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RAPID’Listeria spp/Gélose
356-3950
356-4744

DOMAINE D’APPLICATION
Milieu chromogénique sélectif pour la recher- NF EN ISO 11290-1/A1 (Février 2005)
che et le dénombrement des Listeria spp dans Microbiologie des aliments – Méthode
les produits destinés à l’alimentation humaine horizontale pour la recherche et le
et les prélèvements de l’environnement. dénombrement de Listeria monocytogenes –
Partie 1 Méthode de recherche (IC : V08-028-1)
PRINCIPE
Le milieu RAPID’Listeria spp permet de mettre NF EN ISO 11290-2/A1 (Février 2005)
en évidence les Listeria spp grâce à la Microbiologie des aliments – Méthode
détection de l’activité β-D-glucosidase par un horizontale pour la recherche et le
substrat chromogénique. Les colonies de dénombrement de Listeria monocytogenes –
Listeria sont bleues à bleue-vertes. Partie 2 Méthode de dénombrement (IC : V08-
La sélectivité du milieu est obtenue par l’action 028-2)
combinée du Chlorure de Lithium et du
mélange antibiotique. PRESENTATION
Déshydraté
NF VALIDATION par AFNOR • 500g code 356-4744
CERTIFICATION selon le protocole EN • Supplément 1 (10 flacons, qsp 500 ml de
ISO 16140 gélose de base) code 356-4745
La méthode RAPID’[Link] est certifiée NF • Supplément 2 (10 flacons, qsp 500 ml de
VALIDATION comme méthode alternative à la gélose de base) code 356-4746
norme de référence NF EN ISO 11290-1, selon
le protocole ISO 16140, pour la recherche des Précoulé
Listeria spp pour tous produits d’alimentation • 90 mm x 20 boîtes code 356-3950
humaine et pour les échantillons
d’environnement. CONSERVATION/VALIDITE/LOT
La date de fin de validité de l’attestation est : • Précoulé et suppléments: + 2 - 8 °C à
15/12/2014 l’obscurité.
• Déshydraté : 15-25°C, flacon soigneusement
fermé dans un endroit sec et frais.
• La date de péremption et le numéro de lot
sont indiqués sur le conditionnement.

FORMULE THEORIQUE
BRD 07/12 – 12/06
METHODES ALTERNATIVES D’ANALYSES POUR Peptones 20 g
L’AGROALIMENTAIRE Extrait de levure 1g
Certifié par AFNOR Certification Pyruvate de sodium 2g
[Link]
Citrate de fer ammoniacal 0,5 g
Maltose 1g
Chlorure de sodium 4g
VALIDATION AOAC-RI
Chlorure de Lithium 10,5 g
RAPID’Listeria spp est validé AOAC Research
Silice 20 g
Institute selon le protocole « Performance
Activateurs de croissance 2g
Methods Tested ».
Mélange chromogénique 75 mg
Certificate n° : 080701.
Mélange antibiotique 40 mg
Agar 12 g
REFERENCES NORMATIVES
Eau distillée 1000 ml
Département US de la Santé et des Services
Humains, Administration de l’Alimentation et de
pH final (25°C) = 7 - 7.5
la Santé, Centre pour la sécurité alimentaire et
la nutrition appliquée, Bactériologique,
Analytique, Manuel en ligne, Janvier 2003.

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AUTRE(S) PRODUIT(S) NECESSAIRE(S) PROTOCOLE

NON FOURNI(S) • Recherche des Listeria spp dans ηg ou
• Diluant Tryptone-Sel : ηml d’echantillon:
9 ml x 25T (ex. code 355-5754) • Préparation de l’échantillon/
500 g (ex. code 356-4544) Enrichissement sélectif
5 poches de 2,3 l (ex. code 355-5791) - Ensemencer η g ou η ml de l’échantillon
dans 9 x η ml de bouillon FRASER 1/2.
• Bouillon FRASER 1/2 : - Incuber à 30 °C (± 1 °C) pendant 24 heures
Prêt à l’emploi (complet): (± 2 h).
6 flacons de 225 ml (ex. code 355-5797)
5 poches de 2,3 l (ex. code 355-5788) Note : dans le cadre de la marque NF
Déshydraté (base) : VALIDATION, les prises d’essai supérieures à
500 g (ex. code 356-4604) 25g n’ont pas été testées.
Supplément sélectif lyophilisé : Coffret de 10
flacons (ex. code 356-4616) Après incubation, le bouillon d’enrichissement
sélectif FRASER ½ peut être conservé au froid
• Gélose PALCAM : (3°C ±2°C) pendant 72h, avant ensemencement
20 boîtes de 90 mm (ex. code 356-3674) de RAPID’Listeria spp.
Déshydraté 500 g (ex. code 356-4754)
Supplément (ex. code 356-4752) • Isolement et Incubation
- Prélever 0,1 ml de bouillon Fraser ½ en fin
• Gélose RAPID’L Mono : d’incubation avec une pipette stérile et les
20 boites de 90 mm (code 356-3694) déposer en goutte sur le bord "extérieur" de la
Kit (flacon + supplément) (code 355-5294) moitié de la gélose RAPID’Listeria spp (schéma
1).
Voir Fiche(s) Technique(s) correspondante(s) - Avec un écouvillon stérile, étaler par va et
vient sur la moitié de la boîte (schéma 2)
MATERIEL NECESSAIRE NON FOURNI - Avec une pipette Pasteur stérile, en partant de
(liste non exhaustive) la fin de l’étalement, isoler en stries
• Balance "relativement serrées" l’étalement sur toute la
• Sacs de pesée stériles boite. (schéma n°3)
• Broyeur - Incuber les boîtes à l’envers à 37°C ( ± 1°C)
• Agitateur-homogénéisateur pendant 24h (± 2 h).
• Boîtes de Pétri stériles (Ø = 90 ou 140 mm)
• Pipettes stériles (0,1 ml ; 1 ml…..) Schéma 1 :
• Ecouvillons stériles
• Pipettes Pasteur stériles Dépôt 0,1 ml
• Bains-marie avec une précision de ± 1 °C
• Etuve ou enceinte thermostatée avec une Schéma 2 : Ecouvillon
précision de ± 1 °C
• Tout matériel courant d’un laboratoire

PREPARATION DU MILIEU DESHYDRATE

MODE D’EMPLOI
« Toujours agiter avant chaque utilisation » Schéma n°3 :
Dissoudre 71,5 g de poudre dans 950 ml d’eau Départ
distillée. Stériliser à l’autoclave à 121°C
pendant 15 minutes. Refroidir à 47-50°C. Pour
1 litre de milieu, ajouter aseptiquement 2
flacons de supplément 1 (code 356-4745)
reconstitués chacun avec 25 ml d’eau stérile. Pipette stérile
Bien homogénéiser. Pour 1 litre de milieu, Arrivée
ajouter 2 flacons de 5 ml de supplément 2
(code 356-4746). Bien homogénéiser. pH 7 –
7,5. Répartir en boites de Pétri stériles. • Lecture
Conserver le flacon soigneusement fermé dans - Réaliser une lecture après l’incubation.
un endroit sec et frais. Les Listeria spp présentent des colonies
Taux de reconstitution : 71,5 g /L caractéristiques sur RAPID’Listeria spp de
500 g de poudre permettent de réaliser 7 couleur bleues à bleues vertes.
litres de milieu
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Note : La lecture jusqu’à 48 heures d’incubation suffisants pour s’assurer de la validité du

de la gélose RAPID Listeria spp est possible. résultat rendu.

Après incubation, les géloses RAPID’Listeria • Expression des résultats/Calculs

spp peuvent être conservées au froid Se reporter aux normes ISO 11290-1 et 2, ISO
(3°C ±2°C) pendant 48h avant lecture et 7218
confirmation éventuelle.
PRECAUTIONS D’EMPLOI
Note 1 : - Les précautions d’usage relatives à la mani-
Dans le cas d’absence de colonies pulation de produits potentiellement conta-
caractéristiques sur RAPID’Listeria spp, on peut minés, dans un laboratoire de microbiologie
conclure à l’absence de Listeria spp (et donc à doivent être observées.
l’absence de Listeria monocytogenes). - Avant d’utiliser les boîtes de RAPID’Listeria
spp, laisser sécher, selon la norme ISO 7218,
Note 2 : à 25 °C - 50 °C jusqu’à disparition des
En cas de présence de colonies gouttelettes à la surface du milieu. Toutefois,
caractéristiques sur RAPID’Listeria spp la éviter un séchage prolongé qui pourrait altérer
confirmation et l’identification des espèces peut les performances du milieu.
être réalisée. - Respecter les Bonnes Pratiques de
Laboratoire (EN ISO 7218).
• Confirmation des colonies caractéristiques
Dans le cadre de la marque NF VALIDATION, CONTROLE QUALITE
la confirmation doit être effectuée selon une Tous les produits fabriqués et commercialisés
des manières suivantes : par la société Bio-Rad sont placés sous un
système d'assurance qualité de la réception
1- Par l’utilisation des tests classiques décrits des matières premières jusqu'à la commer-
dans les méthodes normalisées par le CEN ou cialisation des produits finis.
l’ISO (en incluant l’étape de purification)ou par Chaque lot du produit fini fait l'objet d'un
l’utilisation de sondes nucléiques ayant fait contrôle de qualité et il n'est commercialisé que
l’objet d’une validation comme par exemple la s'il est conforme aux critères d'acceptation.
PCR iQ-Check™ Listeria spp. (code 357-8113) La documentation relative à la production et au
à partir des colonies isolées (avec ou sans contrôle de chaque lot est conservée.
l’étape de purification).
QUALITE ET PERFORMANCES DU TEST
2- Repiquage par spot d’au moins une colonie
Aspect des colonies
isolée à partir de RAPID’Listeria spp, sur gélose après 24 heures d’incubation
RAPID’[Link], complété par un test de Gram MICRO- à 37 °C
et de catalase. Il est possible de confirmer ORGANISMES
jusqu’à 15 colonies sur une boite de gélose CROISSANCE COULEUR
RAPID’[Link]. Listeria Bleue
Ou Repiquage par spot d’au moins une monocytogenes +
ATCC 35152
colonie isolée à partir de RAPID’Listeria spp, Listeria innocua Bleue
sur gélose PALCAM. Il est possible de ATCC 33090 +
confirmer jusqu’à 15 colonies sur une boite de Escherichia coli
gélose PALCAM. ATCC 25922 Inhibition NA

Enterococcus
3- L’utilisation de toute autre méthode faecalis Inhibition NA
certifiée NF VALIDATION, de principe ATCC 19433
NA = Non applicable
différent du RAPID’ Listeria spp. Le protocole
validé de la seconde méthode devra être
respecté dans son ensemble, c’est à dire que MOTS CLES
toutes les étapes antérieures à l’étape RAPID’Listeria spp / Listeria / Listeria
intermédiaire de laquelle on repart pour la monocytogenes / Détection / Dénombrement /
confirmation doivent être communes aux deux Produits alimentaires/ Environnement / Fraser /
méthodes. Glucosidase / Chromogénique / Milieu.

En cas de résultats discordants (positifs par la

méthode RAPID’ Listeria spp , non confirmé par
l’une des options décrites ci-dessus) le
laboratoire devra mettre en œuvre les moyens
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BIBLIOGRAPHIE
• OTTAVIANI F., OTTAVIANI M., AGOSTI M.
(1997b): Differential agar medium for Listeria
monocytogenes. Quimper Froid Symposium
Proceedings p6. ADRIA Quimper France. 16-18
June 1997.

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