Université A.
MIRA-BEJAIA 08 Janvier 2023
Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie
Département de Microbiologie
3ème année Licence Microbiologie
Examen de Techniques d’Analyses Biologiques (1H30)
Nom : Prénom : Groupe :
I. Donner succinctement la signification des termes suivants utilisés dans l’analyse
biologique ? (1 points)
Centrifugation isopycnique (0,5)
La centrifugation isopycnique à gradient de densité est une méthode de séparation des
constituants d’un mélange en fonction de leur densité en appliquant une force centrifuge.
Persulfate d’ammonium(0,5)
Réactif utilisé pour la formation de radicaux libres d’oxygène en présence du TEMED, de
l’acrylamide et du bis acrylamide pour la formation du gel de polyacrylamide en électrophorèse
SDS PAGE.
II. Parmi les propositions suivantes concernant la séparation chromatographique d'acide L-
glutamique (pH iso-électrique=3,22) et de L-leucine (pHi=5,96) sur une résine substituée par
des groupements fonctionnels sulfonate.
Entourez la(les) proposition(s) exacte(s) ?
a) La résine utilisée est une résine échangeuse d'anions.
b) A pH = 8, les 2 acides aminés ne sont pas retenus par la colonne. (0,5)
c) Met en jeu des liaisons covalentes entre la résine et les acides aminés.
d) A pH = 2, les 2 acides aminés sont retenus par la colonne. (0,5)
e) Est une chromatographie de partage.
III. Répondez par Vrai ou Faux en justifiant la réponse fausse (6 points)
1. La chromatographie sur résine échangeuse d'ions fait intervenir la formation de liaisons
covalentes entre les protéines et la résine.
Faux(0,5)
La chromatographie sur résine échangeuse d'ions fait intervenir la formation de liaisons
ioniques (électrostatiques) entre les protéines et la résine(0,5)
2. L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide associée à l'utilisation du SDS, sépare les
protéines en fonction de leur taille apparente uniquement.
Vrai(1)
3. Pour analyser un composé en chromatographie à polarités de phase inversées, la phase mobile
peut être constituée d'un mélange d'hexane et d'eau.
Faux(0,5)
Pour analyser un composé en chromatographie à polarités de phase inversées, la phase mobile
peut être constituée d'un mélange d’acétonitrile et d'eau ou méthanol et eau. (0,5)
4. En chromatographie échangeuse de cations, on peut utiliser comme échangeur des silices
greffées avec des chaînes à groupement ammonium quaternaire.
Faux(0,5)
En chromatographie échangeuse de cations, on peut utiliser comme échangeur des silices
greffées avec des chaînes à groupements carboxyméthyl (CM) ou sulfopropyl (SP) (0,5)
5. Le temps mort est le temps entre l'injection et l'instant correspondant sur le chromatogramme
au maximum du pic du premier composant détecté.
Faux(0,5)
Le temps mort est le temps entre l'injection et l'instant correspondant sur le chromatogramme
au maximum du pic de la première molécule non retenue par la phase stationnaire(0,5)
6. La résolution d'une colonne chromatographique évalue la qualité de la séparation de deux
composés consécutifs
Vrai(1)
Exercice 1 (5 points)
Le coefficient de sédimentation d’une protéine a été mesuré en suivant sa sédimentation à 20°C
dans une ultracentrifugeuse tournant à 45000 rpm.
La masse volumique de la solution est égale à 1,030 g/cm3, celle de la protéine est de 1,379
g/cm3 et son coefficient de friction de 3,80 x10-8 g/s.
1. Calculer le coefficient de sédimentation de la protéine en unité Svedberg et sa masse
moléculaire, sachant qu’à t=10 min, la distance entre la protéine et l’axe de rotation est de 6
cm.
𝑁.𝑆.𝐹
On sait que : M= 𝜌𝑠 (0,5)
1−𝜌𝑠
𝑣
S= (0,5)
𝜔2.𝑥
𝑑 0.06
v= (0,5)=> v= = 10-4m/s(0,5)
𝑡 10.60
2п.𝑟𝑝𝑚 2.3,14.45000
ω= (0,5)=>ω= = 4710 rad/s (0,5)
60 60
ω2= 2,218. 107 rad/s
10−4
Donc S= 2,218.107 .0,06 = 7,51. 10-11s (0,5)
Sachant que 1Sv= 10-13s (0,5)
Donc S= 751 Sv(0,5)
𝑁.𝑆.𝐹 6,022.1023 .7,51.10−11 .3,80.10−8
M= 𝜌𝑠 = 1,030
1−𝜌𝑠 1−
1,379
1.718.106
M= = 6,60. 106 Da = 6607,69 kDa(0,5)
0,26
Exercice 2 (7 points)
Soit la protéine oligomérique P suivante :
10000 Da NH2
A1 COOH
B1
20000 Da NH2 | | | COOH
S S S
| | |
S S S
B2 | | |
20000 Da NH2 COOH
10000 Da NH2
A2
COOH
Liaison de faible énergie
Schématiser les chromatogrammes des différentes fractions éluées de la colonne lors des
expériences suivantes tout en précisant l’effet des différents agents sur la structure ci-dessus :
1. La protéine P est déposée sur une colonne de Séphadex (1000 – 50000Da).
2. La protéine P est traitée par du SDS 1% (m/v) puis déposée sur la même colonne.
3. La protéine P est traitée par du SDS 1% (m/v) et par du β-mercaptoéthanol puis déposée sur
la même colonne.
4. La protéine P est traitée uniquement par du β-mercaptoéthanol puis déposée sur la même
colonne.
Sur le gel de SDS-PAGE ci-dessous, positionner les bandes obtenues tout en précisant le sens
de la migration, les signes des électrodes :
5. Suite au traitement par du SDS (1).
6. Suite au traitement par du SDS et du β- mercaptoéthanol (2).
Standards
kDa (1) (2)
170
150
130
110
90
70
50
30
10
Exercice 2 (7 points)
Soit la protéine oligomérique P suivante : (0,25x7= 1,75)
10000 Da NH2
A1 COOH
SDS SDS
B1
20000 Da NH2 | | | COOH
S S S
| | |
S
Β-mercaptoéthanol
S S
B2 | | |
20000 Da NH2 COOH
SDS SDS
10000 Da NH2
A2
COOH
Liaison de faible énergie
Schématiser les chromatogrammes des différentes fractions éluées de la colonne lors des
expériences suivantes tout en précisant l’effet des différents agents sur la structure ci-dessus :
1. La protéine P est déposée sur une colonne de Séphadex (1000 – 50000).
La protéine entière fait 60 kDa donc on la retrouvera dans le volume mort de la colonne :
(0,5)
(0,5)
2. La protéine P est traitée par du SDS 1% (m/v) puis déposée sur la même colonne. (1)
3. La protéine P est traitée par du SDS 1% (m/v) et par du β-mercaptoéthanol puis déposée sur
la même colonne. (1)
4. La protéine P est traitée uniquement par du β-mercaptoéthanol puis déposée sur la même
colonne. (1)
Sur le gel de SDS-PAGE ci-dessous, positionner les bandes obtenues tout en précisant le sens
de la migration, les signes des électrodes ainsi que leurs noms :
1. Suite au traitement par du SDS (1). (0,5)
2. Suite au traitement par du SDS et du β- mercaptoéthanol (2). (0,5)
Standards
kDa (1) (2)
(-)
170
150
(0,25) 130
110
90
70
40 kDa
50 B1-s-s-B2
20 kDa
30 B1 et B2
A1 et A2
(+) 10 10 kDa
A1 et A2 10 kDa
