1) Généralités :
1-1) Aspect d'un spectre de masse
1-2)A quoi sert-il ?
- Composés organiques: Détermination des masses molaires et des formules des
molécules organiques. Il renseigne sur la facilité avec laquelle les liaisons peuvent se
rompre dans la molécule analysée.
- Analyse qualitative et quantitative d'un mélange gazeux même à faible pression. Un
spectrographe de masse peut se placer en sortie d'un chromatographe en phase
gazeuse, comme détecteur.
- Analyse des différents isotopes présents dans un gaz.
2) Comment réalise-t-on un spectre de masse; que signifie-t-il ?
2-1) Première approche en chimie organique :
On soumet le composé moléculaire, par exemple CH4, porté à l'état gazeux, à un
bombardement d'électrons d'énergie moyenne; certaines molécules éjectent un
électron et deviennent des radicaux CH4+. (ion moléculaire ou ion parent). Ces radicaux
peuvent se fragmenter par rupture de certaines liaisons et devenir des cations de masse
inférieure qui à leur tour peuvent se fragmenter ....
Ainsi dans l'exemple du méthane, en plus de l'ion parent on peut obtenir: CH3+; CH2+.;
CH+; C+.
Remarque: Les cations radicalaires sont ceux qui possèdent un nombre impair
d'électrons, les autres en possèdent un nombre pair.
Ces cations sont ensuite accélérés par un champ électrique, puis soumis à un champ
magnétique perpendiculaire à leur direction de propagation qui transforme leur
trajectoire rectiligne en trajectoire circulaire. Les rayons de ces trajectoires dépendent
du rapport m/e (m étant leur masse en unité de masse atomique et e leur charge
électrique exprimée en nombre de charges élémentaires). On peut alors de diverses
façons les trier et les compter et établir un diagramme ("spectre") donnant leur
abondance relative en fonction de leur rapport m/e.
2-2) Analyse d'un spectre simple :
a) On examine le spectre de masse schématisé du méthane:
- en ordonnées, on porte l'abondance relative des ions détectés (100 pour le plus abondant).
- en abscisses, le rapport m/e; comme e vaut 1 (par hypothèse nous ne considérons que les
ions positifs portant une charge élémentaire), ce rapport est égal à m.
- On s'aperçoit que dans l'exemple choisi, le pic correspondant à l'ion le plus abondant (100)
est celui de masse 16 , c'est-à-dire celui de l'ion moléculaire CH4+. ou ion parent (sa masse est
pratiquement celle de la molécule car la masse de l'électron perdu est négligeable).
- Le pic de masse 15 (CH3+.) a une abondance relative d'environ 85.
- Le pic de masse 14 (CH2+.) a une abondance relative d'environ 10.
- Le pic de masse 13 (CH+.) a une abondance relative d'environ 4.
- Le pic de masse 12 (C +.) a une abondance relative d'environ 1.
b) Définition et remarques :
- Définition: Le pic correspondant à l'ion le plus abondant est appelé pic de base . Dans notre
exemple il correspond à l'ion parent, mais ce n'est pas toujours le cas.
- Remarque 1 : La perte d'un atome d'hydrogène fait diminuer la masse d'une unité (la masse
d'un atome d'hydrogène correspond à une unité de masse atomique).
- Remarque 2 : On voit que la rupture d'une liaison C-H est relativement aisée (pour 100 CH4+. on
trouve 85 CH3+).
- Remarque 3 : Un pic existe à droite du pic de l'ion moléculaire CH4+. Il est dû à l'ion moléculaire
CH4+.mais avec l'isotope 13 du carbone (1 neutron de plus que dans le noyau de l'atome de 12C
donc une unité de masse atomique de plus pour l'ion) qui est un isotope stable du carbone,
existant naturellement (1,1%). Statistiquement il y a 1,1% de CH 4 avec 13C, donc 1,1% de
CH4+. avec 13C.
- Remarque 4 : Avec le pentane (C5H12) par exemple on trouve que l'ion parent (masse 72) qui
n'est pas le pic de base a une abondance relative d'environ 10. L'abondance relative de l'ion
C5H12+ contenant du 13C se calcule ainsi:
2-3) Comparaison de spectres :
Observons le spectre de masse du pentane C5H12 (CH3-CH2-CH2-CH2-CH3)
Le pic à m/e = 72 correspond à l'ion parent CH3-CH2-CH2-CH2-CH3.+
Le pic à m/e = 57 correspond à l'ion C4H9+
Le pic à m/e = 43 correspond à l'ion C3H7+ ; c'est le pic de base.
Le pic à m/e = 29 correspond à l'ion C2H5+
Le pic à m/e = 15 correspond à l'ion CH3+
On voit que toutes les liaisons C-C ont été rompues.
On voit autour de ces pics, d'autres pics, résultant de la présence du 13C, ainsi que des pics
résultant de la coupure d'une ou plusieurs liaisons C-H.
Comparaison avec celui du 2-méthylbutane : l'un des isomères du pentane :
On retrouve une fragmentation de la molécule comparable à celle du pentane, mais les
abondances relatives des ions ne sont pas les mêmes. On voit que les ions relativement les plus
abondants sont pour m = 43 et m = 57 ce qui traduit une rupture plus aisée des liaisons C-C
autour du carbone n°2 qui est le carbone de la molécule le plus substitué.
L'ion le plus abondant est (m=43)
Cela n'est pas étonnant dans la mesure où l'on sait qu'un carbocation est d'autant plus stable
qu'il est plus ramifié (carbocation (III) plus stable qu'un carbocation (II) lui-même plus stable
qu'un carbocation (I)).
Comparaison avec celui du 2,2-diméthylpropane: un autre isomère du pentane.
L' abondance de l'ion parent diminue encore ; le pic de base devient celui pour lequel m vaut 57
soit C4H9+ c'est à dire ici
C'est un carbocation tertiaire, le plus stable. Le pic m =43 a disparu et par contre on voit un pic à
m=41 et on continue à voir un pic à m= 29 (C2H5+); ceci traduit des réarrangements complexes
des ions formés avec transferts d'atomes d'hydrogène.
2-4) Cas des composés carbonylés :
Pour les composés carbonylés deux fragmentations se révèlent importantes, ce sont celles qui
se produisent en a du carbone du carbonyle:
Ion parent :
Lors de la scission a1 à partir de l'ion parent il se forme préférentiellement le cation
acylium stabilisé par résonance. :
Lors de la scission a2 il se forme préférentiellement le cation acylium .
Le tableau suivant donne les pics principaux que l'on trouve en faisant les spectres de masse de
trois cétones isomères :
- la pentan-2-one
- la pentan-3-one
- la 3-méthylbutan-2-one
Remarque : Lorsqu'un composé carbonylé à un H placé sur un atome de carbone situé en par
rapport au carbone du groupement carbonyle et si la chaîne permet à cet hydrogène de venir
assez près de l'oxygène de ce même groupement, il se produit un réarrangement dit de Mac
Lafferty qui consiste en une scission de l'ion parent en un nouvel ion moléculaire et une
molécule :
Exemple : Avec la pentan-2-one, par exemple qui satisfait ces conditions, on a :
Ni la pentan-3-one, ni la 3-méthylbutan-2-one ne satisfont ces conditions, le réarrangement
n'a pas lieu.
2-5) Cas des alcools:
- On constate souvent un pic important à 18 unités de moins que l'ion parent; il s'agit de la
déshydratation facile de l'alcool:
- Des scissions en du carbone portant le OH interviennent aussi fréquemment:
Acides carboxyliques :
Les acides (ayant une chaîne saturée) présentent un pic parent en général assez faible
mais visible (très faible pour les chaînes linéaire de moins de 7 carbones) . Il n'y a pas de M -
1, mais plutôt des M - 17 (perte de OH) ou des M- 45 (perte de COOH)
La coupure en α du carbonyle conduit, si la charge est maintenue sur la fonction au
fragment chargé HO-C=O+ de masse 45, et la coupure β qui pour R-CH2-COOH, donne un ion
59 et un autre ion, parfois pic de base, le 60 issu d'un réarrangement de Mac Lafferty si la
longueur de la chaîne R le permet.
Exemples :
Pour les acides aromatiques, on voit un M - 17 notable ainsi qu'un M - 45 issus de la
stabilisation de la charge sur le cycle aromatique..
Les amines :
La règle de l’azote
Pour les composés qui possèdent de l’azote dans leurs structures ils ont tous un ion moléculaire
impair.
Les amines aliphatiques sont caractérisées par une coupure β en avec maintien de la charge
sur l'azote. Pour les coupures sans réarrangement (par retour d'hydrogène), l'ion résultant
est pair :
30 u est le fragment obtenu pour les amines primaires portant une chaîne non
ramifiée sur le carbone portant la fonction.
Exemple
Pour l'heptylamine, le seul ion observé semble être le pic de base à 30u, tous les
autres ions ont une intensité relative inférieure à 5%. Le pic parent à 115 (impair) est à
peine observé, les quelques autres ions sont de la lignée de la chaîne alkyle (27 / 29, 41 /
43) l'ion 44 étant un ion azoté. L'ion 18 est NH4+ issu de deux réarrangements.
Le fragment est déjà plus difficilement attribuable en terme de coupure β; en effet l'ajout
d'un CH2 peut se faire sur l'azote conduisant à une amine secondaire dont la chaîne longue n'est
pas ramifiée sur le carbone portent la fonction, soit R-CH2-N(H)-CH3 ou sur la chaîne alkyle donnant
une amine primaire dont la chaîne est ramifiée par un méthyle sur le carbone portant la
fonction :
3) Schéma de principe d'un spectrographe de masse:
Les cations de masse m de charge électrique e, produits par bombardement des molécules par des
électrons d'énergie voisine de 10 à 12eV, sont accélérés dans un champ électrique produit par deux
plaques métalliques soumises à une différence de potentiel U, puis leur trajectoire est transformée en
cercle par un champ magnétique d'intensité B. La trajectoire de ces cercles a un rayon que l'on peut
calculer par la formule :
On voit que le rayon des cercles dépend du rapport m/e.
Une fenêtre permet de laisser passer et donc de détecter les ions qui se présentent devant elle. On peut
en jouant sur U ou sur B ou sur les deux à la fois, faire passer les ions produits dans la chambre
d'ionisation devant la fenêtre par ordre de masse croissante ou décroissante et donc obtenir le spectre de
masse de la molécule analysée.
Remarque :
Il existe d'autres types de spectrographes, les spectrographes à temps de vol par exemple; la méthode de
dispersion des ions ne fait pas appel à un champ magnétique; on accélère les ions par brèves impulsions
en les soumettant à de brèves différences de potentiel et ils sortent de la chambre d'accélération avec des
vitesses inégales. On montre que la vitesse d'un ion est reliée à sa masse par la relation :
4) Spectromètre de masse MALDI/TOF (Paragraphe inspiré par l'article http://cbm.cnrs-
orleans.fr/la-recherche-2/plateforme-spectrometrie-de-masse/maldi-tof/2-maldi/)
L'acronyme MALDI/TOF correspond à Matrix Assisted Laser Desorption Ionisation/Time Of
Flight.
La désorption/ionisation laser assistée par matrice est une technique d'ionisation douce utilisée
en spectrométrie de masse pour analyser de grosses molécules non volatiles ou instables
thermiquement.
Elle s'adresse à des biomolécules (ADN, protéines, peptides, sucres) ainsi qu'à de grandes
molécules organiques synthétiques (polymères et autres macromolécules).
Une matrice et un échantillon sont disposés sur une cible. Un faisceau laser pulsé dont la
longueur d'onde est située dans la bande d'absorption de la matrice et en dehors de celle de
l'échantillon, vient évaporer la matrice, entraînant avec elle l'échantillon en phase gazeuse
(phénomène de désorption). Les molécules ionisées de la matrice (généralement acide)
transfèrent un proton aux molécules de l'échantillon.
Les ions sont ensuite analysés avec un spectromètre à temps de vol (TOF MS) : par des
différences de potentiels appliquées sur des lentilles, les molécules ionisées sont accélérées puis
transférées dans l'analyseur TOF. Cet analyseur va permettre la séparation des molécules
ionisées qui dépendra de leur rapport masse sur charge (m/e).
La matrice joue 3 rôles :
- Elle réduit les forces intermoléculaires et favorise la séparation des molécules
- Elle absorbe l'énergie du faisceau laser, ce qui permet de protéger les molécules cibles.
- Elle favorise l'ionisation des molécules à analyser en induisant des transferts de protons.
Les principales matrices:
Acide α-cyano-4- Acide sinapinique Acide 2,5-dihydroxybenzoïque Acide 3-hydroxypicolinique
hydroxycinnamique
Pour les peptides et les Pour les protéines et les Pour les oligosaccharides, les Pour les oligonucléotides
protéines. polymères. glycopeptides, les
glycoprotéines et les
polymères.
Ce spectromètre offre plusieurs avantages dont la haute résolution, ce qui permet d'accéder à
une mesure très exacte de la masse de la molécule (erreur < 5ppm en étalonnage interne pour
une molécule de 10000 Da) et donc facilite son identification.
C'est une technique d'analyse réservée à des molécules préalablement purifiées car
contrairement aux autres technologies elle n'est pas couplée à une méthode séparative.
Principe de fonctionnement de Maldi(Extrait d'un article
publié par le Centre de biophysique moléculaire du CNRS)
