Spectrophotométrie d’absorption
moléculaire dans l’UV – VISIBLE
I. Généralités sur les méthodes spectrales
De nombreuses méthodes analytiques sont fondées sur
les interactions entre la matière (solution, médicament à doser)
et une radiation électromagnétique.
Il peut s’agir de photométrie dans le visible , l’ultraviolet
ou l’infrarouge.
Les propriétés optiques des solutions dépendent des
structures atomiques et moléculaires , les radiations
électromagnétiques sont émises et absorbées sous forme
de corpuscules appelé quanta de lumière ou bien photon .
II. Rappel sur les ondes électromagnétiques
Représentation d’une onde électromagnétique
On définit une onde électromagnétique qu’est une fonction
sinusoïdale par :
=C.T
: Longueur d’onde en : m, µm, nm.
C: Célérité de la lumière dans le vide soit 3108 m/s
T: Période; temps au bout duquel le phénomène se reproduit
identique à lui même
= 1/T=C/
: fréquence ( s-1 ou Hertz « Hz »)
E = h = h C/
E : Energie du photon en Joules (J)
h : constante de Planck = 6.62 . 10-34 J.s
= 1/
: le nombre d’onde ( m -1 ), (cm-1)
Type d’onde longueur d’onde
Rayon x 10-3 - 10 nm
Ultra violet lointain 10 - 200 nm
Ultra violet proche 200 - 400 nm
Visible 400 - 780 nm (750-800)
Infra rouge proche 780 – 2500 nm
Infra rouge moyen 2.5 μm – 50 μm
Infra rouge lointain 50 – 1000 μm
Micro- ondes 0.1 - 100 cm
Ondes radio 1 - 1000 m
III. Energie d’une molécule
La molécule (indépendante ) peut se mouvoir dans l’espace
sans se heurter, il s’agit d’une énergie cinétique due au
divers mouvements : 1 - La translation: mouvement libre de
La particule selon les trois directions de l’espace , cette
énergie n’est pas quantifiée.
2 - La rotation de la molécule autour de
son centre de gravité , cette énergie est quantifiée
3 - La vibration des atomes qui
constituent cette molécule, les uns par rapport aux autres
(détaillées en IR)
4 – L’énergie électronique: fait intervenir
La structure réelle de la molécule , faite d’atome ( noyau +
électrons ) elle correspond à la répartition des électrons et à
ces variations
Ee > Ev > Er
E2
r2 v3
r1
r2 V2
r1
v1
r2
r1
v0
E1
Diagramme énergétique
La spectroscopie dans l’UV et le visible fait intervenir
l’excitation électronique et modifie l’énergie vibrationnelle et
rotationnelle
Dans la spectroscopie UV –visible , il y a modification de la
répartition électronique de la molécule
L’énergie électronique n’est pas continue elle ne peut
prendre que certaines valeurs : E0 , E1 , E2 ……. On dit alors
que l’énergie est discontinue ou quantifiée.
IV . Phénomène d’absorption
E2
h = E1 – E0
E1
E0 : état fondamental
h
Si h ≠ E1 – E0, il n y a pas absorption et la molécule ne
passera pas à l’état énergétique E1 .
Si la radiation incidente possède une énergie E= h qui
correspond à la zone de transition électronique, cette
radiation sera absorbée et la molécule passe à un état
énergétique supérieur, la molécule dans un état excité qui ne
dure pas longtemps et par conséquence elle revient à son
état fondamental en restituant l’énergie absorbée sous forme
de chaleur.
V . Aspect quantitatif
V.1. Intensité lumineuse
- L’intensité de la lumière est le nombre de photons de
même énergie qui arrive par unités de temps dans une
direction bien déterminée, on l’exprime par une intensité
incidente I0
- Il s’agit d’une lumière Monochromatique.
- Une radiation possédant une énergie:
E=hν=h.c/λ
est émise par une source de lumière et traverse un milieu
donné.
Au cours du trajet cette lumière peut subir une absorption
partielle par les molécules absorbantes
Loi de l’absorption : Mécanique quantique
E2
h = E1 – E0
E1
h E0 : état fondamental
solution
I0 constant I Avec I < I0
L
Trajet optique (longueur de la solution)
Cette intensité I0 peut être modifiée si cette radiation traverse
une solution (ou molécule) qui absorbe cette radiation.
V.2 La loi de BEER-LAMBERT
La loi de Beer-Lambert, aussi connue comme la loi de
Beer-Lambert-Bouguer et chez les francophones parfois
même simplement comme la loi de Bouguer, est une relation
empirique reliant l'absorption de la lumière aux propriétés des
milieux dans lesquels elle passe.
La loi de Beer-Lambert établit une proportionnalité entre la
concentration d'une entité chimique en solution, l'absorbance
de celle-ci et la longueur du trajet parcouru par la lumière
dans la solution.
Lorsqu’une lumière d’intensité I0 passe à travers une
solution, une partie de celle ci est absorbée par le(s) soluté(s).
L’intensité de la lumière transmise est donc inférieure à I0 .
On définit l’absorbance de la solution comme :
I0
DO log
I
• On parle aussi de transmittance définit par la relation :
I
T DO log T
I0
• L’absorbance est une valeur positive, sans unité. Elle est
d’autant plus grande que l’intensité transmise est faible.
La relation de Beer-Lambert décrit que, à une longueur
d’onde λ donnée, l’absorbance d’une solution est
proportionnelle à la concentration des espèces de la
solution, et à la longueur du trajet optique (distance sur
laquelle la lumière traverse la solution).
Pour une solution limpide contenant une seule espèce
absorbante :
D.O = log I0/ I = log 1 / T = K .C. l
• DO est l’absorbance ou la densité optique de la solution
pour une longueur d'onde λ ;
• C (en mol.L-1) est la concentration de l’espèce
absorbante ;
• L (en cm) est la longueur du trajet optique ;
D.O = log I0/ I = log 1 / T = K .C. l
K : constante qui dépend de , de la nature de la molécule et
du mode d’expression de C.
Si C en moles/l : K = ε : coefficient d’absorption
(d’extinction) molaire. (moles/l)-1..cm-1
Si C en g/100ml : K = E1%1cm : coefficient d’extinction
spécifique.
(le « E » 1% ) (g/100ml)-1..cm-1
L’intensité incidente I0 doit être constante et très augmentée
au cours de l’absorption
A
I0 B I
C..
La loi de Beer Lambert est linéaire pour 0 < DO ≤ 1 .
La loi de Beer Lambert est additive pour l’absorbance; mais
non pour la transmittance.
I0
D.O log a .Ca . l b .Cb . l c .Cc . l ....
I
V.3. Conditions de validité de la loi de Beer Lambert :
1/ Lumière monochromatique
2/ Faibles concentrations
3/ La solution ne doit être ni fluorescente, ni hétérogène
(bulles, précipité…)
4/ La solution n’est pas le siège d’une réaction
photochimique.
VI. Appareillage
source lumineuse
Elle est constituée par :
Une lampe à décharge au deutérium utilisée dans le
domaine de 190 à 400 nm.
Une lampe à filament de tungstène pour la région allant
de 350 à 800 nm.
Monochromateur
L'élément de base est un prisme, un réseau ou un filtre coloré.
Le rôle du monochromateur est d'isoler le rayonnement sur
lequel on fait la mesure. Il est composé principalement d'un
système dispersif, d'une fente d'entrée et d'une fente de
sortie.
Cuve
Elle contient soit l'échantillon soit la référence. La longueur
de la cuve est définie (1cm de trajet optique). Elle
doit être transparente aux radiations d'étude. Par exemple
en UV, les cuves sont en quartz, elles ne peuvent être ni en
verre ni en plastique.
Détecteur
Cellule photoélectrique qui transforme l’énergie lumineuse en
courant électrique qui est amplifié
VII. Applications:
Détermination de la concentration d’une solution X en
utilisant une courbe d’étalonnage
SPECTRE D’ABSORPTION
caféine
