CHAPITRE I : Notion fondamentale de biochimie clinique
Plan :
Introduction
I. Importance de la biochimie clinique
II. Notion de valeurs de référence
III. Qu’est ce que un dosage et une exploration fonctionnelle
IV. Principaux prélèvements en biochimie
V. Différentes étapes d’une analyse biochimiques
VI. Les principaux tubes
Introduction
La biochimie clinique tire profit des progrès de la connaissance des mécanismes
physiopathologiques des maladies, et des méthodes d’analyse (chimie analytique), pour
identifier et mettre en œuvre des marqueurs biochimiques, qui constituent des indicateurs
biologiques de l’état de santé d’une personne. Un marqueur est un composé, souvent une
protéine, présent dans les fluides biologiques, dont les teneurs chez des groupes homogènes de
patients sont suffisamment éloignées d’un point de vue statistique des teneurs chez un groupe
représentatif de sujets en bonne santé, pour que sa mesure ait un caractère discriminant. Les
marqueurs biochimiques trouvent leur intérêt à tous les niveaux de la chaîne qui va de
l’exposition aux facteurs de risque endogènes et exogènes, à la prise en charge thérapeutique
des patients. Citons quelques exemples. Le dosage de la cotinine (un métabolite de la nicotine)
dans les urines constitue un marqueur d’imprégnation tabagique. Le dosage du glucose sanguin
est un marqueur de diagnostic des diabètes sucrés. Le dosage de l’albumine du sérum,
marqueur nutritionnel le plus utilisé, participe au diagnostic, au pronostic et à la prise en charge
des situations de dénutrition chronique.
I- Importance de la biochimie clinique
La biochimie clinique ou chimie pathologique ou chimie clinique est le domaine de la
biologie médicale qui est en général concerne par l'analyse des molécules contenues dans les
fluides corporels (sang, liquide céphalo-rachidien, urines, etc.) et l'interprétation des résultats
de ces analyses par un clinicien dans le but de caractériser l'origine physiopathologique d'une
maladie.
La biochimie clinique se cantonne à la recherche et au dosage des molécules pouvant être
impliquées dans une pathologie.
Le travail du clinicien spécialisé en biochimie clinique consiste en l'interprétation des résultats
en fonction du reste du bilan biologique et Cette interprétation prend en compte les
caractéristiques physiologiques du patient (âge, sexe, poids...) et les symptômes repérés par le
clinicien dans le but d'aboutir un diagnostic de la pathologie.
La biochimie clinique est donc la réalisation des explorations fonctionnelle par le biais des
dosages.
II- Notion de valeurs de référence
C’est la mesure connue et correcte d’un paramètre. Les valeurs de références visent à décrire
les différentes valeurs que peuvent prendre les résultats des tests de biologie médicale chez les
sujets en bonne santé d’un groupe d’individu défini (age, sexe, ) le terme valeur de référence
est préféré à valeur usuelle, valeur normale ou à norme.
L’étude biochimique des organismes vivant démontre que leurs compositions chimiques est
constante dans certaines limites. Une cellule vivante normale comporte un nombre constant de
molécules de chaque métabolisme : état stationnaire. En effet il appartient au sein même de la
cellule, des mécanismes de régulation chargé de maintenir cette constante, on s apparait
seulement lorsque la cellule doit s adapter a une modification des conditions de l
environnement, EX : une cellule musculaire qui se contracte par voie énergétique modifie son
état et les métabolites chargés de lui fournir
III- Qu’est ce que un dosage et une exploration fonctionnelle
Apprécier un état pathologique en mesurant le degré de modification qualitatif ou surtout
quantité d’un paramètre biochimique, a l’air actuel c’est presque des différences quantitatives
qui permettent de caractériser un état pathologique, sa mise en évidence se fait par un dosage.
Dosage et exploration :
1. Dosage :
Doser une substance consiste a obtenir au moyen d’une méthode adéquate, la concentration de
cette substance par unité de volume ou de masse.
Les sérums, le plasma, l’urine sont les moitiés biologiques les plus faciles à prélever, et dans
lesquelles se retrouve la quasi-totalité des substances biochimiques d’intérêt médical. Les
autres moitiés liquides qui existent dans l’organisme en faible quantité, sont plus difficiles à
étudier, les dosages partant sur les constituants cellulaires sont plus faciles à étudier et
interpréter sauf dans le cas des globules rouge, le prélèvement est toujours limité en quantité.
Cas particulier des enzymes : En raison de leurs présence en faible quantités dans le plasma,
les enzymes sont indirectement dosés en mesurant la quantité de substrat qui disparait par unité
de temps c’est ce qu’on appelle l’activité enzymatique (ou dosage classique en cinétique)
2. Exploration fonctionnelle
Une exploration fonctionnelle consiste à réaliser des dosages biochimiques après avoir modifié
les conditions de vie des sujets, autrement dis cela consiste à pousser l’organisme a réagir afin
de faire apparaitre une éventuelle anomalie.
Exemple : dosage de cortisol avant et après injection de corticotropine (ACTH). Un
doublement du taux de cortisol est une bonne réponse à l'ACTH et signe une bonne réserve
cortico surrénalienne, tandis qu'une réponse moindre signe surtout une corticodépendance pour
certains patients sous cortico-thérapie de longue durée.
IV- Principaux prélèvements en biochimie
Le prélèvement constitue la première étape d’une analyse biochimique, la bonne réalisation
d’un prélèvement conditionne en grande partie la validité d’un résultat.
Un prélèvement est réalisé pour confirmer ou infirmer un diagnostic il est de ce fait précédé
toujours d’un examen clinique, le plus complet possible.
Les plus fréquents :
- sang veineux
- urine
Plus rarement :
- Liquide céphalo-rachidien
- Epanchements et liquides
- sang artériel
- sang capillaire
- selles
- salive, sueur, ...
Méthode de prélèvement
définition
Prélèvement: recueil d’une certaine quantité de matière organique humaine
Prélèvement sanguin :ponction d’une veine pour recueillir un échantillon de sang
veineux à but d’analyse.
CONDITIONS DU PRELEVEMENT:
- Asepsie: salle propre, tenue propre, site de prélèvement nettoyé, matériel stérile
- Récolte des informations: jeun, prise des médicaments, date des dernières règles, etc.
MATERIEL DE PRELEVEMENT:
- coton, Seringues, Aiguilles, Garrot, Gants, Désinfectants, Container pour objets souillés
tranchants, Poubelle, Chaise et/ou lit, Stylo, marqueurs
Accès veineux : liste de priorité
1 Pli du coude
2. Revers de la main
3. Veines du pied
4. Veine sous-clavière
5. Veine et artère fémorales
Mesures pour mieux faire ressortir la Veine
1 Faire incliner le bras vers le bas
2. Masser légèrement les veines en direction distale
3. Faire serrer le poing
4. Tapoter la veine
5. Chaleur (Bain du bras ou coussin chauffant)
Réalisation du prélèvement
IDENTIFICATION DU PATIENT ET DU SPÉCIMEN
Tout spécimen doit correctement être identifié et la demande qui l’accompagne,
Cela signifie que la demande doit contenir l’information pertinente à l’identification du patient
et les analyses demandées
L’identification du patient doit être sans équivoque. Le professionnel effectuant le prélèvement
doit :
demander au patient de décliner son nom;
comparer les renseignements donnés par le patient avec ceux indiqués sur les
documents en sa possession (formulaire d’analyse, carte de l’hôpital, carte d’assurance-
maladie);
résoudre et corriger toute discordance avant de procéder au prélèvement;
entraine une augmentation de potassium
TRANSPORT ET CONSERVATION DES SPÉCIMENS
Il est recommandé de traiter tout spécimen dans un délai de deux heures après le prélèvement.
Traiter signifie que :
l’on procède à l’analyse immédiate
le spécimen soit centrifugé, décanté, réfrigéré ou congelé pour être analysé plus tard -
ou expédié vers un centre de référence pour être analysé
les spécimens doivent être emballés de façon à éviter un bris ou une fuite lors du
transport
Les prélèvements ne doivent pas être soumis à des variations extrêmes de température
les tubes de sang doivent être maintenus dans une position verticale afin d’éviter
l’agitation excessive et l’hémolyse
les spécimens doivent être transportés à une température adéquate pour leur
conservation
SOURCES D’ERREURS DES RESULTATS LIEES A LA PHASE PREANALYTIQUE
PREPARATION DU MALADE
- Médicaments et drogues : iono sanguin
- Café, thé : cortisol
- Alcool : transaminases, triglycérides
- Tabac : prolactinémie
- Etat physiologique ( à jeun) : trigly, glycém
- Exercices physiques : CK, ASAT
CHOIX DES TUBES
Système de codage international ISO 6710 = code couleur
DATE DE PEREMPTION DES TUBES
Les tubes à anticoagulants ont une date de péremption après laquelle l’action des additifs n’est
plus optimale
IDENTIFICATION DES TUBES
Tubes sans nom du patient
Tube sans nom des analyses
Tubes sans date et heure de prélèvement
LE BON ETIQUETAGE:
Nom et prénom
Nom des analyses à réaliser
Date du prélèvement
Heure de prélèvement
POSE DU GARROT
NON
> 60sec / Pression forte
Hémoconcentration
Hémolyse
Perturbations certains paramètres
OUI
< 60 secondes
Pression modérée
a) Effet du garrot sur les résultats de laboratoire :
La pression exercée par celui-ci occasionne le passage d’eau et des électrolytes
plasmatiques vers les espaces extracellulaires, provoquant ainsi une hémoconcentration
d’où l’augmentation des protéines
La concentration des protéines augmentera de 5 à 8% en 3 minutes.
PONCTION VEINEUSE
Essais réitérés de localisation de la veine
Déplacement de l’aiguille dans le tissu
hémolyse
a) Effets de l’hémolyse sur certains tests de laboratoire :
Augmentation des paramètres suivant suite à la libération de ceux-ci par les globules rouges :
potassium (2+), magnésium,;
LDH, AST;
Les globules rouges contiennent :
25 fois plus de potassium que le sérum
150 fois plus de LDH que le sérum
PRELEVEMENT A PARTIR D’UN CATETHER
Hémodilution => données seront plus bas que dans la réalité
Ponction dans une veine perfusée au sérum glucosé => glycémie plus élevée
IL FAUT:
Éliminer les 10 premiers millilitres de sang
RAPPORT DE MELANGES, VOLUME DES ECHANTILLONS ET
HOMOGENEISATION DES TUBES
Respect des zones de tolérance de remplissage dans les tubes à anticoagulant
Recueillir un échantillon suffisant pour les analyses demandées pour le tube sec
Ne pas agiter
Mélanger lentement et soigneusement immédiatement après remplissage du tube à
anticoagulant
V- Différentes étapes d’une analyse biochimiques
•Formulation de la demande d’analyse
•Prélèvement du patient
•Envoi au laboratoire
•Réception et identification
•Réalisation de l’analyse
•Contrôle de qualité
•Recueil des résultats
•Interprétation
•Compte rendu
VI- Les principaux tubes
Le tube à bouchon rouge ou tube sec :
• Ce tube ne contient aucun anticoagulant, le sang va donc pouvoir coaguler dans le
tube (effet recherché). Il contient seulement un activateur de la coagulation
(microparticules de silice). Après centrifugation, nous obtiendrons donc du sérum.
• Ce tube servira notamment pour les analyses suivantes :
- En sérologie, en biochimie (ionogramme, urée, créatinine, cholestérol, ...)
- En allergie, en auto-immunité, en hormonologie, pour les marqueurs tumoraux
Le tube à bouchon jaune :
• Ce tube sert pour les mêmes analyses et possède les mêmes propriétés que le tube à
bouchon rouge, hormis la présence d'un gel dans le tube.
• Après centrifugation, le gel fait interface entre la partie liquide et les cellules, et
empêchera ainsi que les deux se remélangent.
• Tous les autres tubes contiennent un anticoagulant; après centrifugation nous
obtiendrons donc du plasma.
Le tube à bouchon bleu :
• Ce tube contient un anticoagulant : le citrate de sodium.
• Il sera utilisé pour : les bilans de coagulation, le suivi des traitements anti coagulants
...
Le tube à bouchon violet :
• Ce tube contient un anticoagulant : l’EDTA 2,2,2,2 (Ethane-1,2diyldinitrilo) tetraacetic
acid
• Ce tube est utilisé notamment pour : les numérations (globules blancs, globules rouges,
plaquettes), l’hémoglobine glyquée, les groupes sanguins...
Le tube à bouchon gris :
• Ce tube contient un anticoagulant le fluorure de sodium/oxalate de potassium.
• Ce tube est utilisé pour le dosage de la glycémie.
Le tube à bouchon vert :
• Ce tube contient un anticoagulant : l’héparine de lithium.
• Ce tube est utilisé pour quelques analyses particulières : lactates, méthémoglobine, ....
• Il peut aussi être utilisé pour les bilans de chimie courante, il permet de s’affranchir
d’attendre 30 minutes avant d’être centrifugé (Utilisation pour les bilans URGENTS)
Les tubes à bouchon mauve clair : NFS (numération de formule sanguine)
Examen sanguin permettant de renseigner sur l’état de santé général, ces renseignements
concernent le volume des érythrocytes et des lymphocytes
Contient de l’EDTA
• Ces tubes, destinés à la pédiatrie, sont d'une plus petite contenance.
• Ce sont là les principaux tubes utilisés. Il en existe d'autres, utilisés plus rarement pour
des analyses bien spécifiques.
