ÉTUDE DE LA SENSIBILITÉ AUX ANTIBIOTIQUES : 1.
Effets des antibiotiques sur la croissance bactérienne
DÉTERMINATION DE LA CMI 1.1. Courbes expérimentales
Un antibiotique est :
• une substance naturelle ou synthétique Logarithme de la concentration bactérienne
exprimée en bactéries viables par mL
• capable d’empêcher la multiplication de certaines bactéries (bactériostatique) ou de les
détruire (bactéricide)
• de mode d’action spécifique Courbe de croissance
SANS antibiotique
• actif à des concentrations faibles (de l’ordre du !g par mL ou mg/L)
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Les antibiotiques utilisés en pathologie humaine sont en général peu toxiques pour les cellules 1 !g/mL
eucaryotes supérieures.
Certaines antibiotiques antibactériens comme les sulfamides sont aussi actifs contre certains 10
parasites eucaryotes (toxoplasme, Plasmodium du paludisme,…). 8
La classification des antibiotiques n’est pas aisée mais est principalement basée sur leur nature
biochimique. 2 !g/mL BACTÉRIOSTASE
Le mode d’action des antibiotiques fait l’objet d’un chapitre dans le cours de Microbiologie de 10
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Terminale.
Classe d’antibiotiques Exemples 10
6 4 !g/mL
Aminosides Streptomycine, kanamycine, gentamicine, Tobramycine, Amikacine
Pénicilline G, Pénicillines A (ampicilline, amoxicilline,…) CMI
Temps en heures
Penicilline M (oxacilline,…) 10
Noyau de type
Mécillinam 5
pénicilline
Ticarcilline 8 !g/mL
ß-lactamines Pipéracilline …
Inoculum BACTÉRICIDIE
Céphalosporines de 1ère génération : céfalotine,… 16 !g/mL
Noyau de type Céphalosporines de 2ème génération : céfuroxime, céfoxitine,…
céphalosporine Céphalosporines de 3ème génération : céfotaxime,… Figure 2 : évolution de la croissance bactérienne
… en fonction du temps à différentes concentrations d’antibiotique
Fosfomycine Fosfomycine 1.2. Notion de bactériostase et de bactéricidie
Glycopeptides Vancomycine 1.2.1. Bactériostase
Macrolides vrais : érythromycine, josamycine,… Pour de faibles concentrations en antibiotique, la concentration bactérienne
Macrolides et apparentés Lincosamides : lincomycine,… augmente mais d’autant plus lentement que la concentration en antibiotique
Streptogramines : pristinamycine,… augmente ; la croissance bactérienne est ralentie mais la concentration bactérienne en
Nitrofuranes Nitrofurantoïne période stationnaire est inchangée.
On dit que l’antibiotique a un effet bactériostatique.
Phénicolés Chloramphénicol
La bactériostase correspond à l’arrêt de la multiplication des bactéries.
Polypeptides Bacitracine, colistine, polymyxine
1.2.2. Bactéricidie
Quinolones de 1ère génération :acide nalidixique,…
Quinolones Pour de fortes concentrations en antibiotique, la concentration bactérienne
Quinolones de 2ème génération ou fluoroquinolones : norfloxacine,…
diminue et ceci d’autant plus vite que la concentration en antibiotique augmente au-
Sulfaméthoxazole dessus d’une certaine valeur seuil.
Sulfamides et sulfones
Triméthoprime,…
On dit que l’antibiotique a un effet bactéricide.
Tétracyclines ou cyclines Tétracycline,… La bactéricidie correspond à la destruction des bactéries.
Figure 1 : principaux antibiotiques et leur classification
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1.3. Notion de CMI On peut représenter la CMI de la manière suivante :
Entre bactériostase et bactéricidie existe une concentration en antibiotique pour
laquelle la concentration bactérienne ne varie sensiblement pas par rapport à celle de
départ. Cette concentration difficile à déterminer par cette méthode correspond à la
concentration minimale inhibitrice ou CMI.
Présence Absence
de culture bactérienne CMI de culture bactérienne
La CMI est la plus petite concentration en antibiotique pour laquelle la croissance
bactérienne n’est plus visible, in vitro (pas de croissance mais 100 % des bactéries 1.4. Notion de sensibilité et de résistance
survivantes). 1.4.1. Concentrations critiques inférieure et supérieure
La CMI permet d’apprécier in vitro la sensibilité d’une souche vis-à-vis d’un
À partir de la courbe de la figure 2, on peut tracer la courbe de la figure 3 en se
antibiotique mais elle ne reflète pas la réalité thérapeutique.
plaçant à un temps fixé (pointillé vertical sur la figure 2). Cette courbe décrit alors
Sur le plan thérapeutique, des études statistiques chez un nombre significatif
l’évolution de la concentration bactérienne en fonction de la concentration en antibiotique.
d’individus permettent de déterminer deux valeurs caractéristiques des concentrations
L’intersection de la courbe avec l’axe des abscisses permet de déterminer avec une relative
plasmatiques obtenues suite à l’administration d’une posologie recommandée
précision la CMI.
d’antibiotique :
• la concentration critique inférieure (CCinf ou c) représente la
Logarithme de la concentration bactérienne concentration plasmatique moyenne minimale habituellement obtenue
exprimée en bactéries par mL
chez un patient suite à l’administration d’une posologie recommandée
d’antibiotique
10 • la concentration critique supérieure (CCsup ou C) représente la
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concentration plasmatique moyenne maximale habituellement obtenue
chez un patient suite à l’administration d’une posologie recommandée
10 d’antibiotique
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1.4.2. Souche sensible
CCinf CCsup
10
7
10 Présence Absence
6 de culture bactérienne CMI de culture bactérienne
Si CMI " CCinf, la souche est sensible car dans l’organisme, les bactéries sont en contact
Concentration en antibiotique (en !g/mL) avec une concentration en antibiotique supérieure à la CMI où leur croissance est inhibée.
10
5 1 2 4 8 16 1.4.3. Souche résistante
CMI CCinf CCsup
Figure 3 : évolution de la croissance bactérienne
en fonction de la concentration en antibiotique
Présence Absence
de culture bactérienne CMI de culture bactérienne
Si CMI > CCsup, la souche est résistante car dans l’organisme, les bactéries sont en contact
avec une concentration en antibiotique inférieure à la CMI où leur croissance n’est pas inhibée.
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1.4.4. Souche intermédiaire 2.2. Méthode en milieu gélifié
Les dilutions d’antibiotique sont incorporées dans des géloses de Mueller-Hinton
CCinf CCsup maintenues en surfusion qui sont ensuite coulées en boîte de Pétri. Chaque boîte contient
une concentration d’antibiotique différente. La surface de la gélose est ensemencée par des
stries de suspension à environ 105 bactéries par mL à l’aide d’une anse calibrée de 10 !L.
Une dizaine de souches peuvent être testées sur une boîte.
Présence Absence La CMI correspond à la plus petite concentration en antibiotique qui inhibe la
de culture bactérienne CMI de culture bactérienne croissance bactérienne (aucune colonie sur la strie).
Si CCinf < CMI " CCsup, la souche est intermédiaire car dans l’organisme, les bactéries 2.3. Méthode Etest®
sont en contact avec une concentration en antibiotique où il n’est pas possible de dire s’il y aura Une bandelette est imprégnée de quantités croissantes d’antibiotique. Elle est placée
croissance ou non.
Certains microbiologistes préfèrent dans ce cas-là rendre la souche résistante.
sur une gélose pour antibiogramme ensemencée classiquement (voir TP 9 : antibiogramme
standard) ; l’antibiotique diffuse en formant un gradient de concentration : la zone
2. Détermination de la CMI d’inhibition a la forme d’une ellipse et la lecture est alors directe sur la bandelette là où
Déterminer la CMI consiste à déterminer la concentration en antibiotique inhibant la celle-ci rencontre la zone d’inhibition.
croissance bactérienne.
2.1. Méthode de dilution en milieu liquide
En milieu liquide, la croissance bactérienne se visualise par un trouble ou un culot
bactérien.
On réalise une gamme d’antibiotique de concentrations décroissantes par dilutions
successives de raison 1/2 à partir d’une solution mère d’antibiotique.
2.1.1. Préparation d’un inoculum à 105 bactéries par mL (absence de trouble)
L’inoculum bactérien est préparé à partir d’une culture de 24 h en milieu
liquide.
Introduire 0,1 mL (3 gouttes de pipette Pasteur) d’une culture de 24 heures de la
souche étudiée dans 25 mL de bouillon Mueller-Hinton.
Au final, cette suspension correspond à une concentration bactérienne de 105 à
6
10 bactéries par mL et constitue l’inoculum.
2.1.2. En macrométhode
Figure 4 : schéma de la méthode Etest®
La gamme d’antibiotique est réalisée en tubes à hémolyse.
L’inoculum standard est mis en contact avec des concentrations croissantes en
antibiotique.
Après 24 heures d’incubation à 37 °C, la CMI correspond à la concentration en
antibiotique du premier tube ne présentant ni trouble ni culot bactérien.
Voir protocole du TP 8 : détermination de la CMI en milieu liquide
2.1.3. En microméthode
La gamme d’antibiotique est réalisée en microplaque de 96 puits à fond en U.
L’inoculum standard est mis en contact avec des concentrations croissantes en Bibliographie :
• Activités technologiques en Microbiologie Terminale BGB de G. Leyral, C. et J.N. Joffin, E. Verne-Bourdais,
antibiotique. J.P. Larpent (CRDP Aquitaine 1994)
La CMI correspond à la concentration en antibiotique du premier puits ne • Microbiologie technique Tome 1 Dictionnaire des techniques de J.N. Joffin et G. Leyral
présentant ni trouble bactérien ni culot bactérien. (CRDP Aquitaine 2006)
Voir protocole du TP 8 : détermination de la CMI en milieu liquide • Comité de l’antibiogramme de la Société Française de Microbiologie Recommandations 2007
[Link]
• Image de l’Etest® : [Link]
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