Université Elhadj Lakhdar Batna Module : méthodes chromatographiques

département de chimie et électrophorétiques

Exercice n°1

I/ Deux substances P et Q ont des coefficients de distribution respectivement, 490 et 460, dans
certain colonne. Quel est le composé qui sera éluer en premier pendant la séparation.
II/ un composé Y est élué en 15 mn. un composé Z nécessite 25 mn et un composé X non retenu
nécessite 2 mn.
1-calculer le temps de rétention relatif de Z par rapport Y
2-calculer le temps de rétention relatif de Y par rapport Z
3-calculer le facteur de capacité de Y dans cette colonne
4-quelle fraction du temps total Y doit être passée dans la phase mobile
5-quelle est le temps passé par le composé Z dans la phase stationnaire
III/ la largeur d’un pic est 50 sec et le temps de rétention égal à 50 min.
Dans ces conditions, calculer le nombre de plateaux théoriques.
IV/ l’iso-octane et le n-octane donnent des temps de rétention égal à 800 et 815 sec, respectivement
dans une colonne avec 8100 plateaux théoriques.
1-calculer la résolution
2-si on garde les temps de rétentions inchangeables, calculer le nombre de plateaux théoriques pour
une résolution de 1.
3-répéter la même question pour une résolution de 1.5.
Exercice n°2 :
Déduire, d’après les résultats du tableau ci-dessous et d’après la force des trois solvants, la phase
mobile la mieux adaptée pour la séparation des différents solutés.
Composés de K’
l’échantillon 50% MeOH/50%eau 40% AcN /60% eau 37%THF/63%eau
1 Aniline 1.3 1.5 1.7
2 Phénol 1.6 1.4 2.3
3 Anisole 4.5 4.3 3.9
4 Benzène 4.7 4.7 4.7
5 Chlorobenzène 9.2 7.7 6.5
MeOH : méthanol, AcN : acétonitrile, THF : tétrahydrofuran

Exercice n°3
Les paramètres thermodynamiques des produits suivants ont été mesurés sur une colonne capillaire
ayant pour phase stationnaire un polysiloxane.
Les termes H° et S° correspondent aux variations d'enthalpie et d'entropie de dissolution des
produits entre la phase gazeuse et la phase stationnaire.
Décane Butyl acétate 1-Heptanol 1-Bromobutane Hexyl acétate
H° -47,2 -34 -36.9 -31 -42
Kj/mol
S° en -75.4 -58 -58 -51 -66
j/mol K
Quelle sera l'ordre d'élution de ces produits à 120°C ? Justifier votre réponse par un calcul simple.

Exercice n°4
Soit une courbe de V.D. expérimentale, obtenue en HPLC, [ Int .Lab 30, 20 (2000)]; en ordonnée est
reportée la hauteur de plateau réduite h = H/dp (où dp = 5 mm est le diamètre des particules. On
considère deux points particuliers A et B sur cette courbe.

1- Au point A (débit = 1 ml/mn, U = 0,65 mm/s et h = 2), calculer le temps mort et le temps
d'analyse.
2- Même question au point B (débit = 2,75 ml/mn, U = 1,7 mm/s et h = 2,5).
3- Calculer la perte d'efficacité de la colonne entre A et B. Conclusion.
Exercice n°5
Le chromatogramme de la nicotine a été obtenu dans les conditions suivantes :
CPG. Colonne remplie, Phase stationnaire: 10% Carbowax 20M/2%, KOH sur 80/100 Chromosorb
W AW , Dimensions de la colonne: Longueur 6‘
, (183cm) x 2mm (diamètre intérieur) , Débit de la phase mobile: 20mL/min.Quantité injectée:1µL
Four: 200°C. Temps de rétention de la nicotine = 3,20 mn
Four: 180°C. Temps de rétention de la nicotine = 6,60 mn
Questions :
1-Calculer la vitesse linéaire (en cm/ sec)
de la phase mobile dans la colonne.
2- En déduire le temps mort de cette analyse.
3-Calculer le temps de rétention de la nicotine à 160°C.
4- Peut-on éluer la nicotine en 1 mn, sachant que
la température limite d’utilisation de la colonne et de 250°C ?
Université Elhadj Lakhdar Batna Module : méthodes chromatographiques
département de chimie et électrophorétiques
Parcours : Master I année universitaire : 2019/2020

TD N° 2

Exercice n°1
On donne ci-après un tableau des valeurs du facteur de capacité K’ pour quatre gaz de raffinerie,
étudiés à trois températures différentes sur une même colonne capillaire (L = 30 m, diam.int =
250μm) dont la phase stationnaire est du type SE-30.

Température de la colonne
Composé Temp eb °C -35 25 40
Ethylène -104 0.249 0.102 0.0833
Ethane -89 0.408 0.148 0.117
Propène -47 1.899 0.432 0.324
propane -42 2.123 0.481 0.352

1- D’après l’ordre d’élution peut-on dire si la phase SE-30 est polaire ou non ?
2- Calculer le facteur de sélectivité pour le couple propène-propane aux trois températures
3- Pourquoi K’ diminue-il lorsque la température croit, pour un même composé

Exercice n°2
Plusieurs injections du meme mélange de composés sont effectuées en isothèrme, à des températures
différentes sur une meme colonne.
A 120°C le composé X qui nous intéresse sort à 15.2 min, le tm est de 0.2 min
A 150°C, ce meme composé sort à 10.1 min, le tm est de 0.17 min.
Suite à l’interprétation de plusieurs chromatogrammes, il semble que la température de travail la plus
adaptée pour séparer les composés qui nous intéressent soit 132°C.
A quel temps de rétention tr devrait sortir le composé X, si tm = 0.19min ?
Exercice n°3
Dans une expérience de CPG, on injecte un mélange des alcanes linéaires à 6, 7 et 8 atomes de
carbones. Les temps de rétention sont respectivement de 271, 311 et 399 sec en régime isotherme à
80°C (longueur de la colonne de 25 m, dc= 0.2mm)
1- Calculer le tm
On injecte du n-butanol et la pyridine. L’équation de la droite de Kovats déterminée à partir du
chromatogramme est :
Log t’r = 0.39 n – 0.29
Sachant que tr(butanol) = 406 sec et I butanol = 590 (sur une colonne de squalane), et tr (pyridine)=
346 sec et I pyridine = 695,
2- Calculer la constante de MCReynolds du butanol et de la pyridine sur cette colonne.
Université Elhadj Lakhdar Batna Module : méthodes chromatographiques
département de chimie et électrophorétiques
Parcours : Master I année universitaire : 2019/2020

TD N° 3

Exercice n°1

Le chromatogramme 3.1 décrit la séparation des composés suivants :

O
H
N

N O
H
benzène uracil biphényl naphtalène

Questions :
 Proposer une identification probable des pics.
 Quelle serait l’allure du chromatogramme si la proportion d’eau était augmentée dans la PM ?
 Quelle serait l’allure du chromatogramme si la proportion d’eau était diminuée dans la PM
Exercice n°2

OH OH
O H
C

O
CH3
pic 1 pic 2 pic 3 pic 4
benzène benzaldéhyde alcool benzylique alcool 4-méthoxybenzylique
Questions :

 Quel type de phase stationnaire est-il utilisé ?

Exercice n°3

Quel est l’ordre d’élution des acides suivants en HPLC avec une colonne dont la phase stationnaire est de
type C18 et une phase mobile un tampon formiate C = 200 mM, de pH 9.
1- Acide linoléique : H3C–(CH2)4–CH=CH–CH2–CH=CH–(CH2)7–COOH
2- Acide arachidique : CH3-(CH2)18-COOH
3- Acide oléique : CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COOH)

Exercice N°4

OR
phtalates (R et R' variables)
OR'

Questions :

 Quel type de phase stationnaire est-il utilisé ?

Exercice n°5
On étudie par HPLC la séparation de deux composés A et B avec une colonne de type RP-18. La phase
mobile est un mélange binaire d’eau et d’acétonitrile. On admettra qu’il existe une relation linéaire entre le
logarithme du facteur de capacité et le pourcentage d’acétonitrile du mélange binaire eau/acétonitrile utilisé.
A partir de 2 chromatogrammes obtenus l’un avec pour phase mobile un mélange eau/acétonitrile 70/30
V/V et l’autre avec un mélange eau/acétonitrile 30/70 v/v, les équations des deux droites sont :
Pour le composé A : log kA = - 6,075 10-3 (%ACN) + 1,3283
Pour le composé B : log kB = - 0,0107 (%ACN) + 1,5235
1- Trouver la composition de la phase binaire qui conduirait à un facteur de sélectivité de 1.
2- On suppose que pour chaque composé, la largeur du pic correspondant sur le chromatogramme à mi-
hauteur est la même et que l’efficacité de la colonne n’est pas modifiée suivant la composition de la
phase mobile. La résolution entre les deux pics est-elle meilleure pour la phase mobile contenant
70% d’eau ou 30% d’eau ?montrer l’intérêt pratique du choix précédent.