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Fiche TP

Le TP N° 5 se concentre sur l'extraction et la séparation des pigments chlorophylliens à travers des manipulations expérimentales. Les objectifs incluent l'extraction de la chlorophylle, l'analyse des résultats, et le fractionnement des pigments par chromatographie et solubilité différentielle. Le protocole détaillé décrit les étapes pour réaliser ces manipulations en utilisant divers matériels et solvants organiques.

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Fiche TP

Le TP N° 5 se concentre sur l'extraction et la séparation des pigments chlorophylliens à travers des manipulations expérimentales. Les objectifs incluent l'extraction de la chlorophylle, l'analyse des résultats, et le fractionnement des pigments par chromatographie et solubilité différentielle. Le protocole détaillé décrit les étapes pour réaliser ces manipulations en utilisant divers matériels et solvants organiques.

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TP N° 5 : Extraction et séparation des pigments chlorophylliens

 Objectifs :

 Réaliser l’expérience et savoir manipuler le protocole expérimental.


 Analyser et interpréter les résultats de l’expérience.
 Extraction de la chlorophylle.
 Déterminer le rôle de solvant organique utilisé pour l’extraction de la chlorophylle.
 Séparation des pigments chlorophylliens :
 Fractionnement des pigments chlorophylliens par chromatographie.
 Fractionnement des pigments chlorophylliens par solubilité différentielle.
 Matériels :
 Feuilles chlorophylliennes ;
 Sable ;
 Mortier ;
 Solvant organique (alcool à 90° ou acétone).
 Papier Whatmann
 Tubes à essai
 Ether de pétrole 85%
 Cyclohexane 5%,
 Méthanol

 Protocol expérimental :
La manipulation 1 : Extraction de la chlorophylle
1. Dans un mortier, broyer des feuilles bien vertes avec
un peu de sable à fin d’écraser les cellules.
2. Ajouter peu à peu 10 ml d’un solvant organique
(alcool à 90° ou acètone).
3. Filtrer le contenu du mortier : on obtient une solution de chlorophylle brute.

La manipulation 2 : Fractionnement des pigments chlorophylliens par


chromatographie.
1. Sur une bande de papier à chromatographie (papier Whatmann) déposer à environ 2cm
du bas, une goutte de la solution de chlorophylle brute à l’aide d’un agitateur.
2. Laisser sécher puis superposer au même endroit jusqu’à 8 gouttes de la même solution.
3. La bande de papier est placée dans une éprouvette fermée contenant 5 ml d’un mélange
de solvants organiques (cyclohexane 5%, éther de pétrole 85% acétone 10%).
4. Mettre à l’obscurité pendant 30 à 50 minutes.
5. Le solvant monte par capillarité dans la bande de papier et entraine les différents
pigments solubles dans les solvants organiques. Ils se séparent progressivement en
fonction de leur vitesse de migration.
La manipulation 3 : Fractionnement des pigments chlorophylliens par
solubilité différentielle.
1. Prenez une solution acétonique de chlorophylle brute (Tube à essai 1) à laquelle on
rajoute 5 ml d’éther pétrole. On obtient le résultat représenté dans (Tube à essai 2).
2. Isolez la partie verte foncée du tube 2 et on ajoute du méthanol, on obtient le résultats
représenté dans la tube à essai (T3);

Consigne :
1. Réaliser la manipulation 1, Déterminer le rôle du solvant organique utilisé pour
extraire la chlorophylle.
2. Réaliser la manipulation 2, Décrire en quelques lignes les résultats obtenus.

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