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TP:Chromatographie Sur Papier Pour L'analyse Des Pigments Chlorophylliens

Ce document décrit une expérience de chromatographie sur papier pour extraire et analyser les pigments chlorophylliens des feuilles. Les objectifs incluent l'extraction, la séparation et l'identification des pigments, ainsi que le calcul des facteurs de rétention. Le protocole expérimental détaille les étapes de préparation des échantillons, de chromatographie et d'analyse des résultats.

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TP:Chromatographie Sur Papier Pour L'analyse Des Pigments Chlorophylliens

Ce document décrit une expérience de chromatographie sur papier pour extraire et analyser les pigments chlorophylliens des feuilles. Les objectifs incluent l'extraction, la séparation et l'identification des pigments, ainsi que le calcul des facteurs de rétention. Le protocole expérimental détaille les étapes de préparation des échantillons, de chromatographie et d'analyse des résultats.

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TP :Chromatographie sur papier pour l’analyse des pigments

chlorophylliens.

Objectifs :
1.Extraire et séparer les pigments photosynthétiques des
feuilles(chlorophylles et caroténoïdes).

2-Identifier les différents pigments en fonction de leurs


propriétés physico-chimiques.

3-Calculer les facteurs de rétention () des pigments séparés.

Matériel nécessaire :
Feuilles fraiches (ex. épinard ,laitue ,etc.)
Solvants (ex. mélange éthanol ,acétone, et hexane)
Cuve chromatographique
Papier chromatographique
Mortier et pilon
Capillaire ou micropipette
Crayon à papier
Règle
Lunettes de protection et gants
Protocole expérimental :
1-Preparation de l’extrait de pigments :
1-Preparation des feuilles :
Laver et couper les feuilles en petits morceaux.
Les placer dans un mortier.

2-Extraction des pigments :


Ajouter quelques millilitres d’acétone ou d’éthanol dans le
mortier.
Broyer les feuilles jusqu’à obtenir un extrait vert homogène.
3-Filtration :
Filtrer l’extrait avec du papier filtre pour récupérer un liquide
clair contenant les pigments.

2-Preparation de la chromatographie :
1. Préparation de la bande chromatographique :
Découper une bande de papier chromatographique adaptée à
la taille de la cuve.
Tracer une ligne de départ horizontale a environ 2cm du bas
de la bande ,à l’aide d’un crayon à papier.
Déposer une petite goutte d’extrait sur cette ligne à l’aide
d’un capillaire ,puis laisser sécher .Répéter l’opération 2ou 3
fois pour concentrer les pigments.

2.Preparation de la cuve chromatographique :


Verser le mélange de solvants dans la cuve ,sur une hauteur
d’environ 1cm.
Placer la bande chromatographique verticalement dans la
cuve en veillant à ce que la ligne de départ reste au-dessus du
niveau du solvant.
Fermer la cuve avec un couvercle ou un film plastique pour
limiter l’évaporation des solvants.

3.Deroulement de la chromatographie :
1.Laisser le solvant monter le long de la bande
chromatographique par capillarite.
2.Observer la séparation des pigments(différentes bandes
colorées).
3.Retirer la bande avant que le solvant atteigne le haut de la
bande.

4.Marquer immédiatement la position du front du solvant


avec un crayon à papier .
4.Analyse des résultats :
1.Identifiez les bande de pigments séparés (chlorophylle a ,
chlorophylle b ,carotènes ,xanthophylles)en fonction de leurs
couleurs.
Observations attendues :
Les pigments devraient se séparer en plusieurs bandes
distinctes :
Chlorophylle b :Vert jaunâtre (reste proche de la ligne de
départ).

Xanthophylles :Jaune pâle(migrent plus haut).


Carotènes :Orange(migrent le plus loin).
2.Calcul du facteur de rétention(Rf) :
Pour chaque pigment :
Rf=x/z
Rf 1=1,5/8
=187,5.10^-3
Rf2=2,5/8
=312,5.10^-3
Rf3=7,7/8
=962,5.10^-3
Conclusion:
« Plus le refinance factoriel est grand ,meilleure est la
séparation. »

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