L'antibiogramme est un test de laboratoire utilisé pour déterminer la sensibilité d'une souche
bactérienne à divers antibiotiques. Voici les étapes générales pour réaliser un antibiogramme en
milieu solide :
▎1. Préparation de la souche bactérienne
• Isolement : Isoler la souche bactérienne à tester à partir d'un échantillon clinique (sang, urine,
etc.).
• Culture : Cultiver la souche sur un milieu nutritif approprié (ex. : gélose nutritive) pour obtenir
des colonies pures.
▎2. Préparation du milieu de culture
• Choix du milieu : Utiliser un milieu solide approprié, comme la gélose Mueller-Hinton, qui est
standard pour les antibiogrammes.
• Inoculation : Préparer une suspension de la souche bactérienne dans une solution saline ou
un autre diluant afin d'obtenir une turbidité équivalente à celle d'un standard (souvent 0,5
McFarland).
▎3. Inoculation du milieu
• Étaler la suspension : À l'aide d'un écouvillon stérile, étaler uniformément la suspension
bactérienne sur la surface de la gélose.
• Séchage : Laisser sécher légèrement le milieu avant d'ajouter les disques d'antibiotiques.
▎4. Placement des disques d'antibiotiques
• Disques stériles : Utiliser des disques d'antibiotiques préalablement imprégnés avec des
concentrations connues d'antibiotiques.
• Disposition : Placer les disques sur la surface inoculée de la gélose à l'aide d'une pince stérile,
en veillant à respecter une distance adéquate entre eux.
▎5. Incubation
• Conditions d'incubation : Incuber les plaques à une température appropriée (généralement
35-37 °C) pendant 18-24 heures, selon le type de bactérie.
▎6. Lecture des résultats
• Mesure des zones d'inhibition : Après incubation, mesurer les diamètres des zones
d'inhibition autour de chaque disque à l'aide d'une règle ou d'un pied à coulisse.
• Interprétation : Comparer les mesures obtenues avec des normes établies pour déterminer si
la souche est sensible, intermédiaire ou résistante à chaque antibiotique testé.
▎7. Rapport des résultats
• Documentation : Consigner les résultats dans un rapport, indiquant la sensibilité ou la
résistance de la souche aux antibiotiques testés.
• Communication : Transmettre les résultats au clinicien responsable pour guider le traitement.
Ces étapes peuvent varier légèrement selon les protocoles spécifiques utilisés dans différents
laboratoires, mais elles constituent un cadre général pour réaliser un antibiogramme en milieu
solide.
Voici les étapes détaillées pour réaliser un antibiogramme en milieu solide, en utilisant la
méthode de diffusion sur disque (méthode de Kirby-Bauer) :
▎Étapes de l'antibiogramme en milieu solide :
1. Préparation de la souche bactérienne :
• Isolement : Isoler la souche bactérienne à partir d'un échantillon clinique (sang, urine, etc.)
sur un milieu de culture approprié.
• Culture : Cultiver la souche sur un milieu solide (comme l'agar nutritif) pour obtenir des
colonies pures.
2. Préparation du milieu de culture :
• Milieu standardisé : Préparer de l'agar Mueller-Hinton, qui est le milieu standard pour les
tests d'antibiogramme.
• Solidification : Verser l'agar dans des plaques Petri et laisser solidifier à température
ambiante.
3. Inoculation de la plaque :
• Suspension bactérienne : Préparer une suspension bactérienne dans une solution saline
stérile pour obtenir une turbidité équivalente à 0,5 McFarland.
• Inoculation : Utiliser un écouvillon stérile pour inoculer uniformément la surface de la plaque
avec la suspension bactérienne.
4. Application des disques d'antibiotiques :
• Disques standardisés : Disposer des disques d'antibiotiques standardisés (préparés selon des
concentrations spécifiques) sur la surface inoculée de l'agar à l'aide d'une pince stérile.
• Espacement : Assurer un espacement suffisant entre les disques pour éviter le
chevauchement des zones d'inhibition.
5. Incubation :
• Conditions d'incubation : Incuber les plaques à 35-37 °C pendant 18 à 24 heures dans une
atmosphère appropriée (aérobie ou anaérobie selon le type de bactérie).
6. Lecture des résultats :
• Observation des zones d'inhibition : Après incubation, examiner les plaques pour observer les
zones d'inhibition autour des disques.
• Mesure : Mesurer le diamètre des zones d'inhibition en millimètres à l'aide d'un pied à
coulisse.
7. Interprétation des résultats :
• Comparaison avec les normes : Comparer les diamètres mesurés aux valeurs de référence
fournies par des organismes tels que le CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) ou
l'EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing).
• Classification : Classer les souches comme sensibles, intermédiaires ou résistantes aux
antibiotiques testés.
▎Références :
1. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). "Performance Standards for Antimicrobial
Susceptibility Testing." CLSI Document M100.
2. EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing). "Breakpoint tables for
interpretation of MICs and zone diameters." Disponible sur EUCAST.
3. Bauer AW, Kirby WM, Sherris JC, Turck M. "Antibiotic susceptibility testing by a standardized
single disk method." *American Journal of Clinical Pathology.* 1966;45(4):493-496.
Ces étapes et références fournissent un cadre complet pour la réalisation d'un antibiogramme en
milieu solide.
