Effet de la kénitine sur la sénescence des feuilles
But de manipulation :
Mesure la dégradation de la chlorophylle “a” en pigments dégradée telle la
phéophytine “a” qui libérée de Mg++. Les mesures sont faites par spectrophotomètre
avant et après l’acidification. Les spectres absorption de ces pigments à 665nm.
Mg++
Chlorophylle “a” phéophytine “a”
I- Démonstration de l’effet de cytokinine sur le retard de la sénescence des feuilles :
1- Le protocole expérimental :
10 ml de H2O (Témoin) 10 ml de [BAP]=100mg/l 10 ml de [BAP]=50mg/l
10 ml de [BAP]=25mg/l 10 ml de [BAP]=10mg/l 10 ml de [BAP]=0,1mg/l
BAP = c’est une type de cytokinine (6-Benzyl-amino-purine ; C12H11N5)
2- Le protocole d’extraction et le dosage :
Broyage
Centrifugation Récupéré lire la Do
+ La MF
de l’extrait le surnagent à 665 nm
+ 2ml de l’acétone 90%
+ Sable
1
3- Analyse les résultats :
Formule de LORENZEN :
Il faut utilise cette relation pou calculer la quantité non dégradé de la chlorophylle “a”
et la quantité dégradé sous forme de phéophytine “a” par gramme de matière fraiche.
A. K(6650 − 665a ). V
chlorophylle a (mg/g de MF) =
p. l
A. K(R. 665a − 6650 ). V
phéophytine a (mg/g de MF) =
p. l
A:
K:
R:
V:
P:
L:
4- Conclusions :
La quantité La quantité
de chlorophylle de chlorophylle
non dégradé dégradé
100% - 100% -
50% - 50% -
[BAP] [BAP]
0.1 10 25 50 100 en mg/l 0.1 10 25 50 100 en mg/l
2
Gibbérelline dans l’induction de la synthèse d’amylase
But de manipulation :
Mesure l’activité enzymatique du catalyseur α- amylase qui stimulée la dégradation
de l’amidon en sucres. Les mesures de ces sucres sont faites sous forme d’un dosage
colorimétrique avec le DNS.
Amidon
α- amylase
Glucose Couche aleurone
GA
Embryon
H2O
I- Le protocole expérimental:
+E + H2O (Témoin) -E - H2O -E + [GA]=10-6M
-E + [GA]=5.10-6M -E + [GA]=10-5M -E + [GA]=10-5M
En levée les enveloppes + imbibition pendant 24h + agitation pendant 24 à 48h
II- Le protocole de dosage :
1 ml de la solution à doser Ebibution à 100°c Ajouter H2O lire la DO
+ + 1 ml de DNS pendant 5 min faire la dilution à 540 nm
3
III- Le matériel végétal :
Il faut utilise des plantes étiolés pour une pétrification des extrants enzymatiques claire.
IV- Autres méthodes de dosages :
- Par le dosage de l’activité α-amylase.
- Par le dosage de la disparaissions de l’amidon.
V- Les paramètres :
- La masse de caryopse pour pouvoir la quantité par g de MF.
- La DO du sucre pour donne une idée sur la quantité du sucre disponible dans un ml.
- Le volume de la solution utilisé pour évaluée la quantité totale d’imbibition.
- La gamme d’étalonnage des graines.
VI- résultats :
[GA] 0,07 0,11 0,3 0,38 0,56
DO à 540 nm 0,13 0,4 0,33 0,7 0,76
>>> Plus la concentration de GA augment plus la DO augment.
VII- conclusions :
La formule :
Y = a.X DO = a.[glucose]
Q = [glucose] x Vimbibition/ m (la masse)
4
Dosage da l’auxine : biodégradation de l’AIA
But de manipulation :
Mesure l’activité des enzymes qui contrôlent la dégradation de l’auxine.
- Extraction des protéines solubles de MF.
- Dosage par le réactif de Salkowski.
I- Le protocole expérimental :
2,5 de la MF + 7ml de tampon phosphate Centrifugation
(Partie aérienne) sable pendant 10 min
à 8000g
Broyage
Conservation au froid Récupéré le surnagent
à 4°c Noter son volume
II- Le protocole d’extraction et le dosage :
0,5ml de la solution à doser t = temps nécessaire pour la formation lire la DO
+ 1,5ml de réactif de Salkowski du complexe AIA-oxydase = 10 min à 540 nm
III- Résultats :
[AIA]
100% - [AIA-oxydase] = 0
50% -
[BAP]
10 20 30 40 50 60
