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PCR Technique

La réaction de PCR nécessite des éléments essentiels tels que l'ADN modèle, des amorces, de l'ADN polymérase, des nucléotides, un tampon de réaction, des ions divalents et de l'eau. Le principe de la PCR repose sur l'amplification exponentielle d'une séquence d'ADN spécifique à travers des cycles de dénaturation, d'hybridation et d'élongation. Plusieurs techniques associées à la PCR, comme la RT-PCR, la qPCR et la PCR multiplex, permettent d'adapter la méthode à divers besoins d'amplification et de quantification.

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PCR Technique

La réaction de PCR nécessite des éléments essentiels tels que l'ADN modèle, des amorces, de l'ADN polymérase, des nucléotides, un tampon de réaction, des ions divalents et de l'eau. Le principe de la PCR repose sur l'amplification exponentielle d'une séquence d'ADN spécifique à travers des cycles de dénaturation, d'hybridation et d'élongation. Plusieurs techniques associées à la PCR, comme la RT-PCR, la qPCR et la PCR multiplex, permettent d'adapter la méthode à divers besoins d'amplification et de quantification.

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Réaction de PCR

Éléments nécessaires à la réaction de PCR

1. ADN modèle : C’est le matériel génétique cible à amplifier.


2. Primers (amorces) : Ce sont des courtes séquences d'ADN qui se lient de manière
spécifique aux régions flanquantes du gène d'intérêt.
- Amorce sens : Se lie au brin d'ADN complémentaire du brin codant.
- Amorce antisens : Se lie au brin d'ADN complémentaire du brin non codant.
3. ADN polymérase : Enzymes qui catalysent l'élongation de la chaîne d'ADN. La Taq
polymérase (provenant de Thermus aquaticus) est couramment utilisée car elle est
thermostable.
4. Nucleotides (dNTPs) : Les briques de base nécessaires pour la synthèse du nouvel ADN
(adénine [A], thymine [T], cytosine [C], et guanine [G]).
5. Tampon de réaction (buffer) : Maintient un pH optimal pour l'activité enzymatique.
6. Ions divalents (Mg²⁺) : Le magnésium est nécessaire pour l'activité de l'ADN polymérase.
7. Eau : Pour ajuster le volume final de la réaction.

Principe de la PCR

La PCR est une méthode de biologie moléculaire utilisée pour amplifier une séquence d'ADN
spécifique. En utilisant une température cyclique, elle permet de copier de manière
exponentielle une région ciblée du génome. Chaque cycle de la PCR double le nombre de
copies d'ADN cible, permettant d'obtenir des millions de copies après plusieurs cycles.

Étapes de la PCR

1. Dénaturation (94–98°C): L'ADN double-brin est chauffé pour le séparer en deux brins
simples, afin qu'ils puissent être utilisés comme modèles pour la synthèse.
2. Hybridation ou appariement des amorces (50–65°C): La température est abaissée pour
permettre aux amorces spécifiques de se lier aux séquences complémentaires sur les brins
d'ADN cible. Les amorces se fixent aux régions flanquantes du gène d’intérêt.
3. Élongation (68–72°C): L'ADN polymérase commence à ajouter des nucléotides
complémentaires aux brins d'ADN à partir des amorces, prolongeant ainsi la chaîne d'ADN.

Ces trois étapes sont répétées de manière cyclique (généralement 25 à 40 cycles) pour
obtenir une amplification exponentielle de la séquence d'ADN d'intérêt.

Techniques associées à la PCR

1. RT-PCR (Reverse Transcription PCR): Utilisée pour amplifier l'ADN complémentaire


(ADNc) à partir d'ARN. L'ARN est d'abord transcrit en ADN par la transcriptase inverse
avant l'amplification par PCR.
2. qPCR (PCR quantitative): Technique permettant de quantifier l'ADN amplifié en temps
réel pendant le processus, souvent utilisée pour mesurer l'expression des gènes.
3. PCR en temps réel (PCR en temps réel): Une forme de qPCR où des sondes fluorescentes
sont utilisées pour suivre l'amplification en temps réel et quantifier la quantité d'ADN cible.
4. PCR multiplex: Permet l'amplification de plusieurs séquences d'ADN différentes dans une
seule réaction grâce à l’utilisation de plusieurs paires d'amorces spécifiques.
5. Nested PCR: Utilisée pour augmenter la spécificité et la sensibilité de la PCR. Deux
ensembles d'amorces sont utilisés dans deux étapes successives pour l'amplification d'une
même cible.
6. PCR à haute fidélité: Utilisée lorsque des mutations doivent être minimisées dans les
produits amplifiés. Cela implique l'utilisation d'une ADN polymérase à haute fidélité.

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