‫الجمهورية الجزائرية الديمقراطية الشعبية‬

REPUBLIQUE ALGÉRIENNE DÉMOCRATIQUE ET POPULAIRE

‫وزارة التعليم العالي و البحث العلمي‬
MINISTÈRE DE L’ENSEIGNEMENT SUPÉRIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE
UNIVERSITÉ BADJI MOKHTAR – ‫جامعة باجي مختار‬
ANNABA ‫عنابة‬

FACULTÉ DES SCIENCES

DÉPARTEMENT DE BIOLOGIE
LABORATOIRE DE NEUROENDOCRINOLOGIE APPLIQUEE

Thèse En vue de l’obtention d’un Diplôme de Doctorat

Domaine : SCIENCE DE LA NATURE ET DE LA VIE

Filière : Sciences biologiques
Spécialité : Neurobiologie animale

Intitulé

Effets biochimiques, hormonaux et neurocomportementaux

du Fenugrec (Trigonella fœnum graecum L.) chez les rats
wistar
».
Présentée par : Mme ROUAG Faiza

Directeur de thèse : Mme FERHATI Habiba (MCA, Université Badji Mokhtar -

Annaba)
Devant un jury composé de :

Pr. BAIRI Abdelmadjid Président Université Annaba

Pr. TADJINE Aicha Examinatrice Université El Taref
Pr. GRARA Nedjoud Examinatrice Université Guelma
Dr. DJOUINI Amina Examinatrice Université Annaba

Année universitaire : 2021/2022

 REMERCIEMENTS

Parfois notre lumière s’éteint, puis elle est rallumée par

un autre être humain. Chacun de nous doit de sincères
remerciements à ceux qui ont ravivé leur flamme.
Albert Schweitzer

Je tiens à remercier spécialement ma directrice de thèse Docteur FERHATI Habiba du

laboratoire de Neuroendocrinologie Appliquée, Université Badji Mokhtar qui fut pour moi
une directrice de thèse attentive et disponible malgré ses nombreuses charges, je vous
remercie d’avoir cru en mes capacités, pour le temps et patience que vous m’avez accordé
tout au long de ces années en me fournissant d’excellentes conditions logistiques. J’ai
beaucoup apprécie travailler à votre côté tant sur le plan scientifique que sur le plan
humain.

Je tiens à remercier spécialement Professeur BAIRI Abdelmadjid pour avoir accepté de

présider le jury de soutenance, que vous soyez assuré de ma reconnaissance.

Je tiens à exprimer mes sincères remerciements à Mme TADJINE Aicha, Professeur à

l’université Chadli Benjedid El Taref qui nous honore de sa présence en
examinant ce travail.

Je voudrais aussi remercier chaleureusement Mme GRARA Nedjoud,

Professeur à l’université 08 Mai 1945 Guelma, qui a bien voulu accepté de juger
ce travail.

Je remercie très vivement Mme DJOUINI Amina, Maitre de conférences à

l’université Badji Mokhtar Annaba, qui a accepté de faire partie du jury et
d’apporter ses critiques constructives.
 Je remercie du fond du cœur Mr DJEMLI Samir qui n’a jamais hésité à me donner des
conseils et de m’orienter le long de mon parcours, que le grand Dieu vous bénisse.

Je dois à présenter un grand remerciement à Mme MEHOUEL Raouia qui été plus qu’une
sœur, je la remercie pour ces conseils, son aide morale et physique et surtout pour toutes les nuits
blanches de l’hiver qu’on a passé devant le micro-ordinateur portable pour réaliser ce travail.

Je remercie très chaleureusement toute l’équipe de recherche du laboratoire d’anatomopathologie

du EHS El Bouni surtout Dr CHENIKI Rachid ainsi que Dr HOUEDEF médecin responsable
du laboratoire El hikma aussi l’équipe du laboratoire d’analyse médical du centre CAC surtout
Dr AHCENDJABALLAH et du laboratoire central surtout Dr GOURI A. Du CHU Ibn
Roched pour leurs accueils, leur esprit d'équipe, ils m’ont beaucoup aidé pour que mon travail de
recherche se déroule dans les meilleures conditions possibles.

Je tiens ensuite à remercier mes parents pour le soutien inconditionnel dont ils ont fait preuve
depuis que mon projet professionnel est défini. Merci pour le soutien financier, moral,
psychologique et matériel. Si je suis ici aujourd'hui, c'est grâce à vous!

Je remercie toutes les personnes qui, de près ou de loin, ont participé à la réalisation de cette
thèse de fin d'études surtout Mr LAHLOU Amir.

Je remercie également tous mes ami(e)s et mes chers collègues qui m’ont beaucoup aidé et
encouragé, je leurs souhaite une très belle aventure avec mes sincères vœux de
réussite.

Un très grand merci tout particulier à Mr BOUSSENA Mabrouk et Mr BENKERMICHE

Sabri pour nos innombrables moments avec mes meilleurs souhaits de réussite dans leur vie
professionnelle et personnelle.
RÉSUMÉS
 Abstract

Fenugreek is an annual herb belonging to the Fabaceae family. It is found all over the world,
but it is of Mediterranean origin. The whole fenugreek plant can be used in herbal medicine,
but it is mainly the seeds that are of therapeutic interest.
This study aims to strengthen the scientific data on the interest of using an aromatic plant which
is fenugreek in the medical field. The administration of 2 ml of the aqueous extract of fenugreek
seeds for thirty successive days by the method of oral gavage at a dose of 250 g / l of water is
intended to assess on the one hand, the neurobehavioural effects and on the other hand its effect
on certain biochemical parameters, hormones, on body weight as well as on the histology of the
kidneys and liver of rats.
Behavioral tests performed are the light / dark box test, the raised cross maze test, the burying
logs test and the open field test. This work indicates that the consumption of the aqueous extract
of the seeds of fenugreek is beneficial to stimulate appetite and gain weight, to improve the
biochemical, hormonal status with a decrease in anxiety, on the other hand the microscopic
study shows no signs of cytotoxicity in the kidneys or in the liver.

Keywords: Wistar rat, Fenugreek, anxiety, weight, liver.

 ‫ملخص‬

‫حةةةةةةح ال ةةةةةةحل‬ ‫ةةةةة ةةةةةةس ي ةةةةة‬ ‫ةةةةةةح‬ ‫الحلبةةةةة هةةةةةةس ويةةةةة لةةةةةةة ا قةنيةةةةةةس لةةةةة وحالةةةةة ال‬
‫لكةهةةح ةةل تةةط ن لة س قيكةةل الةةنح اة بةةح الحلبة عحلكح ةةط ةةس و ة الويةةحي يلكةةل الب ة ي عيةةكط لحلةةس هةةس‬
‫ذا الهي ال ال‬
‫ا يه الحلب س اليجحل ال بس ن و ح ‪2‬‬ ‫ح ال لي ح ل حا ة النح اة بح و‬ ‫زقز الي‬ ‫ه ف ه ه ال ال ل‬
‫ل اليح قه ف‬ ‫‪ /‬لن‬ ‫ق الح ل الفي ا عج و ‪250‬‬ ‫ط ل اليسنحلص اليحاس لب ي الحلب لي ة ثالث ل ق ً ح ننحل ًح ع‬
‫ح‬ ‫ياله‬ ‫خ ى أث ه ول ع ض الي ليح الب ك ي حا‬ ‫ي ل حح‬ ‫ل حح‬ ‫النأث ا السل ك ال صب‬ ‫ل‬
‫سج الكل يكب الفئ ان‬ ‫ييزن الجس يك لك ول‬
‫ياخنبح لجال‬ ‫ياخنبح الينحه الي ف‬ ‫اؤهح هس اخنبح الصة يق الحف ف ‪ /‬اليظل‬ ‫االخنبح ا السل ك النس قن‬
‫س ةي ط اليه يزقحدة‬ ‫ن النهالك اليسنحلص اليحاس لب ي الحلب ف‬ ‫ال ل ياخنبح اليجحل اليفن ح قي ه ا ال يط ل‬
‫خ ى ظه ال ال اليجه ق و ة ي د‬ ‫ل ط ال لق ي ل حح‬ ‫يالك ي حا الح ق‬ ‫ال زن ي حس ل الححل اله‬
‫ي الكب‬ ‫سي خل ا س الكل‬ ‫وال ح‬

‫قلق يزن كب‬ ‫حلب‬ ‫ذ يقسنح‬ ‫الكلمات المفتاحية‪:‬‬

 Résumé

Le fenugrec est une herbacée annuelle appartenant à la famille des fabacées. Il se trouve partout
dans le monde, mais il est d’origine méditerranéen. La plante de fenugrec entière peut être
utilisée en phytothérapie, mais ce sont essentiellement les graines qui ont un intérêt
thérapeutique.
Cette étude vise à renforcer les données scientifiques sur l’intérêt d’utilisation d’une plante
aromatique qui est le fenugrec dans le domaine médical. L’administration de 2 ml de l’extrait
aqueux des graines de fenugrec pendent trente jours successifs par la méthode du gavage oral à
une dose de 250 g/l d’eau a pour but d’apprécier d’une part, les effets neurocomportementaux
et d’autre part son effet sur certains paramètres biochimiques, hormonaux, sur le poids corporel
ainsi que sur l’histologie des reins et du foie des rats.
Les tests comportementaux effectués sont le test de la boite claire /obscurité, le test du
labyrinthe en croix surélevé, le test d’enfouissement des billes et le test du champ ouvert.
Ce travail, indique que la consommation de l'extrait aqueux des graines du fenugrec est
bénéfique pour stimuler l'appétit et gagner du poids, pour améliorer le statut biochimique,
hormonal avec une baisse d’anxiété, d’autre part l’étude microscopique ne montre aucun signe
de cytotoxicité des reins et du foie.

Mots clés : Rat wistar, Fenugrec, anxiété, poids, foie.

 LISTE DES
FIGURES ET DES
TABLEAUX
 LISTE DES FIGURES

Figure Titre Page

Figure 1 Photographie de Trigonella foenum graecum L. 2
Figure 2 Composition du fenugrec (Trigonella foenum-graecum L.) 4
Figure 3 La trigonelline présente dans les graines de fenugrec et la vitamine 7
PP dont elle est le précurseur
Figure 4 Conditions d’élevage des rats wistar. 10
Figure 5 La nourriture des rats. 11
Figure 6 l’extrait aqueux de Fenugrec. 12
Figure 7 Traitement par la méthode du gavage oral. 12
Figure 8 Prise de poids corporel d’un rat. 13
Figure 9 Illustration schématique du champ ouvert (Open Field) 14
Figure 10 Illustration schématique du labyrinthe en croix surélevée 15
Figure 11 Illustration schématique de la boite claire/obscurité 16
Figure 12 Test d’enfouissement des billes après passage de l’animal 17
Figure 13 Diagramme de la planification expérimentale 18
Figure 14 flacon stérile contenant du formaldéhyde 10%. 19
Figure 15 Automate de biochimie Mindray. 20
Figure 16 Le Bekman Coulter Access 2 38
Figure 17 Test de Sandwich 39
Figure 18 Tests de liaison compétitifs 40
Figure 19 Prélèvement des organes 46
Figure 20 Fixation des pièces dans des bacs dans le formol dilué 47
Figure 21 Automate de déshydratation 47
Figure 22 Automate à inclusion (Model LEICA) 48
Figure 23 L’appareil d’enrobage 49
Figure 24 Technique de coupe par un microtome (Model LEICA) 50
Figure 25 Appareil de la coloration des lames (Model LEICA) 52
Figure 26 Montage des lames 52
Figure 27 Variation de la glycémie (g/l) 55
Figure 28 Variation du cholestérol total (g/l) 55
Figure 29 Variation du cholestérol-HDL (g/l) 56
Figure 30 Variation du cholestérol-LDL (g/l) 57
Figure 31 Variation du taux des triglycérides (g/l) 58
Figure 32 Variation d’Acide Urique (mg/l) 59
Figure 33 Variation d’Urée (g/l) 60
Figure 34 Variation de la créatinine (mg/l) 60
Figure 35 Variation du TGO (UI/l) 61
Figure 36 Variation du TGP (UI/l) 61
Figure 37 Variation du PAL (UI/l) 62
Figure 38 Variation d’ACTH (pg/ml) 63
Figure 39 Variation du TSH (µUI/mL) 64
Figure 40 Variation du T3 (pmol/L) 65
Figure 41 Variation du T4 (pmol/L) 66
Figure 42 Variation des paramètres du test du champ ouvert 67
Figure 43 Variation des paramètres du labyrinthe en croix surélevé 69
Figure 44 Variation des paramètres du test de boîte claire/obscurité 70
Figure 45 Variation des paramètres du test d’enfouissement des billes 71
Figure 46 Tissu rénal d’un rat du lot témoin 72
Figure 47 Tissu rénal d’un rat traité au fenugrec 73
Figure 48 Tissu hépatique d’un rat du lot témoin 74
Figure 49 Tissu hépatique d’un rat traité au fenugrec 75
Figure 50 Synthèse et sécrétion des hormones thyroïdiennes 81
Figure 51 Axe Hypothalamo-Hypophyso-Surrénalien 83
Figure 52 Axe Hypothalamo-Hypophyso-Endocrinien 84
Figure 53 Effet de stress sur la thyroïde 84
Figure 54 Représentation Graphique de Taux TSH en fonction de stress 86
 LISTE DES TABLEAUX

Tableau Titre Page

Tableau 1 Situation botanique de l’espèce Trigonella foenum-graecum L. 5
Tableau 2 Les étapes immunologiques de dosage. 46
Tableau 3 Technique de déshydratation (inclusion) 49
Tableau 4 Batterie de coloration Hématoxyline-Eosine 52
Tableau 5 Changement pondéral des rats (g) 56
 LISTE DES ABREVIATIONS

ACTH Adreno Cortico Tropic Hormone (Hormone adénocorticotrope).

AU Acide Urique
BUN Blood urea nitrogen.
CaOx calciume oxalate
CAT Catalase
CO2 Dioxyde de carbone
CRH Corticotropin-Releasing Hormone (Corticolibérine ).

CT Cholestérol total
EDTA Ethylene- Diamine- Tétra- Acétique
EPM Elevated Plus Maze
(F) Rat gavé par l’extrait aqueux du fenugrec
(G) Rat gavé par l’eau

GGT La gamma glutamyl transférase

GPx Glutathion peroxyde
GSH La glutathion
GST La glutathion -S- transférase
Gly Glycémie
HDL High density lipoprotein.

Hg Le symbole chimique du mercure

L Litre
LDH Lactate desérogènese.
LDL Low density lipoprotein.
LDL Light/Dark Box

OF Open field test (test du champ ouvert).

OMS Organisation mondiale de la santé.

 PAL Phosphatases alcalines
pg Pico gramme
pmol Pico mol
T Rat témoin
TG Triglycérides
TGO Glutamate-oxaloacetate-transaminase
TGP la glutamate-pyruvate transaminase

TRH Thyrotropin Releasing Hormone

TSH Thyréostimuline
T3 Tri-iodothyronine

T4 Thyroxine totale
UI Unité International
VLDL Very Low Density Lipoprotein.
uUI/ml Micro- Unité International par millilitre
ul Micro litre
[] Concentration
°C Degré Celsius.
 TABLE DES MATIÈRES

1. INTRODUCTION 01
2-MATERIEL ET METHODES 10
2-1- Matériel biologique 10
2-1-1-Animaux d’élevage 10
2-1-2- Condition d’élevage 10
2-1-3- Lotissement des animaux 11
2-1-4- Extrait aqueux des graines de fenugrec 11
2-2- Méthodes 12
2-2-1- Traitement des animaux 12
2-2-2- Suivi du poids corporel 13
2-2-3- Tests comportementaux 13
2-2-3-1-Test du champ ouvert 13
2-2-3-2- Test du labyrinthe en croix surélevé (Elevated Plus Maze) 14
2-2-3-3- Test de la boite claire/obscurité (Light/Dark Box ; LDB) 15
2-2-3-4- Test d’enfouissement des billes 16
2-2-4- Mise à mort et prélèvement sanguin 19
2-2-4-1- Prélèvement des organes 19
2-2-5- Dosages biochimiques 20
2-2-5-1- Dosage du glucose 20
2-2-5-2- Dosage de l’urée colore 22
2-2-5-3- Dosage de l’acide urique 24
2-2-5-4- Dosage de la créatinine 25
2-2-5-5- Dosage du cholestérol Total 26
2-2-5-6- Dosage du cholestérol-HDL 28
2-2-5-7- Dosage du cholestérol-LDL : 30

2-2-5-8- Dosage des triglycérides 30

2-2-5-9- Dosage du GOT-ASAT 32
2-2-5-10- Dosage du GPT-ALAT 34
2-2-5-11- Dosage du phosphatase alcaline (PAL) 36
2-2-6- Etude hormonale 37
2-2-6-1- Prélèvement des échantillons 37
2-2-6-2- Analyse des échantillons 37
2-2-6-3- Technologie de dosage 38
2-2-6-3-1- Test de sandwich 38
2-2-6-3-2- Tests de liaison compétitifs 39
2-2-6-4- Dosage de T3 41
2-2-6-5- Dosage de T4 42
2-2-6-6- Dosage de TSH 43
2-2-6-7- Dosage de l’ACTH 44
2-2-7- Technique histologique 46
2-2-7-1- Préparation de prélèvement 46
2-2-7-2- Fixation des pièces 47
2-2-7-3- Inclusion 47
2-2-7-4- L’enrobage 48
2-2-7-5- Coupes, étalement des coupes et coloration 49
2-2-7-6- Montage des lames 52
2-2-7-7- Examen microscopique 53
2-2-8- Traitement statistique des résultats 53
3- RESULTATS 54
4- DISCUSSION 76
5- CONCLUSION ET PERSPECTIVES 88
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 89
ANNEXES
INTRODUCTION
 INTRODUCTION

1- INTRODUCTION
Guidé par le hasard, la religion, la superstition ou encore par l’expérience, l’Homme utilise
depuis toujours des plantes pour se soigner. Dans les années cinquante, des fouilles réalisées
dans le nord de l’Irak mettent en évidence dans la grotte de Shanidar une sépulture vieille de
60 000 ans. L’analyse d’une grande quantité de pollens retrouvés dans la tombe d’un chasseur
met en évidence la présence de plusieurs plantes médicinales dont l’éphédra (Leroi-Gourhan,
1968). La présence de plantes dans cette tombe suggère qu’elles avaient une signification autant
magique que médicale (Chevallier, 2001). Pendant des milliers d'années, il semble que les
hommes aient observé les propriétés curatives ou toxiques provoquées par la consommation de
telle ou telle racine, baie ou feuille. C’est notamment grâce à l’étude du comportement des
animaux qu’ils ont pu découvrir par exemple les propriétés toxiques du laurier-rose. Ainsi,
jusqu’au XIXème siècle et l’isolement chimique des premiers principes actifs issus des
végétaux, dans chaque village, des plantes locales sous différentes formes, tisane, lotion ou
encore onguent (Leroi-Gourhan, 1968) étaient utilisées pour soigner des maladies bénignes
voire plus sévères. A partir du XXème siècle, les chimistes vont aller plus loin que l’isolement
des principes actifs et vont fabriquer des molécules synthétiques, délaissant ainsi la
phytothérapie.
Les légumineuses ou Fabaceae sont classées parmi les Angiospermes, Eudicotylédones. Elles
sont les soeurs des Polygalacée, composant avec les familles des Quillajaceae et Surianaceae,
les Fabales (Campbell et al., 2001).
Elles occupent la deuxième place, après les céréales, pour les terres cultivées et la production.
En 2004, plus de 300 millions de tonnes de légumineuses à graines ont été produites sur une
superficie de 190 millions d’hectares, soit 13% des terres cultivées (FAO, 1996).
Beaucoup d’espèces sont cultivées pour l’agronomie, la génétique, l’entomologie, la
phytopathologie et la physiologie (Baudoin et al., 2001).
On compte 475 genres et environ 16400 espèces se répartissant en trois famille : Mimosoideae,
Caesalpinoideae (Paraphylètique) et Papilionoideae (ou Fabacées) (Come et al., 2006). Elles
constituent de loin le groupe le plus important de plantes participant à la fixation de l’azote avec
des bactéries symbiotiques (Raven et al., 2007). Cependant il y a encore 40% des légumineuses
qui ont des graines riches en amidon (Fève, Haricot, Lentille, Pois, Pois chiche), en huile
(Arachide, Soja) ou en protéines (Fenugrec, Lupin, Soja) les trèfles, les luzernes, le sainfoin et
le lotie servent à l’alimentation du bétail (Come et al., 2006).

1
 INTRODUCTION

Beaucoup d’espèces sont cultivées pour l’agronomie, la génétique, l’entomologie, la

phytopathologie et la physiologie (Baudoin et al., 2001).
Les principales études de recherche, sur les légumineuses à graines, cherchent à la fois à
sécuriser la nodulation, à assurer la complémentarité entre les voies d‘assimilation et de fixation
de l’azote, et à assurer une meilleure remobilisation de l’azote des feuilles et des tiges vers les
graines (Chabbi, 2010).
Le genre Trigonella L. est un membre de la famille Fabaceae qui a été la deuxième grande
famille des plantes fleurissantes avec 650 genres et 18000 espèces (Singh et al., 2008).
Trigonella foenum-graecum L. Du nom arabe Helba est une herbe annuelle connue sous le nom
de fenugrec (Talip et al., 2011), il vient de foenum-graecum signifiant le foin grec qui est une
herbe séché pour être utiliser comme un fourrage dans le passé (Ionescu et Roman, 2013).
Le fenugrec est distribué dans la plus part des régions du monde Europe, Afrique du nord, Asie,
Argentine, Canada, Amérique, Australie, (Ionescu et Roman, 2013) il a une activité anti-
oxydante et antibactérienne et connue par les effets hypoglycémiques, hypocholestérolémie et
anti inflammatoire (Moradi et al., 2013) son usage est très recommandé, généralement en cas
de manque d'appétit (Harchane et al., 2012) et dans la préparation des aliments (avec riz en
Iran, arome de fromage en Switzer lande).
Le fenugrec est la plante la plus utilisé dans
la thérapeutique depuis les anciens temps.
En Egypte antique, il a été employé pour
soulager l'accouchement et pour augmenter
L’écoulement de lait (Fedelic et al., 2009),
et pour embaumer les morts et purifier l'air
des habitations et des lieux de culte
(Journal canadien de microbiologie,
2011). Figure 1 : Photographie de Trigonella
foenum graecum L. (Volpé et al., 2009)

Actuellement, il est utilisé par les femmes Egyptiennes pour la douleur menstruelle et comme
thé de helba pour soulager des problèmes de l'estomac des touristes (Fedelic et al., 2009), et
aussi dans la fabrication du pain (Journal canadien de microbiologie 2011).
Depuis l'ancienne temps, les Grec et les romaines ont utilisés le fenugrec dans la médecine et
comme fourrage pour les animaux (Singh et al., 2008).

2
 INTRODUCTION

Trigonella foenum-graecum L. est une

plante légumineuse annuelle, de nombreux
auteurs suggèrent que l'ancêtre direct de
l'espèce cultivée est le fenugrec sauvage T.
gladiata qui diffère de T. foenum-graecum
par l'ensemble de l'agrégat de caractères les
plus marquants : dont la tuberculination des
graines et la petite taille des gousses
(Sinskaya, 1961).
La région méditerranéenne est connue pour
être l'habitat naturel pour genre Trigonella,
il a été trouvé à l'Asie, l’Afrique et
beaucoup cultiver en Inde (Kanak et al.,
2012), fréquemment cultivés en Algérie
(Quezel et Santa, 1962).
Le nombre des espèces de Trigonella qui sont actuellement identifiés est 18 espèces mais le
genre Trigonella foenum-graecum L est la seule espèce cultivée (Helambe et Dande, 2012).
Le fenugrec est une plante annuelle de 30-60 cm de hauteur, les feuilles sont composés par trois
folioles, dentées, gris-vertes de 20-25mm de longueur. (Moradi et al., 2013).
Les fleurs de Trigonella foenum-graecum L. sont blanchâtres ou jaune pâle, les variétés
sauvages et cultivés existant avec 1 à 2 fleurs axillaires, sessiles, blanchâtres ou jaune citron
(Moradi et al., 2013).
La gousse de 5-7cm de long avec un bec persistant, chaque une portante 10-20 graines qui sont
petites de 5 mm de long, dur et jaune brunâtre (Moradi et al., 2013) (Figure2).

3
 INTRODUCTION

(a) :Trigonella fleurissante (b) : pied de Trigonella

(c) : feuilles (d) : la gousse

(e) : graines

Figure 02 : Composition du fenugrec (Trigonella foenum-graecum L.)

(a) : Trigonella fleurissante, (b) : pied de Trigonella, (c) : feuilles, (d) : gousses, (e) : graines
(Moradi et al., 2013)

4
 INTRODUCTION

Tableau 01 : Situation botanique de l’espèce Trigonella foenum-graecum L. (Rahmani M,

2017).
Règne : Plantae Sous-règne Tracheobionta
Embranchement : Magnoliophyta Sous-embranchement : Magnoliophytina
Classe : Magnoliopsida Sous-classe : Rosidea
Ordre : Fabales Famille : Fabaceae
Genre : Trigonella L. Espèce : Trigonella foenum-graecum

Les graines de T. foenum-graecum sont responsables de la plupart des propriétés médicinales.

Elles ont été utilisées depuis des millénaires notamment en médecines traditionnelles arabo-
islamique, chinoise et indienne (Saad, 2011).
En Chine, les herboristes traditionnels utilisaient ces graines en tant que tonique, pour traiter
l’asthénie et favoriser la prise de poids. Elles sont également données pendant la convalescence,
ainsi que pour traiter l’œdème des jambes, les problèmes rénaux et les affections touchant
l’appareil reproducteur masculin (Snehlata et Payal, 2012). En Inde, il existe de nombreux
autres usages traditionnels du fenugrec : les graines moulues sont couramment consommées
comme stimulant de la lactation. Les Indiens intègrent le fenugrec au Methi Pak, un aliment
traditionnel consommé pendant la grossesse et l’allaitement. Un cataplasme de feuilles est
souvent utilisé sur les brûlures et les enflures et appliqué sur le cuir chevelu pour traiter la
calvitie (Basch et al., 2003), (Basu et Srichamroen, 2010).
Dans l’ancienne Egypte, le fenugrec a été utilisé pour embaumer les momies. Quant aux
Romains, ils l’ont utilisé pour faciliter l’accouchement (Basch et al., 2003). Dans la médecine
arabo-islamique, le fenugrec est l’une des plantes recommandées par le Prophète Mohammad
(PSL) qui a dit : « Si ma communauté avait su ce qu’il y a dans le fenugrec, ils auraient payé
son pesant en or ». Broyées ou pulvérisées, ces graines peuvent être utilisées en usage externe
ou se forme de cataplasmes pour soigner les furoncles, l’urticaire et l’eczéma. En usage interne,
elles ont été utilisées pour stimuler la prise de poids, augmenter la lactation, traiter la pellagre,
l’indigestion, la dyspepsie, la bronchite, la fièvre, l’impuissance et les troubles
gastroduodénaux. Ces graines sont également connues pour augmenter la taille de la poitrine
chez les femmes et traiter les déséquilibres hormonaux (Saad, 2011).
Dans les pays du Maghreb, d’autres applications du fenugrec ont été citées. Ces graines ont été
depuis longtemps considérées comme une panacée : leur farine ou leur décocté a été
traditionnellement utilisés au Maroc pour reconstituer les forces et prendre de l’embonpoint. A

5
 INTRODUCTION

ce titre, elles sont le plus souvent incorporées à des soupes : cette indication principale concerne
les enfants rachitiques, les convalescentes les jeunes femmes désireuses de prendre du poids.
Ces grainés sont également prescrites contre l’anémie des tuberculeux. La plante est donnée
aux femmes allaitantes En usage externe, elle est préconisée sous forme de macérât en frictions
capillaires, pour fortifier et embellir les cheveux, et sous forme de farine pour réaliser des
emplâtres de consolidation des fractures (Ait, 2006).
En Algérie, ces graines étaient employées en usage interne, sous forme d’infusé, comme
fortifiant (spécialement pour les enfants), stimulant réparateur, analeptique, aphrodisiaque,
sédatif des douleurs durant l’accouchement et contre la diarrhée, l’anémie et le mal de poitrine.
En usage externe, elles sont préconisées comme émollient (Ait, 2006).
En Tunisie, L’usage du fenugrec en médecine traditionnelle est très répandu : la poudre des
graines, en suspension dans l’eau sucrée, est recommandée comme reconstituant général
notamment dans les cas d’amaigrissement, les épisodes diarrhéiques, les coliques intestinales,
la fièvre et les gastralgies du nourrisson. Cette poudre prise à jeun et mélangée avec de l’huile
d’olive est efficace en cas de rhume. Le décocté en gargarisme est utilisé dans le traitement des
angines et le macérât des graines dans l’eau de rose en gouttes oculaires serait efficace dans les
cas de conjonctivites. Les abcès et les furoncles murissent par application d’un cataplasme de
la poudre dégraines travaillée en pâte avec un peu d’eau (Boukef, 2006).
La graine de fenugrec est riche en protéine (20 à 30%) avec une teneur importante en
nucléoprotéines (Ghedira et al., 2010). Elle renferme des lipides (7 à 10%) dont 1,5 à 2%
de lécithine et une huile grasse dans l’embryon (renfermant principalement de l’acide linoléique
et de l’acide linolénique), des C-flavonoïdes (vitexines, vicénines, dérivés de l’orientine...etc.)
et des stérols (cholestérol, sitostérol, etc.) (Wichtl et Anton, 2003) (Bruneton, 2009). Les
glucides sont particulièrement abondants (20 à 45%) notamment des fibres (cellulose,
hémicellulose, etc.), de la phytine (=sel calcique et magnésien de l’acide
inositolhexaphosphorique), des mucilages (surtout localisés sur les parois cellulaires de
l’endosperme et constitués de chaînes de mannoses et de chaînes de galactoses avec de faibles
proportions de xylose) (Wichtl et Anton, 2003), aussi de la trigonelline qui est la méthylbétaine
de l’acide nicotinique (un précurseur de la vitamine PP) et de la trigonellène considérée comme
toxique en cas d’abus et enfin une huile essentielle responsable de l’odeur de la plante.

6
 INTRODUCTION

Figure 3: La trigonelline présente dans les graines de fenugrec et la vitamine PP dont elle est
le précurseur (Wichtl et Anton, 2003)

Plusieurs effets bénéfiques sur la santé ont été attribués à la consommation de fenugrec. Ces
effets ont été mis en évidence lors d’essais effectués aussi bien chez l’animal que chez l’homme.
L’administration de graines de fenugrec à des rats diabétiques a normalisé la peroxydation
lipidique élevée ainsi que la sensibilité accrue au stress oxydatif associé à l’épuisement des
antioxydants présents dans le foie, les reins et le pancréas et ce de manière dose-dépendante
(Lim, 2012).
L’extrait aqueux des graines de fenugrec a montré des effets protecteurs importants en
soulageant l’ulcère gastrique et la gastrite. Il est probable que l’activité anti-oxydante pourrait
être liée à l’effet gastro protecteur des graines. Les polysaccharides et/ou les flavonoïdes
seraient responsables de la gastro protection et de l’activité anti sécrétoire des graines de
fenugrec. Ces graines pourraient ainsi avoir la capacité de traiter l’ulcère gastrique chez le rat
(Helmy, 2011).
Des études expérimentales sur des rats ont montré que l’administration d’un extrait de graines
de fenugrec enrichi en stéroïdes renforce l’activité des enzymes digestives et donc un effet
bénéfique du fenugrec sur la digestion. Une augmentation significative de l’apport alimentaire,
des mouvements de l’intestin ainsi que la motivation à manger ont été notées. De même, la forte
teneur en fibres dans la graine de fenugrec contribue à soulager les maux observés lors de la
constipation (Meghwal et Goswami, 2012). L’augmentation des activités des lipases
pancréatiques et intestinales, observée lors d’études réalisées sur des animaux, fournit une base
théorique pour l’utilisation du fenugrec dans la dyspepsie (Braun, 2010). Aussi le fenugrec
offre une alternative dans le traitement et la prévention du diabète et de ses complications (Basu
et Srichamroen, 2010).

7
 INTRODUCTION

D’autres études ont montré que la consommation de fenugrec prévient des troubles
métaboliques induits par l’alimentation, y compris la résistance à l’insuline, la dyslipidémie et
la stéatose hépatique. La dose efficace étudiée chez la souris est d’environ 0,25 g/kg/j c’est-à-
dire 1,2% du régime alimentaire.
Bien que le mécanisme d’action ne soit pas encore élucidé, il semble que les fibres et les
saponines stéroïdiques internes agissent avec les sels biliaires dans le tractus digestif. La4-
hydroxy-isoleucine, acide aminé inhabituel isolé du fenugrec, a été testée chez des hamsters
dyslipidémiques. Une diminution significative des niveaux plasmatiques de triglycérides de
33%, du cholestérol total de 22% et d’acides gras libres de 14%, une augmentation de 39% du
ratio HDL cholestérol/cholestérol total ont été observées (Braun, 2010). L’extrait hydro-
alcoolique de graines de fenugrec administré à la dose de 200 mg/kg a présenté une activité
anti-inflammatoire significative selon le modèle de l’oedème aigu de la patte du rat (Lim,
2012).
Il a été démontré aussi que l’extrait aqueux des graines de fenugrec administré à des souris aux
doses de 50, 100 et 200 mg par kg de poids corporel pendant 10 jours a pu exercer un effet
stimulant sur les fonctions immunitaires. On note une élévation significative de la réaction
d’hypersensibilité retardée à des doses de 50 et 100 mg/kg. L’immunité humorale a été
augmentée uniquement à la dose de 100 mg/kg. En outre, l’extrait est responsable d’une
augmentation significative de l’indice et de la capacité phagocytaires des macrophages (Lim,
2012), (Meghwal et Goswami, 2012).
Un extrait enrichi en polyphénols issu des graines de fenugrec a montré un effet cytoprotecteur
contre la toxicité induite par l’éthanol et l’apoptose dans les cellules hépatiques. D’autres études
ont suggéré que les composés poly phénoliques des graines de fenugrec pourraient être
considérés comme cytoprotecteurs contre les lésions hépatiques induites par l’éthanol (Lim,
2012).
Les graines de fenugrec possèdent des activités ostrogéniques pourraient constituer une
alternative appropriée au THS (traitement hormonal substitutif). L’extrait chloroformique a
montré la capacité d’agir comme un agoniste du récepteur d’oestrogène (Lim, 2012). On a noté
une activité défertilisante chez le rat albinos par une intervention sur le métabolisme du
cholestérol. Des actions anti-androgénique et métabolique de l’extrait aqueux de fenugrec ont
été mises en évidence chez des rats (Ghedira et al., 2010). Par ailleurs, il a été démontré que
la graine de fenugrec est un galactagogue naturel efficace.
En effet, des études confirment que la tisane de graines de fenugrec est utile pour la promotion
et l’augmentation de la production du lait maternel dans les jours qui suivent l’accouchement.

8
 INTRODUCTION

Son effet est plus net pendant les deux premières semaines après l’accouchement (Sakka et al.,
2014).
Une étude a montré que les symptômes systémiques de la dysménorrhée (fatigue, maux de tête,
nausées, vomissements, manque d’énergie, syncope) ont diminué chez les femmes ayant ingéré
des graines de fenugrec. Ces données suggèrent que la prescription de la poudre de graines de
fenugrec pendant la menstruation peut réduire la sévérité de la dysménorrhée (Younesy et al.,
2014).
L’extrait éthanoïque de graines de fenugrec a présenté une activité antibactérienne contre des
bactéries Gram positifs et négatifs notamment vis-à-vis de Escherichia coli, Salmonella typhi,
Vibrio cholerae, Staphylococcus aureus et Bacillus subtilisé (Lim, 2012).
Ce travail s’inscrit dans le cadre d’une étude portant sur la recherche et la valorisation des
plantes à intérêt médicinale et thérapeutique. Il s’articule sur l’étude de l’effet de l’extrait
aqueux des graines du fenugrec, utilisé en médecine traditionnelle sur la prise de poids, sur
l’amélioration de plusieurs paramètres plasmatiques biochimiques, hormonaux et sur le
neurocomportement chez le rat wistar.

9
MATERIEL
ET
MÉTHODES
 MATERIEL ET MÉTHODES

2- MATERIEL ET METHODES :
2-1- Matériel biologique :
2-1-1- Animaux d’élevage
Le matériel biologique de base que nous avons utilisé est le rat blanc de la souche wistar,
provenant de l’institut pasteur d’Alger. Ces rats sont des mammifères de l’ordre des rongeurs.
La puberté survient entre 50 et 60 jours après la naissance chez les deux sexes. Une ratte en
bonne santé peut vivre entre 2 ans et demi à 3 ans en fonction de la souche, des conditions
environnementales et d’autres variables (Baker et al., 1980).
A leur arrivée, ces rats pesaient en moyenne 80 grammes, et au moment de l’expérimentation
ils pesaient en moyenne 200± 05 grammes.

2-1-2- Condition d’élevage

Les animaux ont été élevés dans des cages en polyéthylène, tapissées d’une litière composée de
copeaux de bois (voir figure 4). Les cages ont été nettoyées et la litière changée une fois tous
les 2 jours. Ces animaux ont été acclimatés aux conditions de l’animalerie, à une température
de 25±2°C, une hygrométrie de 50% et une photopériode naturelle.

Figure 4: Conditions d’élevage des rats wistar (Photo personnelle)

La nourriture apportée aux animaux est fabriquée sous forme de bâtonnets (figure 5) constitués
de maïs, d’orge, de lait et de compléments vitaminés (unité Bénbayda, Guélma). Quant à l’eau
de boisson, elle est présentée aux rats dans des biberons adaptés aux cages nettoyées
régulièrement.

10
 MATERIEL ET MÉTHODES

Figure 5: La nourriture des rats (Photo personnelle)

2-1-3- Lotissement des animaux

Après une période d’adaptation, nous avons choisi 21 rats mâles en fonction du poids (200± 5
g) que nous avons séparé en trois lots expérimentaux dont un lot témoin, un lot gavé par l’eau
minérale et un lot traité par l’extrait aqueux des graines de fenugrec :
-Lot témoin (T) n= 7.
-Lot gavé par l’extrait aqueux du fenugrec (F) n= 7.
-Lot gavé par l’eau minérale (G) n=7.
L’identification des rats se fait par numérotation au niveau de la queue avec un marqueur en
couleur permanente.

2-1-4- Extrait aqueux des graines de fenugrec

L’extrait aqueux du fenugrec a était préparé selon le procédé d’infusion (voir figure 6).
Deux cent cinquante grammes (250g) de graines de fenugrec ont été plongées dans un litre (1L)
d’eau minérale portée à ébullition et maintenue à chauffer pendent cinq minutes (5 min). La
conservation de l’extrait se fait au réfrigérateur jusqu’à utilisation (Harchane et al., 2012)

11
 MATERIEL ET MÉTHODES

Figure 6: l’extrait aqueux de Fenugrec (Photo personnelle)

2-2- Méthodes :
2-2-1- Traitement des animaux
L’administration de l’eau et de l’extrait aqueux des graines de fenugrec a été réalisée par voie
orale par la méthode du gavage oral, ce dernier été effectué à 08h:30 quotidiennement pendant
30 jours chez les rats des lots (G) et (F) (Figure 7).

Figure 7: Traitement par la méthode du gavage oral (Photo personnelle)

12
 MATERIEL ET MÉTHODES

2-2-2- Suivi du poids corporel

Le poids des rats a été pris quotidiennement du premier jour (J1) jusqu’au dernier jour de
l’expérimentation (J30), à l’aide d’une balance numérique (figure 8).

Figure 8: Prise de poids corporel d’un rat (Photo personnelle)

2-2-3- Tests comportementaux

Le comportement anxieux inné est une composante fondamentale du comportement général des
rongeurs. Il se manifeste par l’attitude de l’animal à avoir peur lorsqu’il est mis, sans expérience
préalable, dans un environnement non protégé (Chouba, 2016).
Ce comportement peut être évalué à l’aide de dispositifs expérimentaux validés dont les plus
utilisés sont le test du champ ouvert (Open Field ; OF), le labyrinthe en croix surélevé (Elevated
Plus Maze ; EPM), la boite claire/obscurité (Light/Dark Box ; LDB) et autres. Dans cette étude,
les tests ont été réalisés à la fin de l’expérimentation.

2-2-3-1-Test du champ ouvert (Open Field ; OF) (Hall, 1934)

Le test de l’Open Field, initialement décrit par Hall en (1934), a été développé dans le but de
mesurer les différences de réactivité émotionnelle chez le rat.
Le dispositif se compose d’une base entourée par des parapets en plexiglas dont les mesures
sont respectivement de 70cm×70cm×40cm. Le plancher est sous forme de carrés de
10cm×10cm de diamètre, il a été divisé en deux zones : zone centrale et zone périphérique
dont chacune est de 35cm.

13
 MATERIEL ET MÉTHODES

Le test de champ ouvert est réalisé pendant 5mn et l'animal est placé au centre du dispositif
(Sáenz et al., 2006). Son déplacement permet de mesurer le nombre de carrés traversés ainsi
que le temps passé dans chaque zone. De ce fait, ce test indique l'activité locomotrice et le
comportement anxieux respectivement. Ce dernier est d’autant plus prononcé quand le rat passe
plus de temps dans la zone périphérique. Quant à la zone centrale, son exploration représente
un signe de moindre anxiété.

Figure 09 : Illustration schématique du champ ouvert (Open Field) (Hall, 1934).

2-2-3-2- Test du labyrinthe en croix surélevé (Elevated Plus Maze) :

Le labyrinthe en croix surélevé est utilisé pour mesurer le degré d’anxiété chez les rongeurs
(Handley et Mithami, 1984).
Le dispositif consiste en un labyrinthe surélevé et croisé avec deux bras ouverts (50 cm × 10cm)
et deux bras fermés (50cm × 10cm ×45 cm ; Figure 02). L’appareil se situe à une hauteur de 50
cm au-dessus du sol (Patin et al., 2005). Ce test est réalisé pendant 5 min en plaçant l’animal
dans l’aire central face au bras ouverts. Etant donné que le rat craint les espaces vides et hauts
; son exploration dans les bras ouverts témoigne d’un comportement
moins anxieux. Plus l’animal est localisé dans les bras fermés plus son comportement est
désigné comme anxieux (Pellow et al., 1985). A l’issue de ce test, les paramètres suivants sont
mesurés :
- Le temps passé dans les bras ouverts et le temps passé dans les bras fermés.
- le nombre d’entrée dans les bras fermés et le nombre d’entrée dans les bras ouverts.

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 MATERIEL ET MÉTHODES

Figure 10 : Illustration schématique du labyrinthe en croix surélevée (Patin et al., 2005).

2-2-3-3- Test de la boite claire/obscurité (Light/Dark Box ; LDB)

Le test de LDB est appliqué en ce sens que le rat préfère naturellement les endroits obscurs tout
en évitant ceux bien éclairés. Cette conduite éthologique est utilisée pour estimer le degré
d’anxiété chez l’animal (Arrant et al., 2013). Le test est fait dans le dispositif de l’OF après
avoir divisé le plancher en 2 compartiments : un d’eux (le compartiment obscur) a été peint en
noir et éclairé par une lampe rouge faible, et l’autre (le compartiment clair) a été laissé
transparent et éclairé par une lampe blanche brillante (fig.03). Une ouverture jouant le rôle
d’une porte a été créée entre les deux compartiments, ce qui permet à l’animal de se déplacer
librement d’un compartiment à l’autre. Au début du test, le rat est placé dans le compartiment
clair et ses activités comportementales sont enregistrées pendant 5 minutes (Toumi, 2014).

15
 MATERIEL ET MÉTHODES

Figure 11 : Illustration schématique de la boite claire/obscurité (Toumi, 2014).

2-2-3-4- Test d’enfouissement des billes

Description générale et principe
Le test d’enfouissement des billes, du terme anglais « marble burying test (MBT) » a été
découvert et mis au point chez la souris (Njung'e et al., 1991). Puis adapté chez le rat (Skelton
et al., 2009). Il permet d’évaluer le comportement de type anxieux chez le rongeur en se basant
sur la tendance naturelle du rongeur à enfouir les stimuli menaçants qu’il rencontre.
Contrairement aux tests classiques, fondés principalement sur l’exploration d’un nouveau
dispositif (openfield), l’animal est placé dans un environnement familier mais en présence d’un
stimulus aversif, ici, des billes. L’impact de molécules anxiolytiques ou à l’inverse anxiogènes,
est souvent étudié avec ce test. Généralement, il est réalisé dans une cage standard de rongeurs,
remplie de litière propre où des billes sont stratégiquement déposées à la surface de cette litière.
La mesure du niveau d’anxiété est alors obtenue par comptabilisation. Nous avons réalisé ce
test pour mesurer le degré d’anxiété chez les rongeurs suite à la consommation du fenugrec par
la méthode du gavage oral.

Protocole du laboratoire
Ce test est réalisé dans une cage standard de rat (taille : 40 x 36 x 16 cm), remplie de sciure
propre à une hauteur suffisante (environ 6-8 cm) pour un enfouissement optimal des billes par
l’animal. Vingt billes de taille standard sont placées à la surface de la sciure, réparties en 4

16
 MATERIEL ET MÉTHODES

colonnes de 5 billes à distance égale (Figure 12A). L’animal est placé dans la cage contenant
les billes et laissé seul dans une pièce sombre pendant 30 min. A la fin du temps, l’animal est
remis dans sa cage de stockage et le nombre de billes enfouies ou non est comptabilisé (Figure
12 B, C et D). Une bille est considérée enfouie lorsque celle-ci est complètement recouverte ou
au 2/3 de sciure (Figure 12C). Entre chaque passage, les cages et les billes sont lavées à l’éthanol
70%, et la sciure changée (Marina, 2019).

B A

D C

Figure 12 : Test d’enfouissement des billes après passage de l’animal. (A) Représentation du
test d’enfouissement de billes. (B) L’image de gauche représente le passage d’un animal
anxieux du lot (G) dans la cage, puisque après son passage, la majorité des billes ont été

17
 MATERIEL ET MÉTHODES

enfouies dans la sciure. (C) L’image de droite illustre le passage d’un rat témoin non anxieux.
(D) L’image de gauche montre le passage d’un rat du lot (F) peu anxieux (Marina, 2019).

Elevage

21 rats mâles répartis en 3 lots

Lot (T) Lot (F) Lot (G)

Gavage orale pendent 30 jours

Tests neurocomportementaux

Mise à mort des rats après 30 jours de

l’expérimentation

Prélèvement d’organes Prise de sang

Histologie (Foie et
Dosage biochimique Dosage hormonal
reins)

Figure 13 : Diagramme de la planification expérimentale

18
 MATERIEL ET MÉTHODES

2-2-4- Mise à mort et prélèvement sanguin

La mise à mort des rats a été exécutée après 30 jours du début de l’expérimentation au moyen
des lames bistouri stériles après anesthésie au chloroforme, le sang a été recueilli dans des
tubes (étiquetés), EDTA pour la détermination de D’ACTH et dans des tubes héparines qui ont
été directement centrifugé à 5000 tours/min pendant 10 min (Harchane et al., 2012), le plasma
obtenu a été séparé en plusieurs fractions dans des tubes Eppendorf et transportés ainsi que les
tubes EDTA dans une glacière au laboratoire pour le dosage des hormones et les paramètres
biochimiques.

2-2-4-1- Prélèvement des organes

Juste après le prélèvement du sang, les organes ont été immédiatement prélevés (Bocquet,
2012), L’animal a été fixé en décubitus dorsal, une incision a été pratiquée depuis l’orifice
urogénital jusqu’au manubrium sternal. Le foie, les reins ont été rapidement prélevés à l’aide
de pinces fines, rincés dans une solution de chlorure du sodium (NaCl) à 0.9%, puis pesés au
moyen d’une balance de précision (Scaltec Instruments, Germany) puis déposés dans des flacon
stériles contenants du formaldéhyde 10% pour les coupes histologiques (Figure 14).

Figure 14: flacon stérile contenant du formaldéhyde 10% (Photo personnelle)

19
 MATERIEL ET MÉTHODES

2-2-5- Dosages biochimiques

Figure 15 : Automate de biochimie Mindray (photo personnelle)

2-2-5-1- Dosage du glucose : (Selon la fiche technique Spinreact)

Principe :
Détermination enzymatique du glucose selon les réactions suivantes :
Glucose oxydase
Glucose + O2 +H2O Acide gluconique + H2O2
Péroxydase
2 H2O2+Phénol+4-Amino-antipyrine Quinoneimine rose + 4H2O
(Trinder et al., 1969), (Dingeon et al., 1975), (Lott et al., 1975)

20
 MATERIEL ET MÉTHODES

Réactifs :
Réactif 01 Tampon Tris pH= 7 100 mmol/l
Solution tampon Phénol 0,3 mmol/l
Glucose oxydase 10 000 U/l
Réactif 02
Péroxydase 1000 U/l
Enzymes
Amino 4 -Antipyrine 2,6 mmol/l
100 mg/dl
Réactif 03 Glucose 1g/I
5,56 mmol/l

Préparation et stabilité :
Dissoudre le lyophilisat R2 dans le tampon R1.
Protéger de la lumière.
Stabilité du réactif de travail
- 8 semaines à 20 - 25°C
- 8 mois à 2 - 8°C
Echantillons :
Sérum ou plasma recueilli sur héparine.

Mode opératoire :
Longueur d’onde : 505 nm (492-550)
Température : 37° C (20-25°C)
Cuve : 1 cm d’épaisseur
Ajuster le zéro du spectrophotomètre sur le blanc réactif.

Blanc Standard Echantillon

Standard -- 10 μl --
Echantillon -- -- 10 μl
Réactif de travail 1 ml 1 ml 1 ml
Mélanger, lire les DO après une incubation
de 10 minutes à 37 °C ou 30 min à 20-25
-- -- --
°C.
La coloration est stable 30 minutes.

21
 MATERIEL ET MÉTHODES

Calcule:

[Link]
Clucose = xn
[Link]

mg/dl n = 100
g/l n = 1
mmol/l n = 5,56

2-2-5-2- Dosage de l’urée colore : (selon la fiche technique Spinreact)

Principe :
L'urée est dosée en cinétique selon la réaction suivante :
Uréase
Urée + H2O ————> 2NH3 + CO2

Les ions ammonium, en présence de salicylate et d'hy- pochlorite de sodium réagissent en

formant un composé de couleur verte (Dicarboxylindophenol) dont l'intensité est
proportionnelle à la concentration en urée (Berthelot et al., 1859)
(Mac Key et al., 1927), (Balleter et al., 1985)

Réactifs :
Réactif 01 Tampon
EDTA 2 mmol/l
Salicylate de sodium 60 mmol/l
Réactif 02 Nitroprussiate de sodium 32 mmol/l
Uréase 30000 U/M
Phosphate pH 6.7 60 mmol/l
0,50 g/l
Réactif 03 Etalon urée
8,325 mmol/l
Réactif 04 Hypochlorite de sodium 40 mmol/l
10 * [ ] Hydroxyde de sodium 150 mmol/l

22
 MATERIEL ET MÉTHODES

Préparation et stabilité :
Le réactif 4 est à compléter avec 90 ml d'eau distillée : Réf. 20141, 450 ml d’eau distillée Réf.
20146 ou réf. 20148. Dissoudre le flacon R2 dans le tampon R1 : réactif A.
Les réactifs de travail sont stables pendant 6 mois entre 2-8°C et 14 Jours à 20-25°C.

Echantillons :
Sérum ou plasma recueilli sur héparine.
Mode opératoire :
Longueur d'onde : 590 nm (578 Hg)
Température : 25-30-37 °C
Cuve : 1 cm d’épaisseur
Ajuster le zéro du spectrophotomètre sur le blanc réactif
Blanc Etalon Echantillon
Etalon - 10 µl -
Echantillon - - 10 µl
Réactifs de travail A 1 ml 1 ml 1 ml
Mélanger, incuber 5 min à 37°C ou 10 min
à 20-25°C ajouter ensuite.
Le réactif 4 1 ml 1 ml 1 ml
Mélanger, incube 5 min à 37°C ou 10 min. a
20-25°C. lire contre le blanc
- - -
Stabilité de la coloration 2 heures à l'abri de
la lumière

Calcule :
D. O. Echantillon
Urée = xn
D. O. Etalon

g/l : n= 0.50
mmol/l : n= 8.325

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 MATERIEL ET MÉTHODES

2-2-5-3- Dosage de l’acide urique : (Selon la fiche technique Spinreact)

Principe :
L’acide urique est dosé selon les réactions suivantes :
Uricase
Acide Urique + 2H2O + O2 Allantoine + CO2 + H2O2

Peroxydase
2H202 + Amino-4-antipyrine + Dichloro 2- 4 Phenolsulfonate Quinone rose + 4H2O
(Barham et Trinder, 1972) (Fossati et al., 1980).

Réactifs :
Tampon phosphate pH 7.4
Réactif 01 50mmol/l
Dichloro 2-4
Solution tampon 4mmol/l
Phenolsulfonate
Uricase 70 U/l
Réactif 02
Peroxydase 660 U/l
Enzymes
Amino-4-Antipyrine 1 mmol/l
6 mg/dl
Réactif
Acide urique 60 mg/l
Standard
357 μmol/l

Préparation et stabilité :
Dissoudre le Lyophilisat R2 avec le contenu d’un flacon Tampon R1 Réf. (20091), (20092),
(20095), (20096).
Le réactif de travail est stable : 7 jours à 20-25°C et 3 semaines à 2-8°C

Echantillons :
Sérum ou plasma recueilli sur héparine.

Mode opératoire :
Longueur d’onde : 510 nm (490-550)
Température : 20-25°C ou 37°C

24
 MATERIEL ET MÉTHODES

Cuve : 1 cm d’épaisseur
Ajuster le zéro du spectrophotomètre sur le blanc réactif.
Blanc Standard Echantillon
Standard - 20 μl -
Echantillon - - 20 μl
Réactif de travail 1 ml 1 ml 1 ml
Mélanger, lire les DO après une incubation
de 5 min à 37° C ou de 10 min à 20 - 25°C. - - -
La coloration est stable 30 minutes

Calcule :
D. O. Echantillon
Acide urique = xn
D. O. Standard

mg/dl n = 6
mg/l n = 60
μmol/l n = 357

2-2-5-4- Dosage de la créatinine : (selon la fiche technique Spinreact)

Principe :
La créatinine forme en milieu alcalin un complexe coloré avec l’acide picrique. La
vitesse de formation de ce complexe est proportionnelle à la concentration de créatinine.
(Larsen, 1972), (Henry, 1984)

Réactif :

Réactif 01 Hydroxyde de sodium 1.6 mol/l

Réactif 02 Acide picrique 17.5 mmol/l
2 mg/dl
Réactif 03
Créatinine 20 mg/l
Standard
176,8 μmol/l

Préparation et stabilité :
Les réactifs sont prêts à l’emploi, stables à température ambiante jusqu’à la date

25
 MATERIEL ET MÉTHODES

indiquée sur l’étiquette. Réactif de travail : mélanger à parts égales R1 et R2 Stabilité : 1 mois
à 20°-25°C.
Echantillons :
Sérum ou plasma recueilli sur héparine.
Mode opératoire :
Longueur d’onde : 492 nm (490 - 510)
Température : 25 - 30 ou 37 °C
Cuve : 1 cm d’épaisseur
Ajuster le zéro du spectrophotomètre sur l’air ou l’eau distillée.

Standard Echantillon
Standard 100 μl -
Echantillon - 100 μl
Réactif de travail 1 ml 1 ml
Mélanger et lire les densités optiques DO1 après
30 sec. - -
Lire ensuite DO2 exactement 1 minute après.

Calcule :
Calculer ∆ DO = DO2 - DO1 pour le standard et les échantillons.

∆. D. O. Echantillon
Créatinine = xn
∆. D. O. Standard

mg/dl: n = 2
mg/l: n = 20
μmol/l: n = 176.8

2-2-5-5- Dosage du cholestérol total : (Selon la fiche technique Spinreact)

Principe :

Le cholestérol est mesuré après hydrolyse enzymatique puis oxydation. L’indicateur quinone
imine est formé à partir du peroxyde d’hydrogène et du amino 4 antipyrine en présence de

26
 MATERIEL ET MÉTHODES

phénol et de peroxydase.
Détermination enzymatique selon les réactions suivantes :

Cholestérol estérase
Esters de cholestérol + H₂O Cholestérol+Acides gras

Cholestérol oxydase
Cholestérol + O₂ Cholestène- 4-one - 3 + H₂O₂

Péroxydase
H₂O₂ + Phénol + Amino- 4 – antipyrine Quinoneimine rose

La quantité de quinoneimine formée est proportionnelle à la concentration de cholestérol

(Trinder et al., 1969), (Richmond et al., 1973), (Fasce et al., 1982).

Réactif :

Réactif 01 Pipes 6.9 90 mmol/l

Solution tampon Phénol 26 mmol/l
Réactif 02 Cholestérol oxydase 300 U/l
Peroxydase 1250 U/l
Cholestérol estérase 300 U/l
Amino-4-antipyrine 0.4 mmol/l
Réactif 03 200 mg/dl
Standard - 2 g/l
5.1 7 mmol/l

Préparation et stabilité :

Dissoudre le contenu d’un flacon de R2 avec un flacon de tampon R1.

Le réactif de travail est stable : 1 mois à 20 - 25°C 4 mois à 2 - 8°C

Echantillons :

Sérum ou plasma recueilli sur héparine.

27
 MATERIEL ET MÉTHODES

Mode opératoire :

Longueur d’onde : 505 nm (500 - 550)

Température : 37°C

Cuve : 1 cm d’épaisseur

Ajuster le zéro du spectrophotomètre sur le blanc réactif.

Blanc Standard Echantillon

Standard - 10 μl -
Echantillon - - 10 μl
Réactif de travail 1ml 1 ml 1 ml
Mélanger, lire les densités optiques après une incubation de 5 min. à 37° C.
La coloration est stable 30 minutes.

Calcule :

D. O. Echantillon
Cholesterol = xn
D. O. Standard

mg/dl: n = 200

g/l: n = 2

mmol/l: n = 5,17

2-2-5-6- Dosage du cholestérol-HDL : (Selon la fiche technique Spinreact)

Principe
Les chylomicrons et les lipoprotéines de très faible densité (VLDL) et de faible densité (LDL)
contenus dans l’échantillon sont précipités par addition d’acide phosphotungstique en présence
d’ions magnésium.
Le surnagent obtenu après centrifugation contient les lipoprotéines de haute densité (HDL) dont
le cholestérol est dosé par le réactif cholestérol enzymatique (Burstein et al., 1970).

28
 MATERIEL ET MÉTHODES

Réactifs :

Réactif 1 : Acide Phosphotungstique 13,9 mmol/L

Précipitant MgCl2 6H2O 490mmol/L
pH 6,2

Stabilités :

Conservation à 2-8°C
La date limite d’utilisation est indiquée sur chaque conditionnement.
Si le réactif est trouble ou coloré, il doit être rejeté.

Echantillons :
Sérum ou Plasma recueilli sur héparine.

Mode opératoire :

Précipitation :

Diluer, dans une solution de NaCI 9 g/l, les sérums dont le taux est supérieur à 3,5 mmol/l de
triglycérides.

Sérum : 500 μl

Réactif précipitant :50 μl

Bien mélanger, attendre 10 min. Centrifuger 15 min à 5000 t/min

Reconstituer le réactif <cholestérol enzymatique> selon la notice jointe au coffret. Réf.

20111ou 20112.

Longueur d’onde : 500 nm (492 à 550 nm)

Température : 37°C

Cuve : 1 cm d’épaisseur

Zéro de l’appareil : Blanc réactif

29
 MATERIEL ET MÉTHODES

Blanc réactif Etalon Dosage

Eau distillée 10 μl - -
Etalon Cholestérol - 10 μl -
Surnageant - - 10 μl
Réactif Cholestérol 1 1ml 1 ml 1ml
enzymatique

Mélanger, incuber 5 min à 37°C

Stabilité de la coloration : 30 min

Calcule :

DO dosage
[HDL − Cholestérol] = ×n
DO étalon

n= 5,17 mmol/l

n = 2 g/l

Multiplier le résultat obtenu par 1. 1 pour tenir compte de la dilution effectuée lors de la
précipitation : on obtient la concentration du cholestérol lié aux HDL.

N.B : Une fois le flacon du réactif HDL est entamé il ya possibilité de formation des cristaux
brillants au fond du flacon qui n’ont pas d’influence sur la qualité du produit.

2-2-5-7- Dosage du cholestérol-LDL :

Le cholestérol-LDL a été calculé par la formule de Friedewald (AFSSAPS, 2005).

La formule de Friedewald : C-LDL = CT – [C-HDL + Tg/5] (en g/L).

Dont ;

CT : Cholestérol Total, C-HDL : Cholestérol-HDL, Tg : Triglycérides

2-2-5-8- Dosage des triglycérides : (Selon la fiche technique Biomaghreb)

Principe
Les triglycérides sont déterminés selon les réactions suivantes :
Lipoprotéine lipase
Triglycérides Glycérol + Acides gras

30
 MATERIEL ET MÉTHODES

Glycérokinase, Mg ++
Gylcérol + ATP Glycérol -3-P + ADP

Glycérol-3- Phosphate oxydase

Glycérol-3-Phosphate + O2 H2O2+ Dihydroxyacétone-P

Péroxydase
H2O2 + Amino-4-Antipyrine + chloro-4-phénol Quinone rose +H2O
(Young et al., 1975), (Fossati et al., 1982).

Réactifs

Réactif 1 50
Solution tampon Chloro-4- Tampon pipes pH 7,2 mmol/l
phénol 2 mmol/l

150000
Lipoproteine lipase U/l
Glycérokinase 800 U/l
Glycérol 3-P- 4000 U/l
Réactif 2
Oxydase 440 U/l
enzymes
Péroxydase 0,7
Amino-4-antipyrine mmo/l
ATP 0,3
mmol/l

200 mg/dl
Réactif 3 Standard glycérol 2 g/l
Standard (en trioléine) 2,28
mmol/l

31
 MATERIEL ET MÉTHODES

Préparation et stabilité
Dissoudre le Iyophilisat R2 avec un flacon de tampon R1.
Stabilité du réactif de travail : 1 semaine à 20-25°C et 4 semaines à 2-8°C.
Echantillons
Sérum, plasma recueilli sur héparine.
Mode opératoire
Longueur d’onde :.............................505 nm (490-550)
Température :....................................37°C
Cuve :................................................1 cm d’épaisseur
Ajuster le zéro du spectrophotomètre sur le blanc réactif.

BLanc Standard Echantillon

Standard
- 10 μl -
Echantillon
- - 10 μl
Réactif de
1 ml 1 ml 1ml
travail

Mélanger et lire les DO après incubation de 5 min à 37°C ou de 10 min à 20-25°C. La

coloration est stable 30 minutes.
Calcule :

D. O. Echantillon
Triglycérides = xn
D. O. Standard

mg/dl : n = 200
g/l : n = 2
mmol/l : n = 2,28

2-2-5-9- Dosage du GOT-ASAT : (Selon la fiche technique Spinreact)

Principe :
Détermination cinétique de l’activité aspartate aminotransférase.
La réaction est initiée par addition de l’échantillon du patient au réactif. Le schéma réactionnel
est le suivant :

32
 MATERIEL ET MÉTHODES

GOT
2 oxoglutarate + L-Aspartate Glutamate + oxaloacetate

MDH
Oxaloacétate + NADH + H⁺ Malate + NAD⁺

Le taux de diminution de la concentration en NADH est directement proportionnel à l’activité

aspartate amino transférase dans l’échantillon.
GOT : Transaminase flutanique oxaloacétique
MDH : Malate Dehydrogenase

(Bergmeyer et al., 1976), (Bergmeyer et al., 1978).

Réactifs :

Réactif 01 Tampon Tris pH 7.8 a 30°C 80 mmol/l

Solution Tampon L- aspartate 200 mmol/l
Réactif 02 NADH 0.18 mmol/l
Substrat LDH 800 U/l
MDH 600 U/l
Oxoglutarate 12 mmol/l

Préparation et stabilité :
Reprendre le substrat R2 par 3 ml Réf. (20042) ou10 ml Réf. (20043) de Tampon R1. Pour les
Réf (20050) et (200492) reconstituer chaque R2 par un flacon R1.
Cette solution de travail est stable : 7 jours à 2-8°C. : 24 heures à 20-25°C.
Echantillon :
Sérum ou plasma hépariné sans hémolyse.
Mode opératoire :
Longueur d’onde. : 340 nm
Température : 25-30-37°C
Cuve : 1 cm d’épaisseur
Ajuster le zéro du spectrophotomètre sur l’air ou l’eau distillée.

33
 MATERIEL ET MÉTHODES

Solution de travail 1 ml 3 ml
Préincuber a la température choisie (25, 30 ou 37°C)
Echantillon 100μl 300 μl

Mélanger et incuber 1 minute.

Mesurer la diminution de la densité optique par minute pendant 1 a 3 minutes.

Calcule:
à 340 nm

ΔDO/min x 1750 = U/l

2-2-5-10- Dosage du GPT-ALAT : (Selon la fiche technique Spinreact)

Principe :

Détermination cinétique de l’activité Alanine aminotransférase. La réaction est initiée par

addition de l’échantillon du patient au réactif.

Le schéma réactionnel est le suivant :

GPT
2-oxoglutarate + L-Alanine Glutamate + Pyruvate

LDH
Pyruvate + NADH + H+ Lactate + NAD+

Le taux de diminution de la concentration en NADH est directement proportionnel à l’activité

alanine transférase dans l’échantillon.
GPT : Transaminase glutanique pyruvique.
LDH : Lactate dehydrogenase.

(Bergmeyer et al., 1978), (Bergmeyer et al., 1980).

34
 MATERIEL ET MÉTHODES

Réactifs :

Réactif 01 Tampon Tris pH 7.5 à 30°C 100 mmol/l

Solution Tampon Alamine 500 mmol/l
Réactif 02 NADH 0.18 mmol/l
Substrat LDH 1200 U/l
Oxoglutarate 15 mmol/l

Préparation et stabilité :

Reprendre le substrat R2 par 3 ml Réf (20046) ou 10 ml Réf (20047) de Tampon R1.

Pour les Réf (20040) et (200462) reconstituer chaque R2 par 1 flacon R1.
Cette solution de travail est stable 7 jours à 2-8°C. 24 heures à 20-25°C.
Echantillon :
Sérum ou plasma héparine sans hémolyse.
Mode opératoire :
Longueur d’onde : 340 nm.
Température : 25-30-37°C.
Cuve : 1 cm d’épaisseur.
Ajuster le zéro du spectrophotomètre sur l’air ou l’eau distillée.
Solution de travail 1 ml 3 ml
Préincuber à la température choisie (25, 30 ou 37°C)
Echantillon 100μl 300 μl

Mélanger et incuber 1 minute.

Mesurer la diminution de la densité optique par minute pendant 1 à 3 minutes.

Calcule :
À 340 nm

ΔDO/min x 1750 = UI/I

35
 MATERIEL ET MÉTHODES

2-2-5-11- Dosage du phosphatase alcaline (PAL) : (Selon la fiche technique Spinreact)

Principe :
Détermination cinétique de l’activité phosphatase alcaline (PAL) selon la méthode
recommandée par la société allemande de chimie clinique (DGKG).
PAL
nitro-4 phénylphosphate H₂O nitro 4 phénol + phosphate.

(Haussamen et al., 1977).

Réactifs :

Réactif 01 Tampon diethanolamine (PH 9.8) 1 mol/l

Solution Tampon Chlorure de magnésium 0.5 mmol/l
Réactif 02 Nitro 4 phénylphosphate 10 mmol/l
Substrat

Préparation :

Réactif de travail :
Réf. : 20015 R1 : 3 ml, R2 : 0,3 ml.
Réf. : 20016 R1 : 10 ml, R2 : 1 ml.
Réf. : 20017 R1 : 30 ml, R2 : 3 ml.
Réf. : 20018 R1 : 50 ml, R2 : 5 ml.
Stabilité :
Stabilité du réactif de travail :
- 15 - 25°C : 5 jours.
- 2 - 8°C : 15 jours.
Prélèvement :
Sérum ou plasma héparine sans hémolyse.
Mode opératoire :
Longueur d’onde : 405 nm (Hg 400-Hg 420)
Température : 25°, 30° ou 37°C
Cuve : 1 cm d’épaisseur.
Zéro de l’appareil : air ou eau distillée.

36
 MATERIEL ET MÉTHODES

Dans un tube à hémolyse introduire :

Solution de travail 1 ml.
Equilibrer à 25°, 30° ou 37°C.
Echantillon 20 μl.

Mélanger et introduire dans une cuve thermostatée, attendre 1 minute puis mesurer
l’augmentation moyenne de la D.O par minute pendant 1 à 3 minutes.
Calcule:
405 nm ...............PAL (U/L) = ΔD.O/min x 2750
410 nm ...............PAL (U/L) = ΔD.O/min x 2910

2-2-6- Etude hormonale

2-2-6-1- Prélèvement des échantillons

A la fin de l’expérimentation, la mise à mort des rats a été réalisée après anesthésie au
chloroforme, le sang a été prélevé dans des tubes héparines pour le dosage de T3, T4 et le TSH
et dans des tubes EDTA pour le dosage de l’ACTH, après ils sont véhiculés au sein de
laboratoire El hikma (Annaba) où ils sont centrifugés à 3000 tours/minute pendant dix minutes,
le plasma a été récupéré pour effectuer les dosages hormonaux.
Remarque : après centrifugations des tubes EDTA, le plasma est conservé directement au frigo
jusqu’au moment de passer à l’automate.

2-2-6-2- Analyse des échantillons

Après centrifugation (avec la centrifugeuse nommée ; Presvac) et récupération des
plasmas le dosage a été réalisé à l’aide d’un Bekman Coulter Access 2 (figure 16) dans
lequel on met les plasmas et les réactifs puis on sélectionne les différents paramètres
hormonaux : T3, T4, TSH et enfin l’ACTH.

37
 MATERIEL ET MÉTHODES

Figure 16: Le Bekman Coulter Access 2 (photo personnelle)

L'Access 2 est un système d'immunoanalyse automatisé qui mesure les analytes dans
échantillons, en combinaison avec les réactifs appropriés, les calibreurs, le contrôle qualité
(CQ) matériel et autres accessoires. L'immunoessai est une méthode analytique qui utilise des
réactions antigène-anticorpspour détecter ou mesurer un analyte spécifique dans un échantillon
de fluide corporel.

2-2-6-3- Technique de dosage

2-2-6-3-1- Test de sandwich

• Les particules paramagnétiques enrobées se lient à un analyte à mesurer dans un échantillon.

•Un deuxième réactif (appelé conjugué) se lie également à l'analyte.
• L'analyte est lié entre la particule d'un côté et le conjugué du autre (comme un sandwich).
• Les unités d'éclairage relatives (RLU) produites sont directement proportionnelles à la
quantité d'analyte dans l'échantillon (plus il y a de RLU, plus l'analyte est concentrée).
• Le système utilise une courbe d'étalonnage pour convertir l'émission de lumière mesurée en
une concentration d’analyte (Access 2 In-Lab Training Manual, Version 1.0, 2017).

38
 MATERIEL ET MÉTHODES

Figure 17: Test de Sandwich (Access 2 In-Lab Training Manual, Version 1.0, 2017)

2-2-6-3-2- Test de liaison compétitifs

• Les particules paramagnétiques enrobées se lient à un analyte à mesurer dans un échantillon.

• Un deuxième réactif (appelé conjugué) se lie également aux particules paramagnétique
enrobées (le conjugué marqué par l'enzyme est le même analyte que l'analyte mesuré).
• Le conjugué est lié à une phosphatase alcaline, ce qui déclenche enzymatiquement le substrat
pour produire une lumière rougeoyante.
• Les unités de lumière relative (RLU) produites sont inversement proportionnelles à la quantité
d'analyte dans l'échantillon (plus il y a de RLU, plus l'analyte est concentrée).

39
 MATERIEL ET MÉTHODES

• Le système utilise une courbe d'étalonnage pour convertir l'émission de lumière mesurée en
une concentration d'analyte (Access 2 In-Lab Training Manual, Version 1, 2017).

Figure 18 : Tests de liaison compétitifs (Access 2 In-Lab Training Manual, Version 1.0,
2017).

40
 MATERIEL ET MÉTHODES

2-2-6-4- Dosage de T3 (Triiodothyronine)

Principe du test

Le test T3 libre est un test immunoenzymatique de liaison compétitive. L'échantillon est

ajouté à un récipient de réaction avec un anticorps monoclonal anti-T3 conjugué à la
phosphatase alcaline. Pendant l’incubation, la T3 libre dans l'échantillon réagit avec l'anticorps
anti-T3 Particules enrobées de streptavidine et Un analogue de T3 biotinylé est ensuite ajouté
au mélange.
La quantité d'analyte dans l'échantillon est déterminée au moyen d'une courbe
d'étalonnage enregistrée. Avec des niveaux normaux de protéines de liaison à la thyroïde, les
niveaux de T3 libre sont en corrélation avec la T3 totale. La mesure de T3 libre est utile en cas
de modification des taux de T3 totale en raison de modifications des protéines de liaison aux
hormones thyroïdiennes, en particulier dans les cas de TBG altéré ou de faibles concentrations
d'albumine. La T3 libre est élevée seule (toxicose T3) dans environ 5% des hyperthyroïdies
(Beckman Access Assay Manual, 2006).

Procédure de collecte, de stockage et de manipulation des échantillons

- Le sérum ou le plasma séparés ne doivent pas rester entre + 15 ° C et + 30 ° C pendant plus

de 8 heures. Si les tests ne sont pas terminés dans les 8 heures, le sérum ou le plasma doivent
être conservés entre + 2 ° C et + 8 ° C.

calcule des résultats

Le système d'immunoanalyse Access effectue tous les calculs en interne pour produire le
résultat rapporté. Les résultats des tests du patient sont déterminés automatiquement par le
logiciel système en utilisant un modèle mathématique de courbe logistique pondérée à quatre
paramètres (4PLC). La quantité de L'analyte dans l'échantillon est déterminée à partir de la
production de lumière mesurée au moyen des données d’étalonnage enregistrées.
La valeur normale de la T3 libre dans le sérum est de 2.77 à 7.08 pmol/l pour l’homme
et de 6.1 à 8.1 pmol/l pour le rat (Béatrice, 2012).

41
 MATERIEL ET MÉTHODES

2-2-6-5- Dosage de T4 (Thyroxine)

Principe du test

Le test Access Free T4 (FRT4) est un dosage immunoenzymatique en deux étapes.

Monoclonal anti-anticorps thyroxine (T4) couplé à la biotine, à l'échantillon, à la solution
protéique tamponnée et une phase solide dont la streptavidine est ajouté au récipient de réaction.
Au cours de cette première incubation l'anticorps anti-T4 couplé à la biotine se lie à la
phase solide et au T4 libre dans l'échantillon. Après incubation dans un récipient de réaction,
les matériaux liés à la phase solide sont maintenus dans un champ magnétique tandis que les
matériaux non liés sont emportés. Ensuite, tamponné une solution de protéine et un conjugué
triiodothyronine (T3) -alcaline phosphatase sont ajoutés au Récipient de réaction.
Le conjugué T3-phosphatase alcaline se lie à l'anti-T4 vacant sites de liaison d'anticorps.
Les résultats sont transférés dans un fichier Excel à l'aide d'un logiciel développé en
laboratoire (Beckman Access Assay Manual, 2005).

Procédure de collecte, de stockage et de manipulation des échantillons

- Le sérum est le type d'échantillon préféré. Le plasma d'héparine est acceptable. Si le test doit
être effectué dans les 48 heures, les échantillons peuvent être réfrigérés entre 2 et 8 ° C.
Congeler à -20 ° C ou plus froid pour un stockage plus long.
- Les échantillons troubles ou contenant des particules doivent être centrifugés avant le dosage.

Calcule des résultats

Les résultats des tests du patient sont déterminés automatiquement par le logiciel du
système. La quantité de l'analyte dans un échantillon est déterminée à partir de la production de
lumière mesurée au moyen d’une courbe d'étalonnage non linéaire enregistrée. Les résultats des
tests des patients peuvent être consultés à l'aide de l’Exemple d'écran de résultats. Reportezvous
au Guide de l'utilisateur pour obtenir des instructions complètes sur examen des résultats.
La valeur normale de la T4 libre dans le sérum est de 12.0 à 38.6 pmol/l chez l’homme
et de 21.4 à 30.8 pmol/l chez le rat (Béatrice, 2012).

42
 MATERIEL ET MÉTHODES

2-2-6-6- Dosage de TSH (Thyréostimuline)

Principe du test

Le dosage de l’hormone de stimulation de la thyroïde humaine hypersensible Access

(hTSH) est un 3 ème test immunoenzymatique à deux sites de génération («sandwich»). Un
échantillon est ajouté à un récipient de réaction avec conjugué anti-hTSH-phosphatase alcaline
de chèvre, protéine tamponnée solution, et des particules paramagnétiques recouvertes
d'antimonoclonal de souris immobilisé anticorps hTSH.
L'anticorps anti-souris de chèvre est utilisé pour immobiliser l'anti-hTSH de souris
anticorps.) Le hTSH se lie à l'anti-hTSH monoclonal immobilisé sur la phase solide tandis que
le conjugué anti-hTSH-phosphatase alcaline de chèvre réagit avec un antigénique différent site
sur le hTSH.
Les résultats des échantillons sont transférés dans un fichier Excel à l'aide d'un logiciel
développé en laboratoire (Beckman Access Assay Manual, 2005).

Procédure de collecte, de stockage et de manipulation des échantillons

- Le sérum est le type d'échantillon préféré. Le plasma d'héparine est acceptable. Si le test doit
être effectué dans les 48 heures, les échantillons peuvent être réfrigérés entre 2 et 8 ° C.
Congeler à -20 ° C ou plus froid pour un stockage plus long.
- Les échantillons peuvent être conservés dans des flacons en verre ou en plastique, à condition
que les flacons soient hermétiques scellé pour empêcher la dessiccation de l'échantillon.
- Les échantillons troubles ou contenant des particules doivent être centrifugés avant le dosage.

Calcule des résultats

Les résultats des tests du patient sont déterminés automatiquement par le logiciel du
système.
La quantité d'analyte dans un échantillon est déterminée à partir de la production de
lumière mesurée par moyenne d'une courbe d'étalonnage non linéaire enregistrée.
Les résultats des tests des patients peuvent être consultés à l'aide de l'écran Résultats de
l'échantillon. Reportez-vous au guide de l'utilisateur pour instructions sur l'examen des

43
 MATERIEL ET MÉTHODES

résultats.
Les valeurs normales se trouvent entre 0.4 -4.0 µUl/ml chez l’homme (Has, 2007 et
Biomis, 2014).

2-2-6-7- Dosage de l’ACTH (hormone adrénocorticotrope)

Principe du test

Le dosage immunoradiométrique de l’hormone corticotrope (ACTH) est un dosage de

type sandwich" de l’ACTH préalablement modifiée chimiquement par une réaction
d’succinylation (sACTH).

L’ACTH est une molécule très bien conservée à travers les espèces et très peu stable.
Pour ces deux raisons il est particulièrement difficile d’immuniser des animaux contre
l’hormone humaine pour obtenir des anticorps de bonne affinité susceptibles de convenir à un
dosage immunoradiométrique.

A la suite d’une nouvelle incubation, le contenu des tubes est aspiré, et après deux lavages
la radioactivité liée est mesurée. Les valeurs inconnues sont déterminées par interpolation à
l’aide de la courbe standard. La quantité de radioactivité fixée est directement proportionnelle
à la concentration en ACTH de l’échantillon (Beckman Access Assay Manual, 2016).

Prélèvement, préparation, conservation et dilution des échantillons

- Recueillir le sang dans des tubes en verre siliconé ou en plastique, contenant de l’EDTA. Ne
pas utiliser d’héparine comme anticoagulant. Ne pas utiliser de tubes en verre non siliconé car
ils fixent l’ACTH.

- Séparer le plus tôt possible le plasma par centrifugation à 2-8 °C.

- Si les échantillons analysés ont une concentration supérieure au calibrateur le plus élevé de la
gamme, ils doivent être succinylés et dilués dans le calibrateur zéro.

Procédure de collecte, de stockage et de manipulation des échantillons

- Préparation des réactifs : Equilibrer les réactifs à la température du laboratoire.

44
 MATERIEL ET MÉTHODES

- Reconstitution du sérum de contrôle : Reprendre le contenu d’un des deux flacons avec le
volume d’eau distillée indiqué sur l’étiquette. Attendre 10 - 20 min (max) après reconstitution
et agiter doucement en évitant la formation de mousse avant de répartir dans les tubes. Une fois
reconstitué, ne pas conserver le sérum de contrôle non traité par l’anhydride succinique, même
congelé, pour une utilisation ultérieure. Utiliser le second flacon lors d’une seconde série.
- Préparation du réactif d’succinylation : Reprendre le contenu du flacon par le volume de
DMSO indiqué sur l’étiquette. Après reprise le réactif est stable à 2-8 °C jusqu’à la date de
péremption de la trousse. Le léger brunissement, parfois constaté au cours de la conservation,
n’affecte en rien les performances du réactif d’succinylation.
- Préparation de la solution de lavage : Verser le contenu du flacon dans 950 mL d’eau distillée.
- Succinylation du sérum de contrôle et des échantillons : Dans un tube en polypropylène
déposer dans l’ordre : 500 μl d’échantillon ou de sérum de contrôle + 250 μl de solution alcaline
+50 μl de réactif d’succinylation + Vortexer immédiatement ; Incuber 5 minutes à 18-25 °C.
Tableau 02 : les étapes immunologiques de dosage.
Etape Etape Etape
immunologique 1 immunologique 1 immunologique 1
Dans les tubes recouverts
Dans chaque tube distribuer :
d’anticorps,
déposer :
Laver 2 fois avec 2 ml de
100 μL de traceur
300 μL de calibrateur, ou solution de lavage
d’échantillon succinylé ou de
Incuber 2 heures
sérum de contrôle succinylé
à 18-25 °C avec
Compter les cpm liés
agitation (350 rpm)
Incuber 1 heure à 18-25 °C (B) et cpm totaux (T)
avec agitation (350 rpm) pendant 1 min.
Aspirer soigneusement le
contenu de chaque tube (sauf 2
Aspirer soigneusement le
tubes «cpm totaux»)
contenu de chaque tube

45
 MATERIEL ET MÉTHODES

- Ajouter 100 μL de traceur dans 2 tubes supplémentaires pour obtenir les cpm totaux.

Calcule des résultats

Les résultats sont déduits de la courbe standard par interpolation. La courbe sert à
déterminer les taux d’ACTH de tous les échantillons mesurés en même temps que les
calibrateurs.

2-2-7- Technique histologique :

Les coupes histologiques ont été réalisées au niveau du laboratoire d’anatomopathologie
suivant la technique classique de (Houlot, 1984).
La technique histologique a pour but l’obtention de coupes fines, colorées de matériels
biologiques observables au microscope optique. Le matériel biologique à étudier va subir
différents traitements avant de pouvoir être analysé au microscope : Fixation, déshydratation,
imprégnation, inclusion, coupe et coloration. Le résultat final doit refléter au plus juste l’état
natif du prélèvement (Lydie et al., 2010).

2-2-7-1- Préparation de prélèvement

La mise à mort des rats a été effectuée après une durée de 30 jours d’expérimentation. Les
organes à étudiés ont été conservés dans le formol et doivent être fixés le plus rapidement
possible. Pour la réalisation des pièces, on utilise des instruments bien tranchants pour ne pas
écraser les tissus et donc d’éviter la formation d’artefacts (le scalpel). Les prélèvements doivent
avoir une surface de 1 à 2 cm et une épaisseur proche de 1.5 mm pour être mis dans des cassettes
spéciales à parois tournées afin de permettre le passage de liquide (Djemli, 2014)

Figure 19: Prélèvement des organes ; foie et reins (photo personnelle)

46
 MATERIEL ET MÉTHODES

2-2-7-2- Fixation des pièces

La fixation est immédiate après le prélèvement pour empêcher une putréfaction (altération
microbienne) du tissu ou par autolyse (destruction tissulaire par les enzymes qu’il contient en
lui-même), ainsi garder les constituants cellulaires ou tissulaires dans un état aussi voisin que
possible de l’état vivant. Le volume du fixateur doit être 20 à 50 fois celui du prélèvement. Les
organes séjournent 20 à 48 heures dans le fixateur et doivent être totalement immergés.

Figure 20: Fixation des pièces dans des bacs dans le formol dilué (photo personnelle)

Figure 21 : Automate de déshydratation (photo personnelle)

2-2-7-3- Inclusion
Le mode d’inclusion à la paraffine est le plus répondu. La paraffine est un mélange
d’hydrocarbures saturés et quelquefois de cires. Elle n’est pas miscible à l’eau, les pièces fixées
doivent être déshydratées. Le déshydratant le plus courant est l’alcool éthylique. Mais comme

47
 MATERIEL ET MÉTHODES

la paraffine n’est pas non plus miscible à l’alcool, celui-ci sera remplacé avant inclusion par un
liquide intermédiaire miscible à l’alcool et à la paraffine. On utilise le xylène. Ce liquide est
« éclaircissant » ce qui permet d’apprécier le degré de pénétration par la transparence acquise
par la pièce (Mark, 2010). La succession de toutes ces étapes est facilitée par un automate à
inclusion (figure 22) (tableau 3).

Figure 22: Automate à inclusion model LEICA (photo personnelle)

Tableau 03: Technique de déshydratation (Ait Hamadouche, 2010).

Etapes Produits Durée
er
1 bain Formol 1h30
2ème bain Alcool 75% 1h30
3ème bain Alcool 95% 1h30
4ème bain Alcool 100% 2h
5ème bain Acétone I 1h30
6ème bain Acétone II 1h30

2-2-7-4- L’enrobage
Ce fait par l’automate à inclusion (Figure 22) composé de trois compartiments (A, B, C),
deux chauds et un froid. A l’aide de moules métalliques, les cassettes seront remplis par la
paraffine chaude, puis refroidie au niveau du compartiment froid (Figure 23)

48
 MATERIEL ET MÉTHODES

Figure 23 : L’appareil d’enrobage, comportant deux compartiments chauds (A et B) et un

compartiment froid (C). (Adli, 2014)

2-2-7-5- Coupes, étalement des coupes et coloration

Le microtome model (LEICA) permet d’obtenir des coupes dont l’épaisseur est de 3 à 5 µm
(Figure 24). La coupe s’obtient par passage régulier de la pièce à couper devant la lame du
microtome. Les rubans de paraffine obtenus sont plissés et doivent être étalés sur un milieu
liquide légèrement chauffé. Les coupes égouttées et mises dans des portoirs sont ensuite séchées
dans une étuve jusqu’au moment de la coloration.

49
 MATERIEL ET MÉTHODES

Figure 24 : Technique de coupe par un microtome model LEICA (Adli, 2014),

La paraffine est hydrophobe tandis que les colorants sont hydrophiles, c’est pourquoi la
coloration des coupes comporte une étape de déparaffinage et de réhydratation, ces étapes
sont assurées par une succession de bains dans un automate (Tableau 4).

50
 MATERIEL ET MÉTHODES

Tableau 4: Batterie de coloration Hématoxyline-Eosine (Ait Hamadouche, 2010).

51
 MATERIEL ET MÉTHODES

Figure 25 : Appareil de coloration des lames model LEICA (photo personnelle)

2-2-7-6- Montage des lames

Après coloration une goutte d’Eukitt de montage (colle à base de résine) est disposée sur la
coupe, une lamelle est ensuite déposée. Lors de la manipulation, il faut éviter la formation des
bulles d’air, l’Eukitt polymérise en 20 minutes environ mais on peut accélérer ce processus en
plaçant la lame sur une plaque chauffante à 40°C.

Figure 26 : Montage des lames (photo personnelle)

52
 MATERIEL ET MÉTHODES

2-2-7-7- Examen microscopique

Cette étape est réalisée par un microscope optique ou photonique, mais aussi électronique.
Elle permet d’apprécier les éventuelles lésions ou anomalie au sein des tissus à analyser. Ainsi
qu’à pouvoir identifier l’agent causal (Laquet, 2007).

2-2-8- Traitement statistique des résultats :

Tous les résultats ont été exprimés en tant que moyenne ± écart-type (M ± SD). Les calculs
statistiques ont été effectués à l'aide du logiciel GraphPad Prisme version 5.00 (Trial), mars 12,
2007 sauf pour le poids corporel nous avons utilisé le logiciel XLSTAT Launchar (version
[Link]) La comparaison entre les différents groupes a été réalisée par une analyse de variance
(ANOVA) Les différences sont considérées comme :
 Non significatives lorsque (P> 0.05).
 Significatives lorsque (P≤ 0.05).
 Hautement significative lorsque (P≤0.01).
 Très hautement significatives lorsque (P ≤0.001). Avec p : le seuil de signification.

53
RÉSULTATS
 RESULTATS

3- RESULTATS

3-1- Évolution du poids corporel

Tableau 5 : Changement pondéral des rats témoins (T), les rats traités au fenugrec (F) et les
rats gavés par l’eau seule (G) pendant l’expérimentation. Les résultats sont exprimés en
moyenne ± SEM (n=7).

Poids (g)

Jours Lot (T) Lot (G) Lot (F)

J1
200.4 ± 1.325 200.0 ± 1.195 198.9 ± 0.9619
J 05
206.1 ± 1.010 205.1 ± 0.8845 211.7 ± 0.5654
J 10
211.4 ± 1.066 210.4 ± 0.9221 229.4 ± 0.5281
J 15
217.6 ± 1.066 216.4 ± 1.020 248.0 ± 0.4364
J 20
223.4 ± 1.066 222.1 ± 0.9368 276.1 ± 0.6335
J 25
229.3 ± 0.8081 227.9 ± 1.010 308.1 ± 0.4592
J 30
234.6 ± 0.8411 233.3 ± 0.8650 327.1 ± 0.6701

Au cours de l’expérimentation, le poids corporel des rats (exprimé en gramme) a été pris chaque
jour et présenté au jour 1, 5, 10, 15, 20, 25 et 30 (Tableau 5).
Le lot traité (F) montre une augmentation pondérale hautement significative (p≤0.01) par
rapport au lot témoin (T). Par contre nos résultats montrent une diminution très hautement
significative (p≤0.001) du poids corporel chez le lot (G) par rapport aux témoins.

3-2- Etude biochimique :

3-2-1- Variation de la glycémie
Nos résultats montrent une réduction très hautement significative (p≤0.001) de la glycémie à
jeun chez le lot (F) par rapport aux rats témoins et une réduction hautement significative
(p≤0.01) de la glycémie chez le lot (F) par rapport au lot (G) ainsi qu’une diminution
significative (p≤0.05) de la glycémie chez le lot (G) par rapport aux rats témoins (Figure 27).

54
 RESULTATS

Concentration de la Glycémie (g/l)

1.5

a:* b:**
1.0
a:***

0.5

0.0
T

F
G
Taux de glycémie chez les rats wistar mâles

Figure 27 : Variation de la glycémie (g/l) chez les rats témoins (T), les rats traités au fenugrec
(F) et les rats gavés par l’eau seule (G). Les résultats sont exprimés en Moyenne ± SEM (n=7)
(a : comparaison vs T ; b : comparaison vs G)
3-2-2- Variation du cholestérol total :
Nos résultats montrent une réduction hautement significative (p≤0.01) du taux de cholestérol
total chez le lot traité au fenugrec (F) par rapport aux rats témoins et une réduction significative
(p≤0.05) dans le lot (G) par rapport au lot (T). (Figure 28).

1.5
Concentration du CT (g/l)

a:* a:**
1.0

0.5

0.0
T

F
G

Taux du cholestérol total chez les rats wistar mâles

Figure 28 : Variation du cholestérol total (g/l) chez les rats témoins (T), les rats traités au
fenugrec (F) et les rats gavés par l’eau seule (G). Les résultats sont exprimés en Moyenne ±
SEM (n=7) (a : comparaison vs T)

55
 RESULTATS

3-2-3- Variation du cholestérol-HDL (HDL-c) :

Nos résultats montrent un taux normal moyen de cholestérol-HDL égale à 0,3729 g/l chez le
lot témoin.
Chez le lot traité au fenugrec (F), les résultats montrent une augmentation significative (p≤0.05)
par rapport aux rats témoins et une augmentation non significative (p>0.05) chez le lot (G) par
rapport au lot (T).

0.5
a:*
concentration du HDL-c (g/l)

0.4

0.3

0.2

0.1

0.0
T

F
G

Taux de HDL-c chez les rats wistar mâles

Figure 29 : Variation du cholestérol-HDL (g/l) chez les rats témoins (T), les rats traités au
fenugrec (F) et les rats gavés par l’eau seule (G). Les résultats sont exprimés en Moyenne ±
SEM (n=7)
(a : comparaison vs T)

3-2-4- Variation du taux du cholestérol-LDL :

D’après les moyennes des taux de LDL-c présentés dans le graphe de la figure, mesurés chez
les rats des trois lots, nous avons trouvé chez le lot traité au fenugrec, une diminution par rapport
aux rats témoins, cette réduction est hautement significative dont (p≤0.01) ainsi une diminution
significative (p≤0.05) chez le lot (G) par rapport au lot (T).

56
 RESULTATS

0.6

concentration du LDL-c (g/l)

a:*
0.4 a:**

0.2

0.0
T

F
G
Taux du LDL-c chez les rats wistar mâles

Figure 30 : Variation du cholestérol-LDL (g/l) chez les rats témoins (T), les rats traités au
fenugrec (F) et les rats gavés par l’eau seule (G). Les résultats sont exprimés en Moyenne ±
SEM (n=7)
(a : comparaison vs T)

3-2-5- Variation des triglycérides :

Nos résultats montrent une diminution très hautement significative (p≤0.001) du lot (F) par
rapport aux rats témoins (T) et par rapport au lot (G).

57
 RESULTATS

1.5

Concentration des TG (g/l)

a,b:***
1.0

0.5

0.0
T

F
G
Taux des triglycérides chez les rats wistar mâles

Figure 31 : Variation du taux des triglycérides (g/l) chez les rats témoins (T), les rats traités
au fenugrec (F) et les rats gavés par l’eau seule. Les résultats sont exprimés en Moyenne ±
SEM (n=7)
(a : comparaison vs T ; b : comparaison vs G)

3-2-6- Variation du taux d’Acide urique :

Nos résultats montrent une diminution significative (p≤0.05) du taux d’AU chez le lot traité au
fenugrec (F) par rapport au lot (T). Pas de différence significative entre le lot (T) et le lot (G)
(Figure 32).

58
 RESULTATS

60

Concentration d'AU (mg/l)

a:*
40

20

0
T

F
G
Taux d'Acide urique chez les rats wistar mâles

Figure 32: Variation d’AU (mg/l) chez les rats témoins (T), les rats traités au fenugrec (F) et
les rats gavés par l’eau seule (G). Les résultats sont exprimés en Moyenne ± SEM (n=7)
(a : comparaison vs T)

3-2-7- Variation du taux d’Urée :

Nos résultats montrent une diminution significative (p≤0.05) du taux d’urée chez le lot traité au
fenugrec (F) par rapport au lot (T). Pas de différence significative entre le lot (T) et le lot (G)
(Figure 33).

59
 RESULTATS

0.5

Concentration de l'urée (g/l)

0.4
a:*
0.3

0.2

0.1

0.0
T

F
G
Taux de l'urée chez les rats wistar mâles

Figure 33: Variation d’urée (g/l) chez les rats témoins (T), les rats traités au fenugrec (F) et
les rats gavés par l’eau seule (G). Les résultats sont exprimés en Moyenne ± SEM (n=7)
(a : comparaison vs T)
3-2-8- Variation du taux de créatinine :
Nos résultats montrent une diminution significative (p≤0.05) du taux de créatinine chez le lot
traité au fenugrec (F) par rapport au lot (T). Pas de différence significative entre le lot (T) et le
lot (G) (Figure 34).
Concentration de créatinine (mg/l)

10
a:*
8

0
T

F
G

Taux de créatinine chez les rats wistar mâles

Figure 34: Variation de créatinine (mg/l) chez les rats témoins (T), les rats traités au fenugrec
(F) et les rats gavés par l’eau seule (G). Les résultats sont exprimés en Moyenne ± SEM (n=7)
(a : comparaison vs T)

60
 RESULTATS

3-2-9- Variation du TGO

Nos résultats montrent un changement insignifiant au niveau des concentrations sériques du
foie (TGO, TGP et PAL) chez les lots ; (T), (G) et (F).

100
Concentration du TGO (UI/L)

80

60

40

20

0
T

F
G

Taux du TGO chez les rats wistar mâles

Figure 35 : Variation du TGO (UI/l) chez les rats témoins (T), les rats traités au fenugrec (F)
et les rats gavés par l’eau seule (G). Les résultats sont exprimés en Moyenne ± SEM (n=7)

3-2-10- Variation du TGP

50
Concentration du TGP (UI/L)

40

30

20

10

0
T

F
G

Taux du TGP chez les rats wistar mâles

Figure 36 : Variation du TGP (UI/l) chez les rats témoins (T), les rats traités au fenugrec (F)
et les rats gavés par l’eau seule (G). Les résultats sont exprimés en Moyenne ± SEM (n=7)

61
 RESULTATS

3-2-11- Variation du PAL

200

Concentration du PAL (UI/L)

150

100

50

0
T

F
G
Taux du PAL chez les rats wistar mâles

Figure 37: Variation du PAL (UI/l) chez les rats témoins (T), les rats traités au fenugrec (F)
et les rats gavés par l’eau seule (G). Les résultats sont exprimés en Moyenne ± SEM (n=7)

3-3- Etude hormonale

3-3-1- Variation d’ACTH (Adreno CorticoTropic Hormone)

Nos résultats montrent une diminution très hautement significative (p≤ 0.001) du taux
d’ACTH chez le lot traité au fenugrec (F) par rapport au lot (G) et une diminution significative
(p≤ 0.05) dans le lot (F) par rapport au lot (T), par contre une augmentation significative
d’ACTH (p≤ 0.05) au niveau du lot (G) par rapport au lot (T). (Voir figure 38).

62
 RESULTATS

60 b:***

Concentration d'ACTH (pg/ml)

a:*
a:*
40

20

0
T

F
G
Taux d'ACTH chez les rats mâles

Figure 38: Variation d’ACTH (pg/ml) chez les rats témoins (T), les rats traités au fenugrec
(F) et les rats gavés par l’eau seule (G). Les résultats sont exprimés en Moyenne ± SEM (n=7)
NS :( Différence non significative P> 0.05), (Différence significative *p≤0.05), (Différence
hautement significative **p≤0.01)
(Différence très hautement significative ***p≤0.001
(a : comparaison vs T ; b : comparaison vs G)

3-3-2- Variation de TSH

Nos résultats montrent une baisse significative (p≤ 0.05) du taux de TSH chez le lot traité au
fenugrec (F) par rapport au lot (G). Par ailleurs une augmentation significative (p≤ 0.05) dans
le lot (G) par rapport au lot (T) (voir Figure 39).

63
 RESULTATS

concentration de TSH (UI/mL)

5
a:*
4
b:*
3

0
T

F
G
Taux de TSH chez le rat wistar mâle

Figure 39 : Variation du TSH (µUI/mL) chez les rats témoins (T), les rats traités au fenugrec
(F) et les rats gavés par l’eau seule (G). Les résultats sont exprimés en Moyenne ± SEM (n=7)
NS :( Différence non significative P> 0.05), (Différence significative *p≤0.05), (Différence
hautement significative **p≤0.01)
(Différence très hautement significative ***p≤0.001
(a : comparaison vs T ; b : comparaison vs G)

3-3-3- Variation de T3 : (La tri-iodothyronine)

Nos résultats montrent une réduction hautement significative (p≤ 0.01) du taux de T3
chez le lot traité au fenugrec (F) par rapport aux rats témoins et une réduction très hautement
significative (p≤ 0.001) dans le lot (F) par rapport au lot (G), en revanche une augmentation
significative (p≤ 0.05) au niveau du lot (G) par rapport au lot (T) (Voir Figure 40 ).

64
 RESULTATS

8 b:***

concentration de T3 ( pmol/L)
a:*
a:**
6

0
T

F
G
Taux de T3 chez le rat wistar mâle

Figure 40 : Variation du T3 (pmol/L) chez les rats témoins (T), les rats traités au fenugrec (F)
et les rats gavés par l’eau seule (G). Les résultats sont exprimés en Moyenne ± SEM (n=7)
NS :( Différence non significative P> 0.05), (Différence significative *p≤0.05), (Différence
hautement significative **p≤0.01) (Différence très hautement significative ***p≤0.001
(a : comparaison vs T ; b : comparaison vs G)

3-3-4- Variation de T4 (La thyroxine)

Nos résultats montrent une augmentation significative (p≤ 0.05) du taux de T4 chez le lot
traité au fenugrec (F) par rapport aux lots (T) et (G) (voir Figure 41).

65
 RESULTATS

20

concentration de T4 ( pmol/L)
a,b:*
15

10

0
T

F
G
Taux de T4 chez le rat wistar mâle

Figure 41 : Variation du T4 (pmol/L) chez les rats témoins (T), les rats traités au fenugrec (F)
et les rats gavés par l’eau seule (G). Les résultats sont exprimés en Moyenne ± SEM (n=7)
NS :( Différence non significative P> 0.05), (Différence significative *p≤0.05), (Différence
hautement significative **p≤0.01)
(Différence très hautement significative ***p≤0.001
(a : comparaison vs T ; b : comparaison vs G)

3-4- Etude neurocomportementale

3-4-1- Test du champ ouvert (Open Field ; OF)
La figure 42 montre les variations des paramètres du champs ouvert chez les rats mâles :
D’après les résultats de la figure, on remarque que le lot des rats mâles traités (F) montre une
diminution très hautement significative (p≤0.001) du temps passé dans le centre par rapport au
lot (T) et (G) et une diminution très hautement significative (p≤0.001) dans le lot (G) par rapport
aux témoins.
Le lot (G) présente une augmentation très hautement significative (p≤0.001) du temps passé
dans la périphérie par seconde (s) par rapport au lot (T).
Pour le nombre de redressement, nos résultats montrent une augmentation très hautement
significative (p≤0.001) chez le lot (F) par rapport au lot (G) et une diminution très hautement
significative par rapport au lot (T), concernant le lot (G), l’histogramme montre une réduction
très hautement significative (p≤0.001) par rapport aux témoins.
Pour la distance parcourue, il y a une diminution très hautement significative (p≤0.001) chez le
lot (G) par rapport aux témoins (T) et une augmentation très hautement significative (p≤0.001)

66
 RESULTATS

du lot (F) par rapport au lot (G) avec une réduction très hautement significative (p≤0.001) chez
le lot (F) par rapport au lot (T).

400
30
a:*** a,b:***
300
20
200 a,b:***

10 a:***
100

0 0
T

F
G

F
G
Temps passé dans la périphérie (s) Temps passé dans le centre (s)

15 2000

a,b:*** 1500
10 a,b:***

1000 a:***
5
a:***
500

0 0
T

F
G

F
G

Nombre de redressements Distance parcourue (cm)

Figure 42 : Variation des paramètres du test du champ ouvert chez les rats pendant
l’expérimentation. Les résultats sont exprimés en Moyenne ± SEM (n=7).
(a : comparaison vs T ; b : comparaison vs G)

3-4-2- Test du labyrinthe en croix surélevé (Elevated Plus Maze)

La figure 43 montre les variations des paramètres du labyrinthe en croix surélevé chez les rats
mâles :
Les lots des rats témoins (T) et traités (F) et (G) ont été soumis au test du labyrinthe en croix
surélevé au dernier jour de l’expérimentation (au 30ème jour).

67
 RESULTATS

D’après les résultats de la figure, on remarque que le lot des rats mâles traités (F) montre une
diminution très hautement significative (p≤0.001) du temps passé dans les bras ouverts par
rapport aux témoins (T) avec une augmentation très hautement significative par rapport au lot
(G).
Le lot (G) présente une diminution très hautement significative (p≤0.001) du temps passé dans
les bras ouverts par seconde (s) par rapport au lot (T).
Pour le temps passé dans les bras fermés du labyrinthe, nos résultats montrent une augmentation
très hautement significative (p≤0.001) chez le lot (G) par rapport aux témoins, concernant le lot
(F), l’histogramme montre une élévation très hautement significative (p≤0.001) par rapport aux
témoins et une diminution en revanche très hautement significative par rapport au lot (G).
Concernant le nombre d’entrée dans les bras ouverts, il y a une diminution très Hautement
significative (p≤0.001) chez le lot (G) par rapport aux témoins (T) et une augmentation
hautement significative (p≤0.01) du lot (F) par rapport au lot (G).
Pour le nombre d’entrée dans les bras fermés, il y a une diminution hautement significative
(p≤0.01) chez les rats traités (F) par rapport aux témoins (T) et une diminution très hautement
significative (p≤0.001) chez les rats du lot (G) par rapport aux témoins (T).

68
 RESULTATS

a:***
250
300
a,b:*** 200

200 150

100
a,b:***
100 a:***
50

0 0

F
G
T

F
G

Temps passé dans les bras ouverts chez les rats mâles (s) Temps passé dans les bras férmés chez les rats mâles (s)

6
5
b:**
b:** a:***
4 4

3 a:***

2 2

0 0
T

F
G
T

F
G

Nombre d'entrées dans les bras ouverts chez les rats mâles Nombre d'entrées dans les bras férmés chez les rats mâles

Figure 43: Variation des paramètres du labyrinthe en croix surélevé chez les rats des lots (T),
(G) et (F) pendant l’expérimentation. Les résultats sont exprimés en Moyenne ± SEM (n=7).
(a : comparaison vs T ; b : comparaison vs G)

3-4-3- Test de la boite claire/obscurité (Light/Dark Box ; LDB)

D’après les résultats de la figure (44) qui expose les variations des paramètres du test de la
boîte claire/obscurité, on remarque que le lot des rats mâles traités (F) a montré une

69
 RESULTATS

augmentation très hautement significative (p≤0.001) du temps passé dans le compartiment clair
par rapport au lot (T) et (G), avec une diminution très hautement significative (p≤0.001) chez
le lot (G) par rapport au lot (T).
Par contre, pour le temps passé dans le compartiment obscur, les résultats exposent une
diminution très hautement significative (p≤0.001) chez le lot (F) par rapport au lot (G) et (T).
Ainsi une augmentation importante dont (p≤0.001) chez le lot (G) par rapport au lot témoin (T).

Figure 44 : Variation des paramètres du test de boîte claire/obscurité chez les rats pendant
L’expérimentation. Les résultats sont exprimés en Moyenne ± SEM (n=7).
(a : comparaison vs T ; b : comparaison vs G)

3-4-4- Test d’enfouissement des billes

D’après les résultats de la figure (45) qui expose le nombre de billes enfouies du test, on observe
que le lot des rats mâles traités (F) a montré une diminution très hautement significative
(p≤0.001) du nombre de billes enfouies par rapport au lot (G) et une réduction hautement
significative (p≤0.01) par rapport au lot (T).
Par contre, on remarque une augmentation très hautement significative (p≤0.001) chez le lot
(G) par rapport au lot (T).

70
 RESULTATS

15

Nombre de billes enfouies

a:***

10
a:**
b:***
5

0
T

F
G
Nombre de billes enfouies par le rat mâle

Figure 45 : Variation des paramètres du test d’enfouissement des billes chez les rats pendant
l’expérimentation. Les résultats sont exprimés en Moyenne ± SEM (n=7).
(a : comparaison vs T ; b : comparaison vs G)

71
 RESULTATS

3-5- Etude histologique :

3-5-1- Etude histologique des reins :

Figure 46: Tissu rénal d’un rat du lot témoin (coloration Hématéine-Eosine « HE » G×40).

L’histologique chez les rats témoins (Figure 46) montre une architecture tissulaire bien
préservée, avec la pulpe blanche, la pulpe rouge et la zone marginale visibles, structure normale
des tubules rénaux et des glomérules.

72
 RESULTATS

Figure 47: Tissu rénal d’un rat du lot traité au fenugrec (coloration Hématéine-Eosine « HE »
G×40).

L’étude histologique de la coupe tissulaire chez les rats traités au fenugrec montre un aspect
tissulaire normal dont la pulpe blanche, la pulpe rouge et la zone marginale sont clairement
visibles, structure normale des tubules rénaux et des glomérules.

73
 RESULTATS

3-5-2- Etude histologique du foie :

Figure 48: Tissu hépatique d’un rat du lot témoin (coloration Hématéine-Eosine « HE »
G×40).

L’histologie du foie d’un rat témoin montre un parenchyme hépatique normal fait d’hépatocytes
à disposition trabéculaires groupés en lobules de forme hexagonale délimités par des septa
fibrocollagéniques. Ils sont centrés par une veine Centro-lobulaire et délimités au niveau de
leurs angles par des espaces portes (Figure 48).

74
 RESULTATS

Figure 49: Tissu hépatique d’un rat du lot traité au fenugrec (coloration Hématéine-
Eosine « HE » G×40).

Concernant le lot (F) traité à l’extrait aqueux du fenugrec, on note un aspect normal du
parenchyme hépatique formé de cellules hépatiques groupées en lobules de forme hexagonale
délimités par des septa fibrocollagéniques.

75
DISCUSSION
 DISCUSSION

4- Discussion :
« Le système de santé traditionnel se réfère à un ensemble de valeurs positives et négatives qui
le fonde et l’inspire. Il est légitime de par son origine, mais aussi de par sa finalité qui est de «
soigner », c’est-à-dire remettre en harmonie un équilibre (physique ou psychologique,
individuel ou collectif) qui a été perturbé. » (Claisse-Dauchy, 2000).
Les lipides, molécules hydrophobes, comprennent les acides gras, les triglycérides, les
phospholipides et le cholestérol. Leurs principales fonctions sont : vecteurs énergétiques via les
triglycérides, composants des membranes cellulaires, précurseurs des hormones stéroïdes
via le cholestérol, et médiateurs lipidiques (Maqsood, 2014).
Le cholestérol n’est pas soluble dans le sang, car c’est un composé hydrophobe. Son transport
est assuré par quatre types de lipoprotéines.
-Les lipoprotéines de basse densité (LDL- C) transportent le cholestérol dans le sang vers les
cellules de l’organisme. Des taux très importants de LDL-C conduisent généralement au dépôt
de cholestérol sur les parois des artères sous forme de plaque d’athérome ;
-Les lipoprotéines à haute densité (HDL- C) le captent de nouveau au niveau des tissus extra
hépatiques et le ramènent vers le foie ou il est dégradé ;
-Les lipoprotéines à très basse densité (VLDL) participent au transport des lipides vers le foie;
Son métabolisme est contrôlé par la 7-alpha-hydroxylase, enzyme-clé de la transformation du
cholestérol en acides biliaires au niveau hépatiques et par le taux de réabsorption des sels
biliaires par le cycle entéro-hépatique (Maqsood, 2014).
Le diabète sucré est un groupe de troubles métaboliques caractérisé par une hyperglycémie
(Daisy et al., 2013).
Le diabète est caractérisé par l’augmentation du taux de glucose dans le sang au-dessus du seuil
de son élimination rénale (hyperglycémie et/ou glucosurie. Permanentes ou non). En l’absence
de traitement, les diabètes entrainent des symptômes généraux aigus : (polyurie, polydipsie,
amaigrissement inexpliqué, somnolence voir coma) et une glycémie à n’importe quelle l’heur
de la journée ≥2.00 g/l (11.1 mmol/l). (Fargherazzi, 2002), il est associé aux complications
aigues (acidocétose et hyperglycémie) et aussi aux complications tardives touchant les yeux,
les reins, les pieds, les nerfs, le cerveau, le coeur et les vaisseaux sanguins (Lefebvre, 2017).
Dans notre étude nous avons confirmé que l’extrait aqueux des graines de fenugrec a un effet
stimulant sur la prise de poids corporelle chez les rats wistar mâles, ces résultats concordent
avec ceux obtenus chez l’homme et les rats ayant reçu un régime riche en poudre de fenugrec
(Petit et al., 1995, Brasch et al., 2003, Vats et al., 2004) et confirme le rôle orexigénique des
graine de fenugrec. En effet la stimulation de l’appétit est obtenue chez des rats après traitement

76
 DISCUSSION

par des saponines stéroïdiennes extraites des graines de fenugrec. Ces saponines stimulent
l’appétit chez les animaux en modifiant le rythme circadien du comportement alimentaire
(Petit, 1995).
Des études expérimentales sur des rats ont montré que l’administration de 33, 37,5 ou 333
mg/kg de poids corporel par jour d’un extrait de graines de fenugrec enrichi en stéroïdes
renforce l’activité des enzymes digestives et donc un effet bénéfique du fenugrec sur la
digestion. Une augmentation significative de l’apport alimentaire, des mouvements de l’intestin
ainsi que la motivation à manger ont été notées. De même, la forte teneur en fibres dans la
graine de fenugrec contribue à soulager les maux observés lors de la constipation (WHO, 2007)
(Meghwal et Goswami, 2012).
D'autres travaux ont mis en évidence un neuropeptide, le NPY, un puissant orexigène
hypothalamique, essentiellement au niveau des noyaux arqués. Son niveau de production est
soumis à un rythme circadien et il est régulé notamment par des facteurs hormonaux ; il est
inhibé par l'insuline et la leptine et stimulé par la ghréline et les glucocorticoïdes (Gourcerol
et al., 2006).
Par ailleurs, nous avons noté une amélioration significative du profil lipidique chez les
rats traités à l'extrait aqueux du fenugrec :
- baisse des triglycérides plasmatiques ;
- effet hypocholestérolémiant ;
- augmentation de la fraction HDL-c ;
- réduction du LDL-c.
Ces résultats confirment ceux trouvés par Sowmya et Rajyalakshmi (Sowmya, Rajyalakshmi,
1999) ; Billaud et Adrian (Billaud et Adrian, 2001) qui ont montré que les saponines de la
graine de fenugrec présentent des propriétés physiologiques et fonctionnelles, en particulier un
effet hypocholestérolémiant lié à leur caractère émulsifiant et hydrophobe d'une part et leur rôle
dans l'augmentation de l'excrétion biliaire du cholestérol d'autre part (Stark et Madar, 1993).
Bien que le mécanisme d’action ne soit pas encore élucidé, il semble que les fibres et les
saponines stéroïdiques internes agissent avec les sels biliaires dans le tractus digestif. La4-
hydroxy-isoleucine, acide aminé inhabituel isolé du fenugrec, a été testée chez des hamsters
dyslipidémiques. Une diminution significative des niveaux plasmatiques de triglycérides de
33%, du cholestérol total de 22% et d’acides gras libres de 14%, une augmentation de 39% du
ratio HDL cholestérol/cholestérol total ont été observées (Braun, 2010).

77
 DISCUSSION

Quant à la baisse du taux des triglycérides plasmatiques, elle serait due aux fibres diététiques
solubles de l'extrait du fenugrec (Bainton et al., 1992). La fibre soluble du fenugrec peut réduire
les triglycérides en diminuant les acides gras non estérifiés chez les rats.
En outre, nos résultats montrent clairement une élévation importante du taux de HDL-c et une
réduction significative des taux de LDL-c, ce qui aurait un impact sur la réduction du risque des
maladies cardiovasculaires.
Cela est en parfait accord avec les travaux de Tadigoppula et al., en 2005 qui ont montré une
augmentation de 39 % du rapport HDL-c/cholestérol total chez le hamster traité avec la poudre
du fenugrec et ceux de Arvill en 1995 et Hannan et al., en 2003.
Dans la présente étude nous avons constaté un effet hypoglycémiant du fenugrec sur les rats
wistar, ce qui concorde avec les travaux de Basu et Srichamroen en 2010. En effet, Une action
hypoglycémiante et antidiabétique été mise en évidence chez l’animal. En effet, des études ont
montré que Trigonella foenum graecum, administré par voie orale a produit une
diminution significative de la glycémie chez des rats présentant un diabète induit par l’Alexane
et ce de manière dose dépendante. Cette action est due essentiellement à la présence de fibres
solubles qui font baisser l’activité de la disaccharidase intestinale et l’absorption du glucose.
Cependant des études réalisées in vitro et in vivo ont montré que d’autres constituants de la
graine tels la4-hydroxy-isoleucine, le galactomannane et la saponine, abaissent la glycémie et
agissent en synergie pour inhiber l’absorption du glucose et promouvoir les fonctions
pancréatiques. Par ailleurs, on a également noté une augmentation de la glycogenèse hépatique,
du transport de glucose dans les adipocytes et de l’action de l’insuline. Ainsi le fenugrec offre
une alternative dans le traitement et la prévention du diabète et de ses complications (Basu et
Srichamroen, 2010).
L’urée, la créatinine, l'acide urique sont souvent considérés comme des marqueurs fiables de la
fonction rénale. Élévations des concentrations sériques de BUN et acide urique chez les rats
hyperthyroïdiens sont des signes de dysfonctionnement rénal (Eman et al., 2018).
Nos résultats montrent une diminution du taux d’urée, de créatinine est d’AU ainsi un
changement insignifiant au niveau des concentrations sériques du foie (TGO, TGP et PAL)
attribuable à la propriété antioxydante du fenugrec qui protège les organes fonctionnels et a un
effet hépatoprotecteur (Eman et al., 2018)
Le fenugrec a un effet néphroprotecteur qui peut être attribué à ses propriétés antioxydantes et
hypoglycémiants et à son effet constructif du collagène qui empêche la destruction induite par
les ROS de la filtration et de la membrane basale du rein (Adeniyi1 et al., 2012).

78
 DISCUSSION

En 2010, Navayath et al ont rapporté que l'extrait aqueux de Trigonella foenum graecum
(fenugrec) prévient l'hépatotoxicité et la néphrotoxicité induites par la cyperméthrine. Des rats
mâles Wistar ont été traités avec 1/10 DL50 (25 mg / kg de poids corporel) de cyperméthrine
(CM) et 10% d'extrait aqueux de fenugrec (GFaq) pendant 60 jours. Le traitement CM a
provoqué une augmentation des substances réactives à l'acide thiobarbiturique (TBARS), une
déplétion du glutathion (GSH) et une réduction des activités de la superoxyde dismutase (SOD),
de la catalase (CAT), de la glutathion peroxydase (GPx) et de la glutathion-S-transférase (GST)
chez foie et reins. Ils ont observé une réduction significative des phospholipides totaux et une
augmentation des activités des phospholipases A (PLA) et C (PLC) dans le foie et les reins et
une augmentation des activités des enzymes marqueurs sériques, de l'aspartate transaminase
(AST), de l'alanine tansaminase (ALT), de la phosphatase alcaline (ALP), la lactate
déshydrogénase (LDH) et la gamma glutamyl transférase (GGT). Le traitement avec 10% de
GFaq a montré une reconstitution du statut antioxydant et a ramené toutes les valeurs à un
niveau presque normal, indiquant l'effet protecteur du fenugrec (Navayath et al., 2010).
En 2007, Laroubi et al ont étudié l'effet prophylactique des graines de Trigonella foenum
graecum L. sur la formation de calculs rénaux chez le rat. L'effet inhibiteur de l'extrait aqueux
de graines de fenugrec a été examiné sur la formation de calculs rénaux d'oxalate de calcium
induite par l'éthylène glycol (EG) avec du chlorure d'ammonium. A la fin de l'expérience, tous
les reins ont été prélevés et examinés au microscope pour détecter d'éventuelles localisations
de cristaux / calculs et la quantité totale de calcium dans le tissu rénal a été évaluée. Le sang a
été récupéré pour déterminer les niveaux de calcium, de phosphore, de créatinine et d'urée. Les
résultats ont montré que la quantité de calcification dans les reins et la quantité totale de calcium
du tissu rénal chez les rats traités avec du fenugrec étaient significativement réduites par rapport
au groupe non traité. Le fenugrec peut être utilisé dans le traitement des patients atteints de
lithiase urinaire calcique (Laroubi et al., 2007).

En 2010, Chauhan et al ont rapporté un potentiel anti-inflammatoire du fenugrec (Chauhan et

al., 2010).

Dans ce travail, nous avons essayé de montrer l’effet du fenugrec comme traitement contre
l’anxiété provoquée par le gavage oral chez le rat wistar, en effet, les résultats des tests
neurocomportementaux tels le test de labyrinthe en croix surélevé (Elevated Plus Maze)
et test de la boîte claire/obscurité (Light/Dark Box ; LDB), le test du champs ouvert (OF)
et le test d’enfouissement de billes le confirme.

79
 DISCUSSION

Concernant le test (EPM), Plus l’animal est localisé dans les bras fermés plus son
comportement est désigné comme anxieux (Pellow et al., 1985). Nous avons trouvé que les rats
du lot (G) soumit au gavage orale de l’eau seule passe plus de temps dans les bras fermés et
moins de temps dans les bras ouverts en comparaison avec le lot (F) et le lot (T) respectivement
cela signifie que le lot (G) est plus anxieux que le lot (F) ce dernier est plus anxieux que le lot
témoin (T). Ces résultats sont confirmés par ceux du test (LDB) dont les rats du lot (G) passe
beaucoup plus de temps dans le compartiment obscur et moins de temps dans le compartiment
clair en comparaison avec le lot (F) qui à son tour y passe moins de temps que le lot (T).
Une littérature fournie montre que le gavage provoque une réaction de stress rapide et
prononcée. L’activation de l’axe hypothalamo-hypophyso-surrénalien a été objectivée chez la
souris par l’augmentation de l’excrétion fécale de corticostérone, et chez le rat par
l’augmentation de la pression artérielle et du rythme cardiaque. Certaines études indiquent que
les effets cardiovasculaires surviennent même lorsqu’un petit volume de liquide est administré
(contredisant la notion d’un stress lié à un volume excessif) et persistent pendant au moins 1
heure après le gavage. Les changements physiologiques, métaboliques (liés notamment à
l’impact sur les systèmes enzymatiques de détoxication), endocriniens et comportementaux
induits par le stress sont susceptibles d’interférer avec les effets de la substance à étudier
(Patricia et al., 2012) .

Bien que des matériaux spécifiques, tels que les véhicules huileux, et des volumes de dose
élevés (par exemple, 40 mg / kg) peuvent induire des réponses physiologiques chez le rat après
gavage (Brown et al., 2000). Le gavage orogastrique avec des matières aqueuses induit des
effets indésirables chroniques, le stress chez le rat, la détérioration du bien-être animal est
inconnue (Patricia et al., 2012).
Le gavage expose à des complications telles que l’introduction accidentelle de liquide dans la
trachée et les poumons, une apoptose hépatique, un reflux gastro-oesophagien, une
inflammation chronique, des saignements et une perte de poids. Certains rapports font état d’un
taux de morbimortalité dépassant 50 % (Vandenberg et al., 2014). En effet, nos résultats
montrent une perte remarquable du poids corporel au niveau du lot (G) par rapport aux autres
lots de l’expérimentation, ce qui explique que la technique du gavage orale engendre la perte
du poids.
Nos résultats ont mis l’accent sur la capacité d’une plante médicinale nommée Trigonella
foenum graecum L. à améliorer la secrétions d’hormones hypophysaires et thyroïdiens.
L’effet des extraits de graines de fenugrec (200 mg / kg de poids corporel) a été démontré

80
 DISCUSSION

pour son potentiel d’amélioration dans le modèle de rat hyperthyroïdique induit par la L-
thyroxine, qui était rendu hyperthyroïdien par des injections quotidiennes de la L-thyroxine
(300 µg/ kg de poids corporel) (Tahiliani et Kar, 2003).
D'après les résultats, il est évident que l’extrait de la graine de fenugrec diminue la
concentration sérique de T3 chez les rats cela a été confirmé par les travaux de Sunanda et al.,
1999 Dont les résultats confirment qu’il est évident que l’extrait de la graine de fenugrec
diminue la concentration sérique de T3 à la fois chez la souris et rats.
Au niveau de la thyroïde, la plupart des T3 circulants est produite en périphérie par
extrathyroïdienne 59-monodésiodation de T4 à T3.
Il semble donc que, dans la présente étude, une diminution de la concentration de T3 après
l'administration d'extrait de graines peut être le résultat de l'inhibition dans la conversion de T4
en T3 en tissu extrathyroïdien.
Une concentration intéressante de T4 a été trouvée plus chez les animaux traités. C’est
compréhensible, car il est connu que T4 agit comme une prohormone ou substrat pour la
formation de T3 et évidemment sa disponibilité en circulation devrait être plus élevé lorsque la
conversion de T4 en T3 devient moindre (Sunanda et al., 1999).

Figure 50 : Synthèse et sécrétion des hormones thyroïdiennes (Bernard et al., 2006).

81
 DISCUSSION

Le stress peut se manifester tant sur le plan physique que psychologique et génère
systématiquement une hyperfonction du système nerveux. Celui-ci étant étroitement lié au
système hormonal, une cascade de réactions chimiques se déclenche, entraînant des troubles
manifestes. Lorsque le stress perdure, nous nous trouvons dans un état de réponse permanente,
ce qui use notre système cardio-vasculaire, diminue nos défenses immunitaires et perturbe un
ensemble de régulations hormonales indispensables au bon fonctionnement de notre corps. Le
stress chronique a pour conséquence, un taux de cortisol élevé, une hormone qui peut causer
certains dommages à la glande thyroïde et ralentir l'absorption des hormones
thyroïdiennes. Donc il a des effets immédiats sur le système endocrinien et une action directe
sur l’axe neurohormonal (Breton, 2015) (voir figure 51 et 52).

82
 DISCUSSION

Figure 51 : Axe Hypothalamo-Hypophyso-Surrénalien (Breton, 2015).

83
 DISCUSSION

Figure 52 : Axe Hypothalamo-Hypophyso-Endocrinien (Breton, 2015).

Figure 53 : Effet de stress sur la thyroïde (Breton, 2015).

Certains rapports font état d’un taux de morbimortalité dépassant 50 % (Vandenberg et

al., 2014). En effet, nos résultats montrent une perturbation endocrinienne remarquable dont
une augmentation significative de la sécrétion de l’hormone hypophysaire

84
 DISCUSSION

ACTH ainsi une augmentation significative du taux de TSH au niveau du lot (G) par rapport
aux autres lots de l’expérimentation, ce qui explique que la technique du gavage orale engendre
des perturbations endocriniennes au niveau hypophysaire mais aussi thyroïdien par une
augmentation significative de la concentration de l’hormone T3 chez le lot (G) par rapport au
lot (T) avec une sécrétion plus élevé dans la concentration de T4 dans le lot (G) et qui est voisine
à celle remarquée dans les rats témoins.
Lorsqu’un agent stressant est identifié, l’hypothalamus envoie l’hormone CRH à la
glande pituitaire pour activer la sécrétion de L’ACTH, qui à son tour active la croissance et le
développement de la glande surrénale et stimule la sécrétion de cortisol, hormone qui intervient
dans les mécanismes de défense de l'organisme vis-à-vis du stress (Simon et al., 2007).
Elisabeth Breton a entrepris une étude sur les effets de la stimulation réflexologique dans
la prise en charge des répercutions neurophysiologiques du stress sur la thyroïde.
Cette étude s’est effectuée sur une année, avec des prises de sang régulières, qui ont révélé
l’impact du stress sur le taux TSH. Les séances régulières en réflexologie plantaire ainsi que les
auto-traitements réflexes ont permis de baisser, de réguler et maintenir le taux TSH sans avoir
recours au traitement médicamenteux. Lors de cette étude, il s’est avéré que le taux TSH bien
qu’il soit dans les normes, subit certaines variations, en fonction d’un niveau de stress que la
personne peut vivre (Breton, 2015).

85
 DISCUSSION

Figure 54 : Représentation Graphique de Taux TSH en fonction de stress (Breton,

2015).

La pratique régulière des séances de réflexologie (au moins une séance par mois) réduit
considérablement les effets négatifs du stress et permet une régulation d’un dérèglement
ponctuel neurohormonal. La stimulation réflexologique permet de rétablir ou de réguler le
fonctionnement normal de la glande thyroïde (Breton, 2015).

86
 DISCUSSION

Ainsi, nous pouvons affirmer que l'extrait aqueux des graines de fenugrec, Trigonella foenum
graecum L. grâce à ses composés chimiques, se révèle donc être d'une grande valeur alimentaire
et présente de multiples vertus phyto-thérapeutiques (Kassem et al., 2006).
Bien que, dans de nombreux pays, plusieurs des usages médicinaux traditionnels des graines de
fenugrec figurent toujours, la recherche actuelle doit concentrer ses efforts sur les mécanismes
d’action de ces produits.

L'examen histopathologique de divers tissus du foie et des reins principaux organes

impliqués dans l’élimination des toxiques, n'a révélé aucun changement significatif attribuable
à la consommation de graines de fenugrec. Il est conclu que le fenugrec semble être
essentiellement non toxique aux doses administrées aux rats dans cette étude sur une période
de 30 jours, Ce résultat est en accord avec ceux rapportés par des essais cliniques sur des
patients diabétiques (Sharma et al., 1996) et des études histopathologiques menées sur des rats
(Rao et al., 1996) ayant consommé des graines de fenugrec en poudre et par les travaux de
Harchane en 2012.

87
CONCLUSION ET
PERSPECTIVES
 CONCLUSION ET PERSPECTIVES

5- Conclusion et perspectives
Parmi les plantes médicinale les plus utilisées en phytothérapie traditionnelle figure le fenugrec
qui représente l’une des nombreuses légumineuses possédant des propriétés
thérapeutiques connues depuis des siècles.
Le fenugrec est riche en métabolites secondaires notamment en saponines, stéroïdes, alcaloïdes
et flavonoïdes qui représentent sur le plan pharmaceutiques le point de départ de nombreuses
réactions chimiques et biotechnologiques aboutissant à des médicaments tels que les
corticostéroïdes, les hormones sexuelles, les anabolisants, les contraceptifs et les
spironolactones.
Dans la présente étude, nous avons démontré l’effet de l’extrait aqueux des graines de fenugrec
sur les paramètres biochimiques, hormonaux et neurocomportementaux chez les rats wistar.
Ainsi nous avons essayé de montrer l’effet du fenugrec sur le poids corporel et comme
traitement contre l’anxiété.
Le but de cette étude était de trouver de nouvelles approches thérapeutiques dans la prévention
des altérations physiopathologiques et comportementales.
En outre, les résultats obtenus prouvent que les molécules contenues dans les graines stimulent
l’appétit donc gain de poids corporel, réduisent la glycémie, améliorent le profil lipidique ainsi
que la sécrétion d’hormones thyroïdiens, d’ACTH et diminuent l’anxiété.

A partir de ces résultats, il serait souhaitable de réaliser les perspectives suivantes :

➢ Tester l’effet du l’huile essentielle du fenugrec au lieu de l’extrait aqueux.
➢ Tester le pouvoir anxiolytique et antioxydant d’autres molécules actives telles que, la
cannelle, le curcuma et le gingembre.
➢ Choisir une autre méthode d’induction du fenugrec que le gavage oral.
➢ Etude histologique au niveau du pancréas et du cerveau.
➢ Réalisation du stress oxydatif chez les rats adultes et leurs progénitures.
➢ Réalisation d’une étude similaire mais sur une durée différente.
➢ Etudier l’utilisation de différentes doses de l’extrait aqueux de fenugrec.

88
 RÉFÉRENCES
BIBLIOGRAPHIQUES
 RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
-A-

1. Access 2 In-Lab Training Manual, Version 1.0, (2017), P : 16-17

2. Adeniyi1 TT., Ajayi Sado GA., Olopade HG., (2012). Vitamin C and garlic (Allium
sativum) ameliorate nephrotoxicity and biochemical alterations induced in lead-exposed
rats. Journal of Medicine and MedicalSciences, 3:273-280.
3. Adli Djallal Eddine Houari., (2014). Effets prophylactique de l’administration d’un
extrait de Syzygium aromaticum (Clou de girofle) chez les rats wistar en croissance
intoxiqués au plomb et au manganèse. Etude biochimique, histologique et
neurocomportementales. (Thèse de doctorat)
4. Ait Youssef M., (2006). Plantes médicinales de Kabylie, Ibis Press, Paris
5. Ait-Hamadouche N., (2010). Effets de l’exposition chronique au plomb sur le système
reproducteur et l’axe hypothalamo-hypophysaire chez le rat mâle wistar. Etude
histologique et biochimique.
6. Arrant Ae., Jemal H., Kuhn Cm., (2013) : Adolescent Male Rats Less Sensitive Than
Adults To The Anxiogenic And Serotonin- Releasing Effects Of Fenfluramine.
Neuropharmacology. 65 :213-22
7. Arvill, A., Bodin L., (1995). Effet of short-term ingestion of konjak glucomannan on
serum cholesterol in healthy men. Am J Clin Nutr. 61(3), 585-9.

-B-
8. Bainton D., Miller NE., Bolton CH., Yarnell JWG., Sweetnam PM., Baker IA., Lewis
B., Elwood PC., (1992). Plasma triglyceride and high density lipoprotein cholesterol as
predictors of ischaemic heart disease in British men. Heart BMJ journals. 68, 60-66.
9. Baker H., Lindsey J., Weisbroth S., (1980). The Laboraty Rat, .Research Application
.[Link] : Cc Pa [Link].2, [Link].
10. Balleter WG., Bushaman CS., Tidwell PW., (1859). Anal Chim. 33,59
11. Berthelot MPE, (1859). Report Chim. 284
12. Basch E ., Ulbricht C., Kuo G., (2003). Therapeutic Applications of Fenugreek. Alternat
Med Rev 8(1) 20–7 10.
13. Basch E., Ulbricht C., Kuo G., Szapary P., Smith M., (2003). Therapeutic
Applications of Fenugreek. Alternat Med Rev., 8 (1), 20-7.

89
 RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES

14. Basu TK., Srichamroen A., (2010). Health benefits of Fenugreek (Trigonella foenum-
graecum, Leguminosse) bioactive foods in promoting health : Fruits and Vegetables.
Elsevier. 425-35.
15. Basu TK., Srichamroen., (2010). Health benefits of Fenugreek (Trigonella foenum-
graecum, Leguminosae) In : Bioactive Foods in Promoting Health : Fruits and Vegetables
Watson RR and Preedy VR Academic Press/Elsevier Inc. London, Burlington, San Diego
16. Baudoin JP., (2001). Contribution des ressources phytogénétiques à la sélection variétale
de légumineuses alimentaires tropicales. Biotechnol. Agron. Soc. Environ. 2001 5(4) pp
221–230.
17. Beckman Access Assay Manual, (2005).
18. Beckman Access Assay Manual, (2016).
19. Bergmeyer and Horder., (1980). Clin. Chem. Acta 105, 147 F
20. Bergmeyer H et Wahiegeld., (1978). Clin. Chem 24, 58
21. Bergmeyer H., Bower and Cols., (1976). Clin. Chim Acta 70
22. Bergmeyer H., Schaibe and Walefeld., (1978). Clin. Chem. 24, 58 - 73
23. Bernard G., Michel Z., Guy L., José S., (2006). Chirurgie de la thyroïde et de la
parathyroïde. Edition n 41.
24. Billaud C., Adrian J., (2001). Le fenugrec : composition, valeur nutritionelle et
physiologique = Fenugreek : composition, nutritional value and physiological properties.
Sci Aliments., 21 (1), 3-26 (3 p.3/4).
25. Bocquet B., (2012). Étude de toxicité in-vitro et in-vivo de boîtes quantiques contenant
du cadmium et synthétisées par voie aqueuse. Anses • Bulletin de veille scientifique, 17:
16-19.
26. Boukef MK., (2006). Les plantes dans la médecine traditionnelle Tunisienne. Agence de
coopération culturelle et technique, Paris 12.
27. Braun L., (2010). Introduction to herbal medicine. In : Herbs and natural supplements,
Braun L, Cohen M. 3rd ed. Elsevier Australia.
28. Braun L., Cohen M., (2010). Introduction to herbal medicine. Herbs and natural
supplements. 1, 3rd ed.
29. Brown AP., Dinger N., Levine BS., (2000). Stress produced by gavage administration
in the rat. Contemp Top Lab Anim Sci. 39, 17–21.
30. Bruneton J., (2009). Pharmacognosie, phytochimie, plantes médicinales (4e ed.). Paris :
Lavoisier,
31. Burstein M., (1970). Lipid Res.11. 583

90
 RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES

-C-
32. Campbell CS., Judd WS., Jules Bouharmont., Kellogg EA., Stevens P., (2001).
Botanique systématique : une perspective phylogénétique. Edition de boeck.
33. Chabbi R., (2010). Caractérisation des bactéries isolées à partir du genre Trigonella L.
(légumineuses) poussant dans différents écosystèmes de l'Est algérien. Thèse de magister
de l'Université Mentouri Constantine. Algérie.
34. Chauhan G., Sharma M., Varma A., Khanrkwal H., (2010). Phytochemical analysis
and anti-inflammatory potential of fenugreek. Medicinal plants- international journal of
phytomedicines and related industries. 2(1). Available from: [Link]
35. Chevallier A., traduction Vican P., (2001). Encyclopédie des plantes médicinales. Paris
: Larousse.
36. Chouba I., (2016). Effets maternels et postnataux de l’infection gestationnelle chez des
rattes wistar diabétiques traitées à l’hespéridine. (Thèse de doctorat)
37. Claisse-Dauchy R., (2000). Médecine traditionnelle du Maghreb, rituels d'envoûtement
et de guérison au Maroc. Paris : L'harmattan.
38. Come D., Françoise C., (2006). Dictionnaire de la biologie des semences et des plantes,
EditionTec.

-D-
39. Daisy P., Feril G., Jeeva K., (2013). Hypolipidemic And Hepatoprotrctive Effects Of
Cassia Auriculata Linn Barck Extracts On Streptozotocin Induced Diabetics In Male
Wistar Albinos Rats. Asian J Pharm Clin Res., 6 (2), 43-48.
40. Dingeon B., (1975). Ann. Biol. Clin. 33,3
41. Djemli S., (2014). L’effet combiné du zinc et de la vitamine C (acide ascorbique) contre
la toxicité du nickel chez les rats Wistar. (Thèse de doctorat)

-E-
42. Elisabeth B., (2015). L’impact de stress sur la thyroïde et les bienfaits de la réflexologie.
P : 1-3-5.
43. Eman GE Helal., Rasha AA El sayed., Sara Ebrahiem., Mohamed A Mustafa.,
(2018). Department of Zoology, Faculty of Science (Girls), Al-Azhar University, Cairo,
Egypt.
44. Ennaceur A., Neave N., Aggleton JP., (1997). Spontaneous objet recognition and object
location in memory in rats : the effects of lesions in the cingulated cortices, the medial
prefrontal cortex, the cingulum bundle and the fornix. Exp Brain Res ; 133 :509-19.

91
 RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES

-F-
45. Fagherazzi H., (2002). Actualités Sur Le Diabéte De Type 2, Service Science de La Vie
70, P3.
46. FAO (1996) : Rapport de pays pour la conférence technique internationale de la FAO sur
les ressources phylogénétiques, Ministère De L’agriculture Tunis.
47. Fasce CF., (1982). Clin. Chem. 18901
48. Fedelic AT., Rachna AP., (2009). Pharmacological actions and potential uses of
trigonella foenum- graecu m: a review. Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical
Research , 2(4), pp29-38.
49. Fossati P., Prencipe I., (1982). Clin. Chem. 28, 2077

-G-
50. Ghedira K., Goetz P., Le Jeune R., (2010). Fenugrec : Trigonella fœnum-græcum L.
(Fabaceae ex. Leguminosae). Phytothérapie, 8, 180-184
51. Gourcerol G., Ducrotté P., Vandry H., Jégon S., (2006). Intégration Des Signaux
Digestifs Par L’hypothalamus, Mécanismes Et Implications Thé[Link].,
19, 42-47

-H-
52. Hall CS., (1934). Emotional behaviour in the rat. J Comp Physical.18:385-403.
53. Handley SL., Mithani S., (1984). Effects of alpha-adrenoceptor agonists and antagonists
in a mazeexploration model of 'fear'-motivated behaviour. Naunyn-Schmiedeberg's
archives of pharmacology: 327, 1-5.
54. Hannan J., Rokeya B., Faruque O., (2003). Effect Of Soluble Dietary Fibre Fraction
Of Trigonella Foenum Graecum On Glycemic, Insulinemic, Lipidemic And Platelet
Aggregation Status Of Type 2 Diabetic Model Rats. J Ethnopharmacol. 88, 73.
55. Harchane H., El Addas H., Amsaguine S., El Amrani N., Radallah D., (2012). Effets
l'extrait aqueux des graines du fenugrec (Trigonella foenum-graecumL.) sur l'amélioration
du profil lipidique et la prise de poids chez le rat. Springer-verlag France : pp 1-6
56. Haussamen TU., (1977). Clin. Chim. Acta. 35, 271-273
57. Helambe SS., Dande RP., (2012). Fenugreek (Trigonella foenum-graecumL.) : An
Overview. International Journal of Current Phamaceutical Review and Research. 2(4) :
pp169-187.
58. Helmy HM., (2011). Study the Effect of Fenugreek Seeds on Gastric Ulcer in
Experimental Rats. World Journal of Dairy & Food Sciences ; 6(2): 152-158.
59. Henry J.B., (1984). Clinical Diagnosis and management 17th edition, Sauders Publisher.
92
 RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES

60. Houlot R., (1984). Techniques d’histologie et de [Link] [Link] 225-227.

-I-
61. Ionescu AM., Roman GV., (2013). Research on biology, productivity and yield quality
ofTrigonellafoenumgraecum L. species (fenugreek) in the central part of the south
Romanian plain. Scientific papers. Series A. agronomy. LVI.
-J-
62. Journal canadien de microbiologie., (2011).

-K-
63. Kanak V., Arpita G., Vinay K., Spandan C., Navin S., Kalpesh K., Tanushree T.,
Surendre KC., (2012). De novo transcriptome sequenncing in Trigonella foenum-
graecumto identify genes involved in the biosynthesis of diosgenin. The plant Genome,
plantgenome : pp1-31.
64. Kassem A., Al-Aghbari A., Molham A., Al-Mamary M., (2006): Evaluation of the
potential antifertility effect of fenugreek seeds in male and female rabbits. Contraception
73:301-306.

-L-
65. Laroubi A., Touhami M., Farouk L., Zrara I., Aboufatima R., Benharref A., (2007).
Prophylaxis effect of trigonella foenum graecum L. seeds on renal stone formation in rats.
Phytotherapy research. 21(10): 921-925.
66. Larsen K., (1972). Clin. Chim. Acta 66, 209
67. Lefebvre P., (2017). Guide De Prise En Charge Du Diabéte De Type 2 Pour L’afrique
SubSaharienne, Fédération Internationale Du Diabéte Région Afrique, Prise En Charge Du
Diabètes Et Affection Liée, 50, P11.
68. Leroi-Gourhan A., (1968). Le Néanderthalien IV de Shanidar. Bulletin de la Société
préhistorique française. Comptes rendus de séances mensuelles. Vol. 65, 3, 79-83.
69. Lim TK., (2012). Edible Medicinal And Non-Medicinal Plants : Vol 2, Fruits, Springer
Science & Business Media, Dordrecht
70. Lott JA., (1975). Clin. Chem. 21. 1754
71. Lydie V., Emilie V., (2010). Histotechnol : L’importance de la fixation en histochimie,
23, (1), 25-32.
-M-
72. Mac Key EM., Rackeyll J., (1927). [Link]. 4, 295

93
 RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES

73. Maqsood Z., (2014). Prescription des statines en soins primaires d’apres les donnees
scientifiques actuelles.
74. Marina C., (2019). Impact des modalités d’un exercice physique sur la neuroplasticité.
Focus sur les sources de BDNF. Biochimie, Biologie Moléculaire. Université Bourgogne
Franche-Comté, 2019. Français. ffNNT : 2019UBFCK049ff. fftel-02402708f
75. Meghwal M., Goswami TK., (2012). A Review on the Functional Properties, Nutritional
Content, Medicinal Utilization and Potential Application of Fenugreek. J Food Process
Technol, 3(9) :181 18.
76. Meghwal M., Goswami TK., (2012). A Review on the Functional Properties, Nutritional
Content, Medicinal Utilization and Potential Application of Fenugreek. J Food Process
Technol., 3 (9), 181-18.
77. Moradi Kor N., Didarshetaban MB., Saeid HR., (2013). Fenugreek (Trigonella
foenum graecum L.) as à valable medicinal plant. International Journal of Advanced
Biological and Biomedical Research. 1(8) : pp 922-931.

-N-
78. Navayath S., Thiyagarajan D., (2010). Aqueous extract of trigonella foenum graecum
(fenugreek) prevents cypermethrin induced hepatotoxicity and nephrotoxicity. SAGE
journals online. 29(4): 311-319. Available from:
[Link]
79. Njung'e K., Handley SL., (1991). Evaluation of marble-burying behavior as a model of
anxiety', Pharmacol Biochem Behav, 38: 63-7: 10.1016/0091-3057(91)90590-x.

-P-
80. Patin V., Lordi B., Vincent A., Caston J., (2005). Effect of prenatal stress on anxiety
and social interactions in adult rats Dev Brain Res 160: 265-74.
81. Patricia V., Elizabeth V., Janet S., Jelena O., Francesco L., (2012). Oral Gavage in
Rats : Animal Welfare Evaluation. JAALAS 51:25-30.
82. Pellow S., Chopin P., File SE., Briley M., (1985). Validation of open:closed arm entries
in an elevated plus maze as a measure of anxiety in the rat .J Neurosciences .Methods
.33:134-140.
83. Petit Pr., Sauvaire Yd., Hilaire-Buys Dm., (1995). Steroid Saponins From Fenugrec
Seeds : Extraction, Purification And Plasma Cholesterol. Steroids., 60 (10), 674-80

-Q-

94
 RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES

84. Quezel P., Santa S., (1962). Nouvelle flore de l’Algérie et des régions désertiques
méridionales. CNRS, Paris. France.

-R-
85. Rahmani M., (2017). Etude Physiologique Et Valorisation Des Plantes Fourragères Et
Médicinales Dans La Wilaya De Sidi Bel-Abbés, Algérie Occidentale : Cas De Fenugrec
(Trigonella Foenum-Graecum L.), Thèse De Doctorat de l’université Djillali Liabe ,30-31p
86. Rao PU., Sesikeran B., Rao PS., Naidu AN., (1996). Évaluation nutritionnelle et de
sécurité à court terme du fenugrec. National Institute of Nutrition, Hyderabad, India.
[Corporate Author] Ministry of Agriculture, Fisheries and Food (United Kingdom).
[Corporate Author]
87. Raven., Evert., Eichhorn., (2007). Biologie végétale. 2e édition. Edition de Boeck. Paris
France. Pp [Link].
88. Richmond., (1973). Clin. Chem. 19, 1350

-S-
89. Saad Bashar., (2011). Greco-Arab and Islamic herbal medicine: traditional system,
ethics, safety, efficacy, and regulatory issues. John Wiley & Sons, Inc. Hoboken (New
Jersey)
90. Sáenz JCB., Villagro OR and Trias JF., (2006). Factor analysis of Forced Swimming
test, Sucrose Preference test and Open Field test on enriched, social and isolated reared
rats. Behav Brain Res., 169,57-65
91. Sakka AE., Salama M., Salama K., (2014). The Effect of Fenugreek
Herbal Tea and Palm Dates on Breast Milk Production and Infant
Weight. J Pediatr Sci 6:202
92. Schulz KM., Pearson JN., Neeley EW., Berger R., Leonard S., Adams CE., Stevens
KE., (2011). Maternal stress during pregnancy causes sex-specific alterations in offspring
memory performance, social interactions, indices of anxiety, and body mass. Physiol
Behav ; 104 :340-7.
93. Sharma RD., Sarkar A., Hazra DK., (1996). Toxicological evaluation of fenugreek
seeds: a long term feeding experiment in diabetic
patients. Phytother Res 10: 519–20
94. Simon G., Katon W., Lin E., Rutter C., Manning W., Von Korff M., Ciechanowski
P., Ludman E., Young B., (2007). Costeffectiveness of systematic depression treatment
among people with diabetes mellitus. Arch Gen Psychiatry 64:65–72.

95
 RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES

95. Singh B., Kaur R., Singh K., (2008). Characterization of Rhizobium strain isolated from
the roots of trigonella foenum-graecum (fenugreek). African Journal of Biotechnology.
7(20) : pp 3671-3676.
96. Sinskaya E., (1961). Flora of cultivated plants of the U.S.S.R. XIII. Perennial leguminous
plants, Part I. Medical.
97. Skelton MR., Schaefer TL., Herring NR., Grace CE., Vorhees CV ., Williams MT.,
(2009). Comparison of the developmental effects of 5-methoxy-N,N-
diisopropyltryptamine (Foxy) to (+/-)-3,4-methylenedioxymethamphetamine (ecstasy) in
rats', Psychopharmacology (Berl), 204: 287-97: 10.1007/s00213-009-1459-x.
98. Snehlata HS., Payal DR., (November 2011-January 2012). Fenugreek (Trigonella
foenumgraecum L.) : an overview. Internat J Curr Pharmaceut Rev Res 2(4) :169–87 9.

99. Sowmya P., Rajyalakshmi P., (1999). Hypocholesterolemic effect Of Germinated

Fenugreek Seeds In Human Subjects. Plant Foods For Human Nutr. 53 (4), 359-65.
100. Stark A., Madar Z., (1993). The Effect Of An Ethanol Extract Derived From Fenugreek
(Trigonella Foenum Graecum ) On Bile Acid Absorption And Cholesterol Levels In Rats.
Br J Nutr., 69 (1), 277-87.
101. Study Group, European Atherosclerosis Society., (1988). European Heart Journal, 9,
571 ARCOL, ISB, 1989, 15, 121 -124
102. Sunanda P., Pankaj T., Anand K., (1999). Pharmacological Research, Vol. 40, No.
5,[Link] No. phrs.1999.0510, available online at http:[Link] on
inhibition of triiodothyronine production by fenugreek seed extract in mice and rats. Thyroid
Research Unit, School of Life Sciences, Vigyan Bhawan, D.A. Uni¨ersity, Khandwa Road,
Indore 452 017.

-T-
103. Tadigoppula N., Anju P., Tanvir K., Rashmi S., Geetika B., Ramesh C., (2005). 4-
Hydroxyisoleucin And Unusual Amino Acid As Antidyslipidimic And Antihyperglycemic
Agent. Bioorg Med Chem Lett. 16 (2), 293-6.
104. Tahiliani P., Kar A., (2003). The combined effects of Trigonella and Allium
extractsintheregulation of hyperthyroidism in rats. Phytomedicine, 10, 665–668
105. Talip C., Munevver NP., Hasn A., Murat E., Zeki A., (2011). Comparative seed
morphology of Trigonella L. Species (leguminosae) in Turkey. African Journal of
Agricultural Research 7(3) : pp509-522.

96
 RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES

106. The Egyptian Journal of Hospital Medicine (April 2018) Vol. 71 (4), Page 3049-3055 3049
Received:20 / 3 /2018 DOI: 10.12816/0046160 Accepted:30 /3 /2018 Effect of Trigonella,
Allium Sativum and Their Mixture on Some Physiological Parameters in Hyperthyroidimic
Rats
107. Toumi ML., (2014). Impact Du Stress Prénatal Anxio-Oxydatif Sur Les Capacités
Cognitives Maternelles Et L’Emotivité De La Progéniture Chez Des Rattes Traitées A La
Quercétine. Thèse de Doctorat
108. Trinder P., (1969). Ann. Clin. Biochem. 6, 24

-V-
109. Vandenberg L N., Welshons W V., Vom Saal F S., Toutain P L., Myers J P., (2014).
Should oral gavage be abandoned in toxicity testing of endocrine disruptors ? Environmental
Health. 13, 46.
110. Vats V., Yadaw Sp., Grover Jk., (2004). Ethanolic Extract Of Ocimum Sanctum Leaves
Partialy Attenuates Streptozotocin-Induced Alterations In Glycogen Content And
Carbohydrate Metabolism In Rats. J Ethnopharmacol., 90 (1), 155-60.
111. Volpé J., Sergeant P., Fakler A., Kenny G., (2009). Fenugrec : Aliment

-W-
112. World health organization (WHO)., (2007) : Monographs On Selected Medicinal Plants.
WHO Press, Geneva. Vol 3.
113. Wichtl Max., Anton Robert., (2003). Plantes thérapeutiques. EMI/Tec et
Doc, Lavoisier, Paris

-Y-
114. Younesy S., Amiraliakbari S., Esmaeili S., (2014). Effects of
Fenugreek Seed on the Severity and Systemic Symptoms of Dysmenorrhea. J Reprod Infertil
15(1):41–8
115. Young D., Pestaner L., (1975). Clin. Chem., 21,5

97
ANNEXES
PUBLICATION
COMMUNICATIONS