TP Détermination de la CMI
Introduction:
- Un antibiotique est une substance chimique organique d’origine naturelle ou
synthétique agissant sur les microorganismes pathogènes soit en empêchant le
développement des bactéries (antibiotiques bactériostatiques), soit en les tuant
(antibiotiques bactéricides).et possédant une toxicité sélective.
- la concentration minimale inhibitrice CMI d’un antibiotique est déterminée
dans les tests se sensibilité aux antibiotiques en examinant le taux auquel
différentes concentration de substances antimicrobiennes affectent la croissance
des bactéries.
Ojectif :
Détermination de la CMI qui est la concentration la plus faible d’un agent
antibactérien exprimée en mg/l (μg/ml) qui, dans des conditions in vitro
strictement contrôlées, empêche complètement la croissance visible de la
souche test d’un organisme.
Méthodes de Détermination de la CMI:
Méthode de dilution : en gélosé / en milieu liquide.
Méthode de dégradé : bandelette imprégnées d’un gradient de
concentration prédéfini d’un antibiotique.
NB : Pour déterminer les valeurs de CMI, toutes les méthodes quantitatives
utilisent un milieu Mueller – Hinton ( MH).
TP Détermination de la CMI
La méthode de dilution en milieu solide ( gélosé) :
La méthode de dilution en milieu solide (gélosé) consiste à incorporer
l'antibiotique à une concentration finale donnée dans du milieu de culture
standard gélosé maintenu en surfusion à 45°C. Une série de boites de Pétri
est préparée avec des concentrations d'antibiotique variant selon une
progression géométrique de raison ½.
Les inoculum des différentes souches à tester sont réalisés sur les différentes
boites de Pétri contenant les différentes concentrations de l'antibiotique à
tester. L'inoculum standard est un dépôt d'environ 104 bactéries (à partir
d'une suspension ajustée) pour la plupart des souches.
Les boites ensemencées sont incubées. La lecture est alors effectuée : il s'agit
de repérer l'emplacement de chaque souche et de noter une croissance visible
ou une absence de croissance visible.
Mode opératoire:
1. Préparation de l’inoculum :
TP Détermination de la CMI
2. Préparation des solutions d’antibiotiques :
3. Préparation du milieu de culture et inoculation :
TP Détermination de la CMI
4. Incubation:
Pendant 24h à 37°C dans l’incubateur
(mais elle peut être prolongé jusqu'à 48 h
et la température selon les exigences des
bctéries choisies)
TP Détermination de la CMI
Lecture et interprétation des résultats:
Vérifier la croissance bactérienne sur la boîte témoin.
L’activité de chaque antibiotique sera appréciée, par le diamètre de
l’auréole d’inhibition provoqué autour du disque.
Noter la plus petite dilution qui ne donne plus de culture visible.
Classer la souche dans catégorie R (résistante), I (intermédiaire), S
(sensible) selon les résultats
Calcule de la C (concentration des solution d’ATB) :
n (nombre de mole) = m (la masse) / M (la masse molaire)
n = 1 g / 349.406 g/mol = 0.00286
C (concentration) = n / V = 0.00286 / 5 = 0.000572 mol/mL
C (S.M) = 0.000572 mol/mL = 572*10-6 mol/mL
C (D.1) = 0.000572 / 2 = 0,000286 mol/mL = 286*10-6 mol/mL
C (D.2) = 0,000286 / 2 = 0,000143 mol/mL = 143*10-6 mol/mL
C (D.3) = 0,000143 / 2 = 0,0000715 mol/mL = 71.5*10-6 mol/mL
C (D.4) = 0,0000715 / 2 = 0,00003575 mol/mL = 35.75*10-6 mol/mL
TP Détermination de la CMI
Détermination de la CMI :
TP Détermination de la CMI
Université Dr Mouley Taher
Module : Microbiologie Technique
TP N ° 3 : TP Détermination de la CMI
Nom et Prénom : GHOMID ASSIA
Sous la supervision de : Mdme Baghdad
Plan de travail :
Introduction
Objectif
Méthodes de Détermination de la CMI:
La méthode de dilution en milieu solide (gélosé) :
Mode opératoire
Résultat
Interprétation des résultats
