1. Qu'est-ce que la spectrométrie de masse ?
La spectrométrie de masse mesure le rapport m/z, c’est-à-dire la masse d’un ion par rapport à sa charge.
• Ionisation : Une molécule neutre est transformée en un ion (positif ou négatif). Cela est
nécessaire pour manipuler les molécules avec des champs électriques ou magnétiques.
• Pourquoi mesurer m/z? La charge (z) des ions permet de calculer leur masse exacte, même
pour des molécules complexes.
Exemple pratique : Si une protéine a une masse moléculaire de 10 kDa et que l’ion formé porte 10
charges (z=10), le rapport mz mesuré sera m/z=1000
2. Les étapes du spectromètre de masse
Chaque spectromètre de masse comporte trois étapes :
A. Ionisation
La première étape consiste à convertir les molécules en ions. Cela se fait grâce à des techniques
spécifiques :
1. EI (Impact électronique) :
o Un faisceau d’électrons frappe les molécules, arrachant des électrons pour former des
ions positifs.
o Avantage : Génère des fragments, utiles pour comprendre la structure.
o Inconvénient : Technique "dure", qui peut détruire les molécules complexes.
o Exemple : Analyse des hydrocarbures légers.
2. ESI (Electronébulisation) :
o Convient aux biomolécules fragiles (protéines, peptides, ADN).
o Les molécules dissoutes passent par une buse appliquant une haute tension. Cela forme
des gouttelettes chargées qui s’évaporent, laissant les ions libres.
o Avantage : Préserve les molécules entières et permet de détecter des ions multichargés.
o Exemple : Analyse du peptide SATIEKPK (m/z=873.5).
3. MALDI (Désorption-ionisation laser assistée par matrice) :
o L’échantillon est mélangé à une matrice qui absorbe l’énergie d’un laser UV. La matrice
transfère cette énergie à l’échantillon, formant des ions.
o Avantage : Idéal pour les grandes molécules comme les protéines.
o Exemple : Protéines de masse supérieure à 100 kDa.
B. Analyseur de masse
L’analyseur trie les ions en fonction de leur rapport mz. Voici les principaux types :
1. Quadrupole :
o Utilise des champs électriques oscillants pour filtrer les ions.
o Adapté pour les analyses rapides et ciblées.
2. TOF (Temps de vol) :
o Les ions sont accélérés dans un champ électrique. Les ions légers voyagent plus vite
que les ions lourds.
o Exemple : Analyse rapide de biomolécules.
3. Orbitrap :
o Les ions sont piégés dans un champ électrique et leur oscillation est mesurée.
o Fournit une haute résolution et des mesures précises.
C. Détecteur
Le détecteur mesure l’intensité des ions séparés, produisant un spectre de masse. Plus un ion est
abondant, plus le pic sera élevé.
Exemple : Un spectre de masse peut montrer :
• Un pic principal (m/z=873.5) représentant l’ion moléculaire.
• Des pics secondaires dus aux isotopes (13C, 15N).
3. Analyse des isotopes
• Les isotopes sont des variantes d’un élément avec un nombre différent de neutrons.
• Exemple : Le carbone a deux isotopes stables :
o 12C (98.9 %, masse exacte = 12.000000 Da).
o 13C (1.1 %, masse exacte = 13.003354 Da).
Pourquoi c’est important ?
• Les isotopes influencent la masse exacte et créent des pics isotopiques dans le spectre.
• Exemple pratique : Une molécule contenant un atome de 13C aura un m/z légèrement
supérieur.
4. Détermination du poids moléculaire
Pour des macromolécules comme les protéines :
1. ESI et ions multichargés :
o Une protéine peut porter plusieurs charges ([M+nH]n+).
o Chaque charge génère un pic distinct dans le spectre.
Calcul :
o Si deux pics consécutifs sont observés à m/z1 et m/z2, on peut résoudre un système
d’équations pour déterminer la masse moléculaire (M) et la charge (n).
2. MALDI-TOF :
o Les ions monocargés ([M+H]+) produisent un spectre plus simple.
o Idéal pour les protéines de très grande taille.
5. Fragmentation et MS/MS
La fragmentation (MS/MS) est une étape supplémentaire où les ions sont brisés en fragments pour
analyser leur structure. Cela permet de :
• Identifier des groupes fonctionnels.
• Déterminer les séquences peptidiques.
Exemple : Le spectre MS/MS du phosphatidylcholine PC 34:2 montre des fragments permettant
d’identifier les chaînes R1 et R2.
6. Applications pratiques
A. Analyse des biomolécules :
• Les protéines et les peptides sont souvent étudiés.
• Exemple : Le peptide SATIEKPK a un poids moléculaire de 873.017 Da, confirmé par son pic
principal (m/z=873.5).
B. Identification des lipides :
• Exemple : Analyse du phosphatidylcholine (m/z=816.5772).
• La fragmentation permet d’identifier les chaînes d’acides gras.
C. Diagnostic médical :
• iKnife : Un scalpel utilisant la spectrométrie de masse pour différencier les tissus sains et
cancéreux en temps réel.
D. Analyse environnementale :
• Détection de composés organiques dans l’espace (ex. comète 67P).
7. Différences entre masse exacte et poids moléculaire
• Masse exacte : Calculée à partir des masses isotopiques.
• Poids moléculaire : Moyenne des masses atomiques, tenant compte des abondances
isotopiques.
Exemple : Pour le méthanol (CH3OH) :
• Masse exacte = 32.0266 Da.
• Poids moléculaire = 32.0421 Da.
8. Historique de la spectrométrie de masse
• 1913 : J.J. Thomson mesure les isotopes du néon (20Ne, 22Ne).
• 1917 : F.W. Aston invente le premier spectromètre de masse précis.
• Aujourd’hui : Des instruments avancés comme Orbitrap offrent des résolutions et précisions
extrêmes.
