Université des Sciences et de la Technologie d’Oran « MB »
Faculté de Chimie Techniques d’analyse
L3 GP 2024-2025
Fiche TD 3 « Chromatographie »
CCM – Exclusion - CPG - HPLC
Exercice 1 :
On veut vérifier la présence ou l’absence de sucres et à les identifier dans deux sodas
commerciaux. Pour cela on réalise une CCM sur deux plaques en silice. Nous effectuons les
dépôts de cinq solutions: une de glucose (G), une de fructose (F), une de maltose (M) ; une de
sodas 1 (S1) et une de sodas (S2). L’éluant est le benzène. Après révélation, nous obtenons les
chromatogrammes donnés par la figure ci- dessous.
1- Analyser les chromatogrammes obtenus et conclure sur la composition des deux sodas.
2- Calculer les rapports frontaux des sucres (G) et (F). Indiquer celui le plus polaire. Justifier
votre réponse.
3- Si la phase mobile est remplacée par de l’eau, comment évolueraient les valeurs de Rf de
(G) et (F) ?
Analyse du sodas 1 (S1)
Analyse du sodas 2 (S2)
Exercice 2 :
Nous désirons déterminer le poids moléculaire de l'Aspartate Amino Transférase (ASAT) par
chromatographie d'exclusion. Pour cela, nous montons en série 5 colonnes de 25cm de long
chacune. La phase mobile (tétrahydrofurane) traverse la colonne en 3,07 min avec un débit
de 2 mL.min-1. Les résultats obtenus sont donnés par le tableau suivant :
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Poids moléculaire (Da) t (min)
2 000 000 26,5
1 040 000 26,9
390 000 28,8
110 000 31,3
10 200 36,4
3 100 39,3
680 42,8
1- Quel autre nom peut-on donner à cette technique chromatographique ?
2- Quelle est la vitesse linéaire du tétrahydrofurane ?
3- En utilisant la courbe d’étalonnage nécessaire, déterminer le poids moléculaire de
l’ASAT, sachant que son temps de rétention est de 34 minutes.
Exercice 3 :
Les conditions opératoires pour une analyse chromatographique sont les suivantes :
Longueur de la colonne 10cm Température : 20°C
Débit : 1ml/mn Teneur en méthanol : 35%
Pression en tête de la colonne : 69 105Pa Temps mort : 41s
Le tableau des résultats est le suivant :
Nom du soluté Largeur à la base ω (s) Temps de rétention réduit tr’(s)
Uracile (a) 10,9 28
Phénol(b) 13,1 141
1- Donner le type de cette chromatographie.
Calculer :
2- les temps de rétention tr.
3- le nombre de plateaux théoriques Nth en cm et en µm.
4- la hauteur équivalente aux plateaux théoriques Hept.
5- le facteur de séparation α et le facteur de résolution Rs.
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Exercice 4 :
Les mycotoxines sont des molécules toxiques libérées par les moisissures. L’analyse par CPG
des deux mycotoxines, nivalénol et déoxynivalénol, conduit à :
Colonne capillaire : 10 m x 0.53 mm Température : 260°C
Débit : 1.2 ml/mn, Vitesse linéaire : µ = 544.2 cm/min Gaz vecteur N2, Détecteur FID
ω( nivalénol) = 0.167 min ω(deoxynivalénol) = 0.176
tr ( nivalénol) = 3.9 min tr (deoxynivalénol) = 4.1 min
1- Calculez le temps mort (min) et le volume mort (mL).
2- Calculez le facteur de sélectivité α entre les deux solutés analysés.
3- Calculez le facteur de résolution Rs dans ces conditions d’analyse. Discuter.
4- Quelle colonne, de même diamètre et même phase stationnaire, faudrait-il-utiliser pour
obtenir la séparation du nivalénol et du déoxynivalénol avec une résolution de 1,5. Rs
est proportionnel à la racine de L (L étant la longueur de la colonne).
Exercice 5 :
Le chromatogramme de la nicotine a été obtenu dans les conditions suivantes (CPG, colonne
remplie, dimensions de la colonne : longueur 183 cm x 2 mm (diamètre intérieur).
Débit de la phase mobile : 20 ml/min.
Quantité injectée : 1μL.
Four : 200°C. Temps de rétention de la nicotine = 3,20 mn.
Four : 180°C. Temps de rétention de la nicotine = 6,60 mn.
1- Calculer la vitesse linéaire en cm/sec de la phase mobile dans la colonne.
2- En déduire le temps mort de cette analyse.
3- Calculer le temps de rétention de la nicotine à 160°C.
4- Peut-on éluer la nicotine en 1mn, sachant que la température limite d’utilisation de la
colonne est de 250°C.
5- Le pic de la nicotine a une largeur à mi-hauteur (demi-hauteur) de 10 sec. Calculer le
nombre de plateaux théoriques Nth et la hauteur équivalente aux plateaux théoriques
Hept.
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Rappel de cours
ω : Largeur à la base mesurée à 13.5% de la hauteur du pic.
δ : Largeur du pic à la mi hauteur, mesurée à 50%.
σ: Ecart type, c’est la demi largeur mesurée à 60.6% de la hauteur du pic.
- L’efficacité de la colonne est calculée par le nombre de plateaux théoriques :
Nth = (tr/σ)2, Nth = 16(tr/ω)2, Nth = 5.54 (tr/δ)2
- La hauteur équivalente à un plateau théorique est calculée par la relation :
HEPT = L / Nth
