UE 2.
15 Sciences analytiques 2 Chromatographies
UE 2.15 Sciences analytiques 2 EL BIYAALI Sania
Chromatographie en phase gazeuse
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Chromatographie Liquide Haute Performance
La séparation est basée sur les différences de vitesse de déplacement des
composés entrainés par une phase mobile gazeuse (gaz vecteur) à travers une
colonne contenant la phase stationnaire.
Les seules interactions sont celles des composés d’intérêts avec la phase
stationnaire.
On se sert de la CPG pour:
- l’analyse d’échantillons gazeux
- l’analyse de composés gazeux ou susceptibles d’être volatilisés par chauffage,
sans décomposition (pas adapté aux protéines).
La chaine de CPG est composée de plusieurs éléments :
- phase mobile (gaz)
- un tubulure qui amène à l’injecteur
- un manomètre
Principe - un injecteur
- une colonne chromatograhique ou se passe la séparation
- un détecteur
- un four
Le gaz vecteur est la phase mobile donc transporte les composés dans la
colonne, sans interagir avec les composés.
En général on utilise de l’hélium de l’azote ou de l’hydrogène.
On choisit le gaz en fonction du détecteur (He pour spectrométrie de masse, argon-
méthane pour détecteur à capture d’électrons).
Phase mobile Le gaz doit être :
- pur : exempt d’eau, d’oxygène, de traces d’hydrocarbures.
- inerte chimiquement : pas de réaction avec les solutés ou la phase stationnaire.
Le débit est fonction du type de colonne :
- 30-40 mL/min pour une colonne remplie
- 0,5-2 mlL/min pour une colonne capillaire
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L’injecteur permet d’introduire l’échantillon et de le vaporiser immédiatement.
La T° d’injection est supérieure à la T° de la colonne pour être sûr de vaporiser
l’échantillon.
On choisir l’injecteur selon le type de colonne et selon la nature des composés
(selon résistance à T° élevée).
Il existe différents types d’injecteurs :
- à vaporisation directe : pour colonne remplie
- split/splitless
- head-space
- injection à froid
Exemple de l’injecteur split/splitless
Injecteur
Exemple de l’injecteur headspace
On et l’échantillon dans un vial qu’on referme
de facon étanche. Il est ensuite placé sur un
passeur qui chauffe et volatilise les composés
à l’intérieur du vial. On crée alors deux phases,
l’une gazeuse et l’autre liquide ou solide.
Ensuite, on introduit une seringue dans le vial
et on aspire le volume désiré au niveau de la
phase gazeuse.
Il existe deux types de colonnes : remplies et capillaires.
- colonnes remplies : elles sont remplies de granules, de particules de phase
stationnaire. Elles mesurent 50 cm à 6 m et ont un plus grand diamètre. C’est un
tube en acier ou en verre dont les granules sont imprégnés servant de support de
phase stationnaire. On les utilise en général pour des échantillons qui sont déjà
sous forme gazeuse.
- colonnes capillaire : elles ont une architecture différente avec un tube de silice
Phase stationnaire qui est recouvert de polyimide pour le protéger. Il n’y a pas de particules de
phase stationnaire, elle est greffée sur le support de silice.
Les phases stationnaires :
- chomatographies chirales : cyclodextrines.
- chomatographies de partage : phase imprégnée, greffée de type polysiloxanes
(apolaire) ou polyéthylèneglycols (polaire).
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• polysiloxane : c’est la forme la plus courante de silicone, on les
utilise pour séparer les composés polaires alors que c’est plutôt
une molécule apolaire. Pour augmenter la polarité du motif
siloxane, en ajoutant des groupements polaires (exemple :
polycyanopropylphénylsiloxane)
Phase stationnaire
Le four permet de programmer un gradient de T°, quand on augmente la
Four température, on diminue les interactions chimiques entre les composés d’intérêts et
la phase stationnaire. Il peut chauffer jusqu’à 400°C.
- détecteurs universels : détectent tous les composés organiques
• détecteur à conductibilité thermique : catharomètre
• détecteur à ionisation de flamme
- détecteurs spécifiques :
• détecteur thermoionique : composés azotés ou phosphorés
Détecteur • détecteur à capture d’électrons : composés halogénés
• détecteurs à photoionisation : composés soufrés ou phosphorés
- détecteurs apportant une information structurale :
• spectromètre de masse
• spectromètre infrarouge à transformée de Fourier
• détecteurs à émission atomique
Les modes de chromatographies utilisables en CPG sachant qu’il y a moins
d’interactions et que la phase mobile est un gaz :
- le partage
Modes de - l’adsorption
chomatographie - chiral
On ne peut pas utiliser celle par échange d’ions avec un gaz et celle avec le
changement de pH non plus.
- vitesse linéaire de la phase mobile : quand on modifie le débit du gaz, on
modifie l’efficacité de la colonne à réaliser la séparation.
Facteurs affectant
la rétention
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- nature du gaz vecteur : le chromatogramme est change selon le gaz vecteur, il
impact la courbe de Vann Deemter car il chage les conditions optimales.
- température de la colonne : elle est réglée par le four, quand on augmente la T°
on diminue la rétention. La séparation est de mauvaise qualité quand la
température est trop élevée, les pics sont trop rapprochés.
Facteurs affectant
la rétention
- nature de la phase stationnaire : selon l’épaisseur du film de phase stationnaire,
la rétention varie, si on augmente l’épaisseur, la rétention augmente.
- géométrie de la colonne : selon la longueur de la colonne, plus on augmente la
longueur de la colonne, plus la rétention augmente mais le temps d’analyse est
aussi augmentée.
- analyse qualitative et quantitative : applicables aux composés volatils ou
volatilisables, on peut les dériver (silylation, alkylation, estérification).
Application
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