Université Mustapha Ben Boulaid Batna-2
Faculté : SNV
Département : Microbiologie/Biochimie
Spécialité : Microbiologie (L3)
TD4 d’enzymologie
Exercice01 : L’étude de la cinétique de deux (02) enzymes A et B a donné les résultats
mentionnés dans le tableau ci-dessous.
1) Tracer la courbe en présentant la vitesse en fonction de [S] et déduire le type des enzymes
A et B
2) expliquer l’allure des courbes.
Solution d’ exercice 01 :
La courbe A représente v= f([S] pour une enzyme Michaelienne et la courbe a une allure
hyperbolique indiquant l’influence de la concentration du substrat .
La courbe B représente v= f([S] pour une enzyme allostérique et la courbe a une allure
sigmoïdale indiquant un effet coopératif( Quand une molécule ligand L (substrat, inhibiteur
ou activateur) se fixe sur un des sites disponibles sur l’enzyme allostérique, elle induit une
modification conformationnelle de l’enzyme transmise aux autres sites susceptibles de lier L).
Exercice 02 :
La phosphotransacétylase catalyse la réaction :
Acétyl-CoA + Pi acétylphosphate + CoA-SH
La constante de Michaelis( Km) de la phosphotransacétylase de Bacillus subtilis pour
l’acétyl-CoA est 6.10-4 M. En présence du palmityl-CoA , qui est un inhibiteur compétitif de
la phosphotransacétylase , à la concentration de1,8.10-5 M, on a mesuré vi (μmoles d’ester
clivé par minute par mg de protéine) pour différentes concentrations initiales d’acétyl-CoA.
A l’aide de la présentation de lineweaver-Burk, déterminer la constante de dissociation Ki du
complexe enzyme-inhibiteur.
Solution d’ exercice 02 :
Pour déterminer la constante de dissociation Ki du complexe enzyme-inhibiteur , on a
besoin de calculer Le Kmʹ( en présence d’inhibiteur) à l’aide de la représentation de
Lineweaver-Burk( 1/V= f(1[S]) ) qu’une droite qui coupe l’axe des ordonées (1/V) en
1/Vmax et celui des abscises à( -1/Km) qui nous permet de déterminer facilement les Km et
Vmax d’une cinétique à partir du graphe.
1/V et 1/[S] sont présentés sur le tableau ci-dessous
* La droite obtenue, après extrapolation coupe l’axe 1/[S]( 1/[ acétyle CoA]) en un point
d’abscisse – 1/Kmʹ = - 0.1x104 M-1
Connaissant : Km =6.10 -4M au lieu de 6.10-5
[I] = 1.8.10-5 M
On doit calculer le Kmʹ à partir du graphe comme suit :
-1/Kmʹ = -0.1x104 ⇒ Kmʹ= -1/-0.1x104 M-1 = 10x 10-4 M
Sachant que l’inhibition et compétitve( mentionnée dans l’exercice) .
Donc Kmʹ =Km (voir chapitre05)
10x10-4 = 6x10-4( 1+ 1.8x10-5/ Ki)
10x10-4 = 6x10-4+ 6x10-4 x1.8x10-5 / Ki
10x10-4 – 6x10-4 = 10.8x 10-9
4x10-4 = 10.8x10-9 / Ki
Ki = 10.8 x10-9/ 4x10-4
Ki = 2.7x10-5 M
Exercice03 :
L’activité d’une enzyme est mesurée en fonction de la concentration en substrat, en absence et
en présence d’un inhibiteur à une concentration de mM. On trouve les résultats suivants :
1 Déterminer Vmax et Km en absence et en présence de l’inhibiteur.
2 Indiquer le type d’inhibition en justifiant votre réponse.
3 Calculer la constante KI.
Solution exercice 03 :
Pour déterminer Vmax et Km on applique la méthodes la plus pratique et facile qui consiste
en représentation de Lineweaver-Burk ( 1/V= f( 1/[S] ) et on doit calculer 1/[S et sur 1/V
comme ils sont présentés sur le tableau ci-dessous.
1) Détermination des Km et Vmax
A)- en absence de l’inhibiteur
-1/Km = - 0.1x10-6 M ⇒ Km = 1/0.1x10-6 M = 10x 106 M-1
1/Vmax= 0.025 ⇒ Vmax = 1/0.025 = 40 μ mol/min
B)- en présence de l’inhibiteur
- 1/Kmʹ= - 0.05 x10-6 M ⇒ Kmʹ = -1/-0.05x10-6 M = 20x106 M
1/Vmaxʹ = 0.025 ⇒ Vmaxʹ = 1/0.025 = 40 μmol/min
2)- On constate que la Vmax n’est pas modifiée( Vmax= Vmaxʹ) tandis-que Km est
changeé( Km<Kmʹ) .
2) A partir de ces résultats ci-dessus( vmax inchangée et le Km modifié) on peut conclure
que le type de l’inhibition est compétitif.
3) Sachant que l’inhibition et compétitive
Donc Kmʹ = Km( 1+ [I]/ Ki) ( voir chapitre 5)
20x106 = 10x106 (1+ 2x10-3 / Ki)
20x106 = 10x106 + 10x106 x2x10-3/ Ki
20x106 – 10x106 = 20x103 / Ki
10x106 = 20x103 /Ki
Donc Ki = 20x103 /10x106 = 20/10x103
Ki= 2x10-3 M
Exercice04 :
S et I sont respectivement un substrat et un inhibiteur d’une enzyme. On mesure vi (μmole de
substrat consommé par minute) pour différentes concentrations initiales de S, en l’absence et
en présence de I( à la concentration de 10-6 M).
1)- Porter en fonction de 1/[S], en l’absence et en présence de I.
2)- Préciser le type de l’inhibition exercée par I sur l’enzyme
3)- Déterminer Km et Vmax en l’absence et en présence de I
Solution exercice04 :
1- Pour porter 1/V en fonction de 1/[S] ( 1/V = f(1/[S]) en absence et en présence de
de linhibiteur I, on va calculer 1/V et 1/[S] sur le tableau ci-dessous
1/Vmax= 0.1 μmol/min
2) le type de l’inhibition est compétitif, car vmax est inchangée et Km est modifié.
3)-Détermination des Vmax et Km en présence et en absence de l’inhibiteur.
A)- Détermination des vmax en absence de l’inhibiteur :
A partir du graphe on détermine Vmax et on constate que 1/vmax = 1/ vmaxʹ⇒
Vmax= vmaxʹ(en présence d’inhibiteur)
1/Vmax = 0.1 ⇒ Vmax = 1/0.1 = 10 μmol/min
B)- Détermination des Km à partir du graphe
* En absence de l’inhibiteur
-1/Km = -0.4x103 ⇒ Km = -1/-0.4x103 = 2.5 x10-3 M
*
En présence de l’inhibiteur :
-1/kmʹ= - 0.2x103 ⇒ Kmʹ = -1/- 0.2x103 = 5 x10-3
Kmʹ> Km
