Le système endomembranaire

Retrouvé dans toutes les cellules eucaryotes, organites cellulaires reliés par flux de vésicules entourées d’une membrane
semblable à la MP, seules diffèrent les proportions et types de lipides et protéines .
Cet ensemble renferme: le réticulum endoplasmique (RE) l’appareil de Golgi (AG), lysosome et peroxysome*.

Réticulum endoplasmique (RE)

Généralités
Réseau en tubules et saccules de membranes interconnectées issues des membranes nucléaires. Il représente ≥ 50% des
biomembranes et des cavités et 10% du volume de la majorité des cellules eucaryotes.
Structure (MO):
Il n’apparait que si il est très dense et associé aux ribosomes, par techniques histochimiques basiques (hématoxyline, le
violet de crésyl ou bleu de toluidine), en fin feutrage ; ergastoplasme, ou tâches basophiles très colorées ; corps de Nissl
des neurones.
US (MET) :
Mis en évidence par imprégnation osmique ou argentique, ensemble de membranes tri-stratifiées (6 nms d’épaisseur)
délimitant des cavités closes, en forme de; saccules aplatis, vésicules ou tubules, à face cytoplasmique et face luminale.
En continuité avec l’enveloppe nucléaire, il communique avec l’AG et la MP par flux de vésicules.
Le Réticulum endoplasmique (RE) revêt 2 aspects :
1-Le Réticulum endoplasmique granulaire ou rugueux (REG ou RER):
Ses membranes sont bordées à l’extérieur par de nombreux ribosomes fixés par leur grosse SU sur sa face cytosolique, à
citernes aplaties et à lumière de 20-30 nms de large.

2-Le Réticulum endoplasmique lisse (REL)

A membranes sans ribosomes, délimitent des cavités tubulaires de 30- 40nms de Ѳ.
Dans les cellules à sécrétion protéiques intense, il est une zone de transition entre REG-AG, d’où bourgeonnent les
vésicules de transition qui transportent les macromolécules vers l’AG.

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Composition biochimique du RE
Les méthodes cytochimiques révèlent au niveau du RE diverses activités enzymatiques surtout des hydrolases
Après homogénat et UCD on obtient de petites vésicules de 100 nms de θ ; les microsomes.
-Les microsomes du REG, plus dense, qui gardent leurs ribosomes, des microsomes lisses, du REL (mais aussi de
mitochondries, d’AG et de l’enveloppe nucléaire).
L’isolement des microsomes du REL est réalisé sur hépatocytes ou cellules à sécrétion de stéroïdes ou il est abondant.
-Les membranes du RE sont formées de 70% de protéines de 30% de lipides, ces derniers comparables à ceux de la MP
avec moins de glycolipides et de cholestérol. L’asymétrie est respectée (glycocalyx vers face luminale).
-Fraction microsome rugueux :
Identifiée par: La glucose 6phosphatase, les enzymes de glycosylation des protéines et lipides, un transporteur
d’électrons ; le cytochrome b5 et les ribophorines à rôle dans la fixation des ribosomes.
-Fraction microsomes lisses :
Identifiée par : Les enzymes ; du métabolisme des acides gras, de synthèse de, phospholipides, de stéroïdes,
le transporteur d’électrons; cytochrome P450.
Dans les cellules musculaires striées, le réticulum sarcoplasmique lisse (RSP) et à disposition en tubules creux.
Sa membrane porte de nombreuses protéines intégrées dont l’ATP ase ca2+ dépendante qui pompe activement le Ca2+du
cytosol et l’accumule dans les cavités du RSP (au repos).
La libération du Ca2+par les canaux transmembranaires spécifiques permet la contraction des myofibrilles.

Rôle du REG :
Synthèse de diverses protéines:-Très développé surtout dans cellules à synthèse de protéines exportables, occupe toute la
partie basale de la cellule pancréatique par exemple,- Il participe à leur bon repliement grâce aux molécules chaperons et l
initie la glycosylation des polypeptides.

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Mode de fixation et d’activité du ribosome sur le REG :
Lorsque l’ARNmpasse dans le cytosol, la grande puis la petite SU ribosomale se fixent sur la séquence signal (peptide
signal hydrophobe), la traduction se met en pause. Ce peptide signal est reconnu par une protéine cytosolique; la SRP,
qui se rapproche et se fixe sur le site de liaison à la grande SU ribosomiale.
L’ARNm+ ribosome + protéine de signal sont tractés par le peptide signal vers la membrane du REG ou la SRP se lie à
son récepteur. La ribophorine fixe les ribosomes aux membranes du REG et verrouille le complexe, ainsi la traduction
peut se poursuivre.
La protéine en voie de synthétise pénètre par canal membranaire du REG, la SRP est libérée dans le cytosol
(le récepteur peut se lier à une autre SRP).Une signal peptidase excise le peptide signal et le polypeptide se replie grâce
aux protéines chaperons et prend sa forme finale dans le REG.
-Des preuves génétiques étayent cette hypothèse: Des cellules mutantes produisent des protéines membranaires qui restent
dans le cytosol , l’analyse montre que la mutation affecte la séquence signal amino terminale.

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-Initiation de la glycosylation : Elle s’amorce dans le REG par fixation de :-2N acétyl-glucosamine,-9Mannose,
3Glucose. Cette chaine glucidique s’attache par une liaison pyrophosphate à un lipide membranaire dirigé vers la face
cytosolique (dolichol) puis transférée au polypeptide et se fixe sur un résidu asparagine situé vers l’extrémité NH2
terminale. Avant de quitter le REG les protéines élaguent 3 glucoses et 1 mannose
-A noter que les protéines cytosoliques ne portent pas de glucides.
Rôle du REL :
-Synthèse des lipides membranaires:
Le REL est abondant dans les cellules spécialisées dans le métabolisme des lipides, confirmée par l’analyse chimique qui
montre l’abondance des enzymes impliquées dans le métabolisme des PL membranaires au niveau des membranes du
REL, ex l’acyle transférase, la choline phosphotransférase, la décarboxylase. .. Etc.
-2 acyles gras s’insèrent dans la couche de phospholipides (face cytosolique), vont être remaniés par les enzymes jusqu'à
former l’un des PL membranaires. Un rééquilibrage aura lieu vers la monocouche luminale par un mécanisme catalysée
par la flipase qui permet des mouvements, type flip, qui respecte la symétrie des deux monocouches.
Les PL synthétisés dans le REL sont transmis aux autres organites par un système de transporteurs, des images de
contigüité entre MP-REL- mitochondries sont observés.
Certains PL passent du REL vers la mitochondrie pour être décarboxylés de même que d’autres passent directement dans
la MP, peut être grâce à une protéine échangeuse localisées au niveau des zones de contigüité, la synthèse du cholestérol
membranaire est réalisée partir de l’acétate (2C).
Synthèse des stéroïdes :
Ex : les cellules de Leydig utilisent soit le cholestérol exogène véhiculé par le sang associé à une lipoprotéine (LDL) ou
celui produit par le REL, qui est transformé au niveau de la mitochondrie en précurseur ; la prégnénolone, remaniée au
niveau des membranes du REL pour former l’hormone (testostérone……..etc)
Détoxification:
Les membranes du REL portent des enzymes de détoxification, la plus connue est la P450, retrouvée dans les
hépatocytes, activées par la présence de substances toxiques, résultat : Extension de la surface du [Link] substances
toxiques sont solubilisées, reprises par le sang puis rejetées dans les urines.
L’excès du REL est dégradé par autophagie (voir lysosomes) .
Variation du RE selon le type cellulaire et l’état de la cellule :
Liés à des métabolismes différents le REG et REL peuvent donc occuper une place plus ou moins importante dans la
cellule, selon le moment du cycle et l’activité physiologique de la cellule. Ces deux formes sont inter convertibles, ainsi
lors d’une intoxication aux barbituriques, l’hépatocyte converti tout son REG en REL porteur d’enzymes de
détoxification (Cytochrome P450) avant de rétablir l’équilibre REL/REG.

Appareil de Golgi (AG)

Réseau réticulaire péri nucléaire, découvert par Camilo Golgi (prix Nobel 1906) dans les cellules de Purkinjé du cervelet
par imprégnation osmique.
MO : Ensemble d’organites dispersés souvent juxta nucléaire en forme d’écailles. Chaque écaille ou dictyosome de 1-3
µms de Ѳ, à face chromophobe concave et face chromophile convexe.
MET: Un dictyosome est un empilement de 5- 10 saccules aplatis, les vésicules périphériques sont petites (50nms),
parfois recouvertes de clathrine, dans la face concave de grandes vésicules de sécrétion (1000 nms).
L’AG est polarisé : Face convexe proximale (cis) et face concave distale (trans).

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Isolement de la fraction golgienne.
Par UCD, après homogénéisation douce, les dictyosome se scindent en microsomes lisses en forme de saccules
(semblables à ceux du REL ou de l’enveloppe nucléaire).
Analyse chimique :
L’AG ne possède pas d’enzymes marqueurs mais il est riche en hydrolases et peroxydases. Le contenu des saccules
varie avec le type cellulaire, toujours riche en polysaccharides. Les membranes golgiennes se caractérisent par des
glycosyl transférases qui fixent des résidus glucidiques sur les protéines synthétisées et glycosylées dans le REG, de
nombreuses sulfotransférases qui transforment les chaines protéiques en dérivés sulfatés, des enzymes, qui fixent des
phosphates, des acides gras ou qui élaguent (détachent) des sucres.
Rôles physiologiques :
-Emballage des protéines
- Palade (1960) par marquage radioactif sur cellules du pancréas exocrine, démontre que les protéines synthétisées dans
le REG, traversent les citernes golgiennes à partir de vésicules golgiennes et s’accumulent dans des vésicules de
sécrétion.
L’expérience : Des tranches de pancréas sont placées dans un milieu nutritif stérile (les cellules secrètent pendant
quelques heures des hydrolases pancréatiques).
Le milieu est enrichi de leucine radioactive pendant 3mn (pulse) puis placées dans un milieu froid*(chasse).
Les échantillons sont prélevés et analysés par autoradiographie et par mesure de la radioactivité.
Celle-ci est révélée dans le REG dès la fin du pulse, elle se concentre dans l’AG après 7mn de chasse, après 40mn elle est
dans les grains de pro enzyme et excrétée après 120 mn du début de l’expérience.
-Un 2èmelot est traité selon le même protocole pour analyse, les tranches de pancréas sont broyés, l’homogénat est passé en
UCD afin de séparer ; grains de zymogène, fractions de microsomes rugueux (REG) et lisses (peu) ; l’AG.
La majorité de la radioactivité mesurée à différents temps au compteur Geiger est retrouvée au niveau de ces
fractions :Les polypeptides sont synthétisés dans le REG cheminent dans des vésicules de transition vers les saccules
golgiens puis emballés dans des vésicules de sécrétion avant d’être excrétés au pôle [Link] cours du transport ils sont
isolés du cytoplasme. Ce mode de cheminement est général aux cellules eucaryotes.

-Leblond démontre que ces protéines sont glycosylées dans l’AG, les enzymes présents sur les saccules (citernes) peuvent
ajouter (élongation), élaguer (détacher) des sucres et d’autres fixent des phosphates, sulfates ou acides gras.
Glycosylation des protéines, triage et adressage (ou orientation) des protéines.
Porthman et all (1981) ont séparé les saccules golgiens par UCD et isolé des saccules :

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De la face proximale (cis) de la face distale (trans) et intermédiaire. La garniture enzymatique de ces fractions est
différente et non interchangeable.
Chaque dictyosome est formé de 3 compartiments superposés munis d’enzymes à fonctions distinctes.
1) Saccules de la face proximale (cis) : Phospho transférases.
2) / / / / / / / /moyenne : Manosidases (élaguent le mannose), N acétyle glucosamine transférases (fixent le N
acétyle glucosamine).
3) Saccules de la face distale (trans) plus légères : Riches en galactose transférases qui fixent le galactose et des acide
sialique transférases qui fixent l’acide sialique.
Dans le REG les polypeptides sont glycosylés, ils reçoivent; 2 N acétyle glucosamine, 9 mannoses et 3 glucoses. Avant de
quitter le REG, 3 glucoses et 1 mannose sont élagués.
-Les hydrolases destinées au lysosome reçoivent des phosphates sur le mannose (étiquette des hydrolases) elles traversent
les citernes golgiennes passent dans les vésicules golgiennes formant des lysosomes Iaires.
-Les protéines destinées à être excrétées sont libérées dans la lumière du REG, circulent dans les citernes proximales du
dictyosome sans changement.
Dans les citernes moyennes, perdent des résidus mannoses (il restera 3) et reçoivent 2N acétyle glucosamines. Dans les
citernes distales 2 galactoses et 2 acides sialiques s’attacheront au mannose.
-Les protéines membranaires se replient dans la bicouche de PL du REG. Dans l’AG elles perdent plusieurs mannoses
mais ne reçoivent pas d’acétyle glucosamine. Galactose et acide sialique termineront la chaine des polyholosides.
Les glycoprotéines synthétisées dans le REG sont reconnues d’après leur séquence en acide aminés puis étiquetées
dans l’AG grâce à un mécanisme d’élongation des séquences glucidiques déterminantes du devenir de la glycoprotéine.
-Ces sucres formés dans le cytosol pénètrent dans les saccules golgiens grâce à des transporteurs.
-Les protéines en cours de glycosylation circulent dans le sens cis-trans enfermées dans des vésicules.
L’étude par marquage du sulfate des mucopolysaccharides de mucocytes démontre que les glycoprotéines sulfatées le
sont dans l’AG par des sulfotransférases.
Formation des cytomembranes
-Dans cellules à activité sécrétoire : L’agrandissement de leur MP résulte de l’addition des membranes des vésicules
d’excrétion (golgiennes) qui s’intègrent par fusion dans les [Link] garniture protéique change depuis les citernes
golgiennes, ainsi le Cytochrome B5, les glycosyl transférases et sulfotransférases disparaissent.
A noter que l’asymétrie de la MP est respectée car les groupements saccharidiques sont orientés vers la face luminale
dans REG, dictyosomes et vésicules d’exocytose.
-Dans d’autres types cellulaires:Des vésicules golgiennes recouvertes d’un réseau de clathrine (protéine sans fonction
d’excrétion) viennent s’ouvrir sur la MP assurant ainsi son élongation.
-(Le rôle de l’AG dans la glycosylation des lipides membranaires n’est pas encore tout à fait élucidé, ces glycolipides se
retrouvent dans la MP après passage dans l’AG.
-Les membranes vésiculaires s’intègrent directement à la membrane de l’organite cible.