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BIOLOGIE CELLULAIRE 1

Licence de Sciences, Technologies et Santé

Mention Sciences de la Vie et de la Terre
Semestre 1 TREC 5
Semestre 3 TREC 7

PACES_0
Semestre 1

FASCICULE D’EXERCICES

Yvon CAVALOC
[email protected]
 lOMoARcPSD|13316797

TD Biologie Cellulaire 1

Ce fascicule d’exercices sera votre compagnon pour les Travaux Dirigés (TD) de Biologie Cellulaire 1 tout au long
de ce semestre. Merci de l’apporter avec vous le jour de votre TD.
Les TD viennent en appui aux Cours Magistraux (CM) et permettent de vous amener à vous interroger sur les
grandes fonctions cellulaires tout en affinant vos connaissances.
Ces TD ne sont pas uniquement une mise en application du cours, mais également le lieu où certaines notions
peuvent être approfondies.

Il est très important pour la suite de votre cursus que vous assimiliez bien la structure de la cellule et de ses
constituants, ainsi que les relations qui unissent les éléments moléculaires que vous aurez l’occasion de voir en
détail en biochimie.

Les TD sont obligatoires et doivent être préparés avant la séance. Nous n’excluons pas la possibilité d’un contrôle
noté en début de séance pour nous assurer que le travail a bien été effectué en amont.

Beaucoup des exercices traités sont des exercices extraits des évaluations des années précédentes. Il y a des
exercices de divers types :

- Questions de cours : Ces questions permettent de vérifier votre niveau de connaissance du cours
- QCM : Les Questions à Choix Multiples s’intéressent à des aspects précis du cours. Elles permettent de
mesurer si vous avez une connaissance suffisamment précise et claire des notions essentielles. Il n’y a
pas de piège dans les QCM, mais un bon niveau de compréhension est nécessaire pour pouvoir s’en
sortir.
- Exercices de réflexion : Pour aborder ces exercices, vous devrez montrer que vous maîtrisez les
mécanismes cellulaires. Il s’agit de faire des analyses de cas précis, en répondant clairement et de
manière concise aux questions posées.

Yvon Cavaloc
[email protected]

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TD Biologie Cellulaire 1

Première partie – Généralités sur la cellule - Membrane

Question 1
Annoter le schéma ci-dessous, représentant un fibroblaste en déplacement

Quelle est la taille de cette cellule ?

Quel est l’agrandissement appliqué ?

Question 2

Observez cette image d’une cellule et entourez les lettres correspondant aux réponses justes :

1/ Concernant les éléments 3

A. Ils sont composés de 4 types de fibres : les microfilaments, les filaments intermédiaires, les microtubules
et les filaments de kératine
B. Certaines fibres de l’élément 3 sont très stables et d’autres sont beaucoup plus dynamiques
C. Toutes les fibres de l’élément 3 prennent leur origine au niveau de l’élément 2
D. Les fibres les plus épaisses sont les fibres de kératine

2/ Concernant les organites cellulaires

A. L’élément 8 contient l’intégralité de l’ADN cellulaire
B. L’élément 10 est impliqué dans la maturation et le tri de protéines

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TD Biologie Cellulaire 1

C. Les éléments 11 et 12 sont en continuité et ont la même fonction

D. L’élément 9 peut être libre dans le cytosol ou associé aux éléments 11 et 12
3/ Généralités sur la cellule
A. L’élément 1 est bordé par une double membrane
B. L’élément 1 est le producteur majeur d’énergie pour la cellule
C. L’élément 2 se duplique avant la mitose
D. L’élément 4 peut être un lysosome ou un peroxysome
4/ Concernant l’élément 14
A. Tous les lipides qui composent l’élément 14 sont construits à partir d’un alcool commun, le glycérol
B. Le cholestérol est présent dans l’élément 14 et est un composé très abondant des membranes
procaryotes
C. Tous les éléments 14 sont composés de 2 feuillets présentant exactement la même composition
moléculaire
D. Les lipides qui composent l’élément 14 sont amphipathiques

Question 3
Observez cette image d’une cellule et répondez aux questions posées :

Identifiez, en donnant le nom et le numéro correspondant, l’organite ou l’élément cellulaire défini ci-dessous :

Définition Nom N°

Organite responsable de la production d’énergie, sous forme

d’ATP, dans la cellule

Composé d’un empilement de saccules, cet organite est impliqué

dans la maturation, le tri et la concentration des protéines
sécrétées

Cet organite est aussi appelé centre organisateur des

microtubules. Il est le point d’origine de tous les microtubules
cellulaires.

Elément cellulaire dépourvu de membrane impliqué dans

l’assemblage et le stockage des sous unités des ribosomes.

Réseau tubulaire, dépourvu de ribosomes impliqué dans la

biosynthèse des phospholipides membranaires.

Vésicule contenant des hydrolases acides nécessaire à la

digestion des produits de l’endocytose.

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TD Biologie Cellulaire 1

Question 4 - Exercice - Cytométrie de flux (trieur compteur de cellules)

Le cisplatine est un sel de platine utilisé pour lutter contre la prolifération tumorale. Afin d’étudier le mode d’action
de ce complexe, on a traité des cellules cancéreuses en culture avec des quantités croissantes de cisplatine. Puis,
on a incubé ces cellules avec de l’annexine V fluorescente et de l’iodure de propidium. L’annexine V est une
protéine qui se fixe sur les phosphatidyl sérines membranaires lorsque les cellules débutent une réaction
d’apoptose (l’apoptose est le nom donné à une forme de suicide de la cellule). En effet, les phosphatidyl sérines
habituellement sur la face interne de la membrane subissent un retournement au début de l’apoptose et ont ainsi
accessibles sur la face externe. L’iodure de propidium est une molécule également fluorescente qui se fixe sur
l’ADN lorsqu’il est accessible, ce qui est le cas lors des phases terminales de l’apoptose.
Les cellules ainsi marquées sont analysées par cytométrie de flux grâce à un trieur-compteur de cellules et les
résultats sont donnés ci-dessous. L’axe des ordonnées donne la quantité de fluorescence mesurée pour l’iodure
de propidium et l’axe des abscisses donne la mesure de la fluorescence liée à l’annexine V.

1/ D’après ces résultats :

A. Chaque point de ce graphique représente une cellule
B. En absence de cisplatine, les cellules sont fortement marquées par l’iodure de propidium et l’annexine V
C. Le cisplatine est une molécule fluorescente
D. Le traitement par le cisplatine augmente la fixation d’annexine V sur les cellules traitées
E. Le cisplatine entraine la mort des cellules cancéreuses par apoptose

2/ La cytométrie en flux
A. Est une technique utilisant de la radioactivité
B. Est une technique utilisant la fluorescence
C. Utilise un ou plusieurs lasers
D. Permet notamment de détecter des molécules présentes à la surface des cellules grâce à des anticorps
E. Permet de compter le nombre de cellules

Question 5
Identifiez les éléments de 1 à 12

4
3

5
6

9
10
11 [ 1

12 [
2

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TD Biologie Cellulaire 1

Quels milieux ont permis d’obtenir les 3 images A, B et C respectivement ? Justifiez votre réponse.

Question 6 - QCM
1/ Les lipides membranaires
A. Tous les phospholipides membranaires sont construits à partir d’un alcool commun : le glycérol
B. Deux acides gras seulement estérifient deux fonctions alcool du glycérol dans les glycérophospholipides
C. Les propriétés de charge électrique des phospholipides dépendent de la nature du groupement qui estérifie
l’acide phosphatidique.
D. Le cholestérol est un composé lipidique abondant des membranes bactériennes
E. Les phospholipides membranaires sont synthétisés sur la face luminale du réticulum endoplasmique lisse

2/ Chez les eucaryotes, la membrane plasmique comporte

A. 2 couches (ou hémimembranes) ayant exactement la même composition moléculaire
B. Autant de molécules de cholestérol que de molécules de phospholipides
C. Des protéines qui sont toutes transmembranaires
D. Un glycocalyx du côté cytoplasmique qui permet des relations étroites avec les éléments du cytosquelette
E. Plus de molécules de lipides que de molécules de protéines
3/ Les transports transmembranaires
A. Les transports passifs s’effectuent toujours dans le sens du gradient électrochimique
B. Le transport facilité est un mécanisme saturable
C. Les canaux ioniques permettent aux ions de traverser les membranes contre leur gradient électrochimique
D. Les transporteurs actifs secondaires utilisent l’ATP comme source d’énergie
E. La pompe Na/K fait entrer 3 ions Na+ dans la cellule et expulse 2 ions K+
4/ La diffusion facilitée du glucose à travers la membrane des hépatocytes
A. S’effectue contre le gradient de concentration
B. Est spécifique
C. Nécessite de l’énergie métabolique sous forme d'ATP
D. Présente un phénomène de saturation
E. Cesse dès que l’égalité de concentration est atteinte de part et d’autre de la membrane
5/ Les protéines membranaires
A. Sont toujours transmembranaires
B. Peuvent-être plusieurs fois transmembranaires
C. Peuvent-être fixées à la membrane par un ancrage lipidique
D. Sont fortement glycosylées du côté intracellulaire
E. Assurent le transport sélectif à travers la membrane
6/ Parmi les molécules suivantes, quelles sont celles qui sont des composants normaux des membranes
cellulaires eucaryotes
A. Protéines
B. Glycogène
C. Phospholipides
D. Cholestérol
E. ARN de transfert
7/ Les membranes plasmiques
A. Sont composées par un assemblage de lipides amphiphiles et de protéines
B. Sont, par leur composition essentiellement lipidique, des barrières étanches pour les molécules d’eau (en
absence de protéines)
C. Tous les lipides membranaires présentent une distribution symétrique au sein de la membrane
D. Le cholestérol est présent principalement sur la face externe de la membrane plasmique
E. Les protéines membranaires ne peuvent pas se retourner au sein de la membrane plasmique
8/ Concernant la membrane plasmique
A. Le contenu protéique des membranes plasmiques chez les mammifères est très conservé et proche de
25% du poids sec
B. Les glycérophospholipides sont des lipides membranaires qui portent des groupements glucidiques
C. Dans un milieu aqueux, les phospholipides s’arrangent naturellement en bicouche, les groupements
hydrophiles tournés vers l’extérieur

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TD Biologie Cellulaire 1

D. Les perméases sont des protéines membranaires transportant les molécules polaires du milieu où elles
sont le moins concentrées vers le milieu où elles sont le plus concentrées
E. La membrane plasmique joue un rôle de barrière sélective grâce à ses nombreuses protéines assurant un
transport orienté et sélectif

9/ FRAP

Deux lignées cellulaires (A et B - figure ci-contre) ont été rendues

fluorescentes. Elle ont subi une décoloration au laser sur une région de
la membrane (carré noir sur la 2e colonne), puis une photo de ces mêmes
cellules a été prise 5 minutes après l’arrêt du laser (3e colonne).

D’après ces résultats, on peut dire que:

La membrane de la cellule A est moins fluide que celle de la cellule B

Cette expérience met en évidence la fluidité membranaire
Le marquage fluorescent peut être réalisé par un anticorps qui reconnait des protéines membranaires
Le laser a modifié la fluidité de la membrane de la cellule B
Aucune de ces réponses n’est correcte.

Question 7
On réalise, au temps tO, un marquage fluorescent des protéines membranaires d’une cellule.
1. Expliquez comment on effectue ce type de marquage.

Expérience 1
Au temps t1, on décolore rapidement au laser une zone de la cellule, et on mesure dans cette même zone la fluorescence
émise.
Expérience 2
A partir du temps t1, on applique en continu un laser pour décolorer une région de la cellule. On mesure la fluorescence
émise dans une région adjacente.
Expérience 3
A partir d’un temps t1, on applique en continu un laser pour décolorer une région de la cellule. On mesure la fluorescence
émise dans cette même région.
2. Comment s’appelle ce type d’expérience ?
3. Donnez l’aspect des courbes mettant en évidence l’évolution de l’émission de fluorescence au cours du temps.
4. Que pouvez-vous en déduire ?
5. Que dire de l’expérience 3 ?

Question 8
Le thymus est un organe important pour la maturation des lymphocytes T. Le thymus d'une souris normale de 4 semaines
est prélevé, dilacéré et les cellules ainsi récupérées sont lavées. Ces cellules sont incubées avec deux anticorps
reconnaissant chacun une protéine transmembranaire exprimée par les lymphocytes T (1) un anticorps anti-CD4 couplé à
un fluorochrome, la phycoérythrine (PE), et (2) un anticorps anti-CD8 couplé à un autre fluorochrome, l'allophycocyanine
(APC). L'analyse par cytométrie de flux des cellules ainsi marquées est représentée sur la figure suivante :

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TD Biologie Cellulaire 1

6 67

couplé à l’allophycocyanine
Anti-CD8
17

Anti-CD4
couplé à la phycoérythrine
1. Rappeler le principe de la cytométrie de flux
2. Sur la figure ci-dessus, à quoi correspondent :
a. Chaque point
b. Les lignes horizontale et verticale
c. Les nombres 6, 67 et 17
3. Que pourrions-nous conclure, d’après ce graphe, sur les lymphocytes T présents dans le thymus de la souris de 4
semaines ?

Question 9
On étudie in vitro l'entrée d'un acide aminé, la leucine, dans un œuf d'oursin après fécondation. Dans toutes les expériences,
le milieu extracellulaire reste isotonique et la leucine est électriquement neutre. Le milieu extra cellulaire dans lequel est
plongé l’œuf contient du NaCI 440 mM, du KCI 12 mM, et du MgCl2 10 mM. On ajoute à ce milieu de la leucine. On mesure
simultanément un flux entrant de leucine et une brève dépolarisation de la membrane (- 80 mV à - 70 mV).
Comment expliquez-vous cette dépolarisation ?
Proposez un mécanisme d'entrée de la leucine.

Question 10
On mesure la perméabilité de la membrane d'une fibre musculaire au déoxyglucose en mesurant le flux entrant de cette
molécule (le déoxyglucose est une molécule qui est transportée comme le glucose, mais qui n’est pas métabolisée).
Si on effectue la même mesure, sur une bicouche lipidique artificielle composée exclusivement de lipides, dans les mêmes
conditions expérimentales, on s'aperçoit que la perméabilité est 100 fois inférieure.
Comment pouvez-vous expliquer cette différence?

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TD Biologie Cellulaire 1

Question 11
Un segment d’intestin retourné est maintenu en survie in vitro dans un milieu nutri-
tif. Le retournement de la paroi permet de mettre la face séreuse (S), normalement
en relation avec le sang circulant, vers l’intérieur et la face muqueuse (M) orientée
vers l’extérieur. Les 2 extrémités du segment d’intestin sont ligaturées pour séparer
les 2 compartiments (S) et (M). La préparation est placée dans un milieu correcte-
ment oxygéné. Dans le compartiment (S) (interne), la concentration en NaCl est
fixée à 150 mM et la concentration en glucose à 0,9 g/L durant toute la durée de
l’expérience, sauf lorsque des concentrations différentes sont appliquées.

En réalisant diverses expériences, on a pu montrer :

1. Si en (M), [Glucose] = 3 g/L et [NaCl] = 0 mM, aucun flux de glucose n’est observé.
2. Si la concentration en NaCl augmente, aucun flux de glucose n’est observé de (M) vers (S) tant que, en (M), [NaCl]
< 9,5 mM
3. Lorsque l’on remplace le NaCl par du chlorure de choline, aucun flux de glucose n’est observé, même avec des
concentrations élevées en chlorure de choline
4. On fixe en (M), [NaCl] = 20 mM. On observe un flux de glucose de (M) vers (S). Si on supprime l’oxygénation, on
constate que le flux de glucose diminue considérablement
5. Lorsque l’oxygénation est rétablie, le transport de glucose reprend.

D’après ces résultats, on peut dire que:

L’absorption du glucose nécessite du Na +
L’absorption du glucose nécessite du Cl
Ces expériences montrent que le transport du glucose est un transport secondairement actif
Le transport du glucose se fait grâce à une pompe
la concentration en NaCl dans les cellules de la muqueuse est inférieure à 9,5 mM
Aucune de ces réponses n’est correcte.

Question 12 (Session 2 - 2013) (d’après Koivisto et al. (1991) J. Biol. Chem.)

Le glucose est une source importante d’apport énergétique pour la cellule. L’absorption de ce sucre par la cellule
s’effectue par l’intermédiaire de transporteurs transmembranaires, parmi lesquels les transporteurs GLUT sont les
plus étudiés. En 1991, une équipe de chercheurs s’est intéressé au rôle de l’insuline, hormone hypoglycémiante,
dans l’absorption cellulaire du glucose.
En travaillant sur des cellules musculaires en culture, ils ont mesuré la présence du transporteur GLUT-4, protéine
de 45 kDa, sur les membranes plasmiques (PM) et les membranes intracellulaires (IM) de cellules ayant subi
différents traitements :
1 G = cellules incubées en présence de glucose (25 mM)
2 GI = cellules incubées en présence de glucose (25 mM) et d’insuline
3 X = incubées en absence de glucose (xylose à 25 mM)
Rq : Le xylose n’utilise pas le transporteur GLUT-4 pour pénétrer dans la cellule.

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TD Biologie Cellulaire 1

Après 24 heures d’incubation, les membranes sont isolées, les protéines membranaires sont extraites, séparées
par électrophorèse et la protéine GLUT-4 est visualisée par western blot. On obtient les résultats suivants :

À partir de ces observations et de vos connaissances :

A. Les protéines GLUT ont pu être détachées des membranes en effectuant un traitement salin
B. Une incubation avec le glucose diminue fortement la présence de GLUT-4 sur les membranes plasmiques
C. GLUT-4 n’est présente que sur les membranes plasmiques
D. L’insuline augmente l’expression membranaire de GLUT-4
E. L’insuline augmente l’absorption cellulaire du glucose

Question 13 (1e session 2011)

Des globules rouges humains ont subi une hémolyse par choc osmotique. Dans les conditions utilisées, les membranes
plasmiques se sont refermées en vésicules homogènes appelées fantômes, de taille comparable à celle de l'hématie.
Après centrifugation, un culot de ces fantômes est récupéré puis lavé de nombreuses fois.
1/ Dans quel type de milieu a-t-on placé les hématies pour obtenir les fantômes (justifiez)?
Afin de déterminer la masse moléculaire des protéines de la membrane plasmique des hématies, ainsi que leur position vis-
à-vis de la bicouche lipidique, la suspension de fantômes est partagée en 2 lots dont l'un subit un traitement salin à forte
concentration ionique et l'autre non (lot témoin). Dans les 2 cas les fantômes sont ouverts par rupture des membranes. Les
2 lots sont centrifugés afin de sédimenter les structures membranaires. Les surnageants (S) et les culots (C) sont traités
par un détergent, le dodécyl sulfate de sodium (SDS) puis subissent une électrophorèse en gel de polyacrylamide contenant
du SDS. D'après vos connaissances :
2/ Nommez les 2 catégories de protéines membranaires définies selon leur localisation par rapport à la bicouche lipidique?
3/ Quel est l’effet d'un traitement salin sur la structure membranaire ?
4/ Quel est l’effet du SDS sur la membrane ?
Après l’électrophorèse, on obtient l’image suivante :

5/ Que pouvez-vous dire des protéines correspondant aux bandes 1 à 6 (justifiez) ?

On soumet la protéine de la bande 3 à différentes enzymes. Les produits de réactions sont analysés par électrophorèse. On
obtient les résultats suivants :

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TD Biologie Cellulaire 1

6/ Que pouvez-vous dire de cette protéine (justifiez) ?

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TD Biologie Cellulaire 1

Deuxième partie – Cytosquelette, jonctions cellulaires

QUESTIONS DE COURS

Question 1 (2e Session 2009)

De manière simple, vous présenterez, en vous aidant de schéma(s), les mécanismes permettant à la cellule de se déplacer
sur la matrice extracellulaire. Vous décrirez notamment l’implication du cytosquelette et des jonctions cellulaires.
Cf cours

Question 2 (Contrôle Continu 2007)

Complétez la légende

Microvillosité

Jonction serrée

Ceinture d’adhérence Filaments intermédiaires

Desmosome ponctuel

Jonction lacunaire

Lame basale
Contact focal
Celui-ci est un contact focal, car il n’est pas
Question 3 en contact avec les filaments intermédiaires
Complétez le tableau suivant

Protéine transmembranaire Cytosquelette associé

Jonction serrée Occludine / Claudine

Desmosome Cadhérine Filaments Intermédiaires

Hémi-desmosome Intégrine Filaments Intermédiaires

Ceinture d’adhérence Cadhérine Microfilaments

Jonction lacunaire Connexine

Contact focal Intégrine Microfilaments

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TD Biologie Cellulaire 1

Question 4
Identifiez les éléments du cytosquelette représentés sur les 3 schémas suivants. Vous en donnerez :
a) Le nom
b) Le nom du monomère protéique qui les compose
c) Le diamètre
d) Les caractéristiques dynamiques
e) La localisation cellulaire
f) Les fonctions principales

A B C
NOM Filaments intermédiaires Microtubules Microfilaments
Monomère protéique Kératine (vimentine,
desmine,prot des Tubuline Actine
neurofilaments…)
Diamètre 10 – 11 nm 25 nm 7-9 nm
Dynamique Dynamique Dynamique
Pas dynamique (Polymérisation / (Polymérisation /
Dépolymérisation) Dépolymérisation
Localisation Dans tout le cytoplasme.
Réseau dense autour du Origine dans le Réseau sous la membrane
noyau. centrosome plasmique (cortex
Fixé à la membrane Dans tout le cytoplasme cellulaire)
plasmique (desmosomes)
Fonctions principales Rail de communication Morphogénèse cellulaire
Charpente de la cellule pour les vésicules Motilié cellulaire
Résistance mécanique Organisation des organites Rail de communication
Cohésion des tissus Fuseau mitotique pour les vésicules sous-
épithéliaux Fonctionnement des cils et membranaires
flagelles Contractions cellulaires

Question 5
a- Sur le schéma suivant, identifiez les structures numérotées de 1 à 4

Jonctions serrées

Ceinture d’adhérence

Desmosome ponctuel

Jonction lacunaire

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TD Biologie Cellulaire 1

b- Identifiez les protéines notées par une lettre

b c d
a e

a- Occludine / claudine
b- Desmoplakine / plakoglobine
c- Cadhérine
d- Kératine
e- Connexine

Question 6 - QCM
QCM 1 - A propos du cytosquelette 1, 2 et 3
A Les fibres 1 sont des microtubules microfilaments
B Les fibres 2 sont des microfilaments
C Les fibres 3 présentent les caractéristiques de résistance mécanique les plus
élevées filaments intermédiaires
D Les fibres 3 sont très dynamiques, ce qui permet à la cellule de se déplacer sur
un support solide
E Les fibres 2 sont présentes dans tout le cytosol des cellules cortex cellulaire
QCM 2 - A propos des jonctions A, B et C
A Les jonctions A s’établissent grâce aux occludines
B Les jonctions B et C utilisent des intégrines
C Les jonctions C forment une ceinture qui entoure les cellules épithéliales
D Les jonctions B délimitent les domaines apicaux et baso-latéraux des cellules épithéliales
E Les jonctions C permettent les liaisons entre la cellule et la matrice extracellulaire
QCM 3 - Les jonctions GAP
A Permettent d’ancrer deux cellules adjacentes par l’intermédiaire de cadhérines
B Forment des canaux qui laissent passer les petites molécules
C Empêchent le passage de molécules extracellulaires de la zone apicale à la zone baso-latérale
D Permettent le passage d’ADN d’une cellule à l’autre, favorisant ainsi le brassage génétique
E Sont localisées notamment sur les faces latérales des cellules épithéliales
QCM 4 - Les filaments intermédiaires
A Sont issus de la polymérisation de protéines globulaires
B Sont issus de monomères variables en fonction des cellules concernées
C Sont situés dans le cytoplasme des cellules eucaryotes
D De type lamine ont un assemblage régulé par phosphorylation
E Ont un rôle essentiellement, mécanique
QCM 5 - Les microfilaments
A Sont formés par de l'actine polymérisée
B Portent des protéines associées nécessaires à l'association et au déplacement des microfilaments
C Sont présents dans toutes les cellules eucaryotes
D Présentent des extrémités ayant des propriétés de polymérisation différentes
E Sont, par leur dynamique, à l'origine des mouvements de la surface cellulaire

QCM 6 - Les microtubules

A Sont issus de la polymérisation de dimères de tubuline
B Ne peuvent prendre naissance qu'en présence d'un centre organisateur
C N'existent que dans les cellules eucaryotes
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TD Biologie Cellulaire 1

D Sont constitués de 13 protofilaments

E Présentent in vivo une instabilité dynamique à leur extrémité (-) non à cause du centrosome qui les
protège
QCM 7 - Le cytosquelette
A Le cytosquelette est composé de fibres protéiques, parmi lesquelles on trouve la tubuline, la kératine, la
fibronectine et l’actine pas la fibronectine qui est une protéine de la matrice extracellulaire
B Les microtubules sont les fibres les plus épaisses et les plus résistantes
C La myosine est une protéine qui interagit avec l’actine
D La tubuline fixe le GTP tandis que l’actine fixe l’ATP
E Une kinésine est une protéine qui se déplace le long des microtubules et qui transporte notamment les
vésicules d’endocytose L’endocytose se faisant de l’extérieur vers l’intérieur de la cellule les vésicules
partent de l’extrémité + et vont vers l’extrémité -. Ce sont donc les dynéines qui font se transport.
QCM 8 - Le cytosquelette
A Les cils et flagelles sont constitués de 9 triplets de microtubules 9 doublets
B Les mouvements des cils vibratiles sont générés par la myosine ce sont des microtubules, donc dynéine
C Tous les microtubules sont positionnés avec leur pôle (+) dans le centrosome pôle -
D Les protéines motrices associées au cytosquelette peuvent hydrolyser l’ATP
E Les filaments intermédiaires sont les fibres les plus résistantes à la torsion

Question 7 (1e Session 2009)

On dispose d’un épithélium intestinal de porc sur lequel on dépose de l’hydroxyde de lanthane, soit du côté de la lumière
intestinale (photo 1), soit du côté basolatéral (photo 2). L’hydroxyde de lanthane est une substance opaque aux électrons.
Deux cellules (1 et 2) composant cet épithélium sont ensuite visualisées par microscopie électronique à transmission. Les
résultats sont présentés dans la figure ci-dessous.

Questions :
a) Nommer la structure identifiée par « A » Ce sont les microvillosités
b) Quel est l’élément indiqué par une flèche ? Justifier votre réponse
Ce sont les jonctions serrées. En effet, elles bloquent le passage de l’hydroxyde de lantane du pôle apical vers le
pôle basolatéral (Photo 1) ou du pôle basolatéral vers le pôle apical (photo 2). Ces jonctions forment donc des
points d’étanchéité de l’épithélium en bloquant les passages paracellulaires (entre les cellules 1 et 2).
c) Quels sont ses rôles et sa composition moléculaire ?
- Jonction cellulaire
- Etanchéité des épithéliums
- Polarisation des cellules
d) Quel est l’ordre de grandeur du grossissement effectué sur la photo 1 ?
X 45 000 environ

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TD Biologie Cellulaire 1

Question 8
Les embryons de souris subissent au stade 8 cellules un processus appelé compaction. Les cellules d’un embryon compacté
sont moins arrondies et possèdent entre elles des surfaces de contact plus importantes et des jonctions intercellulaires
s’établissent.

On veut savoir si des jonctions communicantes sont présentes avant et/ou après ce changement.
On injecte deux substances marqueurs, la peroxydase du raifort (HRP), une enzyme de 40000 Daltons, ou la fluorescéine,
molécule fluorescente de 330 Daltons dans 2 cellules voisines d’un embryon au stade 8 cellules, avant (A) ou après (B) la
compaction.

Le protocole expérimental et les résultats sont montrés sur le schéma suivant :

Les résultats permettent-ils de répondre à la question posée ? Expliquez votre raisonnement.

Avant compaction :
On injecte la HRP dans une cellule, et on la détecte dans cette cellule.
On injecte la fluorescéine dans une cellule et on la détecte dans cette cellule
Donc, rien n’a diffusé.
Après compaction :
On injecte la HRP dans une cellule, et on la détecte dans cette cellule.
On injecte la fluorescéine dans une cellule et on la détecte dans cette cellule
Donc, la petite molécule (fluorescéine) a diffusé et pas la grosse (HRP). Quelque chose qui autorise la diffusion des petites
molécules est donc apparu après la compaction. Ceci est parfaitement compatible avec l’existence de jonctions GAP qui
laisse passer des molécules de PM inférieur à 6000 Da.

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TD Biologie Cellulaire 1

Question 9 (Session 2 - 2013) (d’après Hartlieb et al. (2012) PLoS One)

Les desmogléines sont des cadhérines qui entrent dans la composition des
desmosomes. Il existe plusieurs gènes codant ces protéines. Dans cette étude, on
cherche à savoir si certaines cadhérines sont plus importantes que d’autres dans
les processus d’adhésion cellulaire. Notamment, on s’attachera à estimer les
fonctions respectives de la desmogléine-2 (Dsg2) et la desmogléine-3 (Dsg3).
On utilise des anticorps dirigés contre les protéines Dsg2 (Dsg2 mAb) et Dsg3
(AK23) dans des cultures cellulaires. Dans ces cultures, les cellules adhèrent les
unes aux autres en formant une monocouche. Ces anticorps se fixent sur leur cible
et les neutralisent, bloquant ainsi l’adhésion cellulaire. On mesure ensuite le
pourcentage de cellules qui se décrochent les unes des autres consécutivement à
un stress mécanique. Les résultats sont donnés dans la figure ci-contre. Les
anticorps additionnés sont indiqués en bas et l’axe des ordonnées indique le
pourcentage de cellules non adhérentes.

L’anticorps contre la Dsg2 n’a pas d’effet sur l’adhésion des cellules. La Dsg2 n’est
sans doute pas mobilisée dans ces cellules.
Par contre l’anticorps contre la Dsg3 (AK23) induit une désolidarisation cellulaire. La Dsg3 est certainement
fortement impliquée dans les jonctions de ces cellules.
D’après les résultats de cette expérience et vos connaissances :
A. Les cadhérines sont des protéines transmembranaires
B. L’anticorps AK23 induit la rupture de jonctions serrées Pas de cadhérines dans les jonctions serrées
C. La Dsg3 est plus importante que la Dsg2 pour les jonctions cellulaires mises en place dans notre culture
cellulaire
D. La suppression du gène Dsg2 n’aurait pas d’incidence sur les jonctions entre les cellules utilisées dans
cette expérience
E. Les desmogléines nécessitent du calcium pour se lier les unes aux autres Comme toutes les cadhérines

Question 10 (Session 1 - 2014) (d’après Cahu et al. (2008) PLoS One, 3, e3938)
Lorsque la cellule entre en mitose, elle doit mettre en place un fuseau de division aussi appelé fuseau mitotique.
Pour se faire, le centrosome de la cellule est dupliqué durant la phase S du cycle cellulaire et un réseau de
microtubules s’établit entre les deux centrosomes qui constitueront les pôles du fuseau mitotique. Normalement
bipolaire, le fuseau de division peut être monopolaire par mauvaise séparation des centrosomes (figure 1), mais
alors, la séparation des chromatides ne se fera pas correctement.

Des protéines accessoires participent à la mise en place de ce fuseau mitotique, et parmi elles, la protéine Eg5
semble jouer un rôle important. Afin de mieux comprendre sa fonction, une équipe de chercheurs a dans un
premier temps recherché si des modifications post-traductionnelles pouvaient modifier l’activité d’Eg5. Ils ont
préincubé la protéine Eg5 sauvage fusionnée à la GFP (WT-GFP) ou une version mutée sur la thréonine en position
937 (Thréonine changée en Valine : T937V-GFP) en présence de la kinase Cdk1 et de 32P. La figure 2A présente la
protéine Eg5 fusionnée à la GFP. La figure 2B montre les essais de phosphorylation. Le panel « 32P » est une
autoradiographie des protéines Eg5 mises en évidence dans le panel inférieur « C » par coloration au bleu de
Coomassie. La figure 2C a été réalisée en incubant les différentes versions de la protéine Eg5 en présence d’un
microtubule artificiel placé sur lame de microscope et de la kinase Cdk1 (+) ou en son absence (-).

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TD Biologie Cellulaire 1

Enfin, les auteurs ont mesuré la quantité relative de fuseaux mitotiques bipolaires et monopolaires dans 4 lignées
cellulaires. La première (mock) exprime la protéine Eg5 sauvage. La lignée ∆Eg5 n’exprime pas la protéine Eg5.
WT correspond à la lignée ∆Eg5 complétée avec la protéine Eg5 sauvage et T937A à cette même lignée complétée
avec la version mutée T937A de la protéine Eg5. Les pourcentages de fuseaux mono et bipolaires pour chacune
de ces lignées sont représentés dans la figure 3.

Figure 2 :
A. RAS
B. Eg5 est phosphorylée par Cdk1 sur la thréonine 937 (apparition d’une bande radioactive sur la protéine
WT si présence de Cdk1 et pas de bande si la thréonine est mutée)
C. La protéine Eg5 se fixe sur les microtubules (visualisation de la fluorescence associée à Eg5 le long d’un
microtubule sur la 2e lame) à condition qu’elle soit phosphorylée (besoin de la Cdk1 et pas de fixation si
la thréonine est mutée)

Figure 3 :
Lorsque l’on enlève Eg5, on voit le taux de fuseaux monopolaires augmenter dramatiquement. Cet effet est
contrebalancé si on ajoute la protéine Eg5, par contre, la protéine mutée sur la thréonine (non phosphorylable) ne
restaure pas la fonction perdue en enlevant Eg5 (∆Eg5). La protéine Eg5 doit être phosphorylée pour fire des
fuseaux bipolaires.

D’après ces résultats, on peut dire que :

A. Eg5 est phosphorylée par Cdk1 sur la thréonine en position 937
B. Eg5 doit être déphosphorylée pour se lier efficacement aux microtubules
C. La protéine Eg5 favorise la formation de fuseaux mitotiques monopolaires
D. Les fuseaux bipolaires sont formés majoritairement en présence de la protéine Eg5 phosphorylée
E. La protéine Eg5 peut être une kinésine ou une dynéine (c’est une protéine qui peut interagir avec les
microtubules, alors pourquoi pas…)

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Question 11 (Session 1 - 2015) (D’après Laurent et al. (1999) J Cell Biol, 144, 1245)
La listeriose est une maladie bactérienne, transmise essentiellement par l’alimentation, liée à la présence de Listeria
monocytogenes et pouvant entrainer des atteintes sévères allant jusqu’à la septicémie ou une méningite. Pour se
déplacer dans les cellules infectées, la listeria recrute des monomères d’actine et en induit la polymérisation. Les
filaments ainsi générés forment comme des queues de comète qui propulsent littéralement les bactéries dans le
cytosol.
Afin de lutter efficacement contre ces pathogènes, on s’intéresse aux mécanismes impliqués dans le recrutement
de l’actine par la bactérie. Parmi les protéines qui participent à la dynamique du cytosquelette, la protéine VASP a
été identifiée, comme un bon candidat pour réguler le développement de la listeria.
Des extraits cellulaires ont été utilisés sans traitement particulier (NT) ou ont été passés 3 fois sur colonne
contenant un anticorps reconnaissant spécifiquement la protéine VASP (∆VASP) afin d’enlever spécifiquement
cette protéine de l’extrait. Parallèlement, un troisième extrait est également passé à travers une colonne, mais celle-
ci ne contenait aucun anticorps particulier (Mock). Ces trois extraits, complémentés ou non avec 1 µM de la
protéine VASP, exprimée dans un système hétérologue, ont été mis en présence de Listeria monocytogenes et la
vitesse de déplacement de la bactérie a été mesurée. Les résultats sont donnés dans la figure ci-contre.

D’après ces résultats et vos connaissances, on peut dire que :

A L’actine nécessite du GTP pour polymériser
B La protéine VASP permet le recrutement de l’actine par les listeria
C L’extrait ∆VASP est dépourvu de la protéine VASP
D La protéine VASP hétérologue ne restaure pas la fonction perdue lors de sa
déplétion, ce qui indique qu’elle nécessite un autre partenaire si, si, elle
restaure très bien la fonction
E Une neutralisation de la protéine VASP permettrait de ralentir la progression
de la listeriose oui, car pas de VASP = pas de recrutemnt de l’actine = pas de
déplacement de la listeria = moins de listeriose

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Troisième partie – Endocytose

EXERCICES

Exercice 1
La toxine botulique, sécrétée par la bactérie Clostridium botulinum, est responsable d’une maladie paralytique grave, le
botulisme. La toxine botulique, bien que connue comme l’un des poisons les plus violents, est utilisée en cosmétique en
dose très faible pour induire la paralysie des muscles frontaux et limiter ainsi l’apparition de rides.
On s’intéresse au mécanisme d’action de cette toxine. Pour cela, des terminaisons nerveuses ont été prélevées chez le rat
et les vésicules synaptiques (VS) ont été isolées. On rappelle le mécanisme de fusion vésiculaire (figure 1).

Figure 1 : Mécanisme de fusion vésiculaire

a- A quelle famille de protéines appartiennent les protéines synaptobrevin, VAMP, SNAP25 et syntaxin ?
Les protéines SNAREs
Dans un premier temps, la toxine botulique (BoTx) est incubée en présence de terminaisons synaptiques (TS). Après 30
minutes d’incubation, certaines protéines membranaires sont analysées par électrophorèse suivie d’un western blot. On
obtient les résultats suivants :

etylcholine
Release
and
Botulinum
Toxin
Effect 11061
TABLEIV
b- Que montrent ces résultats ? Proposez un rôle pour la BoTx.
Effect of melittin, arachidonic acid, oleic acid, and stearic acid on
BoTx inhibition of K+-stimulated PHIAChrelease from PC12 On voitcells
une disparition de la bande de SNAP25, au profit de bandes plus
PC12 cells were prelabeled with [3H]choline chloride basses (donc plus petites). Il y a donc eu une dégradation de la protéine
(for [3H]
ACh), exposed to 2 nM BoTx for 2 h at 37"C as described (protéolyse)
under
"Experimental Procedures." Cells were then perfused with the indi-
cated concentrations of agents for 8 min before K+ stimulationfor 8
min, andthe release of [3H]ACh was determined. K+-stimulated
increase was calculated by subtraction of basal release from total K+-
stimulated release. The use of 1~ L (butM not 0.01 and 0.1 p ~ melittin
)
and 100 p~ (but not 10 and 30 p ~ AA ) increased the basal [3H]ACh
values (9.4 k 0.3% of the control), which were taken into account in
calculating
Dans un K+-stimulated
second temps,[3H]ACh release. The
les neurones data de
moteurs arerat
expressed
ont été incubés en présence d’un précurseur radioactif de l’acétylcholine
as percent of [3H]ACh released following K+stimulationin the
(Ach),
absence afin qu’ils
of indicated puissent
agents and are fabriquer
mean f S.E. ceofneurotransmetteur.
three experiments. Après traitement à la toxine botulique ou pas, on mesure la
quantité
Values d’Ach
of control libéréerelease
[3H]ACh dans (pmol/mg
le milieu.ofOnprotein/8
obtient min)
les résultats
are as suivants :
follows: basal, 0.35 f 0.02; stimulated, 1.56 f 0.13.
Treatment [3H]ACh release
c- Quel est l’effet de l’addition de BoTx dans le milieu ?
% control
Le BoTx inhible la libération d’AChdans le milieu (baisse de
None 100.0 f 2.3
BoTx (2 nM) 8.3 k 0.7" l’exocytose)
BoTx (2 nM), then melittin
0.01 p M 9.7 k 1.2"
0.1 p M 31.0 f 1.0"
d- Quel rôle joue la meltittin dans cette expérience ?
20
1 WM 95.0 f 2.2 La meltittin semble être un inhibiteur de la BoTx.
BoTx (2 nM), then AA
10 p M 9.7 f 0.3"
3H]ACh 30 p M 27.3 k 0.7"
)and [3H] 100 p M 96.0 f 1.5
KC1 was BoTx (2 nM), then oleic acid
linechlo- 10 p M 9.0 f 0.6"
at 37 "C 30 p M 9.3 f 0.9" - 20 -
imulated 100 p M 10.3 & 0.9"
d in the BoTx (2 nM), then stearic acid
e control 10 p M 7.3 f 0.3"
ted with 30 p M 9.7 f 0.9"
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TD Biologie Cellulaire 1

e- Proposer un mode d’action de la BoTx dans la paralysie observée dans les cas de botulisme ?
La toxine botulique pourrait agir en induisant la protéolyse de la protéine SNAP25 (t-SNARE). Ainsi, SNAP25 et Syntaxin ne
pourraient pas interagir et les vésicules d’exocytose ne peuvent pas fusionner avec la membrane plasmique. L’exocytose
est bloquée et les neuromédiateurs ne seront pas libérés.
Donc, pas de stimulation de la cellule musculaire, donc paralysie.

Exercice 2(d’après Klockow et al. (2002) EMBO J. ; Macia et al. (2006) Dev. Cell ; Kirchhausen et al. (2008) Methods
Enzymol.)
La dynamine est une protéine indispensable au mécanisme d’endocytose à clathrine et !
à cavéoline. Afin de mieux comprendre le mode d’action de cette protéine, une équipe
de chercheurs a recherché des molécules interférant avec la dynamine. Ils ont ainsi
isolé le Dynasore, petite molécule de 331 g/mol.
L’activité de la dynamine a été mesurée en présence de GTP et en présence de GppNHp,
un analogue non hydrolysable du GTP. En présence de 1 µM de dynamine, les auteurs
ont évalué la quantité de nucléotide présente dans le milieu au cours du temps. Les
résultats obtenus sont présentés ci-contre :
La dynamine est capable d’hydrolyser le GTP
!
Dans un second temps, l’activité de la dynamine a été évaluée en présence et en absence
de dynasore. Dans la courbe suivante, l’hydrolyse du GTP a été évaluée en fonction de la
quantité de substrat (GTP) :

Le dynasore réduit sensiblement l’activité GTPasique de la dynamine

Enfin, la structure des vésicules d’endocytose a été observée en présence (Dynasore – B) et en absence (Vehicle – A) de
dynasore. Les images obtenues en microscopie électronique à transmission sont les suivantes :

Formation d’un puits d’endocytose, et libération de la

vésicule d’endocytose dans la cellule

Formation d’un puits d’endocytose, mais pas de libération

de la vésicule d’endocytose dans la cellule. Elle reste
accrochée à la membrane. Or, c’est la dynamine qui est
chargée de décrocher la vésicule d’endocytose.

En fonction de ces observations, quelles sont les réponses exactes :

A. La dynamine possède une activité ATPasique GTPasique
B. Le dynasore est un inhibiteur de la dynamine
C. La dynamine a une activité stimulée par la présence de GppNHp
D. Le dynasore serait un bon inhibiteur de l’absorption du cholestérol par la cellule (le cholestérol entre par endocytose
à clathrine dépendante de la dynamine)
E. La dynamine permet la libération de la vésicule d’endocytose de la membrane

Exercice 3 (d’après Sorensen et al. (2006) J Biol Chem., 281, 468 et Tevten et al. (2007) FEBS J., 274, 1881)

L’hypercholestérolémie familiale est due à une mutation dans le gène codant le récepteur du LDL (LDLR) qui se traduit par
une accumulation de LDL dans la circulation sanguine pouvant entrainer une maladie coronarienne prématurée. Afin

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TD Biologie Cellulaire 1

d’étudier le rôle de cette mutation, une lignée de cellules (CHO) a été transfectée avec une forme sauvage (WT), normale du
gène LDLR ou une forme mutée de ce récepteur où une glycine en position 544 a été remplacée par une valine (G544V).
Les gènes sauvages et mutés sont associés au gène codant la GFP. La localisation des produits de ces transgènes est
observée au microscope à fluorescence. On obtient les images suivantes :

Figure 1 : Localisation cellulaire du LDLR et de sa forme mutée G544V.

Les cellules transfectées par les gènes du LDLR et de sa forme mutée G544V couplés à
la GFP sont observées au microscope à fluorescence. La colonne GFP montre la
visualisation de la GFP. Les mêmes cellules sont aussi marquées sur la concanavaline
A (Conc A), un marqueur spécifique du réticulum

Le LDLR sauvage est localisé sur la mb plasmique et aussi dans l’appareil de

Golgi (zone dense près du noyau. On voit un voile de fluorescence « dans le
noyau ». Ce n’est pas DANS le noyau, mais AU DESSUS du noyau, car la
membrane plasmique recouvre tout.
(comparez avec la localisation de la concananvaline A qui sert à marquer le
REG. Avec la mutation, le LDLR reste bloqué dans le RE.

A. La GFP permet de localiser dans la cellule le récepteur sauvage et le récepteur muté du LDL
B. Le récepteur sauvage est présent uniquement à la membrane plasmique on voit aussi le golgi très nettement
C. La localisation du récepteur muté pourrait expliquer l’hypercholestérolémie familiale pas de récepteur à la membrane =
pas d’absorption
D. Dans les conditions normales, le récepteur du LDL doit transiter par l’appareil de Golgi Pour toutes les protéines
membranaires : REG -> Golgie -> Membrane
E. Le récepteur muté est séquestré dans le réticulum endoplasmique Même localisation que la Conc A

Le phénylbutyrate (4-PBA) est un composé chimique capable de pénétrer dans les cellules. Pour tester son efficacité
éventuelle dans un traitement de l’hypercholestérolémie familiale, il a été utilisé sur des cellules CHO transfectées avec la
forme sauvage (WT) ou mutée du récepteur au LDL en absence (G544V) ou en présence de 4-PBA (G544V + 4-PBA). Le
nombre de récepteurs à la membrane est déterminé à l’aide d’un anticorps couplé au fluorochrome Alexa488, dirigé contre
le LDLR.
En parallèle, pour déterminer l’internalisation des LDL, celles-ci ont été couplées au colorant fluorescent DiD et incubées à
37°C en présence des trois types cellulaires ci-dessus. Après lavage, la fluorescence associée aux cellules est évaluée.
Les résultats obtenus sont représentés dans la figure ci-dessous :

Intensité de fluorescence

Avec le WT, plus de fluorescence à la surface que le mutant

G544V. Donc le récepteur est mieux localisé.
Cela a un impact sur l’absorption (moins de LDL internalisé
chez le mutant).
Le mutant traité avec 4-PBA présente un niveau
intermédiaire entre mutant seul et WT. Donc, il
D’après ces observations, contrebalance en partie la mutation.
A. Les cellules WT expriment plus de récepteur au LDL à leur surface que les cellules G544V
B. Les cellules WT internalisent moins bien les LDL que les cellules G544V mieux au contraire
C. L’addition du 4-PBA améliore l’internalisation du LDL dans les cellules mutées on se rapproche des niveaux du sauvage
D. Le 4-PBA doit agir dans l’appareil de Golgi il doit agir en aval, dans le RE, car c’est là que le mutant est bloqué
E. Le 4-PBA pourrait être utilisé en traitement contre l’hypercholestérolémie familiale

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TD Biologie Cellulaire 1

Exercice 4
L’endocytose par récepteur est un procédé permettant le transport de macromolécules dans la cellule. Les expériences qui
ont permis d’élucider ce mécanisme ont été réalisées par Goldstein et Brown au cours d’une étude sur
l’hypercholestérolémie familiale. Les expériences suivantes ont été réalisées à partir de fibroblastes d’individus sains (S) et
de fibroblastes de 2 individus malades non apparentés (A et B). Dans un premier temps, la protéine Apo-B des LDL
d’individus sains a été radiomarquée à l’iode 125 pour faciliter sa détection et sa quantification.

Expérience 1 : Des cultures de tissus ont été soumises aux LDL radiomarqués à +4°C durant 5 min, puis rincées abondamment avec
du liquide physiologique. La radioactivité associée à chaque type cellulaire a été déterminée.
Rq : on ne distingue pas par cette approche si la radioactivité est localisée à la surface ou dans les cellules étudiées
Résultats : Une forte quantité de radioactivité est retrouvée associée aux cellules saines (S) et à celles du patient A. Aucune
radioactivité n’est associée aux cellules du patient B. Un traitement à la trypsine (une protéase à spectre large) élimine toute
radioactivité associée aux cellules S et A.

A 4°C, il n’y a pas d’activité enzymatique. Donc, on ne voit que des mécanismes rapides ne nécessitant pas d’énergie. Ici,
on voit la fixation des LDL sur les récepteurs. S et A fixent bien et pas B.

Donc B possède un récepteur incapable de lier les LDL, alors que A oui. Donc, soit pas de récepteur dans B, soit mutation
dans la partie réceptrice.

Expérience 2 : Les cellules sont mises en contact avec la radioactivité (LDL) à faible température durant 5 min, lavées puis
incubées à 37° durant 30 min.
Résultats : Les résultats sont identiques à ceux de l’expérience précédente. Par contre, si on incube ensuite les cellules 30
min en présence de trypsine (37°), la radioactivité associée aux cellules saines perdure. Comme dans l’expérience 1, la
radioactivité associée aux cellules A disparaît.

Maintenant, on mesure la capacité d’endocytose. Le lavage élimine les LDL mal fixées (pas liées par le récepteur) et la
passage à 37° pendant un temps long permet l’intégration des LDL dans la cellule (endocytose).

Le traitement à la trypsine dégrade les protéines situées à la surface de la cellule. Donc, si l’endocytose n’a pas eu lieu, le
récepteur sera dégradé et la LDL sera libérée. La radioactivité perdure dans la cellule saine car la LDL est protégée à l’intérieur
de la cellule. Elle disparaît sur la cellule A (qui pourtant fixait), donc la LDL est toujours dehors.

Expliquez très brièvement et clairement, en vous référant aux étapes requises pour l’endocytose, pourquoi les patients A et
B souffrent d’hypercholestérolémie.

Donc A a un LDLR muté dans sa partie intracytoplasmique (il peut fixer, mais ne déclenche pas l’endocytose) et B est muté
dans sa partie extracellulaire (il ne peut pas fixer, donc pas endocyter non plus).

Exercice 5
L’hypercholestérolémie familiale est due à des mutations dans le gène codant pour le récepteur aux LDL. Chez deux patients
atteints de cette maladie (HF1 et HF2), on évalue la capacité à fixer et internaliser les LDL, en comparaison avec un individu
sain (N). Les résultats sont donnés dans la figure ci-dessous.

On mesure également la synthèse de cholestérol dans les cellules de ces 2 malades.

A. En fonction de ces différentes courbes, expliquez comment le récepteur des LDL pourrait être modifié chez ces 2
patients.
Exactement le même exercice que le précédent, mais avec des courbes. HF1 ne fixe pas les LDL et HF2 les fixe bien.

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TD Biologie Cellulaire 1

Mais aucun des deux ne peut faire d’endocytose. HF1 muté dans la partie extracellulaire du LDLR et HF2 muté dans la partie
intracellulaire.
B. Comment expliquez vous que la synthèse du cholestérol soit très élevée chez les malades atteints d’hypercholestérolémie
familiale ?
Les 2 malades, qui ne font pas d’endocytose, présentent une synthèse abondante de cholestérol. Il y a donc visiblement
une boucle de régulation négative qui s’opère dans les cellules saines : plus la cellule absorbe de cholestérol, moins elle en
fabrique. Les malades souffrant d’HF présentent un taux de synthèse élevé.

Exercice 6
Pour pénétrer dans la cellule, les virus ont développé des stratégies en
s’appuyant sur les mécanismes d’endocytose. Afin de comprendre le mode
d’entrée de l’influenzavirus (virus de la grippe), une étude a été réalisée sur
des cellules issues de rein de chien (MDCK – pour Madin-Darby Canine
Kidney cells).
Dans un premier temps, le taux d’infection par le virus a été mesuré dans les
cellules MDCK en présence de différents inhibiteurs de l’endocytose : La
chlorpromazine (CPZ) est un inhibiteur de la voie d’endocytose à clathrine, le
5-(N-éthyl-N-isopropyl)-amiloride (EIPA) est un inhibiteur de la
macropinocytose ainsi que l’IPA3 qui agit en bloquant la kinase Pak1
impliquée dans le remodelage du cytosquelette.

La CPZ réduit l’entrée du virus. Donc, il est fort possible que le virus détourne l’endocytose à clathrine pour entrer dans la
cellule.
MAIS, on n’atteint pas le zéro. Donc, il y a peut-être un autre mécanisme.
L’EIPA augmente le phénomène d’inhibition, donc la macropinocytose est potentiellement aussi détournée. La macropinocytose
implique un remodelage du cytosquelette d’actine. Cela explique que l’IPA3 ait le même effet que l’EIPA.

Les résultats sont donnés dans la figure (A). La figure B montre deux virus entrant dans la cellule MDCK. Les virus sont identifiés
par une flèche.

*
*

On voit sur ces images le virus associé à de la macropinocytose et à de l’endocytose à clathrine (2e image avec un
épaississement de la membrane au niveau de la vésicule d’endocytose = manteau de clathrine).

Ces résultats montrent que :

A. L’influenzavirus utilise exclusivement l’endocytose à clathrine pour infecter les cellules MDCK
B. L’influenzavirus utilise exclusivement la macropinocytose pour infecter les cellules MDCK
C. L’influenzavirus utilise l’endocytose à clathrine et la macropinocytose pour infecter les cellules MDCK Visible sur le
graphe et confirmé par l’image en microscopie électronique
D. Les éléments repérés par un astérisque dans la photo B sont riches en microtubules Microfilaments
E. L’image repérée par un triangle dans la photo B ne pourrait pas être observée en présence de chlorpromazine cette
image est typique d’une endocytose à clathrine qui aurait été bloquée par la CPZ

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TD Biologie Cellulaire 1

Exercice 7
Le schéma suivant montre le cycle d’absorption du fer par la cellule.

a/ D’après vos connaissances, entourez la (les) bonne(s) réponse(s)

A. L’élément A est la clathrine
B. L’élément B est la cavéoline non, c’est l’adaptine AP2
C. L’étape 3 est causée par une protéine de type « chaperonne »
D. L’élément C est une pompe Non, car transport passif (dans le sens du gradient : très concentré dans l’endosome et peu
concentré dans la cellule)
E. L’élément C est un transporteur passif

b/ Tracez les courbes d’association de la transferrine avec le fer et de la transferrine avec son récepteur, en fonction du pH.

En rouge l’association Apotransferrine/récepteur

En vert, l’association ferrotransferrine/récepteur

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TD Biologie Cellulaire 1

Exercice 8
Le schéma ci-contre montre le mécanisme de l’endocytose du cholestérol :

A Sur ce schéma, l’élément C peut être la clathrine ou la cavéoline NON, on

voit que c’est une structure qui tapisse la membrane et qui disparaît une
fois la vésicule internalisée. C’est donc de la clathrine. La cavéoline est
DANS la membrane et reste donc DANS la membrane.
B La concentration en protons a augmenté entre l’élément E et l’élément F
Oui, l’endosome tardif s’acidifie, donc la concentration en H+ augmente
C Le passage de l’élément D à l’élément E est effectué grâce à des protéines
chaperonnes
D L’élément G provient directement du reticulum endoplasmique granulaire
Non, c’est le lysosome primaire, il vient de l’appareil de golgi
E Les hydrolases sont actives dans l’élément G Non, elles seront actives
quand elles seront dans un milieu acide, c’est à dire quand elles seront
déversées dans l’endosome tardif acide et former ainsi le lysosome
secondaire (H)

A = LDL
B = Récepteur au LDL
C = Manteau de clathrine
D = Vésicule recouverte de clathrine
E = Vésicule d’endocytose nue
F = Endosome en cours d’acidification (intermédiaire entre précoce et tardif)
G = Lysosome primaire
H = Lysosome secondaire
I = Vésicule de recyclage des récepteurs

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