Chimie Analytique Instrumentale
Pr. Aimen El Orche
Spectroscopies moléculaires
UV-Visible
3ème année de Pharmacie
S5
Chimie analytique Diapositive n°
•www.um6ss.ma
Spectrophotométrie d'absorption moléculaire
(spectroscopie UV-Visible)
Chimie analytique Diapositive n° 2
Aspects théoriques :
Chimie analytique Diapositive n° 3
Chimie analytique Diapositive n° 4
Chimie analytique Diapositive n° 5
Chimie analytique Diapositive n° 6
Chimie analytique Diapositive n° 7
Chimie analytique Diapositive n° 8
Chimie analytique Diapositive n° 9
Aspects théoriques :
Orbitales moléculaires :
Les orbitales moléculaires (O.M) se forment par combinaison linéaire des
orbitales atomiques (O.A) ou plus communément la CLOA.
Le rapprochement des atomes entraîne le recouvrement des O.A et la
formation d’ O.M.
Lorsque deux O.A se combinent, elles
donnent 2 O.M:
E
O.M anti-liante
- une liante : d'énergie inférieure à
celle des O.A
- une anti-liante, d'énergie supérieure O.A O.A
à celle des O.A
Les doublets libres des hétéroatomes
forment les orbitales non liantes (n). O.M liante
Ex: O, S, N...
Chimie analytique Diapositive n° 10
Aspects théoriques :
Transitions possibles :
Chimie analytique Diapositive n° 11
Aspects théoriques :
Transitions possibles :
Chimie analytique Diapositive n° 12
Aspects théoriques :
Spectres d’absorption moléculaire :
Chimie analytique Diapositive n° 13
Aspects théoriques :
Spectres d’absorption moléculaire :
Chimie analytique Diapositive n° 14
Aspects théoriques :
Spectres d’absorption moléculaire :
Spectres de bandes A = f()
- Niveaux d'énergie électronique (+ rotationnels et vibrationnels)
Zones spectrales :
UV: 100 à 400 nm
En pratique, on travaille à partir de 200 nm, car les UV sont absorbés par l'O2
de l’air et par le matériel ( cuve de mesure)
Visible: 400 à 800 nm
Chimie analytique Diapositive n° 15
Aspects théoriques :
Spectres d’absorption moléculaire :
Groupements chromophores :
Ce sont des groupements insaturés qui sont responsable de l'absorption de la
molécule.
Chimie analytique Diapositive n° 16
Aspects théoriques :
Spectres d’absorption moléculaire :
Groupements chromophores :
Chimie analytique Diapositive n° 17
Aspects théoriques :
Spectres d’absorption moléculaire :
Groupements auxochromes :
Un auxochrome est, dans une molécule, un groupement d'atomes ionisable
pouvant changer la fréquence (et donc max) d'absorption
d'un chromophore.
Auxochromes acides :
Auxochromes basiques :
Les éléments halogènes jouent aussi un rôle auxochrome en intensifiant la
couleur.
Atomes halogènes :
Chimie analytique Diapositive n° 18
Aspects théoriques :
Spectres d’absorption moléculaire :
Effet du pH :
Selon le pH, on peut assister à une modification de la structure de la molécule
si elle possède des propriétés acido-basiques.
Exemple : phénol
Passage en milieu basique :
→ Augmentation la max
→ Augmentation de l’absorbance ().
Chimie analytique Diapositive n° 19
Aspects théoriques :
Spectres d’absorption moléculaire :
Effet du solvant :
Selon la polarité du solvant, l’espacement des niveaux d'énergie change.
→ Changement de l’énergie nécessaire aux transitions : n → * et → * .
Exemple : Transition n → *
Stabilisation des électrons n en solvant polaire par création de liaison hydrogène .
Exemple : max de l’acétone dans
Eau 265 nm
Méthanol 270 nm
Chloroforme 276 nm
Chimie analytique Diapositive n° 20
Aspects théoriques :
Spectres d’absorption moléculaire :
Effet du solvant :
Contre exemple: Transition → *
Stabilisation de l’orbitale * en solvant polaire car * est plus polaire que .
Chimie analytique Diapositive n° 21
Aspects théoriques :
Spectres d’absorption moléculaire :
Effet du solvant :
Solvant Pas utilisable sans
erreur au-dessous de
Eau (H2O) 200 nm
Cyclohexane (C6H12) 210 nm
Méthanol (CH3OH) 210 nm
Ethanol (CH3CH2OH) 210 nm
Hexane (C6H14) 215 nm
Ether diéthylique ((CH3CH2)2O) 215 nm
Dichlorométhane (CH2Cl2) 240 nm
Chloroforme (CHCl3) 250 nm
Tétrachlorométhane (CCl4) 270 nm
Chimie analytique Diapositive n° 22
Aspects théoriques :
Spectres d’absorption moléculaire :
Qualificatifs des effets sur max et (Absorbance) :
Chimie analytique Diapositive n° 23
Aspects théoriques :
Spectres d’absorption moléculaire :
Qualificatifs des bandes :
Lors de l’étude descriptive d’un spectre UV- visible, on considère 4 types de
bandes : E, K, B et R.
- Bandes E comme éthyléniques dues à des groupements éthyléniques.
Elles sont intenses : > 10 000
située vers les basses longueurs d'onde.
Exemple: 170 nm pour C=C
Elles sont dues aux chromophores C = C ou C C ; transition : → *
Chimie analytique Diapositive n° 24
Aspects théoriques :
Spectres d’absorption moléculaire :
Qualificatifs des bandes :
- Bandes K bandes de conjugaison (Konjugierte : en allemand)
Elles correspondent à des doubles liaisons conjuguées
Transition électronique : → *
élevé: > 10 000
Elles apparaissent à des longueurs d'onde supérieures à 200 nm
Exemple : butadiène 217 nm
C=C—C=C
Chimie analytique Diapositive n° 25
Aspects théoriques :
Spectres d’absorption moléculaire :
Qualificatifs des bandes :
- Bandes B comme benzénoïdes, correspondent à des noyaux aromatiques.
Apparaissent vers 250 nm, d’intensité beaucoup plus faible: 1000 < < 2000
Il s'agit toujours de transitions → *
- Bandes R comme radicalaires, sont dues à la présence dans la molécule
d’hétéro-atomes (S, P, O,...)
Elles correspondent à des transitions n → *
Les maxima d’absorption se situent à des longueurs d'onde supérieures à 250 nm
Elles sont d'intensités faibles < 100.
Chimie analytique Diapositive n° 26
Aspects théoriques :
Spectres d’absorption moléculaire :
Qualificatifs des bandes :
Retenir:
Bande
E, K 10 000
B 1000
R 100
Chimie analytique Diapositive n° 27
Appareillage :
Chimie analytique Diapositive n° 28
Appareillage :
Composantes d’un spectrophotomètre UV-visible :
Sources :
Chimie analytique Diapositive n° 29
Appareillage :
Composantes d’un spectrophotomètre UV-visible :
Sélecteurs de longueur d’onde :
Monochromateur à prisme :
Chimie analytique Diapositive n° 30
Appareillage :
Composantes d’un spectrophotomètre UV-visible :
Sélecteurs de longueur d’onde :
Monochromateur à réseau :
Chimie analytique Diapositive n° 31
Appareillage :
Composantes d’un spectrophotomètre UV-visible :
Cuves – échantillon :
Quartz : 200 à 750 nm , cassable et cher !
Verre : 330 à 750 nm (visible)
Matière plastique: 350 -750 nm (visible)
Habituellement, cuves de trajet optique de
1 cm mais parfois de 0,5 cm, plus rarement de 2 à 10 cm.
Chimie analytique Diapositive n° 32
Appareillage :
Composantes d’un spectrophotomètre UV-visible :
Détecteurs :
Chimie analytique Diapositive n° 33
Appareillage :
Configurations des spectrophotomètres UV-visible :
Mono-faisceau :
Chimie analytique Diapositive n° 34
Appareillage :
Configurations des spectrophotomètres UV-visible :
Bi-faisceau :
1/ Lecture
Echantillon
Chimie analytique Diapositive n° 35
Appareillage :
Configurations des spectrophotomètres UV-visible :
Bi-faisceau :
2/ Lecture
Blanc
Chimie analytique Diapositive n° 36
Appareillage :
Configurations des spectrophotomètres UV-visible :
Bi-faisceau :
Lecture simultanée
Echantillon + Blanc
Chimie analytique Diapositive n° 37
Appareillage :
Configurations des spectrophotomètres UV-visible :
Spectromètre à barrette de diodes (optique inversée) :
Chimie analytique Diapositive n° 38
Appareillage :
Configurations des spectrophotomètres UV-visible :
Spectromètre à barrette de diodes (optique inversée) :
Chimie analytique Diapositive n° 39
Applications :
Chimie analytique Diapositive n° 40
Applications :
Aspects qualitatifs :
Spectre UV-vis et structure :
Règles de
WOODWARD – FIESER
Prévision de λmax pour
les diènes conjugués.
Chimie analytique Diapositive n° 41
Applications :
Aspects qualitatifs :
Spectre UV-vis et structure :
Exemple :
253
+ 30
+ 5
+ 15 (3x5)
= 303 nm
(experimentalement : 206)
Chimie analytique Diapositive n° 42
Applications :
Aspects qualitatifs :
Spectre UV-vis et structure :
Règles de
WOODWARD – FIESER
Prévision de λmax pour
les composés carbonylés
,-insaturés.
Chimie analytique Diapositive n° 43
Applications :
Aspects qualitatifs :
Spectre UV-vis et structure :
Règles de
SCOTT
Prévision de λmax pour
les composés carbonylés
aromatiques substitués
Chimie analytique Diapositive n° 44
Applications :
Aspects qualitatifs :
Spectre UV-vis et structure :
Exemple :
246
+ 3
+ 25
= 274 nm
(experimentalement : 276)
Chimie analytique Diapositive n° 45
Applications :
Aspects qualitatifs :
Vérification d'identité de principes actifs :
Mesures pour l’identification des principes actifs selon les pharmacopées :
- Maxima d’absorption (max)
- Maxima d’absorption (max) + absorbance (A) dans solutions fixées
- Maxima d’absorption (max) + absorbance spécifique
- Minima (min) et maxima d’absorption (max) + absorbance spécifique
(A1%1cm)
- Ratio entre deux maxima ou maximum et minium dans solutions fixées.
Absorbance spécifique : absorbance qu'aurait une solution de produit de concentration
1% (1g/100ml) examinée sous une épaisseur de 1cm à une longueur d'onde donnée.
Chimie analytique Diapositive n° 46
Applications :
Aspects qualitatifs :
Vérification d'identité de principes actifs :
Chimie analytique Diapositive n° 47
Applications :
Aspects qualitatifs :
Vérification d'identité de principes actifs :
0,42
0,24
Chimie analytique Diapositive n° 48
Applications :
Aspects qualitatifs :
Vérification d'identité de principes actifs :
Chimie analytique Diapositive n° 49
Applications :
Aspects qualitatifs :
Vérification d'identité de principes actifs :
0,95
Chimie analytique Diapositive n° 50
Applications :
Aspects qualitatifs :
Vérification d'identité de principes actifs :
Chimie analytique Diapositive n° 51
Applications :
Aspects qualitatifs :
Vérification d'identité de principes actifs :
1,18
0,94 0,96
Chimie analytique Diapositive n° 52
Applications :
Aspects quantitatifs :
Mesure de l’absorbance A de l’analyte (ou de son dérivé) avec la
concentration c (inconnue)
x
x
Détermination de la concentration cx:
En utilisant la loi de Beer-Lambert
En utilisant une solution comparative
En utilisant une courbe d’étalonnage
Chimie analytique Diapositive n° 53
Applications :
Aspects quantitatifs :
Chimie analytique Diapositive n° 54
Applications :
Aspects quantitatifs :
Cette loi, qui ne concerne que la fraction de la lumière absorbée, est vérifiée dans
les conditions suivantes :
la lumière utilisée doit être monochromatique ;
les concentrations doivent être faibles ;
la solution ne doit être ni fluorescente ni hétérogène ;
le soluté ne doit pas donner lieu à des transformations photochimiques ;
le soluté ne doit pas donner des associations variables avec le solvant.
Chimie analytique Diapositive n° 55
Applications :
Aspects quantitatifs :
Méthode de Quantification en Spectrométrie UV-Visible
1. Construction de la Courbe d'Étalonnage :
Principe :
On mesure l’absorbance (A) de plusieurs solutions de concentrations connues (c).
Les solutions étalons sont soumises au même traitement que l’échantillon à
analyser.
On trace la courbe A=f(c), qui est une droite pour les solutions diluées.
Objectif :
Utiliser cette droite pour déterminer la concentration Cx d’une solution inconnue
en mesurant son absorbance Ax.
Chimie analytique Diapositive n° 56
Applications :
Aspects quantitatifs :
Méthode de Quantification en Spectrométrie UV-Visible
1. Construction de la Courbe d'Étalonnage :
Chimie analytique Diapositive n° 57
Applications :
Aspects quantitatifs :
Méthode de Quantification en Spectrométrie UV-Visible
Méthode Simplifiée : Une Seule Solution Étalon
Quand l'utiliser :
Lorsque des conditions rapides ou approximatives suffisent.
Procédure :
Préparer une solution étalon de référence de concentration Cr, avec une
absorbance Ar légèrement supérieure à Ax.
Mesurer l’absorbance de la solution inconnue Ax.
Formule utilisée :
Chimie analytique Diapositive n° 58
Applications :
Aspects quantitatifs :
Méthode de Quantification en Spectrométrie UV-Visible
Avantages de ces Méthodes :
Courbe d’Étalonnage :
Permet une grande précision.
Adaptée aux analyses quantitatives rigoureuses.
Méthode Simplifiée :
Rapide et simple pour des analyses approximatives ou de routine.
Chimie analytique Diapositive n° 59
Applications :
Aspects quantitatifs :
Dosage direct :
Chimie analytique Diapositive n° 60
Applications :
Aspects quantitatifs :
Dosage direct :
Chimie analytique Diapositive n° 61
Applications :
Aspects quantitatifs :
Dosage par étalonnage :
Chimie analytique Diapositive n° 62
Applications :
Aspects quantitatifs :
Dosage par étalonnage :
Chimie analytique Diapositive n° 63
Applications :
Aspects quantitatifs :
Dosage par étalonnage :
Chimie analytique Diapositive n° 64
Applications :
Aspects quantitatifs :
Exercice:
Chimie analytique Diapositive n° 65
Applications :
Aspects quantitatifs :
Dosage d’un mélange :
Rifampicine
Isoniazide
Chimie analytique Diapositive n° 66
Applications :
Aspects quantitatifs :
Dosage d’un mélange :
Chimie analytique Diapositive n° 67
Applications :
Aspects quantitatifs :
Dosage d’un mélange :
Chimie analytique Diapositive n° 68
