableau II.10.

165
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

tdépôt (s) Fe(CN)63- Ru(NH3)63+ FcMeOH

1 0,66 ± 0,04 0,66 ± 0,11 1,00 ± 0,04

5 0,52 ± 0,08 0,70 ± 0,07 0,95 ± 0,06

10 0,56 ± 0,06 0,82 ± 0,06 0,86 ± 0,05

30 0,43 ± 0,03 0,75 ± 0,10 0,71 ± 0,08

60 0,50 ± 0,06 0,63 ± 0,08 0,74 ± 0,10

120 0,41 ± 0,04 0,68 ± 0,14 0,81 ± 0,09

180 0,45 ± 0,09 0,71 ± 0,15 0,65 ± 0,11

300 0,45 ± 0,05 0,65 ± 0,13 0,66 ± 0,10

Tableau II.10 – Valeurs des rapports et calculées à l’aide des méthodes de Tafel et de
Koutecky-Levich à partir de voltammogrammes linéaires tracés dans une solution aqueuse contenant
le complexe considéré à 5 mmol.L-1 et du KPF6 à 0,1 mol.L-1 avec différents complexes métalliques et
de valeurs de tdépôt. βCV = 0,44 ± 0,04 pour le Fe(CN)63-, βCV = 0,53 ± 0,04 pour le Ru(NH3)63+ et αCV
= 0,52 ± 0,05 pour le FcMeOH.

Pour l’hexacyanoferrate(III), la couche organique a un effet barrière très visible dès les dépôts les plus

fins puisqu’une électrolyse de 1 s dans la solution de PhD suffit à diviser par deux la valeur du

coefficient de transfert électronique. Par comparaison, un tel comportement n’est observé que pour

CV-NO2 et à partir de tdépôt > 5 s. Au contraire, dans le cas de films épais, la valeur du rapport est plus

faible avec CV-NO2 qu’avec CV-PhD. Les fonctions NHOH et NH2 améliorent, quant à elles, la

cinétique de réduction de l’hexacyanoferrate(III) comparativement à une couche organique sans

fonctions actives. En effet, pour un tdépôt = 180 s par exemple, la valeur du rapport est égal à 0,45 sur

CV-PhD, 0,31 pour CV-NO2, 0,72 pour CV-NHOH et 1,08 pour CV-NH2.

Dans le cas de l’hexaamine ruthénium, l’effet de la couche organique est moins marqué que pour

l’hexacyanoferrate. Cependant, en comparant les films de PhD et de NBD dans le cas de temps de

166
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

dépôts inférieurs à 10 s, la valeur de est de 0,75 sur CV-PhD mais est supérieure à 0,8 sur CV-NO2,

CV-NHOH et CV-NH2. Le transfert électronique semble légèrement facilité en présence d’une couche

de NBD. Ce résultat est a priori surprenant compte tenu des interactions défavorables entre

Ru(NH3)63+ et les fonctions du film organique résultant. Il peut cependant être expliqué par les

fonctions actives de la couche dont l’implication dans le transfert électronique (figure II.5) a un effet

bénéfique plus important que l’effet barrière qu’elles induisent. Cela relativise la prépondérance de

l’effet électrostatique par rapport à la structure de la couche. Pour les dépôts plus épais (tdépôt > 180 s),

les valeurs du rapport sont plus élevées pour les films de PhD que pour les films de NBD. Cette

observation prouve que les fonctions actives participent à l’effet barrière de la couche organique.

Dans le cas du ferrocène méthanol, les valeurs de sont globalement plus élevées avec un film de

PhD qu’avec un film de NBD à temps identique de dépôt. Les fonctions NO2, NHOH et NH2

participent donc à l’effet de répulsion électrostatique et rendent plus difficile l’oxydation du complexe

neutre sur l’électrode modifiée.

e. Effet du pH

L’influence du pH a été étudiée pour vérifier les hypothèses d’attraction et de répulsion entre les

groupes fonctionnels de la couche organique et les sondes rédox. En se plaçant à pH neutre (PBS 0,1

mol.L-1 pH 7), les fonctions NHOH et NH2 de la couche organique sont non chargées. Par conséquent,

d’autres types d’interactions entre complexes métalliques et couche organique sont susceptibles de se

produire.

La figure II.44 représente les voltammogrammes cycliques enregistrés en milieu PBS contenant 5

mmol.L-1 de Fe(CN)63- avec les électrodes CV, CV-NO2, CV-NHOH et CV-NH2

167
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

60 i (µA)

40

20

-20

-40

E (V/ECS)
-60
-0,6 -0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8

Figure II.44 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution aqueuse de PBS à 0,1 mol.L-1
(pH 7) contenant du Fe(CN)63- à 5 mmol.L-1 sur une électrode de CV (en noir), CV-NO2 (en bleu), CV-
NHOH (en rouge) et CV-NH2 (en vert). v = 0,1 V.s-1.

Comme dans la figure II.33, la courbe obtenue sur CV (courbe noire), est un voltammogramme bien

défini, caractéristique d’un système rédox rapide et réversible. La réduction électrochimique de

l’hexacyanoferrate est quasiment absente sur CV-NO2 (courbe bleue) puisqu’aucun pic anodique ou

cathodique n’est observé dans la gamme de potentiels utilisés. En comparant l’effet barrière sur les

électrodes CV-NHOH et CV-NH2 à pH 3,5 (figure II.33 courbes rouge et verte) et à pH 7 (courbes

rouge et verte ci-dessus), on observe dans le second cas que les intensités de pic sont bien plus faibles.

De plus, l’écart entre les potentiels de pics anodique et cathodique est plus grand à pH 7 (0,55 V sur

CV-NHOH et 0,39 V sur CV-NH2) qu’à pH 3,5 (0,32 V sur CV-NHOH et 0,22 V sur CV-NH2).

L’effet barrière de CV-NHOH et de CV-NH2 vis-à-vis de Fe(CN)63- est donc augmenté à pH 7 car

l’absence de fonctions protonées diminue les effets d’attraction entre couche organique et complexe.

La figure II.45 représente les VC enregistrés en milieu PBS contenant 5 mmol.L-1 de Ru(NH3)63+ avec

les électrodes CV, CV-NO2, CV-NHOH et CV-NH2.

168
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

60 i (µA)

40

20

-20

-40

-60

E (V/ECS)
-80
-0,7 -0,6 -0,5 -0,4 -0,3 -0,2 -0,1 0 0,1 0,2 0,3

Figure II.45 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution aqueuse de PBS à 0,1 mol.L-1
(pH 7) contenant du Ru(NH3)63+ à 5 mmol.L-1 sur une électrode de CV (en noir), CV-NO2 (en bleu),
CV-NHOH (en rouge) et CV-NH2 (en vert). v = 0,1 V.s-1.

Par comparaison avec la figure II.34, on obtient le même type de courbe sur CV (courbe noire). L’effet

barrière est présent de manière plus ou moins visible pour CV-NO2 (courbe bleue), CV-NHOH

(courbe rouge) et CV-NH2 (courbe verte). Cependant, il est moins dépendant de la nature du groupe

fonctionnel à pH 7 qu’à pH 3,5. En effet, si l’écart entre les potentiels des pics cathodique et anodique

est globalement le même (0,26 ± 0,02 V pour les électrodes modifiées à pH 3,5 et pH 7), l’intensité

des pics est bien plus proche de celles sur CV à pH neutre qu’à pH acide. L’hexaamine ruthénium

subit donc un effet barrière plus faible à pH 7 qu’à pH 3,5 puisque la répulsion électrostatique induite

par les fonctions NHOH et NH2 (sous formes protonées à pH 3,5) ne se produit plus à pH neutre.

169
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

f. Bilan de l’étude cinétique

La fonctionnalisation d’une électrode de CV par un film de NBD offre la possibilité de moduler les

propriétés de surface. Ainsi, à partir d’une seule et même couche, il est possible de travailler avec des

fonctions présentant des encombrements stériques différents, à haute densité électronique, chargées

positivement ou neutres. Les groupements fonctionnels présents dans la couche ont une influence sur

le comportement électrochimique de sondes redox par le biais d’interactions électrostatiques, effet qui

se rajoute à celui provoqué par la présence d’une couche organique. L’hexacyanoferrate, complexe

anionique, est la sonde la plus impactée par le changement de groupement fonctionnel. L’hexaamine

ruthénium et le ferrocène méthanol, complexes cationique et neutre respectivement, connaissent les

plus gros changements de cinétique pour des épaisseurs de films conséquentes.

V. Apport de l’étude cinétique dans l’élucidation du mécanisme

L’étude mécanistique (cf. sections E.I et II de ce chapitre) a permis de clarifier trois éléments

principaux du mécanisme de réduction du NBD :

 La réduction du diazonium en son radical correspondant (et donc le greffage) se produit à 0,4

V.

 La réduction des groupements NO2 en NHOH se produit à -0,1 V.

 La formation de fonctions amine NH2 se produit à -0,6 V.

En se basant sur ces valeurs de potentiels, la cinétique de réaction électrochimique de trois complexes

métalliques a été étudiée (cf. section E.IV de ce chapitre). Les résultats obtenus ont d’abord démontré

qu’une électrode ayant subi une électrolyse à 0,3 V dans un milieu contenant du NBD ralentit la

cinétique électrochimique de réactions des complexes métalliques comparativement à une électrode de

CV n’ayant subi aucun prétraitement. Cet effet est d’autant plus marqué que le temps d’électrolyse est

élevé. Ces observations confirment donc qu’un greffage se produit bien à 0,3 V. L’électrochimie et les

170
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
__________________________________________________________________________________

méthodes spectroscopiques confirment par ailleurs la présence à ce potentiel d’une majorité de

fonctions NO2.

Lorsque l’électrode CV-NO2 subit une électrolyse à -0,1 V dans un milieu acide sans NBD, la

cinétique de transfert électronique des complexes est changée avec l’électrode résultante. Celle-ci est

notamment améliorée avec l’hexacyanoferrate et ralentie avec le ferrocèneméthanol et l’hexaamine

ruthénium. Ces résultats sont en accord avec la formation de fonctions cationiques au sein de la couche

lors de l’électrolyse à -0,1 V, qui facilitent les interactions entre espèces anioniques et couche

organique. L’électrochimie et les méthodes spectroscopiques suggèrent l’apparition de fonctions

NHOH au sein de la couche organique. Sous forme protonée à pH acide, ces fonctions influencent la

cinétique des complexes chargés et neutres.

Lorsqu’une nouvelle électrolyse est effectuée à -0,8 V dans un milieu acide sans NBD, la cinétique de

réactions des complexes métalliques est impactée par la couche organique résultante. Elle est

améliorée dans le cas de la réduction de l’hexacyanoferrate et ralentie dans le cas de la réduction de

l’hexaamine ruthénium et du ferrocèneméthanol. Les évolutions différentes sont cohérentes avec

l’apparition de fonctions NH2 lors de l’électrolyse à -0,6 V. Sous leur forme protonée à pH acide, les

groupements amine influent sur la cinétique des espèces étudiées.

171
 Chapitre II : Le diazonium : un outil de modulation de propriétés de surface
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182
 Chapitre III :
Elaboration de capteurs pour le
dosage d’antioxydants
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Chapitre III : Elaboration de capteurs pour

le dosage d’antioxydants

A. Pourquoi modifier les surfaces d’électrodes ? _______________________________ 187

I. Objectifs de la modification de surface _______________________________________ 187

II. Dosage simultané des acides ascorbique et urique ______________________________ 188

III. Exemples de fonctionnalisations __________________________________________ 189

IV. Utilisation des diazoniums pour l’évaluation du stress oxydant _________________ 189

B. Produits chimiques et appareillage _______________________________________ 190

I. Produits chimiques _______________________________________________________ 190

II. Appareillage _____________________________________________________________ 191

C. Films de nitrobenzène diazonium pour la détection de marqueurs du stress oxydant 192

I. Influence de la fonction du film _____________________________________________ 192

II. Utilisation du couple NO/NHOH ____________________________________________ 194

a. Détection de l’acide urique ______________________________________________________ 194
b. Détection de l’acide ascorbique __________________________________________________ 196
1. Mise en évidence de la réduction irréversible de la fonction NO _______________________ 196
2. Elaboration d’un capteur basé sur le couple NO/NHOH _____________________________ 198

III. Bilan : nitrobenzène diazonium et antioxydants _____________________________ 203

D. Polymères conducteurs et poly[3,4-éthylènedioxythiophène] ___________________ 203

I. Avantages des polymères conducteurs _______________________________________ 204

II. Présentation du poly[3,4-éthylènedioxythiophène] _____________________________ 204

a. Historique et applications _______________________________________________________ 204
b. Electropolymérisation __________________________________________________________ 205
c. Stabilité ______________________________________________________________________ 207

III. Poly[3,4-éthylènedioxythiophène] et capteur à acides ascorbique et urique _______ 207

a. Effet électrocatalytique _________________________________________________________ 207
b. Synthèse des travaux antérieurs de l’équipe ________________________________________ 208

185
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

E. Fonctionnalisation mixte diazonium-polymère ______________________________ 211

I. Stratégie et principe ______________________________________________________ 211

II. Greffage du thiophénylbenzènediazonium ____________________________________ 212

a. Synthèse du diazonium _________________________________________________________ 212
b. Modification par le thiophénylbenzènediazonium ___________________________________ 212

III. Electropolymérisation du poly[3,4-éthylènedioxythiophène] ___________________ 214

IV. Détermination des méthodes électrochimiques optimales de dépôts _____________ 217

a. Mode opératoire_______________________________________________________________ 217
b. Influence du mode de dépôt du poly[3,4-éthylènedioxythiophène] ______________________ 219
1. Polymérisation sans précurseur thiophène ________________________________________ 219
2. Polymérisation avec des précurseurs thiophène ____________________________________ 222
(i) Thiophénylbenzène diazonium greffé par voltammétrie cyclique _____________________ 222
(ii) Thiophénylbenzène diazonium greffé par électrolyse à potentiel constant ____________ 224
(iii) Thiophénylbenzène diazonium greffé par électrolyse à courant constant _____________ 226
c. Bilan ________________________________________________________________________ 229

V. Influence des densités de charge des dépôts ___________________________________ 229

a. Influence de la charge d’électropolymérisation du poly[3,4-éthylènedioxythiophène] ______ 229
b. Influence de la charge de greffage de diazonium ____________________________________ 231

VI. Utilisation de la microscopie électrochimique à balayage ______________________ 233

a. Origine de la microscopie électrochimique à balayage ________________________________ 233
b. Principe de fonctionnement _____________________________________________________ 233
c. Comment utiliser la microscopie électrochimique à balayage ? ________________________ 234
d. Applications de la microscopie électrochimique à balayage ___________________________ 236
e. Etude de la fonctionnalisation mixte ______________________________________________ 236
1. Mode opératoire _____________________________________________________________ 236
2. Analyse de la couche organique diazonium-polymère _______________________________ 238

VII. Utilisation du capteur fonctionnalisé _______________________________________ 242

a. Dosage séparé des acides ascorbique et urique ______________________________________ 242
b. Dosage simultané des acides ascorbique et urique ___________________________________ 246
c. Etude de la stabilité ____________________________________________________________ 247
1. Stabilité au stockage __________________________________________________________ 247
2. Stabilité opérationnelle ________________________________________________________ 249
d. Comparaison des performances analytiques ________________________________________ 250
e. Essais en milieu biologique réel __________________________________________________ 251

F. Bilan et perspectives du capteur __________________________________________ 253

G. Références bibliographiques __________________________________________ 255

186
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Dans la course à l’élaboration de capteurs toujours plus sélectifs et sensibles, la modification de

surface est devenue une stratégie indispensable pour améliorer les performances analytiques. Dans

le cas des acides urique (AU) et ascorbique (AA, le manque de sélectivité constitue un obstacle

majeur à surmonter compte tenu du chevauchement de leurs pics d’oxydation sur l’électrode nue.

En effet, que ce soit sur or[1], platine[2] ou carbone vitreux[3], la problématique est la même. De

plus, la coexistence quasi systématique des deux antioxydants dans les milieux d’intérêt comme

les fluides biologiques renforce la nécessite d’améliorer la sélectivité des capteurs. Le risque

d’interférences dans des milieux contenant de la dopamine ou du glutathion, biomolécules qui

réagissent à des potentiels voisins, a également mis en avant l’importance de fonctionnaliser les

capteurs. Détecter de manière simultanée deux antioxydants hydrophiles principaux que sont l’AA

et l’AU est donc d’un intérêt primordial pour envisager les capteurs électrochimiques comme outil

de premier choix pour l’évaluation des propriétés antioxydantes d’un milieu complexe.

A. Pourquoi modifier les surfaces d’électrodes ?

I. Objectifs de la modification de surface

La stratégie de modification d’électrode pour des capteurs à antioxydants a donc pour objectifs :

 D’améliorer les performances analytiques des capteurs : sélectivité, sensibilité, limite de

détection, répétabilité, reproductibilité…

 De réduire les phénomènes d’adsorption, notamment dans des milieux complexes.

 De diminuer les coûts de mesure avec l’utilisation d’un appareillage moins onéreux que les

méthodes traditionnellement utilisées.

187
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

II. Dosage simultané des acides ascorbique et urique

La figure III.1 représente les voltammogrammes cycliques enregistrés avec une électrode de CV

dans un milieu PBS à 0,1 mol.L-1 (pH 7) contenant 200 µmol.L-1 d’AA (courbe bleue), 200

µmol.L-1 d’AU (courbe rouge) et un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 200 µmol.L -1 (courbe

verte).

4,5
i (µA)
4

3,5

2,5

1,5

0,5

0
E (V/ECS)
-0,5
-0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

Figure III.1 – Voltammogrammes cycliques tracés avec une électrode de CV dans une solution aqueuse
de PBS à 0,1 mol.L-1 (en noir) contenant de l’AA à 200 µmol.L-1 (en bleu), de l’AU à 200 µmol.L-1 (en
rouge) et un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 200 µmol.L-1 (en vert). v = 0,02 V.s-1.

Par comparaison avec le voltammogramme cyclique obtenu dans la solution tamponnée sans

antioxydants (courbe noire), des pics correspondants aux oxydations des deux acides sont

clairement observables. Le pic de l’AA est à 0,2 V tandis que celui de l’AU est à 0,36 V. Dans un

mélange équimolaire, la détection des acides est possible (puisqu’un signal d’oxydation est

enregistré) mais la sélectivité n’est pas suffisante pour obtenir deux pics clairement définis. Dans

l’objectif d'un dosage simultané de l’AA et de l’AU, cette sélectivité se doit d’être améliorée.

188
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

III. Exemples de fonctionnalisations

Dans le cadre de la détection simultanée de l’AA et de l’AU, la bibliographie regorge d’électrodes

modifiées par de nombreux modes de fonctionnalisation. Le tableau III.1 regroupe les exemples les

plus notables.

Stratégie de modification Références

[4, 5]
Polyaniline
[6]
Polypyrrole suroxydé
[7]
Polyméthylpyrrole + Nanoparticules de Pd
[8-12]
Polyéthylènedioxythiophène (PEDOT)
PEDOT + catéchine ou nanoparticules de Pd ou d’Au [13-15]
[16]
Polyacétate de vinyle
[3]
Polyluminol
[17]
Nanotubes de carbone monofeuillets
[18]
Nanotubes de carbone multifeuillets
[19]
Poudre de carbone
[20]
Oxydes métalliques
[21]
Silice mésoporeuse
[22]
Thiols autoassemblés
[23]
Complexes métalliques
[24]
Acide caféique
[25]
Quercétine
[26]
Liquides ioniques
[27]
Bromure de cétrimonium (Surfactant)
Tableau III.1 – Exemples de modification d’électrode pour la détection d’AA et d’AU.

Parmi la large gamme de méthodes employées, peuvent être citées notamment les fonctionnalisations

par des polymères conducteurs, l’utilisation de nanoparticules ou de composés organiques naturels

déposés sur des électrodes conventionnelles.

IV. Utilisation des diazoniums pour l’évaluation du stress oxydant

La fonctionnalisation d’électrodes par les sels de diazonium permet de conférer des propriétés très

variables aux surfaces ainsi modifiées. Avec un choix judicieux du groupement R et une étude pour

obtenir les paramètres optimaux de dépôt, l’élaboration d’un capteur à molécules antioxydantes

réunissant à la fois les conditions satisfaisantes de sélectivité, de spécificité (grâce au groupement

189
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

fonctionnel R) et de stabilité (inhérent à la liaison covalente formée) semble tout à fait envisageable.

De plus, l’existence de liaisons covalentes entre le diazonium et les substrats carbonés amène à

privilégier un matériau d’électrode bien moins onéreux que l’or ou le platine traditionnellement utilisé.

Cette opportunité d’emploi de substrats carbonés est aussi intéressante si l’on tient compte des

perspectives d’industrialisation à grande échelle de capteurs via les électrodes sérigraphiées à encre de

carbone.

Toutefois, parmi les travaux consacrés à l’élaboration et à la mise au point de capteurs antioxydants,

rares sont ceux qui utilisent les fonctionnalisations par les sels de diazonium comme stratégie de

modification. On peut citer l’équipe du Dr. O’Sullivan qui a travaillé sur la mesure simultanée de l’AA

et de l’AU avec un diazonium portant une fonction amine et une fonction alcool [28]. A l’aide d’un

couple redox réversible aminophénol/quinoneimine présent à la surface de l’électrode modifiée, la

sélectivité du capteur est améliorée, avec une surtension d’oxydation de l’AA réduite de 200 mV et

une limite de détection de 0,3 µmol.L-1. Cette fonctionnalisation a ensuite été adaptée sur des

électrodes sérigraphiées[29], employées avec succès pour l’analyse d’échantillons issus de l’industrie

agro-alimentaire[30]. Downard et al. ont, quant à eux, exploité les propriétés de barrière du diazonium

vis-à-vis de l’AA afin de permettre le dosage de la dopamine en présence d’un large excès d’AA. Une

limite de détection de 90 nmol.L-1 a été atteinte pour une concentration en AA de 1 mmol.L-1[31].

B. Produits chimiques et appareillage

I. Produits chimiques

Le tableau III.2 liste les produits spécifiquement utilisés dans les expériences décrites dans ce chapitre.

Les autres produits et solutions sont indiqués dans le tableau II.1 (chapitre II).

190
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Nom Formule Fournisseur Rôle

3,4-
éthylènedioxythiophène C6H6O2S Sigma Monomère
(EDOT)
Perchlorate de
tétrabutylammonium C16H36ClNO4 Sigma-Aldrich Electrolyte support
(TBAPC)
Réactif de synthèse du
Thiophénylaniline
C10H9NS Sigma-Aldrich thiophénylbenzènediazonium
(TPA)
(TPBD)
Acide L-ascorbique
(AA) C6H8O6 Sigma Antioxydant
99%
Acide urique (AU)
C5H4N4O3 Sigma Antioxydant
99%

Tableau III.2 – Liste des produits chimiques

II. Appareillage

L’appareillage et les méthodes utilisés dans les expériences qui suivent sont les mêmes que ceux du

chapitre II. Le matériel supplémentaire est listé dans le tableau III.3.

Informations
Nom Illustration
supplémentaires

Dispositif de
microscopie
électrochimique à Sonde Pt d = 10 µm
balayage Bipotentiostat UNISCAN
(Scanning Instruments PG580R
electrochemical piloté par le logiciel M370
microscopy ou
SECM)

Microscope
Utilisé pour faire la
électronique à
caractérisation des dépôts
balayage (MEB)
avec une tension de
ESEM Quanta 250
30 keV
FEG FEI

191
Tableau III.3 – Matériel utilisé
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

C. Films de nitrobenzène diazonium pour la détection de marqueurs du

stress oxydant

Dans le chapitre précédent, nous nous sommes attachés à étudier le mécanisme de réduction du NBD

et l’influence du groupement sur la cinétique de transfert de charges de sondes redox. Les travaux ont

montré qu’il est possible de moduler les propriétés de surface par assistance électrochimique. A partir

de cette étude, les films de NBD sont maintenant envisagés comme couche de reconnaissance

moléculaire d’un capteur à AA et AU. Dans cette optique, plusieurs stratégies sont évaluées.

I. Influence de la fonction du film

La première stratégie consiste à exploiter les interactions électrostatiques favorables entre les fonctions

neutres ou protonées du film de NBD et les antioxydants neutres ou anioniques. Le tableau III.4

précise les configurations possibles en fonction du pH. Les valeurs de pKa utilisées pour les couples

du NHOH, du NH2, de l’AA et de l’AU sont respectivement 6[32], 4,6[33], 4,2[34] et 5,4[35]. Dans les

zones comprises entre pKa - 1 et pKa + 1, les concentrations des formes acide et basique de l’espèce

considérée sont du même ordre de grandeur. Ces intervalles de pH sont donc considérés comme non

judicieux pour favoriser complètement des interactions électrostatiques.

pH 0 3,2 3,6 4,2 4,4 4,6 5 5,2 5,4 5,6 6 6,4 7 >7
Fonctions de NO2 Neutre
la couche de NHOH Cationique [pKa -1 ; pKa +1] Neutre
NBD NH2 Cationique [pKa -1 ; pKa +1] Neutre
AA Neutre [pKa -1 ; pKa +1] Anionique
Antioxydants
AU Neutre [pKa -1 ; pKa +1] Anionique
Tableau III.4 – Charge des fonctions de la couche de NBD, de l’AA et de l’AU en fonction du pH

La comparaison des pKa montre qu’il ne peut y avoir de coexistence entre une forme cationique d’une

fonction de la couche organique et une forme anionique d’un antioxydant. Cela rend une amélioration

par l’électrode modifiée de la cinétique de transfert de charge de l’un ou de l’autre des deux

antioxydants difficile à obtenir. La figure III.2 représente les voltammogrammes cycliques obtenus

dans une solution de PBS à 0,1 mol.L-1 (pH 7) contenant un mélange équimolaire d’AA et d’AU à

192
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

200 µmol.L-1 avec une électrode de CV, de CV-NO2 (tdépôt = 30 s pour diminuer l’encombrement

stérique) et les électrodes CV-NHOH et CV-NH2 associées (cf. tableau II.5).

5 i (µA)

-1

E (V/ECS)
-2
-0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

Figure III.2 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution aqueuse de PBS à 0,1 mol.L-1 et
un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 200 µmol.L-1 avec une électrode de CV (en noir), CV-NO2
(en bleu), CV-NHOH (en rouge) et CV-NH2 (en vert). v = 0,02 V.s-1.

Sur CV (courbe noire), les deux pics d’oxydations de l’AA et de l’AU ne sont pas séparés. Les

fonctionnalisations par les fonctions NO2 (courbe bleue), NHOH (courbe rouge) et NH2 (courbe verte),

n’améliorent pas la sélectivité puisque les deux pics d’oxydations sont toujours confondus et déplacés

vers des potentiels plus anodiques. Les résultats montrent que l’effet barrière est trop important

(malgré un temps de dépôt peu élevé) et empêche toute séparation des deux acides. En outre, au pH

d’étude (pH = 7), choisi pour mimer les conditions neutres du sérum sanguin, l’AA et l’AU sont sous

formes anioniques. Cette charge globalement négative n’est pas favorable dans la mesure où le

groupement NO2 a une haute densité électronique et les fonctions NHOH et NH2 ne sont pas sous leurs

formes protonées. Les conditions physiologiques dans lesquelles le capteur serait amené à fonctionner

débouchent donc sur une configuration fonctions neutres de la couche organique - antioxydants

193
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

anioniques, n’induisant ni répulsion ni attraction électrostatiques. Seule l’effet barrière éventuellement

induit par la couche organique et les fonctions greffés régit la cinétique d’oxydation de l’AA et de

l’AU.

II. Utilisation du couple NO/NHOH

La seconde stratégie envisagée d’utilisation des films de NBD pour assurer la détection simultanée de

l’AA et de l’AU est de se focaliser sur le couple NO/NHOH de CV-NHOH. En effet, la réversibilité

de ce système redox est un atout très intéressant dans la mise en place d’un mécanisme catalytique.

Etant donné que le signal du couple NO/NHOH est mieux défini aux pH acides (cf. section E.I.b. du

chapitre II) et qu’il n’existe pas de pH commun à la protonation du NHOH et à la forme anionique des

deux antioxydants (cf. tableau III.4), le milieu d’étude est porté à pH 1. Les interactions mises en jeu

sont donc de type fonctions cationiques – antioxydants neutres et n’induisent ni répulsion ni attraction

électrostatiques majeures. D’autre part, le temps de dépôt choisi est de 30 s pour que l’effet barrière

induit par la couche organique ne soit pas trop important et que les fonctions NO/NHOH soient plus

difficiles à réduire (cf. chapitre II, figure II.27).

a. Détection de l’acide urique

La figure III.3 représente les voltammogrammes cycliques enregistrés sur une électrode de CV et de

CV-NHOH en milieu HCl à 0,1 mol.L-1 avec de l’AU à 200 µmol.L-1. Les courbes enregistrées sans

AU figurent également à titre de comparaison.

194
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

2,5
i (µA)

1,5

0,5

E (V/ECS)
-0,5
-0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

Figure III.3 – Voltammogrammes cycliques tracés avec une électrode de CV (en bleu) et de CV-
NHOH (en rouge) dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1 ( - - ) et contenant de l’AU à 200
µmol.L-1 (―). v = 0,02 V.s-1.

Sur CV (courbe en trait plein bleu), l’oxydation de l’AU induit un pic anodique à 0,63 V d’intensité

2 µA. Sur CV-NHOH (courbe en trait plein rouge), aucune amélioration de la cinétique réactionnelle

n’est constatée étant donné que le pic d’oxydation de l’AU est décalé au potentiel de 0,66 V et a une

intensité de 1,5 µA. Le couple NO/NHOH centré à 0,23 V a un signal identique avec ou sans l’AU en

solution (courbes rouges). Les résultats observés montrent que le couple réversible NO/NHOH

n’exerce aucune activité catalytique pour l’oxydation de l’AU.

195
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

b. Détection de l’acide ascorbique

1. Mise en évidence de la réduction irréversible de la fonction NO

La figure III.4 représente les voltammogrammes cycliques enregistrés sur une électrode de CV et de

CV-NHOH en milieu HCl à 0,1 mol.L-1 avec de l’AA à 200 µmol.L-1. Les courbes enregistrées sans

AA figurent également à titre de comparaison.

0,9
i (µA)
0,8

0,7

0,6

0,5

0,4

0,3

0,2

0,1

-0,1
E (V/ECS)
-0,2
-0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1
Figure III.4 – Voltammogrammes cycliques tracés avec une électrode de CV (en bleu) et de CV-
NHOH (en rouge) dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1 ( - - ) contenant de l’AA à
200 µmol.L-1 (―). v = 0,02 V.s-1.

Sur CV (courbe en trait plein bleu), l’oxydation de l’AA induit un pic anodique à 0,41 V d’intensité

0,7 µA. Sur CV-NHOH (courbe en trait plein rouge), aucune amélioration de la cinétique réactionnelle

n’est constatée étant donné que le pic d’oxydation de l’AA est décalé au potentiel de 0,5 V et a une

intensité de 0,6 µA. L’effet barrière induit par les fonctions de la couche vis-à-vis de l’agent

antioxydant ne permet pas de favoriser la cinétique d’oxydation. Le couple NO/NHOH centré à 0,23 V

196
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

a un signal légèrement plus faible en présence d’AA (courbe en trait plein rouge) que dans la même

solution sans l’antioxydant (courbe en pointillés rouges). Cette diminution peut être expliquée à l’aide

de l’échelle des potentiels standards suivante (figure III.5).

Figure III.5 – Echelle des potentiels standard concernant les fonctions NO et NHOH.

Avec un potentiel standard apparent à pH 1 de 0,39 V/ECS[34], l’AA a un potentiel inférieur au couple

NO/NH2. En présence de NO et d’AA, une réaction spontanée se produit et débouche sur la réduction

irréversible de la fonction nitroso en NH2 électroinactif selon la réaction :

Réaction III.1 NO + 2 AA → NH2 + 2 ADH

Cette réaction explique la diminution du couple NO/NHOH en présence d’AA observée à la figure

III.4

197
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

2. Elaboration d’un capteur basé sur le couple NO/NHOH

L’existence d’une réduction irréversible de NO en NH2 par l’AA constitue une opportunité

intéressante pour une application analytique. Encore faut-il que la diminution du signal du couple

NO/NHOH soit corrélée à la concentration en AA. Pour vérifier cette hypothèse, deux expériences

sont menées. La figure III.6 représente dix voltammogrammes cycliques successifs tracés avec CV-

NHOH dans une solution de HCl à 0,1 mol.l-1.

0,015
j (A.m-2)

0,01

0,005

-0,005

-0,01

E (V/ECS)
-0,015
-0,05 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45

Figure III.6 – Voltammogrammes cycliques successifs ( n = 10) tracés avec une électrode CV-NHOH
dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1. v = 0,005 V.s-1.

Les courbes montrent une activité redox centrée à 0,27 V, caractéristique du couple NO/NHOH.

L’activité du couple varie peu au cours des cycles car la densité de courant des pics anodique et

cathodique perd 6 % de sa valeur initiale sur le premier cycle. Ces résultats prouvent que le couple

NO/NHOH est relativement stable car sa diminution résiduelle reste négligeable.

198
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

La figure III.7 représente dix voltammogrammes cycliques successifs tracés avec CV-NHOH dans une

solution de HCl à 0,1 mol.l-1 contenant de l’AA à 100 µmol.L-1.

0,015 j (A.m-2)

0,01

0,005

-0,005

-0,01

E (V/ECS)
-0,015
-0,05 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45

Figure III.7 – Voltammogrammes cycliques successifs ( n = 10) tracés avec une électrode CV-NHOH
dans une solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1contenant de l’AA à 200 µmol.L-1. v = 0,005 V.s-1.

Les courbes montrent aussi une activité redox centré à 0,27 V caractéristique du couple NO/NHOH.

Contrairement aux résultats présentés à la figure III.6, l’activité du couple varie de façon plus marquée

puisque les pics anodiques et cathodiques perdent respectivement 11 et 14 % de leur densité de

courant initiale. Cette diminution est due à la consommation des fonctions NO par l’AA qui forme

irréversiblement du NH2 (réaction III.1). Pour tenter d’appliquer ces résultats à des fins analytiques,

dix voltammogrammes cycliques successifs sont tracés avec plusieurs électrodes CV-NHOH dans une

solution de HCl à 0,1 mol.L-1 contenant de l’AA à diverses concentrations. La figure III.8 montre pour

chaque concentration l’évolution du rapport de la densité de courant de pic anodique j pic enregistrée sur

chaque voltammogramme et normalisée par rapport à sa valeur (jpic)initial.

199
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

0,95

0,9

0,85

0,8

0,75

0,7

0,65

0,6

0,55
Nombre de cycles
0,5
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Figure III.8 – Evolution de en fonction du nombre de cycles successifs tracés dans une
solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1 (en noir) contenant de l’AA à 100 (en bleu), 200 (en rouge),
500 (en vert) et à 1000 µmol.L-1(en orange). v = 0,005 V.s-1

Dans le milieu sans AA (courbe noire), la valeur du rapport varie de 1 à 0,95. Ceci est en cohérence

avec la figure III.6 et prouve que le couple NO/NHOH est stable durant l’expérience. Lorsque

l’expérience est répétée en présence d’AA, le rapport décroît de façon plus ou moins rapide

et se stabilise à une valeur limite qui dépend de la concentration en AA. La décroissance de la valeur

de et sa valeur limite sont directement reliées à la concentration en AA. Plus l’AA est

concentré, plus la décroissance est rapide et plus la valeur limite est faible. D’une part, ces résultats

prouvent que la vitesse de disparition du couple de NO/NHOH est corrélée à la concentration en AA.

Ce résultat confirme qu’une réaction spontanée a lieu entre AA et NO (réaction III.1). D’autre part,

l’existence de cette valeur limite confirme que certaines fonctions NO sont plus profondes et ne sont

donc pas accessibles pour une réaction chimique (cf. sections E.I, II et III du chapitre II). Il a été

expérimentalement vérifié que l’évolution est similaire si l’on considère le pic cathodique du couple

NO/NHOH.

200
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Une série d’expériences similaires a été réalisée en augmentant la vitesse de balayage des potentiels de

5 à 100 mV.s-1. La figure III.9 rapporte les résultats obtenus

0,95

0,9

0,85

0,8

Nombre de cycles
0,75
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Figure III.9 – Evolution de en fonction du nombre de cycles successifs tracés dans une
solution aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1 (en noir) contenant de l’AA à 100 (en bleu), 200 (en rouge), 500
(en vert) et à 1000 µmol.L-1 (en orange). v = 0,1 V.s-1

Cette évolution est similaire si l’on considère le pic cathodique du couple NO/NHOH. Dans le milieu

sans AA (courbe noire), la valeur du rapport varie de 1 à 0,96. Ceci est de nouveau en cohérence avec

les figures III.6 et III.8 et prouve que le couple NO/NHOH est stable durant l’expérience. La

décroissance du rapport est plus marquée quand la concentration en AA augmente. De plus,

comparativement à la figure III.8, aucune valeur limite n’est obtenue. Pour un même cycle et une

même concentration, la valeur du rapport est plus élevée à 100 mV.s -1 qu’à 5 mV.s-1. La chute du

signal redox du couple NO/NHOH est donc d’autant plus importante que la concentration en AA est

élevée et que le temps de contact entre NO et l’AA est long, favorisant ainsi la réaction spontanée.

201
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

La figure III.10 montre l’évolution du rapport en fonction de la concentration en AA pour

le second (figure III.10A) et le dixième cycle (figure III.10B) de la série des voltammogrammes

successifs effectués à 5 et à 100 mV.s-1.

1
0,95
0,9
0,85
0,8
0,75
0,7
0,65
0,6
0,55
[AA] (µmol.L-1)
0,5
0 200 400 600 800 1000 1200

1
0,95
0,9
0,85
0,8
0,75
0,7
0,65
0,6
0,55
[AA] (µmol.L-1)
0,5
0 200 400 600 800 1000 1200

Figure III.10 – Evolution de en fonction de la concentration en AA pour(A) le 2ème cycle et

(B) le 10ème cycle. v = 0,005 (en bleu) et 0,1 V.s-1 (en rouge.)

202
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

La variation de en fonction de la concentration d’AA est décroissante que ce soit pour le

2ème cycle (figure III.10A) ou le 10ème cycle (figure III.10B). Pour une même concentration et un cycle

identique, la valeur du rapport est plus élevée à 100 mV.s-1. Ces résultats sont en cohérence avec

l’exploitation des figures III.8 et III.9 et prouvent que la vitesse de la réaction spontanée entre AA et

NO est fonction du temps et de la concentration en AA. Cependant, la diminution du courant n’est pas

linéaire dans la gamme de concentrations (1-1000 µmol.L-1). Cette méthode ne permet donc pas de

doser de manière l’AA de manière simple et précise.

III. Bilan : nitrobenzène diazonium et antioxydants

La fonctionnalisation d’une électrode de CV par une couche de NBD n’a au final pas donné les

résultats escomptés pour élaborer un capteur à AA et AU. En effet, la fonction NO2 a un fort effet

barrière vis-à-vis des antioxydants. La coexistence entre des fonctions NHOH et NH2 de la couche

sous leur forme cationique et les antioxydants sous leur forme anionique n’est pas possible compte

tenu de leurs pKa respectifs. Les électrodes CV-NHOH et CV-NH2 un effet barrière moindre que CV-

NO2, mais le signal obtenu est moins sélectif et moins sensible que sur électrode nue. Une option a

consisté à suivre l’avancement de la réaction spontanée entre NO et AA grâce à l’évolution du signal

du couple NO/NHOH dans une solution d’AA. Cependant, la variation non linéaire du courant en

fonction de la concentration de l’AA et l’inaccessibilité de certaines fonctions profondes rend

finalement cette méthode de dosage peu judicieuse dans ce cas de figure.

D. Polymères conducteurs et poly[3,4-éthylènedioxythiophène]

L’équipe « Capteurs électrochimiques et Procédés » a une expérience dans l’élaboration de capteurs à

AA et AU. De résultats très prometteurs en termes de sélectivité et de sensibilité ont été obtenus en

fonctionnalisant une microélectrode d’or par un polymère conducteur : le poly[3,4-

203
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

éthylènedioxythiophène] (PEDOT)[1, 36, 37]

. Les paragraphes suivants présentent plus en détails le

PEDOT et les travaux antérieurs de l’équipe.

I. Avantages des polymères conducteurs

Les polymères conducteurs offrent de nombreuses opportunités dans le cadre de l’électroanalyse.

L’obtention d’un film de polymère conducteur par électropolymérisation a plusieurs avantages :

 Le film obtenu est relativement fin (généralement entre 100 nm et 1 µm), uniforme et très

adhérent à l’électrode.

 Le film peut être déposé sur de toute petites surfaces et est ainsi bien adapté à la fabrication de

microcapteurs.

 L’épaisseur du film peut être contrôlée via les paramètres temporels et/ou électrochimiques de

polymérisation.

Parmi les polymères conducteurs mentionnés dans la bibliographie durant les dernières décennies, la

polyaniline, le polypyrrole et le poly[3,4-éthylènedioxythiophène] (PEDOT) font partie des plus

utilisés[38].

II. Présentation du poly[3,4-éthylènedioxythiophène]

a. Historique et applications

Originalement synthétisé par la compagnie allemande Bayer[39], le PEDOT est un PC très largement

utilisé de nos jours. Il a suscité un grand intérêt notamment grâce à un potentiel d’oxydation peu

élevé[40]. Le PEDOT trouve des applications dans de nombreux domaines tels que l’élaboration de

capteurs[41-43], la conception de diodes électroluminescentes, de batteries ou de vitrages

électrochromes[44, 45] ou encore de revêtements antistatique et anticorrosion[46, 47]. Les films déposés ont

montré une excellente conductivité[40] (pouvant aller jusqu’à 500 S.cm-1) et une bonne stabilité dans

leur état oxydé grâce à une configuration avec des positions  et ’ bloquées (réaction III.2).

204
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

b. Electropolymérisation

Le PEDOT peut être électropolymérisé à partir du monomère correspondant, le

3,4-éthylènedioxythiophène (EDOT), en milieu organique[48-50], aqueux[51-54] ou liquide ionique[47]

(réaction III.2). La conductivité du film organique résultant n’est que très faiblement influencée par la

nature du solvant[40].

Réaction III.2

Cependant, la réaction d’électropolymérisation est sensible au caractère nucléophile des solvants, en

raison des radicaux générés. De ce fait, la majorité des travaux sur l’EDOT sont effectués dans des

milieux organiques aprotiques étant donné que l’eau résiduelle réduit le rendement faradique de la

polymérisation[55] ainsi que la conductivité du polymère[56]. Néanmoins, l’eau résiduelle peut avoir un

effet bénéfique en réduisant la solubilité des oligomères et en favorisant le dépôt à la surface de

l’électrode.

L’électropolymérisation du PEDOT repose sur un mécanisme radicalaire (figure III.11) proposé par

Diaz en 1982 pour le polypyrrole et élargi à tous les polymères conducteurs[57]. Initié par la génération

d’un radical monomère cationique lors de l’oxydation de l’EDOT, ce mécanisme se poursuit par la

formation de dimères solubles par réaction de deux radicaux formés. L’étape de propagation est

assurée par l’oxydation du dimère, phénomène possible car le potentiel d’oxydation de l’EDOT est

plus élevé que celui des oligomères[58]. La réaction induit un oligomère soluble qui est oxydé lui aussi

plus facilement que le monomère. Cette étape de propagation est stoppée quand l’oligomère croissant

et radicalaire réagit avec le solvant (ou une impureté). La réaction de polymérisation suit donc un

mécanisme ECEC (E = réaction électrochimique, C = réaction chimique).

205
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

R = impuretés ou solvant

Figure III.11 – Mécanisme d’électropolymérisation de l’EDOT et formation du PEDOT.

206
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

c. Stabilité

En plus d’être un bon conducteur électronique, le PEDOT est un polymère très stable. Des études ont

montré qu’il conserve 98 % de sa conductivité initiale lors de tests de vieillissement à 70 °C pendant

1300 h quand le polypyrrole et la polyaniline n’en préservent que 75 % et 50 % respectivement [59].

D’autres travaux ont établi que le PEDOT a une meilleure résistance à l’hydrolyse, à l’exposition à la

lumière et aux températures élevées que d’autres polymères conducteurs[60]. Enfin, sa biocompatibilité

est un facteur clé pour la fabrication de biocapteurs et leurs applications à l’analyse dans des milieux

biologiques[61].

III. Poly[3,4-éthylènedioxythiophène] et capteur à acides ascorbique et

urique

a. Effet électrocatalytique

L’amélioration de la sélectivité et de la sensibilité des capteur modifiés par le PEDOT vis-à-vis de

l’AA et de l’AU a été démontrée sur des électrodes de carbone vitreux [3, 10-12], d’or[1, 22] et de platine[2].

Le progrès est dû à la présence du couple redox réversible PEDOTox/PEDOTred, qui réagit avec l’AA

selon un mécanisme électrocatalytique EC’[58] (figure III.12 et réactions III.3 et III.4). Avec un

potentiel standard apparent de 0,1 V/ECS à pH 7[62, 63]

, le PEDOT est sous sa forme oxydée au

potentiel de mesure :

Réaction III.3 PEDOTred → PEDOTox + 2 e- + H+

En présence d’AA (E°’ = 0,03 V/ECS), la réaction suivante a lieu spontanément :

Réaction III.4 PEDOTox + AA → PEDOTred + DHA

PEDOTred est régénéré et le mécanisme catalytique est alors enclenché.

207
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Figure III.12 – Potentiels standards apparents des couples redox de l’AA, de l’AU et du PEDOT à
pH 7.

En outre, des interactions électrostatiques favorables[64, 65] (le PEDOT possède des charges cationiques

et anioniques locales) et des différences d’hydrophilie entre les deux antioxydants [66] amplifient

également la sélectivité et la sensibilité de l’électrode ainsi modifiée.

b. Synthèse des travaux antérieurs de l’équipe

L’utilisation de films de PEDOT dans l’élaboration d’un capteur à acides ascorbique et urique n’est

pas une chose nouvelle en soi, le sujet ayant fait l’objet de nombreuses publications[2, 8-15, 67, 68]
.

Cependant, le dosage simultané et sélectif des deux espèces n’est que peu étudié puisque l’un ou

l’autre des antioxydants est souvent introduit en très large excès par rapport au second et joue un rôle

d’interférent. Ces conditions ne correspondent pas aux conditions dans les milieux physiologiques.

C’est dans ce contexte que se sont inscrits dans un premier temps les travaux de thèse de Fadhila Sekli

au sein de l’équipe « Capteurs et Procédés Electrochimiques »[1, 36, 37]

. Les travaux ont montré que

l’électropolymérisation d’un film de PEDOT sur une microélectrode d’Au augmente notablement la

sélectivité et la sensibilité vis-à-vis du capteur résultant ( tableau III.5).

208
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Paramètre étudié Conditions opératoires Commentaires

Electrode Microélectrode d’Au Diamètre = 50 µm
Electropolymérisation
Technique Suivi de la charge cycle par
Voltammétrie cyclique
d’électropolymérisation cycle
Le contre-ion ClO4- donne une
Milieu
ACN + TBAPC 0,1 mol.L-1 meilleure conductivité au
d’électropolymérisation
film[69]
Charge de dépôt 120 C.m-2 Optimale pour q > 100 C.m-2
Optimale pour v ≥ 250 mV.s-1
Vitesse de balayage 250 mV.s-1 car la porosité du PEDOT
augmente[70]
Meilleure cohésion du PEDOT
Concentration en EDOT 2,5 mmol.L-1 pour des concentrations
faibles[71-73]
PEDOT poreux qui facilite
l’oxydation de l’AA et de
Limite anodique 1,5 V/ECS
l’AU[74] et non suroxydé
(E < 1,6 V[54, 75])
Performances analytiques
(obtenues en Voltammétrie à impulsions différentielles)
Limite de détection AA 2,5 µmol.L-1
Limite de détection AU 1,5 µmol.L-1
Sensibilité AA 8,75 A.L.µmol-1.m-2
Sensibilité AU 30,6 A.L.µmol-1.m-2
0,403 V entre les deux pics
Sélectivité AA et AU
d’oxydation
Répétabilité AA 1,1 % Calculée à partir de 3 essais
Répétabilité AU 1,4 % Calculée à partir de 3 essais
.
Tableau III.5 – Synthèse des travaux antérieurs de l’équipe sur le PEDOT et le dosage simultané de
l’AA et de l’AU

Cette première étude a, entre autres, permis :

 de démontrer les potentialités d’utilisation du PEDOT pour une mesure simultanée de l’AA et

de l’AU, en obtenant des performances analytiques très comparables, voire meilleures que

celles rapportées dans la bibliographie[1].

 de mettre en avant un mécanisme EC’ aboutissant à la régénération de l’AU par l’AA [36]

(figure III.13) : en effet, l’allantoïne (All) formé par oxydation de l’AU réagit spontanément

avec l’AA présent à l’interface électrode/solution. Cette régénération est

thermodynamiquement possible avec l’ordre des potentiels standards apparents des couples

All/AU et ADH/AA (figure III.12).

209
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

 d’utiliser le capteur dans des milieux biologiques complexes (sérums sanguins) et dont la

justesse des résultats a été vérifiée par comparaison avec les méthodes analytiques de

référence (chromatographique et enzymatique)[37].

Figure III.13 – Mécanisme EC’ entre l’AA et l’AU assurant une régénération partielle de l’AU.

Pour fiabiliser le capteur en vue d’un éventuel transfert de technologie, d’autres performances doivent

être évaluées : la stabilité opérationnelle et au stockage du capteur ainsi que la reproductibilité du

dépôt. Des études préalables menées au sein de l’équipe ont conclu à une durée de vie au stockage

insuffisante avec une perte de 30 % de la réponse du capteur en 24 h[76]. Ces résultats nous ont

conduits à étudier l’efficacité du dépôt de couche organique mixte couplant le diazonium et le

PEDOT[77]. L’idée est de réunir les propriétés de stabilité du diazonium et les propriétés

électrocatalytiques du PEDOT vis-à-vis des antioxydants. Pour ce faire, le matériau d’électrode en or

utilisé lors des travaux de Fadhila Sekli est remplacé par du carbone vitreux pour assurer la liaison

covalente avec le diazonium et diminuer le coût du capteur.

210
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

E. Fonctionnalisation mixte diazonium-polymère

I. Stratégie et principe

Modifier un capteur par une fonctionnalisation mixte revient à coupler les propriétés de chacune des

fonctionnalisations. Dans notre cas de figure, la stratégie est de conjuguer le caractère covalent de la

liaison assurée par le diazonium (afin d’augmenter la stabilité de l’interface modifiée) tout en

conservant les propriétés électrocatalytiques du PEDOT vis-à-vis des antioxydants.

Le protocole de la modification mixte se décompose en deux étapes (figure III.14). Une première étape

consiste à déposer à la surface de l’électrode de CV des fonctions thiophène qui font office de

précurseurs de l’électropolymérisation du PEDOT. Les fonctions thiophène sont greffées via la

réduction du thiophénylbenzènediazonium (TPBD) qui assure la liaison covalente avec l’électrode. La

seconde étape consiste à oxyder des monomères EDOT pour former un film de PEDOT en s’appuyant

sur les fonctions thiophènes préalablement greffées. Ces deux étapes permettent alors de lier de

manière covalente le PEDOT à l’électrode.

Figure III.14 – Principe de la double fonctionnalisation par le TPBD et le PEDOT.

211
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

II. Greffage du thiophénylbenzènediazonium

a. Synthèse du diazonium

Le TPBD est au préalable généré in situ (cf. section A.IV.a. du chapitre II) en milieu HCl à 0,1 mol.L-1

à partir d’un mélange d’un léger excès de NaNO2 et de thiophénylaniline (TPA). La réaction III.5 a

lieu pendant 1 h à 4°C :

Réaction III.5

b. Modification par le thiophénylbenzènediazonium

Après l’étape de synthèse, l’électrode de CV est plongée dans la solution résultante. L’étape de

greffage du TPBD est :

Réaction III.6

La figure III.15 représente les voltammogrammes cycliques enregistrés.

212
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

0,4 i (µA)

0,3

0,2

0,1

-0,1

-0,2

-0,3

-0,4
E (V/ECS)
-0,5
-0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

Figure III.15 – Voltammogrammes cycliques tracés avec une électrode de CV dans une solution
aqueuse de HCl à 0,1 mol.L-1contenant du TBPD à 2,5mmol.L-1. (―) 1er cycle, ( - - ) 2ème cycle.
v = 0,1 V.s-1.

Sur le premier cycle (courbe en trait plein), on observe un pic large à -0.1 V correspondant à la

réduction du TPBD en son radical et donc à la formation du film organique de diazonium (réaction

III.5). Sur le second cycle (courbe en pointillés), aucun signal cathodique remarquable n’est visible,

phénomène dû à l’effet inhibiteur du film organique déposé. Pour confirmer la présence d’un dépôt à

l’interface, trois électrodes de CV sont modifiées par trois électrolyses différentes dans une solution

aqueuse de HCl 0,1 mol.L-1 contenant du TPBD à 2,5 mmol.L-1 (tableau III.5). Pour chaque

électrolyse, une densité de charge de dépôt identique de 1 C.m-2 est consommée, les durées de chaque

électrolyses sont fixées en conséquence.

Nom de l’électrode Protocole de modification Durée (s)

CV-TPBDVC Voltammétrie cyclique de -0,2 à 0,8 V à 100 7,2 ± 1,1
mV.s-1
CV-TPBDE Electrolyse au potentiel constant de -0,1 V 5,3 ± 0,8
CV-TPBDI Electrolyse à densité de courant constante de 10,0 ± 0,3
-0,1 A.m-2
Tableau III.5 – Dépôts de TPBD et temps de modification.

213
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

La figure III.16 représente les voltammogrammes cycliques enregistrés dans une solution de PBS à

0,1 mol.L-1 (pH 7) contenant un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 250 µmol.L-1 sur des électrodes

de CV, CV-TPBDVC, CV-TPBDE et de CV-TPBDI.

4,5 i (µA)

3,5

2,5

1,5

0,5

0
E (V/ECS)
-0,5
-0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

Figure III.16 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution aqueuse de PBS à 0,1 mol.L-1
contenant un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 250 µmol.L-1 avec une électrode CV (en noir), CV-
TPBDVC (en bleu), CV-TPBDE (en rouge) et CV-TPBDI (en vert). v = 0,1 V.s-1.

Sur CV non modifié (courbe noire), l’oxydation des deux antioxydants induit deux signaux confondus.

Sur les électrodes modifiées CV-TPBDVC (courbe bleue), CV-TPBDE (courbe rouge) et CV-TPBDI

(courbe verte), aucun signal d’oxydation n’est clairement visible avant 0,6 V. Un effet barrière est

présent, preuve que les protocoles de modifications des électrodes résumés dans le tableau III.5 ont

formé des couches organiques de thiophène plus ou moins denses selon la méthode électrochimique de

greffage employée.

III. Electropolymérisation du poly[3,4-éthylènedioxythiophène]

La seconde étape du protocole de modification mixte consiste à électropolymériser le PEDOT à la

surface de l’électrode. La figure III.17 représente les cinq premiers voltammogrammes cycliques

214
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

tracés dans une solution de monomère EDOT avec une électrode de CV (figure III.17A) et de CV-

TPBDI (figure III.17B). Les conditions d’électropolymérisation sont celles mises au point dans la thèse

de Fadhila Sekli (tableau III.5).

35 j (A.m-2) (A)

30

25

20

15

10

E (V/ECS)
-5
-1,5 -1 -0,5 0 0,5 1 1,5 2

40 j (A.m-2)

35 (B)

30

25

20

15

10

0
E (V/ECS)
-5
-1,5 -1 -0,5 0 0,5 1 1,5 2

Figure III.17 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution d’ACN contenant de
l’EDOT à 2,5 mmol.L-1 et du TBAPC à 0,1 mol.L-1 avec une électrode (A) CV et (B) de
CV-TPBDI . v = 0,25 V.s-1.
215
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

L’allure des courbes obtenues sur les deux électrodes est comparable. Des courbes analogues ont

également été obtenues avec CV-TPBDVC et CV-TPBDE non représentées ici pour des raisons de

clarté. Dans tous les cas de figure, l’oxydation du monomère (et donc le dépôt de polymère) intervient

dès 1 V et le couple redox PEDOTox / PEDOTred (réaction III.1) est centré aux alentours de -0,25 V.

L’intensité du pic d’oxydation du monomère augmente au cours des cycles de même que l’activité

redox du polymère, témoignant ainsi de la croissance du film.

Pour une meilleure lisibilité, le premier voltammogramme cyclique obtenu pour chaque électrode dans

la solution d’électropolymérisation est représenté dans la figure III.18.

35 j (A.m-2)

30

25

20

15

10

0
E (V/ECS)
-5
-1,5 -1 -0,5 0 0,5 1 1,5 2

Figure III.18 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution d’ACN contenant de l’EDOT à
2,5 mmol.L-1 et du TBAPC à 0,1 mol.L-1 avec une électrode CV (en bleu) et de CV-TPBDI (en rouge).
v = 0,25 V.s-1.

Que ce soit sur CV (courbe bleue) ou sur CV-TPBDI (courbe rouge), un croisement du cycle aller et

retour est observé à environ 1,2 V. Par analogie au dépôt métallique, l’équipe de Downard associa ce

croisement à un phénomène de nucléation[78]. Le croisement témoigne donc du début de croissance du

film de polymère à la surface de l’électrode.

216
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Au niveau des densités de charge de polymère déposé, l’intégration coulométrique des tous les pics

d’oxydation à 1 V de la figure III.17 donne une valeur de 130 C.m-2 sur CV contre 148 C.m-2 sur CV-

TPBDI. Cela prouve que malgré le dépôt épais de TPBD présent sur CV-TPBDI, la polymérisation

n’est pas inhibée par les précurseurs thiophènes à la surface de l’électrode. Le tableau III.6 montre

l’influence de la méthode du greffage du TPBD sur la densité de charge de polymère déposé dans des

mêmes conditions d’électropolymérisation.

Electrode Conditions opératoires Charge déposée (C.m-2)

CV 5 voltammogrammes cycliques à 130 ± 23
CV-TPBDVC 250 mV.s-1 entre 0,8 et 1,5 V/ECS dans 30 ± 12
CV-TPBDE une solution d’ACN contenant du TBAPC 148 ± 31
CV-TPBDI à 0,1 mol.L-1 et d’EDOT à 2,5 mmol.L-1 144 ± 17

Tableau III.6– Influence du mode de dépôt de TPBD sur l’électropolymérisation du PEDOT.

Les résultats prouvent que pour des conditions d’électropolymérisation du PEDOT identiques, la

présence de la couche de TPBD et la manière dont il a été greffé peut avoir une influence non

négligeable sur la charge de polymère déposé. Cette influence est notamment visible dans le cas de

CV-TPBDVC où la polymérisation est plus difficile. En effet, la charge totale déposée est de 30 C.m-2

alors qu’elle dépasse 130 C.m-2 pour l’électrode nue CV et les autres électrodes modifiées.

IV. Détermination des méthodes électrochimiques optimales de dépôts

a. Mode opératoire

Avec deux dépôts successifs à réaliser et trois méthodes de dépôts électrochimiquement assistés (par

voltammétrie cyclique et par électrolyse à potentiel ou courant imposés), il existe neuf combinaisons

possibles. Etant donné que la structure et la conductivité du film sont impactées par les paramètres du

dépôt, une stratégie d’étude (détaillée dans la figure III.19) a été élaborée dans le but d’optimiser les

conditions expérimentales du dépôt et de concevoir in fine un capteur à AA et à AU présentant les

meilleures performances analytiques.

217
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Voltammogramme cyclique dans une solution

de PBS à 0,1 mol.L-1 contenant un mélange
é uimolai e de l’AA et de l’AU à 200 µmol.L-1

Figure III.19 – Mode opératoire suivi

Les densités de charge utilisées sont de 1 C.m-2 et de 100 C.m-2 respectivement pour le dépôt de TPBD

et la polymérisation du PEDOT. Ces valeurs ont été choisies pour réaliser des dépôts de TPBD

conséquents d’une part (voir figure III.16) et bénéficier de l’effet électrocatalytique optimal du

PEDOT d’autre part (voir tableau III.5). Les paramètres électrochimiques de dépôt de TPBD ont été

adaptés pour avoir des durées d’électrolyse du même ordre de grandeur selon la méthode employée (5

à 10 s). De façon analogue, les paramètres des polymérisations potentiostatique et galvanostatique du

PEDOT ont été adaptés pour que leurs durées soient du même ordre de grandeur que celle de

l’électropolymérisation par voltammétrie cyclique (tableau III.7).

218
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Durée
Dépôt Technique Charge (C.m-2) Notation
d’électrolyse (s)
Voltammétrie cyclique
TPBD à 100 mV.s-1 entre 0,8 1 7,2 ± 1,1 TPBDVC
et -0,2 V/ECS
Electrolyse au
TPBD potentiel constant de 1 5,3 ± 0,8 TPBDE
-0,1 V
Electrolyse à densité
TPBD de courant constante 1 10,0 ± 0,3 TPBDI
de -0,1 A.m-2
Voltammétrie cyclique
PEDOT à 250 mV.s-1 entre 0,8 100 27,2 ± 8,3 PEDOTVC
et 1,5 V/ECS
Electrolyse au
PEDOT potentiel constant de 100 38,4 ± 9,2 PEDOTE
1,3 V
Electrolyse à densité
PEDOT de courant constante 100 40,0 ± 2,4 PEDOTI
de 2,5 A.m-2

Tableau III.7 – Conditions opératoires retenues pour les différents dépôts de TPBD et de PEDOT.

b. Influence du mode de dépôt du poly[3,4-éthylènedioxythiophène]

1. Polymérisation sans précurseur thiophène

La figure III.20 représente les voltammogrammes cycliques enregistrés dans une solution de PBS à

0,1 mol.L-1 (pH 7) contenant un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 200 µmol.L -1 avec les

électrodes de CV, CV-PEDOTVC, CV-PEDOTE et CV-PEDOTI.

219
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

5 j (A.m-2)

E (V/ECS)
-1
-0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

Figure III.20 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution aqueuse de PBS à 0,1 mol.L-1
contenant un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 200 µmol.L-1 avec une électrode de CV (en noir),
CV-PEDOTVC (en bleu), CV-PEDOTE (en rouge) et de CV-PEDOTI (en vert). v = 0,1 V.s-1.

Comparativement à l’électrode nue (courbe noire) où les deux signaux sont confondus, un gain

important de sélectivité et de sensibilité est observé lorsque le PEDOT est électropolymérisé à la

surface de l’électrode nue par voltammétrie cyclique (courbe bleue). En effet, deux pics d’oxydation

sont distinctement visibles. Le premier pic, à 0 V, est attribué à l’oxydation de l’AA tandis que le

second à 0,3 V correspond à l’oxydation de l’AU. Un écart de 300 mV entre les deux pics permet

d’avoir une sélectivité satisfaisante et rend possible la mesure simultanée des deux acides. Les densités

de courant de pic augmentent aussi, puisque le pic d’oxydation de l’AA est à 1,3 A.m-2 et celui de

l’AU est à 3,4 A.m-2. Par comparaison, l’oxydation des antioxydants sur CV nue induit un courant

maximal de 2,3 A.m-2. Enfin, le système redox All/AU est réversible sur PEDOTVC. Les dépôts de

PEDOT effectués en électrolyse à potentiel et intensité constants (courbes rouge et verte

respectivement) n’offrent pas en revanche le même gain de sélectivité et de sensibilité. En effet, les

voltammogrammes respectifs ont une allure semblable à celle obtenue sur électrode nue.

220
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

La figure III.21 regroupe les clichés MEB des dépôts de la figure III.20 sur des plaques de carbone

vitreux CVp, les embouts d’électrode utilisés pour effectuer les expériences électrochimiques n’étant

pas adaptés ici.

CVp-PEDOTVC CVp-PEDOTE

CVp-PEDOTI

Figure III.21 – Micrographies MEB des électrodes CVp-PEDOTVC, CVp-PEDOTE et CVp-PEDOTI

Les micrographies MEB montrent que deux types de dépôts sont formés selon les modes opératoires

employés. Dans le cas d’un dépôt CV-PEDOTVC, le PEDOT a un aspect fibreux et la structure du

polymère semble poreuse. Comparativement, les dépôts effectués à potentiel et à intensité constants

(dépôts CVp-PEDOTE et CVp-PEDOTI respectivement) apparaissent plus denses et présentent un

aspect globulaire. Les résultats et observations des figures III.20 et III.21 sont en accord avec les

hypothèses de Patra et al. qui suggèrent que la structure poreuse facilite l’accès aux sites actifs du

221
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

PEDOT et augmente son effet électrocatalytique[74]. Au contraire, une structure compacte et dense

diminue la surface active du polymère et n’induit pas une amélioration de la sélectivité et de la

sensibilité de l’électrode modifiée vis-à-vis de l’AA et de l’AU.

2. Polymérisation avec des précurseurs thiophène

(i) Thiophénylbenzène diazonium greffé par voltammétrie cyclique

La figure III.21 présente les voltammogrammes cycliques enregistrés dans une solution de PBS à

0,1 mol.L-1 (pH 7) contenant un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 200 µmol.L -1 avec les

électrodes de CV, CV-TPBDVC-PEDOTVC, CV-TPBDVC-PEDOTE et CV-TPBDVC-PEDOTI.

3,5 j (A.m-2)

2,5

1,5

0,5

E (V/ECS)
-0,5
-0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

Figure III.22 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution aqueuse dans une solution de
PBS à 0,1 mol.L-1 contenant un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 200 µmol.L-1 avec une électrode
de CV (en noir), CV-TPBDVC-PEDOTVC (en bleu), CV-TPBDVC-PEDOTE (en rouge) et de CV-TPBDVC-
PEDOTI (en vert). v = 0,1 V.s-1.

Dans le cas de dépôt de TPBD réalisé par voltammétrie cyclique, la polymérisation d’une couche de

PEDOT permet de retrouver un signal électrique en contrebalançant l’effet barrière de la couche de

222
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

thiophène (figure III.16). Cependant, les signaux obtenus avec les trois dépôts CV-TPBDVC-

PEDOTVC, CV-TPBDVC-PEDOTE et CV-TPBDVC-PEDOTI (courbes bleue, rouge et verte

respectivement) témoignent d’une perte conséquente de sélectivité. En effet, de la même façon que sur

CV (courbe noire), les pics d’oxydation de l’AA et de l’AU sont confondus, rendant impossible la

mesure simultanée. Ce comportement peut être la conséquence des résultats rapportés dans le tableau

III.6 qui ont conclu à une électropolymérisation difficile sur une couche de TPBD déposé par

voltammétrie cyclique. Le greffage du TPBD donne alors lieu à une couche désorganisée, hétérogène

et avec des fonctions thiophènes peu accessibles pour la fonctionnalisation du PEDOT.

La figure III.23 regroupe les clichés MEB des dépôts de la figure III.22 greffés sur des plaques de

carbone vitreux CVp.

CVp-TPBDVC-PEDOTVC CVp-TPBDVC-PEDOTE

CVp-TPBDVC-PEDOTI

Figure III.23 – Micrographies MEB des électrodes CVp-TPBDVC-PEDOTVC, CVp-TPBDVC-PEDOTE et

CVp-TPBDVC-PEDOTI

223
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Ces clichés révèlent que l’aspect des dépôts obtenus est très compact avec plus ou moins de

macrostructures. Les polymères déposés sont donc très denses et ne favorisent pas l’oxydation

électrochimique des antioxydants.

(ii) Thiophénylbenzène diazonium greffé par électrolyse à potentiel constant

La figure III.24 présente les voltammogrammes cycliques enregistrés dans une solution de PBS à

0,1 mol.L-1 (pH 7) contenant un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 200 µmol.L -1 avec les

électrodes de CV, CV-TPBDE-PEDOTVC, CV-TPBDE-PEDOTE et CV-TPBDE-PEDOTI.

4 j (A.m-2)

3,5

2,5

1,5

0,5

E (V/ECS)
-0,5
-0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

Figure III.24 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution de PBS à 0,1 mol.L-1 contenant
un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 200 µmol.L-1 avec une électrode de CV (en noir), CV-TPBDE-
PEDOTVC (en bleu), CV-TPBDE-PEDOTE (en rouge) et de CV-TPBDE-PEDOTI (en vert). v = 0,1 V.s-1.

Lorsque le TPBD est déposé par électrolyse à potentiel constant, deux types de comportement sont

observés. Dans le cas de l’électropolymérisation du PEDOT réalisée à intensité imposé (dépôt CV-

TPBDE-PEDOTI, courbe verte), le signal est moins bon que sur CV (courbe noire), rendant impossible

la mesure simultanée. En revanche, sur l’électrode CV-TPBDE-PEDOTE (courbe rouge), un gain de

224
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

sélectivité et de sensibilité est observé. Le gain est encore plus notable sur CV-TPBDE-PEDOTVC

(courbe bleue) puisque le pic d’oxydation de l’AA est situé à -0,012 V pour une densité de courant de

1,6 A.m-2 et celui de l’AU est à 0,3 V pour une densité de courant de 3,0 A.m-2. La mesure simultanée

des deux antioxydants est donc possible avec cette électrode qui montre une sensibilité et une

sélectivité comparables à celles observées sur CV-PEDOTVC (figure III.20, courbe bleue).

La figure III.25 regroupe les clichés MEB des dépôts de la figure III.24 greffés sur des plaques de

carbone vitreux CVp.

CVp-TPBDE-PEDOTVC CVp-TPBDE-PEDOTE

CVp-TPBDE-PEDOTI

Figure III.25 – Micrographies MEB des électrodes CVp-TPBDE-PEDOTVC, CVp-TPBDE-PEDOTE et

CVp-TPBDE-PEDOTI

Conformément aux résultats de l’expertise électrochimique, la microscopie MEB met en exergue deux

types de structures selon les conditions d’électropolymérisation du PEDOT. Pour des polymérisations

à potentiel et intensité constants (dépôts CVp-TPBDE-PEDOTE et CVp-TPBDE-PEDOTI

respectivement), la structure du PEDOT est globulaire avec des macrostructures de taille variable.

225
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Lorsque le polymère est déposé par voltammétrie cyclique, l’aspect du dépôt est globalement très

poreux. Cette structure est en accord avec les travaux de l’équipe de Patra[74] conforte les résultats de

figure III.24 : l’interface présente de meilleures performances lorsque l’électropolymérisation du

PEDOT est effectuée par voltammétrie cyclique.

(iii) Thiophénylbenzène diazonium greffé par électrolyse à courant constant

La figure III.26 présente les voltammogrammes cycliques enregistrés dans une solution de PBS à

0,1 mol.L-1 (pH 7) contenant un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 200 µmol.L -1 avec les

électrodes de CV, CV-TPBDI-PEDOTVC, CV-TPBDI-PEDOTE et CV-TPBDI-PEDOTI.

226
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

10 j (A.m-2)

E (V/ECS)
-2
-0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

Figure III.26 – Voltammogrammes cycliques tracés dans une solution aqueuse de PBS à 0,1 mol.L-1
contenant un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 200 µmol.L-1 avec une électrode de CV (en noir),
CV-TPBDI-PEDOTVC (en bleu), CV-TPBDI-PEDOTE (en rouge) et de CV-TPBDI-PEDOTI (en vert). v
= 0,1 V.s-1.

Lorsque le TPBD est déposé par électrolyse à intensité constante, deux types de comportement sont

également observés. Dans le cas de l’électropolymérisation du PEDOT à potentiel ou intensité

imposés (dépôts CV-TPBDI-PEDOTE et CV-TPBDI-PEDOTI, courbes rouge et verte respectivement),

le signal est comparable à celui obtenu sur CV (courbe noire). En revanche, sur l’électrode CV-TPBDI-

PEDOTVC (courbe bleue), un très net gain de sélectivité et de sensibilité est observé. En effet, le pic

d’oxydation de l’AA est situé à -0,03 V pour une densité de courant de 2,2 A.m-2 et celui de l’AU est à

0,33 V pour une densité de courant de 6,9 A.m-2. La mesure simultanée des deux antioxydants est donc

possible avec cette électrode qui montre même une sensibilité et sélectivité bien meilleures que celles

observées sur CV-PEDOTVC (figure III.20, courbe bleue).

La figure III.27 regroupe les clichés MEB des dépôts de la figure III.26 greffés sur des plaques de

carbone vitreux CVp.

227
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

CVp-TPBDI-PEDOTVC CVp-TPBDI-PEDOTE

CVp-TPBDI-PEDOTI

Figure III.27 – Micrographies MEB des électrodes CVp-TPBDI-PEDOTVC, CVp-TPBDI-PEDOTE et

CVp-TPBDI-PEDOTI

La caractérisation MEB montre que l’électropolymérisation du PEDOT effectuée sur une couche de

TPBD déposé par électrolyse à intensité constante aboutit dans tous les cas à une structure poreuse.

L’aspect fibreux du polymère est toutefois plus ou moins marqué selon les méthodes. Néanmoins, il

est difficile ici de corréler directement la structure du polymère à sa réactivité électrochimique : les

courbes de la figure III.26 nous prouvent en effet que toute structure poreuse ne fournit pas forcément

une activité électrocatalytique suffisante pour avoir une mesure sélective et sensible des deux

antioxydants.

228
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

c. Bilan

L’utilisation couplée de l’électrochimie et de la microscopie a donc démontré :

 que la structure de la couche organique mixte peut être très compacte ou très poreuse selon les

méthodes électrochimiques employées.

 que la sensibilité et la sélectivité de l’électrode modifiée vis-à-vis de l’AA et de l’AU sont les

meilleures quand le PEDOT a une structure poreuse obtenue par voltammétrie cyclique.

 qu’une couche de TPBD greffée de manière galvanostatique avant la fonctionnalisation par le

polymère donne naissance à un film de PEDOT très poreux quelle que soit la méthode

d’électropolymérisation du PEDOT employée.

En conclusion, les paramètres de dépôt optimum choisis pour la suite des travaux sont :

1. greffage du TPBD par polarisation à la densité de courant de -0,1 A.m-2.

2. électropolymérisation du PEDOT par voltammétrie cyclique à 250 mV.s-1 entre 0,8 et

1,5 V/ECS.

V. Influence des densités de charge des dépôts

a. Influence de la charge d’électropolymérisation du poly[3,4-éthylènedioxythiophène]

La figure III.28 présente les voltammogrammes cycliques enregistrés dans une solution de PBS à

0,1 mol.L-1 (pH 7) contenant un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 200µmol.L-1 avec l’électrode de

CV-TPBDI-PEDOTVC pour une densité de charge de TPBD (qTPBD) de 1 C.m-2 et des charges

d’électropolymérisation (qPEDOT) de 25, 50, 75, 100 et 150 C.m-2. Ces charges sont contrôlées par le

logiciel de pilotage du potentiostat.

229
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

9 i (µA)

-1
E (V/ECS)
-2
-0,3 -0,2 -0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7

Figure III.28 – Voltammogrammes enregistrés avec une électrode de CV-TPBDI- dans une solution de
PBS à 0,1 mol.L-1 pH 7 contenant un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 200µmol.L-1.
v = 0,1 V.s-1.
qTPBD = 1 C.m-2 ; qPEDOT =25 (en bleu), 50 (en rouge), 75 (en vert), 100 (en noir) et 150 (en orange) C.m -2.

L’effet électrocatalytique du PEDOT est visible dès la plus faible charge d’électropolymérisation

utilisée (courbe bleue). Les pics correspondant à l’oxydation de l’AA et de l’UA sont alors séparés de

360 mV et cet écart reste à peu près constant quand on augmente la charge de polymérisation. Même

s’il n’y a pas de corrélation linéaire entre intensité des pics d’oxydation de l’AA et charge

d’électropolymérisation, la valeur du courant de pic a globalement tendance à augmenter avec qPEDOT

puisqu’elle varie de 0,94 µA pour 25 C.m-2 jusqu’à 2,1 µA pour les qPEDOT plus élevées. On observe

une tendance similaire avec l’AU, une intensité de pic de 3,1 µA pour 25 C.m-2 et de 7 µA pour 150

C.m-2. Ces observations sont en accord avec les travaux précédents de l’équipe[1] (réalisés sans TPBD)

qui ont montré que, dès les premières couches de polymère déposées, la sélectivité et la sensibilité du

capteur augmentent. Cependant, pour les deux valeurs extrêmes de charges d’électropolymérisation

(25 et 150 C.m-2), la cinétique d’oxydation de l’AU est ralentie ce qui induit une augmentation de la

valeur de son potentiel de pic. Ce phénomène est sans doute dû à l’existence de zones où la jonction

230
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

TPBD-PEDOT ne s’est pas créée et les deux couches de fonctionnalisation sont simplement

superposées[77]. Le gain de sélectivité et de sensibilité pour qPEDOT égal à 100 et 150 C.m-2 est similaire.

Dans la suite de l’étude, la valeur de 100 C.m-2 est choisie comme quantité de charge

d’électropolymérisation du PEDOT.

b. Influence de la charge de greffage de diazonium

La figure III.29 représente les voltammogrammes cycliques enregistrés dans une solution de PBS à

0,1 mol.L-1 (pH 7) contenant 200 µmol.L-1 d’AA et d’AU avec l’électrode de CV-TPBDI-PEDOTVC

pour une densité de charge d’électropolymérisation qPEDOT de 100 C.m-2 et des densités de charge de

greffage de TPBD qTPBD de 0,1, 0,5, 1, 5 et 10 C.m-2.

12 i (µA)

10

E (V/ECS)
-2
-0,3 -0,2 -0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7

Figure III.29 – Voltammogrammes enregistrés avec une électrode de CV-TPBDI-PEDOTVC dans une
solution de PBS à 0,1 mol.L-1 pH 7 contenant un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 200µmol.L-1.
v = 0,1 V.s-1.
qPEDOT= 100 C.m-2 ; qTPBD = 0,1 (en bleu), 0,5 (en rouge), 1 (en vert), 5 (en noir) et 10 (en orange)
C.m-2.

231
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

L’épaisseur de la couche de TPBD a une plus faible influence que celle du PEDOT sur le

comportement électrochimique de l’électrode modifiée. En effet, pour une densité de charge allant de

0,1 à 1 C.m-2, il n’y a qu’une légère amélioration de la sélectivité puisque l’écart entre les 2 pics

d’oxydation passe de 294 à 330 mV et que l’intensité des pics d’oxydation augmente de 3,3 µA à 4,7

µA pour l’AA et de 5,3 µA à 7 µA pour l’AU. Cependant, pour des valeurs de q TPBD supérieures à 1

C.m-2, la couche organique mixte résultante est moins performante avec une sélectivité réduite (l’écart

entre les deux pics d’oxydation passe à 252 mV) et une sensibilité amoindrie avec des valeurs

d’intensité de pic d’oxydation de 3,1 µA pour l’AA et de 4,2 µA pour l’AU pour qTPBD = 10 C.m-2. Ce

phénomène est sans doute dû à l’épaisseur croissante du film de diazonium qui rend plus difficile le

transfert électronique jusqu’à l’électrode et/ou affecte la conductivité du PEDOT.

Les meilleurs résultats en termes de sélectivité et de sensibilité sont donc obtenus pour les paramètres

suivants :

1. greffage du TPBD par polarisation à la densité de courant de -0,1 A.m-2 avec une densité de

charge de 1 C.m-2.

2. électropolymérisation du PEDOT par VC à 250 mV.s-1 entre 0,8 et 1,5 V/ECS avec une

densité de charge de 100 C.m-2.

Ce sont ces paramètres qui sont utilisés pour l’élaboration du capteur dans la suite des travaux.

232
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

VI. Utilisation de la microscopie électrochimique à balayage

Les travaux précédents ont mis en avant une différence notable de réactivité entre le dépôt PEDOT VC

(présentant le meilleur signal sans précurseurs thiophènes) et le dépôt TPBDI-PEDOTVC (présentant le

meilleur signal avec précurseurs thiophènes). L'utilisation du MEB a montré que la structure de ces

dépôts était très comparable. Dans l'optique d'une analyse complémentaire, la microscopie

électrochimique à balayage (Scanning Electrochemical Microscopy ou SECM) représente une

méthode de caractérisation intéressante pour examiner à l’échelle locale la réactivité des dépôts vis-à-

vis de l’AA et de l’AU.

a. Origine de la microscopie électrochimique à balayage

L’apparition des ultramicroélectrodes (UME) dans les années 1980, alliée au principe de la

microscopie à effet tunnel (Scanning Tunelling Microsocopy ou STM), a conduit au développement de

la SECM en 1986 par l’équipe de Bard[67]. La SECM est alors devenu rapidement un concept

d’analyse électrochimique[79] relativement fécond grâce aux nombreuses techniques de mesure

électrochimique que l’on peut y associer et à la possibilité de pratiquer de la microscopie à sonde

locale basée sur le déplacement de l’UME au voisinage d’une interface[80, 81].

b. Principe de fonctionnement

La figure III.30 représente le principe de fonctionnement du dispositif SECM. Le principe de ce

microscope repose sur la mesure de la perturbation du courant ou du potentiel d’une microélectrode

(ou sonde) lorsque celle-ci est maintenue ou déplacée dans une solution électrolytique à proximité

d’un substrat polarisé ou non[67, 82].

233
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Le SECM est composé de quatre électrodes : deux électrodes de travail (substrat et sonde), une

électrode de référence et une contre-électrode. Un système de micro-positionneurs sur trois axes

autorise le déplacement relatif de la sonde par rapport au substrat. Un bipotentiostat permet la mesure

ou le contrôle du courant et du potentiel à la fois au substrat et à la sonde.

Figure III.30 – Schéma du dispositif SECM.

c. Comment utiliser la microscopie électrochimique à balayage ?

Il existe trois modes principaux d’exploitation du SECM : le mode feedback, le mode

génération/collection et le mode direct.

Dans le mode feedback[83], le courant mesuré à la sonde est perturbé par la présence du substrat. On

observe trois cas limites détaillés dans la figure III.31 (dans le cas d’un réducteur réversible présent en

solution et s’oxydant à la surface de l’UME).

234
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

(A) (B) (C)

Figure III.31 – Cas limites de fonctionnement du SECM en mode feedback.

(A) Réactif en solution ; (B) : feedback positif ;(C) : feedback négatif.

Quand la microélectrode est suffisamment éloignée du substrat, il y a établissement d’un régime

stationnaire de diffusion avec un courant constant (figure III.31A). Quand la distance entre la sonde et

le substrat est suffisamment faible (environ cinq fois le rayon de la microélectrode), la présence du

substrat modifie le transport au voisinage de l’UME (figures III.31B et .III.31C). Dans le cas d’un

substrat conducteur, le médiateur redox réagissant à la microélectrode est régénéré, entraînant une

augmentation du courant mesuré à la sonde (feedback positif, figure III.31B). Au contraire, un substrat

isolant va bloquer la diffusion des espèces et appauvrit la zone en médiateur redox (feedback négatif,

figure III.31C). Le courant diminue lorsque la distance sonde-substrat diminue. Le mode feedback

permet de dresser une cartographie locale des surfaces et des réactions qui s’y produisent en déplaçant

la sonde sur une surface définie à une distance du substrat maintenue constante [84]. C’est ce mode qui

sera utilisé pour la caractérisation des dépôts organiques mixtes.

Dans le mode génération/collection[85], des espèces sont générées électrochimiquement sur l’une des

deux électrodes de travail (sonde ou substrat) et détectées au niveau de la seconde. Ce mode est

typiquement utilisé pour l’étude des cinétiques de réactions homogènes ou l’établissement de profils

de concentration[86-88].

Enfin, le mode direct permet de fonctionnaliser localement des surfaces en utilisant la microélectrode

comme électrode auxiliaire[89] ou comme électrode de travail[90].

235
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

d. Applications de la microscopie électrochimique à balayage

Le SECM permet de caractériser la réactivité de surface par cartographie de zones plus ou moins

électroactives[91, , mais aussi d’évaluer la nature chimique et/ou électrochimique d’espèces en

92]

investiguant les réactions à la surface de l’échantillon[93]. La modification locale des substrats par

dissolution[94] ou greffage[55, 95, 96] électrochimiquement assistés est également rendue possible grâce au

faible rayon d’action de l’UME. Le champ d’application de la SECM est de plus en plus vaste avec

l’essor de la miniaturisation et la diversification des microélectrodes (matériau, géométrie…). On

retrouve notamment des applications en corrosion[97], en biologie[98, 99] ou en sciences des matériaux[71].

e. Etude de la fonctionnalisation mixte

1. Mode opératoire

Afin de déterminer les différences de réactivité vis-à-vis des acides ascorbique et urique entre un dépôt

PEDOTVC et un dépôt TPBDI-PEDOTVC, un échantillon contenant les deux films organiques est

préparé selon la procédure schématisée dans la figure III.32. Les paramètres de dépôts des deux films

sont ceux précédemment optimisés.

236
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Figure III.32 – Préparation de l’échantillon pour l’étude par SECM

La figure III.33 montre une vue de dessus de l’échantillon qui est cartographié par le SECM.

Figure III.33 – Vue de dessus de l’échantillon pour l’étude par SECM

237
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Le substrat ainsi modifié est plongée dans une solution électrolytique contenant l’une ou l’autre des

deux espèces antioxydantes. La cartographie de la zone analysée est effectuée avec une UME en

platine.

2. Analyse de la couche organique diazonium-polymère

La figure III.34 présente la cartographie obtenue avec une UME de Pt polarisée à 0,3 V et le substrat

plongé dans une solution de PBS à 0,1 mol.L-1 (pH 7) contenant de l’AU à 200 µmol.L-1. Il a été

auparavant vérifié que l’AU est oxydé sur Pt en All au potentiel choisi. Le courant i relevé à la pointe

de la sonde est normalisé par rapport à sa valeur iinf quand la sonde est éloignée du substrat.

Figure III.34 – Cartographie SECM de l’échantillon de la figure III.33 dans une solution de PBS à
0,1 mol.L-1 (pH 7) contenant de l’AU à 200 µmol.L-1
rUME = 10 µm ; dUME-échantillon = 20 µm ; EUME = 0,3 V ; Echantillon non polarisé ;
Aanalysée = 1000 µm x 1000 µm ;Echantillonage X = 10 µm/point ; Echantillonage Y = 10 µm/point ;
iinf= 1,26 nA

238
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Le feedback observé dans le cas de l’AU est un feedback de type positif. En effet, le courant mesuré à

la sonde positionnée à proximité du substrat est supérieur en tout point de la surface analysée au

courant mesuré en solution : la valeur moyenne du rapport est de 1,09. Cette augmentation du

courant de 9 % peut être expliquée par deux phénomènes simultanés. En premier lieu, même s’il n’est

pas polarisé, l’échantillon est immergé dans une solution concentrée en AU qui est un réducteur.

D’après la loi de Nernst, le potentiel du substrat est donc régi par l’équation :

Equation II.1

avec

Esub = potentiel de l’échantillon de carbone vitreux modifié (V/ref)

E°’All/AU = potentiel standard apparent du couple All/AU = 0,34 V/ECS à pH 7.

Même si de l’All est produite localement à la sonde, [All] est très proche d’une concentration nulle du

point de vue du substrat. Donc la différence est négative ce qui implique que

l’échantillon est polarisé spontanément à des potentiels cathodiques[79]. Comme le système All/AU est

réversible sur CV-PEDOTVC et sur CV-TPBDI-PEDOTVC (figures III.20 et III.26) l’All produite par

oxydation de l’AU à la sonde est donc réduite localement sur le substrat. Cette régénération produit de

l’AU qui est de nouveau oxydé à l’UME. On obtient ainsi un mécanisme catalytique, rendu possible

car le substrat est conducteur. L’amplification du courant est ici également due aux propriétés redox

du polymère. Comme > (figure III.12), le feedback positif est une

conséquence de la réaction spontanée entre All et PEDOT red qui régénère l’AU. La figure III.34

montre par ailleurs deux zones clairement distinctes de part et d’autre de l’axe médian de la figure. Le

côté gauche correspondant au dépôt PEDOTVC présente un moyen de 1,04 alors que celui

correspondant au dépôt TPBDI-PEDOTVC présente un moyen de 1,13, soit une augmentation de 13

%. Le fait que les courants soient plus exacerbés avec le dépôt contenant à la fois TPBD et PEDOT

confirme que la fonctionnalisation mixte possède une meilleure réactivité électrochimique que la

couche de PEDOT seule confirmé par comparaison des figures III.20 et III.26. Un autre élément

239
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

possible d’explication réside dans une plus grande porosité induite par les précurseurs TPBD, ce qui

multiplierait les sites actifs du polymère.

La figure III.35 présente la cartographie obtenue avec une UME de Pt polarisée à 0,3 V et le substrat

plongé dans une solution de PBS à 0,1 mol.L-1 (pH 7) contenant de l’AA à 200 µmol.L-1. Il a été

auparavant vérifié que l’AA est oxydé sur Pt en ADH au potentiel choisi. Le courant i relevé à la

pointe de la sonde est normalisé par rapport à sa valeur i0 quand la sonde est éloignée du substrat.

Figure III.35 – Cartographie SECM de l’échantillon de la figure III.33 dans une solution de PBS à
0,1 mol.L-1 (pH 7) contenant de l’AA à 200 µmol.L-1
rUME = 10 µm ; dUME-échantillon = 20 µm ; EUME = 0,3 V ; Echantillon non polarisé ;
Aanalysée = 1000 µm x 1000 µm ;Echantillonage X = 10 µm/point ; Echantillonage Y = 10 µm/point ;
iinf= 1,58 nA

Les mesures réalisées avec l’AA dénotent un comportement atypique. Bien que le substrat soit

conducteur, le courant mesuré à la sonde est inférieur en tout point de la surface analysée au courant

240
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

mesuré en solution : la valeur moyenne du rapport est de 0,92. Cette diminution de 8 % peut être

expliquée par l’irréversibilité du système ADH/AA, tant sur les dépôts PEDOTCV que sur TPBDI-

PEDOTCV (figures III.20 et III.26). Les courbes d’approche sont alors similaires à celles obtenues dans

le cas d’un substrat isolant (figure III.31C). La proximité de l’échantillon gêne donc la diffusion

d’espèces à la sonde et provoque la diminution du courant relevé à l’UME. La diminution de i par

rapport à iinf est alors expliquée par un apport moindre en AA. De la même façon que l’AU (figure

II.34), deux zones sont clairement distinctes de part et d’autre de l’axe médian de la figure. Le côté

correspondant au dépôt PEDOTVC présente un moyen de 0,89 alors que celui correspondant au

dépôt TPBDI-PEDOTVC présente un moyen de 0,95, soit une augmentation de 6 %. Les différences

de courants mesurés entre les deux dépôts peuvent être expliquées par plusieurs hypothèses :

 Une différence de niveau entre les dépôts induite par la fonctionnalisation préalable par le

TPBD. L’ajout de précurseurs conduirait alors à une interpénétration des couches de PEDOT

et diazonium et augmenterait de manière générale la distance sonde-substrat au niveau du

dépôt mixte (Figure III.36).

 Une porosité plus marquée dans le cas d’un dépôt TPBDI-PEDOTVC qui diminuerait de

manière plus ponctuelle et plus nettement la distance sonde-substrat.

Figure III.36 – Représentation de la zone d’interpénétration

La caractérisation de surface des dépôts par la SECM a donc permis de mettre en avant de manière

électrochimique les différences de réactivité vis-à-vis de l’AA et de l’AU qu’induit la modification

préalable de l’électrode par le TPBD et de confirmer les résultats présentés aux figures III.20 et III.26.

241
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Les hypothèses concernant les différences structurales des dépôts sont difficiles à valider ou réfuter

avec les clichés MEB des polymères correspondants (figures III.21 et III.27) car la résolution des

micrographies ne permet pas d’apprécier de manière précise la différence de rugosité et de porosité.

L’utilisation d’autres appareils tels que le rugosimètre ou le microscope à force atomique donnerait

des éléments de réponse. Même si ce regain de sensibilité ne constitue pas la raison première de

l’utilisation du diazonium pour la mesure simultanée de l’AA et de l’AU, cette amélioration est la

bienvenue dans le cadre de l’élaboration d’un capteur électrochimique plus sensible.

VII. Utilisation du capteur fonctionnalisé

a. Dosage séparé des acides ascorbique et urique

Une fois les paramètres de dépôt optimisés, les performances analytiques et les caractéristiques

métrologiques du capteur fonctionnalisé par une couche mixte TPBD-PEDOT peuvent être

déterminées. Dans un premier temps, le dosage des deux antioxydants est effectué individuellement

dans une solution tamponnée à pH 7 pour des gammes de concentrations comprises entre 10-6 et 10-3

mol.L-1. Cet intervalle de concentrations a été choisi pour inclure les concentrations physiologiques

des deux antioxydants. La figure III.37 regroupe les voltammogrammes cycliques obtenus pour le

dosage de l’AA et de l’AU.

242
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

3,5 j (A.m-2) (A)

3
1000 µmol.L-1
2,5

1,5

0,5 0 µmol.L-1

0
E (V/ECS)
-0,5
-0,3 -0,2 -0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7

6
j (A.m-2) (B)

5
1000 µmol.L-1
4

0 µmol.L-1
1

0
E (V/ECS)
-1
-0,3 -0,2 -0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7

Figure III.37 – Voltammogrammes cycliques enregistrés avec une électrode CV-TPBDI -PEDOTVC
dans une solution aqueuse de PBS à 0,1 mol.L-1 contenant de l’AA (A) ou de l’AU (B) aux
concentrations de 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 et 1000 µmol.L-1. Voltammogrammes
cycliques sans AA ou AU en noir. v = 0,1 V.s-1.

Le traitement des ces courbes permet de corréler la densité de courant de chacun des deux pics avec la

concentration de l’espèce antioxydante correspondante. La figure III.38 représente les courbes

d’étalonnage obtenues.

243
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

6 jpic AA (A.m-2)
(A)
0,3 jpic AA
(A.m-2)
5
0,2

4 0,1
[AA] (µmol.L-1)

3 0
0 50 100

2
jpic AA= 3,25 10-3 x [AA] - 5,17 10-2
R² = 0,998
1
[AA] (µmol.L-1)
0
0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600

7 jpic AU (A.m-2)
(B)
0,3 jpic AU
6 (A.m-2)
0,2
5
0,1
4
[AU] (µmol.L-1)
0
3 0 20 40
jpic AU = 5,80 10-3 x [AU] + 4,37 10-2
2
R² = 0,996
1
[AU] (µmol.L-1)
0
0 200 400 600 800 1000 1200

Figure III.37 – Courbes d’étalonnage déduites de la figure III.36 pour le dosage de l’AA (A) et l’AU
(B).

Des tests de répétabilité de mesure (cinq mesures par concentration) et de reproductibilité de

l’interface (cinq dépôts effectués selon les paramètres de modification optimaux) ont également été

accomplis et les coefficients de variation ont été calculés. L’ensemble de ces résultats est rapporté

dans le tableau III.8.

244
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Coefficient Coefficient de
Limite de Zone de Sensibilité de variation variation
Electrode Espèce détection linéarité (10-3 A.L.µmol-
répétabilité reproductibilité
(µmol.L-1)
1
-1
(µmol.L ) .m-2)
(%) (%)
AA 15 ± 3 27 - 1000 1,02 ± 0,24 8 24
CV
AU 6±2 20 - 800 2,39 ± 0,23 10 15
AA 8±1 15 - 1200 2,99 ± 0,27 13 6
CV-PEDOTVC
AU 1 ± 0,5 8 - 1000 5,92 ± 0,44 14 3
CV-TPBDI- AA 6±1 12 - 1400 3,57 ± 0,22 5 4
PEDOTVC AU 1,5 ± 0,5 10 - 1000 5,52 ± 0,53 8 7
Tableau III.8 – Performances analytiques de CV, CV-PEDOTVC et CV-TPBDI-PEDOTVC.

Le tableau III.8 montre que la fonctionnalisation par le PEDOT et par la couche mixte TPBD-PEDOT

apporte un gain non négligeable par rapport à l’électrode nue CV au niveau des performances

analytiques. Les limites de détection (déterminées expérimentalement) sont abaissés puisqu’elles

varient, respectivement sur CV-PEDOTVC et CV-TPBDI-PEDOTVC, de 15 µmol.L-1 à 8 et 6 µmol.L-1

pour l’AA et de 6 µmol.L-1 à 1 et 1,5 µmol.L-1 pour l’AU. Les zones de linéarité sont également

étendues et celles des électrodes fonctionnalisées incluent les domaines de concentrations

physiologiques des antioxydants dans le sérum sanguin (comprises entre 34 et 79 µmol.L -1 pour l’AA

et entre 180 et 420 µmol.L-1 pour l’AU). Enfin, les électrodes avec les couches organiques fournissent

des signaux avec des coefficients de variation de répétabilité acceptable, les plus faibles étant pour

l’électrode avec la couche de TPBD-PEDOT. La reproductibilité est tout aussi intéressante mais est

légèrement meilleure avec l’électrode modifiée uniquement avec le PEDOT puisqu’elle n’est pas

tributaire des conditions de polissage manuel (comme l’électrode CV) et des variations inhérentes à

une double fonctionnalisation (comme CV-TPBDI-PEDOTVC).

En définitive, l’ajout d’une couche de TPBD avant l’électropolymérisation donne à l’électrode

résultante des performances analytiques tout à fait comparables à celles obtenues sur une couche de

PEDOT seule, avec des valeurs légèrement moins bonnes pour l’AU en termes de sensibilité et de

limite de détection et un gain notable sur la détection de l’AA et sur la répétabilité de la mesure.

245
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

b. Dosage simultané des acides ascorbique et urique

Pour simuler les conditions physiologiques, le dosage est effectué en présence des deux antioxydants.

La figure III.39 présente les voltammogrammes cycliques enregistrés avec un mélange équimolaire

des deux acides à différentes concentrations, ainsi que les courbes d’étalonnages résultantes.

(A)
7 j (A.m-2)

5 1000 µmol.L-1

0 µmol.L-1
1

0
E (V/ECS)
-1
-0,3 -0,2 -0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7

9
jpic (A.m-2)
8
jpic AU = 6,65 10-3 x [AU] + 8,06 10-2
7 R² = 0,997 (B)
6

5
jpic AA = 3,45 10-3 x [AA] + 1,53 10-2
4 R² = 0,998

1
[AA] et [AU] (µmol.L-1)
0
0 200 400 600 800 1000 1200

Figure III.39 – (A) Voltammogrammes cycliques enregistrés avec une électrode de

CV-TPBDI -PEDOTVC dans une solution aqueuse contenant du PBS à 0,1 mol.L-1 pH 7 et un
mélange équimolaire d’AA et d’AU aux concentrations de 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700,
800, 900 et 1000 µmol.L-1.(voltammogrammes cycliques sans AA ou AU en noir).v = 0,1 V.s-1.
(B) Courbes d’étalonnage déduites pour le dosage de l’AA (en bleu) et l’AU (en rouge).

246
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Le traitement des données montre que les limites expérimentales de détection (6 µmol.L-1 pour l’AA et

2 µmol.L-1 pour l’AU), les zones de linéarité (15 - 1000 µmol.L-1 pour l’AA et 8 – 1000 µmol.L-1 pour

l’AU) ainsi que les coefficients de variation de répétabilité (5 % pour l’AA, 9 % pour l’AU) et de

reproductibilité (5 % pour l’AA, 8 % pour l’AU) sont comparables aux données obtenues dans le cas

des dosages séparés des deux acides (figure III.36 et III.37, tableau III.8). Alors que les sensibilités du

capteur vis-à-vis de l’AA sont semblables (3,45 10-3 A.L.µmol-1.m-2 contre 3,56 10-3 ± 0,22 A.L.µmol-
1
.m-2), celle vis-à-vis de l’AU passe de 5,52 ± 0,53 10-3 A.L.µmol-1.m-2 à 6,65 10-3 A.L.µmol-1.m-2 soit

une augmentation de 20 ± 9,6 %. Ces résultats sont en cohérence avec le mécanisme de régénération

de l’AU par l’AA, comme démontré précédemment par l’équipe[36].

c. Etude de la stabilité

1. Stabilité au stockage

Le principal intérêt d’utiliser le TPBD réside dans la possibilité de lier de manière covalente le

PEDOT à l’électrode par le biais du diazonium. Ainsi, la couche organique est supposée être plus

stable et garder ses propriétés d’amélioration de la sélectivité et de la sensibilité vis-à-vis des deux

antioxydants. Le premier test concerne la stabilité au stockage. La figure III.40 présente les

voltammogrammes cycliques tracés avec une électrode CV-TPBDI-PEDOTVC et CV-PEDOTVC dans

une solution équimolaire d’AA et d’AU en milieu tampon pH 7, avant et après stockage à l’air libre et

à l’obscurité pendant 30 jours.

247
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

16
j (A.m-2)

14

12

10

-2
E (V/ECS)

-4
-0,3 -0,2 -0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7

Figure III.40 – Voltammogrammes cycliques enregistrés dans une solution aqueuse contenant du PBS
à 0,1 mol.L-1 et un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 1000 µmol.L-1 avec une électrode de
CVp-PEDOTVC (en bleu) et de CV-TPBDI-PEDOTVC (en rouge) avant (en trait plein) et après (en
pointillés) un stockage de 30 jours à l’obscurité et à l’air libre. v = 0,1 V.s-1.

Juste après la modification de surface (courbes en trait plein), le signal enregistré est de très bonne

qualité puisque les pics d’oxydation sont nettement séparés que ce soit sur CVp-TPBDI-PEDOTVC

(courbe en trait plein rouge) ou CVp-PEDOTVC (courbe en train plein bleu). Trente jours plus tard, la

courbe obtenue sur CVp-TPBDI-PEDOTVC (courbe en pointillés rouges) est similaire à la courbe

initiale, puisque le pic d’oxydation de l’AA est à situé -0,022 V (contre -0,037 V initialement) et son

intensité est de 3,9 A.m-2 (contre 4,4 A.m-2 soit 88 % de sa valeur initiale). Le pic de l’AU est resté à

0,27 V et son intensité est passée de 11,7 A.m-2 à 10,0 A.m-2 soit 85 %, de sa valeur initiale.

Comparativement sur CVp-PEDOTVC (courbe en pointillés bleus), les pics d’oxydation se décalent

cathodiquement de 60 mV pour l’AA et de 6 mV pour l’UA tandis que les intensités de pic ont

248
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

diminué de 40 % pour l’AA et de 15% pour l’UA. Ces résultats montrent indubitablement que la

couche de TPBD confère une meilleure stabilité électrochimique à la couche organique.

2. Stabilité opérationnelle

La stabilité opérationnelle peut être déterminée quand le capteur réalise de nombreuses mesures en un

minimum de temps. Des voltammogrammes cycliques successifs qui ont été tracées avec une électrode

CV-TPBDI-PEDOTVC et une électrode de CV-PEDOTVC dans une solution équimolaire d’AA et d’AU

en milieu tampon pH 7. Après leur fonctionnalisation, 50 mesures successives sont réalisées, espacées

de 1 s pour homogénéiser la solution. La figure III.41 représente les voltammogrammes cycliques

correspondants à la 1ère et à la 50ème mesure pour les deux types d’électrode.

6
j (A.m-2)

0
E (V/ECS)
-1
-0,3 -0,2 -0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7

Figure III.41 – Voltammogrammes cycliques enregistrés dans une solution aqueuse contenant du PBS
à 0,1 mol.L-1 et un mélange équimolaire d’AA et d’AU à 1000 µmol.L-1 avec une électrode de
CVp-PEDOTVC (en bleu) et de CV-TPBDI-PEDOTVC (en rouge) avant (en trait plein) et après (en
pointillés) une série de 50 mesures successives espacées de 1 s. v = 0,1 V.s-1.

249
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Initialement, les courbes sont de très bonne qualité puisque les pics d’oxydation sont nettement

séparés, que ce soit sur CV-TPBDI-PEDOTVC (courbe en trait plein rouge) ou CV-PEDOTVC (courbe

en trait plein bleu). Après les 50 mesures successives, la courbe obtenue sur CV-TPBDI-PEDOTVC

(courbe en pointillés rouges) témoigne d’une légère perte de sélectivité et de sensibilité, puisque le pic

d’oxydation de l’AA est à -0,075 V (contre – 0,104 V initialement) et son intensité est de 2,1 A.m-2

(contre 2,4 A.m-2 soit 88 % de sa valeur initiale). Le pic de l’UA est resté à 0,23 V et son intensité est

passée de 4,9 A.m-2 à 4 A.m-2 soit 81 % de sa valeur initiale. Comparativement, les pics d’oxydation

sur CV-PEDOTVC sont décalés cathodiquement de 150 mV pour l’AA et de 70 mV pour l’UA tandis

que les intensités de pic ont diminué de 25 % pour l’AA et de 33% pour l’UA (courbe en pointillés

bleus). Ces résultats montrent qu’une couche de TPBD permet à l’électrode de présenter une meilleure

stabilité opérationnelle que le seul film de PEDOT électrodéposé dans les mêmes conditions.

d. Comparaison des performances analytiques

Le tableau III.9 regroupe les performances analytiques de capteurs composés d’une électrode de CV

fonctionnalisée pour le dosage de l’AA et/ou de l’AU. Sont également mentionnés les travaux

antérieurs de l’équipe réalisés sur microélectrode d’or. Les résultats obtenus dans ce chapitre sont tout

à fait comparables à ceux reportés dans la bibliographie. Surtout, à notre connaissance, aucun ne s’est

clairement penché sur l’étude de la stabilité opérationnelle et au stockage du capteur fonctionnalisé.

Les résultats observés sur cet aspect apportent un intérêt majeur à l’utilisation couplée du TPBD et du

PEDOT car un gain de stabilité est observé sans aucune altération des performances.

250
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

Sensibilité Limite de
Méthode de
Référence Electrode Fonctionnalisation (10-3 A.L.µmol- détection
détection 1
.m-2) (µmol.L-1)
AA AU AA AU
[100] Voltammétrie à
CV Polyacétylthiophène 7,12 24,9 8 1
vagues carrées
Voltammétrie à
[101]
impulsions CV ARN 2,83 84,3 5 0,2
différentielles
[17] Voltammétrie Nanotubes de carbone
CV monofeuillet
- 0,78 - 0,2
linéaire
[28]
Chronoampérométrie CV Aminophénoldiazonium - - 10 0,2
Voltammétrie à
[102]
impulsions CV Acide aspartique - - 10 0,2
différentielles
Voltammétrie à
[9]
impulsions CV PEDOT 0,57 19,2 7,4 1,4
différentielles
[3] Voltammétrie
CV PEDOT - 6,79 excès 1
cyclique
Travaux
Voltammétrie à
antérieurs
impulsions µAu PEDOT 8,75 30,8 2,5 1,5
de
différentielles
l’équipe[1]
Voltammétrie
Ce travail CV TPBD + PEDOT 3,56 5,52 6 1,5
cyclique
Tableau III.9 – Performances analytiques de capteurs pour le dosage de l’AA et de l’AU, composés
d’un substrat de CV fonctionnalisé.

e. Essais en milieu biologique réel

Des essais préliminaires ont été effectués dans des conditions physiologiques avec une électrode de

CV-TPBDI-PEDOTVC. Pour cela, un échantillon de sérum sanguin a été fourni par le Laboratoire de

Biochimie de Rangueil. Comme au cours de travaux de Fadhila Sekli, l’échantillon n’a subi aucun

prétraitement ou dilution avant l’analyse. La figure III.42 présente le voltammogramme linéaire

obtenu.

251
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

1,8 i (µA)

1,6

1,4

1,2

0,8

0,6

0,4

0,2
E (V/ECS)
0
-0,2 -0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5

Figure III.42 – Voltammogramme linéaire enregistré avec une électrode de CV-TPBDI -PEDOTVC
dans un sérum sanguin contenant 30 µmol.L-1 d’AA et 200 µmol.L-1 d'AU. v = 0,1 V.s-1.

Hormis un courant capacitif plus grand qu’en milieu tampon pH 7 (figure III.38), le signal enregistré a

une allure semblable à celle observée dans les milieux simulés. Un premier pic, relativement mal

défini est présent à 0,05 V et peut être attribué à l’oxydation de l’AA tandis que le second pic à 0,25 V

correspond à l’oxydation de l’AU. Aucun nouveau pic induit par une espèce interférente pouvant être

présente dans l’échantillon ne gêne la détection des antioxydants dans ce cas de figure (dopamine,

cystéine, N-Acétylcystéine, xanthine, glucose, glutathion, albumine, acide glutamique…). Cependant,

il a été montré que la présence de ces espèces dans les proportions physiologiques [37] n’interfère pas la

mesure de l’AA et de l’AU. Cette étude préliminaire montre que le signal obtenu à l’aide du capteur

modifié par la fonctionnalisation mixte permet l’appréhension des milieux biologiques.

252
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

F. Bilan et perspectives du capteur

Dans ce chapitre, l’élaboration d’un capteur à antioxydants fiable et stable à partir d’une électrode de

CV utilise deux étapes de fonctionnalisation : une première par greffage de TPBD et une seconde par

électropolymérisation du PEDOT, un polymère conducteur connu pour ses qualités électrocatalytiques

vis-à-vis du dosage des acides ascorbique et urique. Le greffage préalable d’une couche organique de

thiophènes influe sur le processus d’électropolymérisation selon la méthode de greffage utilisé.

Toutefois, il a été démontré que la couche mixte TPBD-PEDOT pouvait, dans certaines conditions,

posséder une meilleure réactivité et donner au capteur résultant des performances analytiques plus

intéressantes que dans le cas d’une couche de PEDOT seule. Cette différence de réactivité

électrochimique a été confirmée par l’analyse de la surface de la couche par SECM. D’autres

observations par MEB ont montré que la structure finale du PEDOT pouvait être soit globulaire et très

compacte, soit fibrillaire et poreuse. Il a donc été possible de corréler structure et comportement

électrochimique du dépôt et de prouver que les structures poreuses donnaient les meilleurs résultats

électrocatalytiques. Au final, l’ajout d’une couche de TPBD améliore les performances du PEDOT en

lui procurant une très bonne stabilité opérationnelle et au stockage. Il est encore toutefois largement

possible d’améliorer ses performances. Pour cela, il existe deux principaux leviers d’action :

 Faire varier les méthodes d’électropolymérisation du PEDOT de manière à obtenir les

structures les plus poreuses possibles : il est possible d’utiliser des méthodes galvanostatique

avec une densité de courant élevée ou potentiostatique avec des potentiels plus anodiques

(sans provoquer la suroxydation du polymère) en déposant la même quantité de charge de

PEDOT (100 C.m-2). Par conséquent, le temps d’électrolyse sera raccourci et la structure du

polymère s’en trouverait impactée. Cette perspective permettrait d’avoir un meilleur contrôle

de l’énergie mise en jeu durant la polymérisation et assurerait une meilleure reproductibilité

structurale des dépôts.

253
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
__________________________________________________________________________________

 Utiliser des méthodes électrochimiques différentielles pour le dosage des antioxydants :

réputées plus sensibles, elles permettraient de diminuer encore plus les seuils de détection tout

en augmentant les sensibilités du capteur.

Une troisième voie pourrait consister à changer les paramètres du dépôt du TPBD (notamment vitesse

de balayage, densité de courant, potentiel ou densité de charge) pour améliorer la stabilité du dépôt

mixte final. En l’état actuel des choses, le capteur peut toutefois être utilisé en milieu biologique pour

des tests de justesse et de fidélité, ce sera d’ailleurs le prochain objectif dans le développement du

capteur.

254
 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
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 Chapitre III : Elaboration de capteurs pour le dosage d’antioxydants
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261
262
Conclusion générale
 Conclusion générale
__________________________________________________________________________________

Conclusion générale

Les travaux de cette thèse avaient pour objectifs :

- d’étudier les potentialités de la fonctionnalisation d’électrodes de carbone vitreux par des sels

de diazonium.

- d’élaborer et de mettre au point un capteur électrochimique pour le dosage simultané des

acides ascorbique et urique, qui présente une stabilité opérationnelle et au stockage lui

permettant d’accroître sa fiabilité à moyen et long termes.

- de diversifier les voies de modification de surface envisageables dans la conception de

capteurs à antioxydants.

Les travaux détaillés dans ce manuscrit de thèse se sont focalisés dans un premier temps sur

l’étude fondamentale de la réduction du 4-nitrobenzène diazonium (NBD). Ce diazonium, très

largement utilisé parce qu’il possède un groupement électroactif, a pourtant un mécanisme de

réduction méconnu. Une étude mécanistique couplée à une étude cinétique ont permis d’élucider en

grande partie les zones d’ombre de la réactivité du NBD, notamment celles concernant la réaction de

greffage. Les expériences entreprises durant cette thèse ont aussi montré que les propriétés de la

surface d’électrode modifiée peuvent être modulées non seulement selon les paramètres de dépôt mais

aussi une fois que le film de NBD est à la surface de l’électrode par le biais d’opérations

électrochimiques dûment choisies. Ainsi, les fonctions actives de la couche ont la possibilité d’être

majoritairement sous les formes NO2, NHOH ou NH2 selon les protocoles d’électrolyse utilisés.

L’effet barrière, induit à la fois par les cycles aromatiques et les groupements fonctionnels de la

couche, influence le comportement électrochimique d’espèces redox en améliorant ou en ralentissant

leur cinétique de réaction. La fonctionnalisation par les sels de diazonium est réputée pour être

polyvalente et c’est en effet ce qu’ont démontré les études mécanistiques et cinétiques d’une couche

265
 Conclusion générale
__________________________________________________________________________________

organique greffée par réduction du NBD. Il est donc possible de moduler avec une certaine finesse la

réponse de l’électrode en fonction de la couche organique immobilisée à sa surface.

Un capteur à antioxydants fonctionnalisé par le NBD a été envisagé, qui exploiterait ces

propriétés de surface. Il n’a malheureusement pas donné de résultats à la hauteur de nos espérances, en

raison d’un effet barrière au transport de matière trop prononcé et de l’impossibilité de réunir des

conditions aboutissant à une configuration électrostatique favorable. Une stratégie basée sur la

diminution du signal de NHOH a néanmoins ouvert une porte pour la détection de l’acide ascorbique.

Face aux promesses de stabilité de la modification covalente et devant les obstacles inhérents

au NBD, la fonctionnalisation couplée diazonium-PEDOT a été envisagée. Cette stratégie a montré

que coupler les deux modifications permet de tirer parti des avantages de chacune d’entre elles. D’une

part, la mesure simultanée de l’acide ascorbique et de l’acide urique est rendue possible grâce au

polymère électrodéposé sur l’électrode. Les performances analytiques de l’électrode présentant alors

une double fonctionnalisation ne sont pas altérées par la modification covalente préalable et sont

comparables à celles obtenues dans le cas d’une électrode fonctionnalisée par le PEDOT seul. D’autre

part, la stabilité opérationnelle et au stockage est d’une meilleure qualité grâce à la covalence induite

par le dépôt de diazonium. C’est ce dernier point qui apporte une caractéristique nouvelle et

particulièrement intéressante dans le cadre de l’élaboration de capteurs à antioxydants, en levant le

verrou important qu’est la stabilité de la modification de surface, et donc celle de la réponse du

capteur. L’étude de l’influence des paramètres des deux fonctionnalisations sur les propriétés

électrochimiques de l’électrode a conclu que l’effet électrocatalytique du polymère ne pouvait être

obtenu que dans certaines conditions d’électropolymérisation. L’examen de ces dépôts par

microscopie a démontré que l’augmentation des performances analytiques pouvait être corrélée à la

structure du PEDOT d’aspect général tantôt fibrillaire, tantôt globulaire.

Plusieurs perspectives se dégagent de ces travaux. D’un point de vue fondamental, l’analyse

spectroscopique des différentes fonctions NO2, NO, NHOH et NH2 de la couche organique greffée à

partir du NBD peut être envisagée à court terme. La collaboration entre le Laboratoire de Génie

266
 Conclusion générale
__________________________________________________________________________________

Chimique et le Laboratoire de Chimie Physique d’Orsay offre l’opportunité d’utiliser la spectroscopie

SFG-DFG de manière totalement inédite pour caractériser les films de diazonium. Des travaux

préliminaires ont été menés, qui méritent d’être approfondis. Ils permettront d’asseoir définitivement

le mécanisme de réduction du NBD proposé dans ce mécanisme. En combinant les résultats

spectroscopiques et électrochimiques, il sera possible de moduler avec davantage de précision les

propriétés de la couche organique de NBD.

Le deuxième point, sur lesquelles les futurs travaux pourraient se concentrer, concerne la

fonctionnalisation mixte diazonium-PEDOT. Même si les performances analytiques du capteur

modifié sont intéressantes, il reste possible de les améliorer en jouant sur deux aspects du procédé

analytique. D’une part, en changeant les paramètres électrochimiques de la fonctionnalisation, une

électropolymérisation peut être envisagée par le biais de méthodes galvanostatique et potentiostatique.

Ce protocole aboutirait alors à un dépôt répondant aux critères morphologiques d’augmentation de

sélectivité et de sensibilité tout en assurant une meilleure reproductibilité de structure. Une

caractérisation plus approfondie (rugosimètre, AFM…) du dépôt reste à faire pour quantifier

l’influence du protocole sur le dépôt. D'autre part, il reste possible d'abaisser les seuils de détection et

d'augmenter les sensibilités des capteurs en utilisant des méthodes de détection électrochimique basées

sur des mesures différentielles.-

D’un point de vue plus global, cette thèse a ouvert les portes d’une voie de fonctionnalisation

par des sels de diazonium pour l’élaboration de capteurs à antioxydants. Même si la modification par

le NBD n’a pas tenu ses promesses et que celle par le TPBD a été couplée au PEDOT, la polyvalence

de la méthode rend possible l’emploi d’un sel de diazonium pour concevoir un capteur à la fois

sensible, sélectif et stable. Cette potentialité passe toutefois par la recherche d’un groupement

fonctionnel adéquat, condition pouvant être satisfaite par la large variété de composés phénylamine et

phényldiazonium disponibles sur le marché ou accessibles par voie de synthèse.

267
268
Abréviations et
symboles
 Abréviations et symboles
__________________________________________________________________________________

Abréviations

Abréviation Désignation
A•- Radical anion ascorbate
AA Acide ascorbique
ACN Acétonitrile
ADH Acide déhydroascorbique
ADN Acide désoxyribonucléique
AFM Microscopie à force atomique (atomic force microscopy)
AH- Anion ascorbate
All Allantoïne
ARN Acide ribonucléique
ATB Acide thiobarbiturique
AU Acide urique
C Réaction chimique
CAT Catalase
CBS Tampon carbonate (carbonate buffer solution)
CoQH Coenzyme Q oxydée
CoQH2 Coenzyme Q réduite
CV Carbone vitreux
CVp Plaque de carbone vitreux
DPPH Diphenylpicrylhydrazyl
E Réaction électrochimique
E Déposé par électrolyse à potentiel constant
E1 Œstrone
E2 Œstradiol
E3 Œstriol
ECS Electrode au calomel saturée
EDOT 3,4-éthylènedioxythiophène
Spectroscopie électrochimique d’impédance (electrochemical impedance
EIS
spectroscopy)
EQCM Microbalance électrochimique à quartz (electrochemical quartz crystal microbalance)
ESH Electrode standard à hydrogène
FcMeOH Ferrocèneméthanol
FcMeOH+ Ion ferrocèniumméthanol
Gpx Glutathion peroxydase
GR Glutathion réductase
GSH Glutathion réduit
GSSG Glutathion oxydé
HOPG Highly oriented pyrolytic graphite

271
 Abréviations et symboles
__________________________________________________________________________________

Abréviation Désignation
Chromatographie en phase liquide à haute performance (high-performance liquid
HPLC
chromatography)
I Déposé par électrolyse à courant constant
IR Infrarouge
Union internationale de chimie pure et appliquée (international union of pure and
IUPAC
applied chemistry)
MEB Microscope électronique à balayage
NADPH Nicotinamide adénine dinucléotide phosphate
NBD 4-nitrobenzène diazonium
NMR Spectrométrie de résonance magnétique nucléaire (nuclear magnetic resonance)
NOs Nitric oxyde synthase
NOX Nicotinamide adénine dinucléotide phosphate oxydase
ORAC Oxygen radical absorbance capacity
PBS Tampon phosphate (phosphate buffer solution)
PEDOT Polyéthylènedioxythiophène
PEDOTox Forme oxydée du PEDOT
PEDOTred Forme réduite du PEDOT
PhD Phényldiazonium
Spectrométrie infrarouge réflexion-adsorption par modulation de la polarisation
PMIRRAS
(polarization modulation-infrared reflection-adsorption spectroscopy)
R• Radical alkyle
Spectroscopie de rétrodiffusion de Rutherford (Rutherford backscattering
RBS
spectrosopy)
RNS Espèces réactives de l'azote (reactive nitrogen species)
RO• Radical alkoxyle
RO2• Radical peroxyle
RONS Espèces réactives de l'oxygène et de l'azote (reactive oxygen and nitrogen species)
ROOH Peroxyde lipidique
ROS Espèces réactives de l'oxygène (reactive oxygen species)
RPE Résonance paramagnétique électronique
SECM Microscopie électrochimique à balayage (scanning electrochemical microscopy)
SFG Génération de la fréquence somme (sum frequency generation)
Génération de la fréquence somme et génération de la fréquence différence (sum
SFG-DFG
frequency generation and difference frequency generation)
SOD Superoxyde dismutase
(sp) Couche organique induite par un greffage spontané
STM Microscopie à effet tunnel (scanning tunneling microscopy)
TBAPC Perchlorate de tétrabutylammonium
TEAC Trolox equivalent antioxidant capacity
TFBTBA Tétrafluoroborate de tétrabutylammonium
TPA Thiophénylaniline
TPBD Thiophénylbenzènediazonium
UME Ultramicroélectrode
UV Ultraviolets

272
 Abréviations et symboles
__________________________________________________________________________________

Abréviation Désignation
VC Déposé par voltammétrie cyclique
VitE• Radical tocophéryl
XO Xanthine oxydase
VitE Vitamine E
XPS Spectrométrie photoélectronique X (X-ray photoelectron spectrometry)

Constantes

Constante physique Nom Valeur

F Constante de Faraday 96500 C.mol-1
R Constante des gaz parfaits 8,314 J.mol-1.K-1

Symboles

Symbole Désignation Unité

A Surface réelle d’électrode cm²
Agéométrique Surface géométrique d’électrode cm²
C Concentration de l’espèce en solution mol.cm-3
D Coefficient de diffusion de l’espèce en solution cm².s-1
E Potentiel V/ref
E°’ Potentiel standard apparent V/ref
Ei=0 Potentiel à courant nul V
i Courant A
i° Courant d’échange A
ik Courant cinétique A
il Courant diffusionnel A
ilim Courant limite de diffusion A
ilim,a Courant limite de diffusion anodique A
ilim,c Courant limite de diffusion cathodique A
j Densité de courant A.m-2
jpic Densité de courant de pic A.m-2
k Constante de vitesse de transfert de charge cm.s-1
k° Constante de vitesse intrinsèque de transfert de charge cm.s-1
n Nombre d’électrons échangés
Q Quantité de charge C
q Densité de charge de dépôt C.m-2
T Température K
tdépôt Temps de dépôt s

273
 Abréviations et symboles
__________________________________________________________________________________

Symbole Désignation Unité

v Vitesse de balayage des potentiels V.s-1
α Coefficient de transfert électronique anodique
β Coefficient de transfert électronique cathodique
η Surtension V
ν Viscosité cinématique du solvant cm².s-2
ν Nombre d'onde cm-1
ω Vitesse de rotation de l’électrode rad.s-1
NO/NHOH Concentration surfacique des fonctions NO/NHOH mol.cm-2

274
 Nouvelle stratégie de fonctionnalisation de surfaces
d'électrodes à base de sels de diazonium : application aux
capteurs à antioxydants

William RICHARD Directeurs de thèse :

Pierre GROS
David EVRARD
Résumé :

Les travaux présentés dans ce manuscrit se sont focalisés dans un premier temps sur l’étude de la
réduction du 4-nitrobenzène diazonium (NBD). Des études mécanistique et cinétique ont permis
d’élucider la réactivité du NBD et de compléter les données bibliographiques sur le sujet. Un capteur à
antioxydants fonctionnalisé par le NBD a ensuite été envisagé, ouvrant les portes à la détection de
l’acide ascorbique (AA). Dans un second temps, une fonctionnalisation mixte à partir d’un sel de
diazonium et un polymère conducteur, le polyéthylènedioxythiophène (PEDOT), a bénéficié de la
stabilité du diazonium et des propriétés électrocatalytiques du PEDOT vis-à-vis de l’AA et de l’acide
urique, deux antioxydants hydrophiles majeurs. L’optimisation des paramètres de modification de
l’interface et la détermination des performances analytiques ont montré que la structure du polymère a
une grande influence sur la réponse du capteur.

Mots-clés : Diazonium, antioxydants, PEDOT, carbone vitreux, capteurs.

Summary :

The work here discussed is a fundamental study of the electrochemical reduction of the 4-nitrobenzene
diazonium (NBD). Mechanistic and kinetic studies shed some light on the parts of the NBD reactivity
and completed literature data about the subject. An NBD-functionalized antioxidant sensor has been
envisaged, allowing the assay of ascorbic acid (AA). In a second time, a combined functionalization
using a diazonium salt and a conductive polymer, the polyethylenedioxythiophene (PEDOT) coupled
diazonium stability and electrocatalytic properties of PEDOT towards AA and uric acid, two major
antioxidants. The modification parameters optimization of the interface and analytical performances
determination highlighted the influence of the polymer structure on the sensor response.

Keywords : Diazonium, antioxidants, PEDOT, glassy carbon, sensors.

Spécialité : Génie des Procédés et de l’Environnement

Laboratoire de Génie Chimique UMR 5503