Centre Régional des Métiers de l’Education
et de la Formation - Marrakech
- Section des Sciences de la Vie et de la Terre
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La réplication de l’ADN chez les
eucaryotes
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Dans les cellules eucaryotes, la réplication de l'ADN se produit pendant la phase S
du cycle cellulaire. -
Mode/modèle de replication de l’ADN?
Les trois modèles possibles de réplication de l’ADN:
• Hypothèse 1- modèle conservatif: À partir d’une molécule d’ADN bicaténaire «
mère », on forme une nouvelle molécule d’ADN bicaténaire. On garde donc ici
une molécule « mère », non modifiée (elle est donc conservée), tout en « créant
» une nouvelle molécule (« fille »).
• Hypothèse 2- modèle semi-conservatif: On dissocie les deux brins de la
molécule d’ADN bicaténaire «mère ». Chaque brin sert donc de matrice à la
synthèse d’un brin complémentaire, l’ensemble reformant une molécule d’ADN
bicaténaire. Chaque nouvelle molécule « fille » ne conserve donc que la moitié
de la molécule « mère ».
• Hypothèse 3 - modèle dispersif: On ne conserve
• aucun brin intact. La copie se réalise par fragments H1 H2 H3
dispersés dans l’ensemble de l’ADN, permettant de
former les deux molécules d’ADN bicaténaires «filles ».
Légendes des couleurs:
* Rouge : Molécule d'ADN "mère" et son devenir.
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* Bleu : ADN néoformé.
• Expérience de Meselson et Stahl (1958)
• Des bactéries sont cultivées pendant une longue période en présence de
molécules azotées à 15N puis sont repiquées sur un milieu contenant des
molécules azotées à 14N et permettant la synchronisation des divisions.
• Des fractions sont prélevées après différents temps correspondant à 1, 2, 3, ...
cycles cellulaires. L'ADN est alors extrait, placé dans une solution de chlorure
de césium et ultracentrifugé pendant 24 heures.
• La position de l'ADN, qui révèle alors sa densité, est repérée par une mesure
de la densité optique.
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Position des différentes bandes d'ADN observées au cours du temps (divisions
successives), après centrifugation dans le gradient de chlorure de césium.
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• Comparaison du résultat obtenu après une génération, (l'ADN hybride), avec les
résultats attendus selon les trois modèles de réplication de l'ADN envisagés.
* Résultat attendu pour le modèle conservatif : ADN lourd (15N) et ADN léger (14N).
* Résultat attendu pour le modèle semi-conservatif : ADN hybride (molécules
formées d’un brin lourd et d'un brin léger)
* Résultat attendu pour le modèle dispersif: ADN hybride
=➔ Première observation (G1), rejet de H1 = modèle conservatif
• Au bout de deux générations cellulaires, on a observé la
présence d’ADN hybride et d’ADN léger. Ceci permet
de conclure quant aux deux modèles restants :
➢ Selon le modèle dispersif, on s’attendrait à n’avoir que
de l’ADN hybride (intermédiaire). Ce qui n’est pas le
cas dans les résultats expérimentaux ( Hybride & léger)
===➔ H3 (modèle dispersif) rejeté.
➢ Les résultats expérimentaux sont conformes
/concordants avec ceux attendus par le modèle semi-
conservatif. =➔ H2 validé.
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• Expérience de Taylor (1957)
❖ Bevellaria est une plante voisine du Lis dont les cellules se divisent à
intervalles réguliers.
❖ De jeunes racines en croissance sont cultivées sur un milieu contenant
de la thymine radioactive pendant tout l'intervalle de temps qui sépare
deux mitoses successives (interphase). Les racines sont alors lavées puis
placées dans un milieu contenant de la thymine non radioactive, et enfin
traitées à la colchicine (qui bloque les mitoses en métaphase) après 1, 2
ou 3 cycles cellulaires. Dans chaque cas on réalise une autoradiographie
où la thymine radioactive est localisable par des points noirs.
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Description des résultats de Taylor:
• À la première mitose 100 % des chromatides sont marquées,
• A la deuxième 50% sont marquées et 50% sont non marquées (chaque
chromosome possédant une chromatide marquée et l'autre non marquée),
• A la troisième mitose 25% des chromatides sont marquées et 75% non marquées.
Interprétation:
En adoptant le même raisonnement que celui appliqué dans l’explication
des résultats de l’expérience de Meselsen et Stahl, on va déduire que seul le
modèle semi-conservatif peut expliquer les résultats obtenus par
l’experience de Taylor.
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Mécanisme de la replication de l’ADN
• Dans chaque chromosome, la réplication
de l’ADN commence quand un œil de
réplication se forme sur de nombreux sites
le long de la molécule géante d’ADN.
• La réplication progresse dans les deux
sens en étirant l’œil de réplication. Un œil
de réplication finit par fusionner avec le
suivant, et ainsi de suite, ce qui met fin à
la synthèse des nouveaux brins.
• Sur la micrographie ci-contre l’ADN de
cellules de hamster . On peut voir trois
exemplaires d’un œil de réplication.
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Les enzymes de la replication d’ADN
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Déroulement de la replication de l’ADN: résumé
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Principles étapes de la réplication d’ADN - eucaryotes
1- Le point de départ / initiation
• La réplication d’une molécule d’ADN commence sur des sites particuliers,
appelés origines de réplication ; il s’agit de courts segments d’ADN ayant une
séquence nucléotidique spécifique.
• La réplication chez les eucaryotes débute simultanément en plusieurs points
d’un même chromosome appelés réplicons.
• A partir de chaque réplicon, elle progresse de façon bidirectionnelle, jusqu’à
ce que les deux réplicons adjacents entrent en contact et que l’ensemble de
l’ADN soit dédoublé.
• Une fois les brins d’ADN sont séparés, des protéines de réplication (RPA) se
lient à l’ADN simple brin pour empêcher sa refermeture. L'ADN polymérase α et
d'autres protéines de réplication sont recrutées à l'origine afin de démarrer la
synthèse de l'ADN.
• L’ADN polymérase α synthétise des amorces d’ARN. Elle allonge ensuite ces
amorces de courtes séquences d’ADN (ADN initiateur) grâce à son activité
ADN polymérase. 11
2- Elongation
• En présence de facteur réplication une ADN polymérase se fixe à chaque brin
d'ADN (ADN polymérase ε sur le brin avancé et ADN polymérase δ sur le brin
retardé).
• Les ADN polymérases allongent les amorces pendant que l’ADN continue à être
déroulé et que la topoisomérase I relâche la tension devant la fourche de
réplication.
• Dans chaque fourche de réplication, les deux brins d’ADN sont synthétisés
simultanément par deux ADN polymérases : l’ADN polymérase ε assure la synthèse
du brin avancé, et l’ADN polymérase δ synthétise le brin retardé. Le mécanisme est
très similaire à celui observé dans la réplication de l’ADN procaryote :
➢ Synthèse du brin avancé/précoce/continu : Une seule amorce est nécessaire
pour initier la synthèse. L’ADN polymérase ε ajoute des nucléotides sur le 3’-
OH de l’amorce dans le sens 5’→3’ continuellement sans avoir à se détacher de
l’ADN matrice.
➢ Synthèse du brin retardé /discotinu : La synthèse du brin retardé se fait
également dans le sens 5’→3’, mais son sens ne coïncide pas avec la direction
de la progression de la fourche de réplication. Sa synthèse est donc discontinue
selon la séquence d’événements suivante : 12
a1- L’ADN polymérase α synthétise une amorce d’ARN;
a2- L’ADN polymérase δ s’attache à l’ADN matrice et allonge l’amorce par de l’ADN
dans le sens 5’→3’ ;
a3- La synthèse d’ADN se poursuit (100 à 200 nucléotides) jusqu’à ce que l’ADN
ploymérase δ rencontre une zone d’ADN double brin, l’ADN polymérase quitte
l’ADN;
a4- L’ADN polymérase δ se fixe sur la prochaine amorce pour commencer un autre
cycle de synthèse;
a5- En parallèle, la RNase H intervient pour dégrader l’amorce d’ARN et l’ADN
polymérase δ remplace les ribonucléotides éliminés par des désoxyribonucléotides ;
a6- Une ADN ligase intervient ensuite pour souder les extrémités libres.
- Les étapes a1 à a6 sont répétées jusqu’à ce que les fourches de réplication se joignent.
3- La Terminaison :
• La terminaison correspond à l’arrêt de la réplication lorsque deux fourches de
réplication se rencontrent ou lorsqu’une fourche rencontre un signal de
terminaison de la réplication.
• Les deux molécules filles sont séparées grâce à l’action des topoisomérases II. 13
La replication de l’ADN chez les eucaryotes est similaire à celle des
procaryotes dans ses grandes lignes. Toutefois elles présentent des points
de différences (exemples du tableau ci-après).
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