TP :Techniques d’Analyses 1 CCM, CC
Objectif du TP : Savoir réaliser et interpréter une chromatographie sur
couche mince et sur colonne
I. chromatographie sur couche mince
1. définition :
chromatographie sur couche mince: La chromatographie sur couche mince (CCM) est une
technique de séparation et d'analyse des composés chimiques présents dans un échantillon.
Elle repose sur la migration différentielle des composés à travers une couche mince de
matériau adsorbant, généralement de la silice, sous l'influence d'un solvant liquide (phase
mobile). Les composés se séparent en fonction de leur affinité avec la phase stationnaire
(matériau adsorbant) et leur solubilité dans la phase mobile.
2. Principe de la chromatographie sur couche mince
La chromatographie sur couche mince (CCM) repose sur le principe de la séparation des
composés chimiques en fonction de leur affinité relative envers une phase stationnaire solide
et une phase mobile liquide.
3. Le but de la chromatographie sur colonne
La chromatographie sur couche mince (CCM) vise à séparer et analyser les composés du
mélange Aniline, Acétophénone, Quinoxaline en exploitant leurs interactions avec une phase
stationnaire le silice et une phase mobile hexane / acétate d'éthyle 7/1.
4. Mode opératoire :
a. Protocole expérimental
Préparation de l'échantillon : L'échantillon à analyser ( mélange Aniline, Acétophénone,
Quinoxaline dissous dans le dichlorométhane ) est dissous dans un solvant (acétate
d'éthyle et hexane).
Élution : La plaque est placée dans une cuve contenant un solvant ou un mélange de
solvants (hexane / acétate d'éthyle 7/1). Le solvant se déplace à travers la phase
stationnaire par capillarité, emportant avec lui les composés de l'échantillon. Les
composés se séparent en fonction de leur affinité avec la phase stationnaire et leur
solubilité dans l'éluant.
Préparation de la plaque : Une fine couche de matériau adsorbant (comme de la silice) est
déposée uniformément sur une plaque de support, formant ainsi la phase stationnaire.
-A 1 cm du bord inférieur, tracer délicatement au crayon un trait fin : c’est la ligne de dépôt.
Les dépôts ne devront pas tremper dans l’éluant.
-Marquer par des croix ou des traits les emplacements correspondant aux échantillons à
déposer en gardant un espace minimum avec les bords de la plaque. Repérer par un chiffre
ou une lettre les emplacements.
-Déposer les échantillons avec une pipette pasteur Éventuellement, sécher les dépôts.
-Introduire délicatement la plaque dans la cuve et veiller à ce que la ligne de dépôt ne soit
pas au contact de l’éluant. Refermer la cuve, ne plus la toucher et laisser éluer.
b. Résultats et interprétations
-L’échantillon testé mélange d’Aniline, Acétophénone, Quinoxaline et l’éluant un mélange
hexane / acétate d'éthyle 7/1. On obtient le chromatogramme suivant.
Dans ce cas la les dépôts ne sont pas colorés, pour faire apparaître les taches (révélation), on
place le chromatogramme sous une lampe UV(rayons ultraviolets) :
-Calcule le Rapport frontal :
RF¿ Distance parcourue par le compose/ Distance parcourue par la phase mobile
2
RF(aniline) = = 0,43
4 ,6
3,3
RF(acétophénone) = = 0,71
4 ,6
0
RF (quinoxaline) = =0
4 ,6
- Dans l'échantillon testé contenant Aniline, Acétophénone et Quinoxaline, soumis à une
chromatographie sur couche mince avec un mélange hexane/acétate d'éthyle (rapport 7/1),
Acétophénone a migré le plus loin avec un RF de 0,71 , indiquant une plus grande affinité
avec la phase mobile. Aniline a migré moins loin que l'Acétophénone, avec un RF de 0,43
suggérant une meilleure interaction avec la phase stationnaire. Quinoxaline a montré une
migration très limitée RF égal 0, indiquant une forte affinité avec la phase stationnaire et une
solubilité limitée dans la phase mobile.
II. chromatographie sur colonne
1. définition :
La chromatographie en colonne (CC) est une méthode de séparation des composés chimiques
basée sur leur distribution entre une phase stationnaire solide ou liquide et une phase mobile
liquide ou gazeuse. Les composés se déplacent à des vitesses différentes à travers la colonne
en fonction de leurs interactions avec la phase stationnaire et la phase mobile. Cela permet
leur séparation et identification.
2. Principe de la chromatographie sur colonne:
Le principe de la chromatographie en colonne (CC) repose sur la distribution différentielle des
composés entre une phase stationnaire et une phase mobile.
3. Le but de la chromatographie sur colonne
Le but de la chromatographie en colonne (CC) est de séparer et purifier et quantifier les
composés présents dans le mélange d’Aniline, Acétophénone, Quinoxaline.
4. Mode opératoire :
a. Protocole expérimental :
1-Fixez la colonne verticalement à l'aide d'une pince.
2-Placez un petit morceau de coton au bas de la colonne.
3-Pesez la silice et mélangez-la avec l'éluant hexane / acétate d'éthyle 7/1 pour former un gel.
4-Introduisez la silice dans la colonne.
5-Tassez légèrement la colonne pour obtenir une surface plane.
6-Placez un bécher sous la colonne.
7-Ajoutez doucement une quantité d'éluant hexane / acétate d'éthyle 7/1 au-dessus de la
surface plane de la silice.
8-Déposez à l'aide d'une pipette, sans toucher les parois de la colonne, le mélange à séparer(
d’Aniline, Acétophénone, Quinoxaline).
9-Poursuivez l'ajout d'éluant de manière contrôlée pour permettre la migration des composés à
travers la colonne.
10- Placez des tubes sous la sortie de la colonne pour recueillir les fractions qui sortent.
Étiquetez-les soigneusement pour identifier les composés.
11- Utilisez la chromatographie couche mince pour identifier les composés dans chaque
fraction.
