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Chromatographie CCM

Le document présente la chromatographie sur couche mince (CCM), en détaillant son principe, ses éléments constitutifs, et les modes chromatographiques. Il aborde également les facteurs influençant la rétention des solutés et fournit des exemples d'applications, tant qualitatives que quantitatives. Les objectifs du cours incluent la maîtrise des principes de la chromatographie et l'analyse des chromatogrammes.

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Chromatographie CCM

Le document présente la chromatographie sur couche mince (CCM), en détaillant son principe, ses éléments constitutifs, et les modes chromatographiques. Il aborde également les facteurs influençant la rétention des solutés et fournit des exemples d'applications, tant qualitatives que quantitatives. Les objectifs du cours incluent la maîtrise des principes de la chromatographie et l'analyse des chromatogrammes.

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Chromatographie couche mince

(CCM - TLC)
FGSP2
UE2.15 – Sciences Analytiques 2
2019-2020

C. Machon
[email protected]
Département Pédagogique des Sciences Physico-Chimiques et Pharmacie Galénique

1
PLAN
I- Principe
II- Eléments
II-1- Phase stationnaire
II-2- Dépôt d’échantillon
II-3- Phase mobile
II-4- Détection
III- Modes chromatographiques
IV- Facteurs affectant la rétention
V- Exemples d’applications
2
I- Principe

I- Principe
• Phase mobile liquide
• Phase stationnaire sur un support plan
• Phase vapeur

Phase vapeur

Soluté

Phase mobile Phase stationnaire

• Notion de capillarité 3
II- Eléments

II- Eléments

Cuve Phase stationnaire

Dépôt

Solvant(s)

4
II-1- Eléments – phase stationnaire

II-1- Phase stationnaire


• Support plan
– Plaque de verre, plastique ou aluminium
– Agent liant permettant de fixer la phase stationnaire

• Phase stationnaire
– Choix fonction des solutés
– Silice, alumine (Al2O3)
– Greffage de la silice possible

5
II-2- Eléments – dépôt

II-2- Dépôt
• De l’ordre du µl
• Manuel (capillaire)
• Automatisé

6
II-3- Eléments – phase mobile

II-3- Phase mobile


• Solvant ou mélange de solvants miscibles
• Polarité et/ou pH maîtrisés
• Gradient possible

• Dans cuve en verre, fermée, saturée en vapeur


de solvants

7
II-4- Eléments – détection

II-4- Détection
Front de solvant

Migration
puis H
révélation h

Ligne de dépôt

Rf = rapport frontal = h / H

8
II-4- Eléments – détection

• Révélation :
– Œil nu : si le composé est coloré
– Lampe UV
• Composés fluorescents
ou rendus fluorescents
• Composés absorbant dans l’UV
• Plaques fluorescentes

– Avec un révélateur chimique

9
III- Modes chromatographiques

III – Modes chromatographiques


• Partage
• Echange d’ions
• Adsorption

10
IV- Facteurs affectant rétention

IV – Facteurs affectant la rétention


• Caractéristiques de la phase stationnaire
– Nature de la phase stationnaire
– Taille des grains
– Surface spécifique

• Nature de la phase mobile

11
V- Exemples d’applications

V – Exemples d’applications
• Exemple d’analyse qualitative : vérification matière première
Laboratoire Boiron®
Mentha piperita

=> Reproductibilité entre les lots


12
• Exemple d’analyse quantitative : dosage de l’azithromycine
dans des formulations pharmaceutiques

HPTLC : CCM Haute Performance

Détecteur densitométrique (scanner)

Phase stationnaire silice, avec


composé fluorescent

13
Bouklouze et al. Ann Pharm Fr 2016
14
Objectifs du cours de chromatographie
• Maîtriser le principe de la chromatographie
• Connaître les termes se rapportant à la
chromatographie
• Comprendre les modes d’interactions
• Apprendre à analyser un chromatogramme
• Connaître les paramètres affectant la rétention
• Connaître les éléments matériels permettant de faire
de la chromatographie

15

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