UNIVERSITE MARIEN NGOUABI

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FACULTE DES SCIENCES ET TECHNIQUES
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DEPATEMENT DE LICENCE
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PARCOURS BIOLOGIE
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RAPPORT DE STAGE
DE FIN DE CYCLE LICENCE

Réalisé par : MILANDOU SOSTENE Responsable du parcours : Dr Gélase Fred

NSONDE
Etudiant en Licence 3 de Biologie cellulaire
et moléculaire

Période du stage : Du 05 septembre au 05 Octobre 2024

Année académique : 2023 - 2024

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 PLAN

Remerciement
I. Introduction
[Link] du stage
Présentation du laboratoire
III.
[Link] du laboratoire
1. Phase pré-analytique
2. Phase analytique
3. Phase post analytique
V. Constat et suggestion
VI. VI. Conclusion

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 Remerciement

Pour la réalisation du document et pour le stage dans son ensemble : je tiens tout d’abord à remercier le Dr Karym
Régis NTSILA, directeur général de l’hôpital de référence de

MAKELEKELE.

J’adresse aussi mes remerciements au chef de service du laboratoire de MAKELEKELE Dr

MOUSSOUNGOU Arnaud, ainsi qu’à la coordonnatrice Mme Stella KIBANGOU et au major Mr Chardein NZONZA.

Je tiens aussi à remercier l’équipe de l’hôpital de MAKELEKELE qui a contribuées au succès de mon stage, ainsi qu’à
toutes les personnes qui m’ont aidé lors de la rédaction de ce rapport.

J’exprime une immense gratitude aux Dr Gélase Fred NSONDE et Raoul AMPA de m’avoir délivré dans les temps et
sourciller la note de stage qui m’a permis de réaliser mon stage mais aussi pour toutes ces années de formation au
sein de la faculté
I. Introduction

Dans le cadre du renforcement des connaissances pratiques, l’université Marien NGOUABI en générale et la faculté
des sciences et techniques en particulier fait des stages de fin de cycle en entreprise l’une des bases de sa formation
académique.

Ainsi, mon stage s’est dérouler du 05 septembre au 05 octobre dans le laboratoire des analyses médicales de
l’hôpital de référence de MAKELEKELE, du lundi au vendredi de 07h30 à 14h30.

J’ai été accueilli par le major du service laboratoire Mr NZONZA Chardein avec qui on a eu un petit entretien puis, il
a expliqué la procédure à suivre et les mécanismes de protection individuelle. Pendant mon stage
j’ai pu m’exercer sur plusieurs paillasses du laboratoire

• J’ai passé la 1ère semaine dans la salle de prélèvement et réception

• La 2ème semaine dans l’unité de bactériologie t parasitologie
• La 3ème semaine dans l’unité de biochimie et dans l’unité d’hématologie II. But du stage

L’objectif de ce stage au sein du laboratoire des analyses médicales est d’obtenir une expérience enrichissante
dans le domaine de biologie et de développer mes connaissances biologiques.

Ce stage m’a donné l’opportunité pour voir l’exécution de quelque leçon théorique en pratique, tout en ouvrant des
portes sur l’emploi
III. Présentation du laboratoire

Le laboratoire d’analyses médicales conçu comme un pôle d’activité hospitalière comportant plusieurs spécialités
d’analyse médicales

 HEMATOLOGIE ;
 BIOCHIMIE ;
 SEROLOGIE ;
 BACTORIOLOGIE et
 PARASITOLOGIE

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Ce laboratoire comprend :

- Un espace de réception des patients (l’accueil)

- Une salle de prélèvement
- Des salles d’analyses des examens
- Le secrétariat
- Trois (3) bureaux (bureau de chef de service, de la coordonnatrice et celui du major)
- Un réfectoire et des latrines
- Concernant les salles d’analyses des examens nous avons trois Box :

Box I : qui comprend une paillasse de biochimie, d’une paillasse de sérologie et une paillasse d’hématologie
Box II : qui comprend le service de bactériologie et parasitologie

Box III : qui comprend les procédés de la microbiologie : coloration (Gram, Giemsa …), le séchage, le lavage,
la fixation et le nettoyage des lames, tubes …

IV- Fonctionnement du laboratoire : le laboratoire est dirigé comme suit

Chef de service

Coordonnatrice

Major

Chef d’équipe A Chef d’équipe B

Chef d’unité ( hematologie,

biochimie, serologie et
Bactériologie )

Collaborateur, Bénévole et
Stagiaire

Le service de laboratoire en trois phases :

1. La phase pré-analytique ; cette phase comprend l’accueil du patient, le prélèvement et la disposition des
échantillons.

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 a) L’accueil du patient : un espace est réservé pour l’accueil du patient. Les patients sont reçus un par un et
selon l’ordre d’arriver tout en respectant les règles élémentaires, de discrétions et de confidentialité. A
ce niveau se fait :
- L’identification du patient (Nom, Age, interrogation)
- Enregistrement des différents examens que le patient fera
- Etiquetage des tubes s’il s’agit d’un prélèvement de sang
- Etiquetage des écouvillons s’il s’agit d’un PV
- Réception et étiquetage des échantillons (urines, selles)

b) Prélèvement : le prélèvement se fait dans un espace isolé qui en deux salles

- Une salle de prélèvement sanguin ;

- Une salle de prélèvement vaginal
NB : les ECBM et coprocultures sont apportés par le patient

Dans un espace il faut assurer les mesures de prévention aux risques : porte gants, blouse, callot …

Prélèvement sanguin (matériel)

- Seringue
- Gavot
- Coton imbibé d’alcool
- Un tube sec : utilisé pour les examens qui nécessite le sérum
- Un tube violet : ce tube contient un anticoagulant EDTA (Ethylène Di-amine tétra Acétique)
- Tube bleu qui contient le citrate tro-sodique)

Procédure de prélèvement

- Mettre les gants

- Poser le garrot
- Repérer la veine du patient (palpation ou directement visible)
- Désinfecter l’endroit à piquer
- Piquer dans le sens de la veine
- Faire desserrer le point
- Défaire le garrot
- Retirer la seringue
- Remplir les différents tubes
- Homogénéiser les tubes à anticoagulant
- Appliquer une compresse sur le site clé piqué
- Retirer les gants

2. La phase analytique

Cette phase s’occupe de l’exécution de tout ce qu’on écrit c’est-à-dire les différents examens qu’on doit réaliser.
Ces examens se réalise dans les salles d’analyses dans différents palliasses :

A. Bactériologie et parasitologie

a) - Bactériologie : les analyses s’effectuent en un seul jour :

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- Réception des échantillons
- Examen microscopique

Par manque d’automate à bactériologie, la culture (ensemencement). Les antibiogrammes ne s’faisaient pas
dans le laboratoire de MAKELEKELE

A-1) - Examen macroscopique ; nous permet d’observer tout ce que l’on peut voir à l’œil nu dans les
échantillons recueillis sur la paillasse, nous observons plus précisément : La couleur, l’aspect, l’odeur, culot …

A-2) Examen microscopique ; on effectue deux types d » examens : Examen direct ou cytologie et l’examen
après coloration de Gram

Examen direct
Cet examen permet de rechercher les éléments suivants :

- Les cellules épithéliales

- Leucocyte
- Cylindre
- Hématie
- Parasites
- Autres éléments

 Procédure
- Déposer sur une lame de verre propre et sèche une goutte de suspension bactérienne
- Recouvrir délicatement d’une lamelle propre
- Examiner rapidement une grande partie de la lame en faible luminosité aux objectifs 10
et 40
Examen des bactéries à l’état coloré Coloration différentielle : la
coloration de Gram

Cette coloration permet de diviser les bactéries en deux groupe : les bactéries gram (+), qui apparaissent
violettes/Bleu foncé et la bactérie gram (-) qui apparaissent roses/Rouges

 Principe

Le frottis est coloré, puis décoloré à l’aide de l’alcool et enfin de nouveau coloré. Les bactéries
qui retiennent le 1er colorant après lavage à l’alcool sont dites gram (+), celles qui ne le
retiennent pas sont dites gram (-). Les deux comportements résultent d’une différence
fondamentale de la nature de la paroi, de la composition et de la structure de la paroi. Les
bactéries gram (-) ont une paroi riche en lipide et renferme un peptidoglycane fin, tandis que les
bactéries gram (-) ont une paroi pauvre en lipide avec un peptidoglycane épais

 Matériel et produit

- Violet de gentiane
- Fuchsine
- Lugo
- Lame
- Alcool  Procédure
- Recouvrir la lame de cristal ou violet de gentiane, laisser reposer 1min
- Rincer rapidement à l’eau du robinet pour enlever l’axe de colorant en veillant à ne pas
détacher le frottis
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 - Recouvrir avec quelques gouttes du Lugo et laisser reposer 1min
- Rincer de nouveau à l’eau du robinet et égouttes
- Traiter la préparation avec de l’alcool goutte à goutte jusqu’à à ce qu’il n’entraine plus le
colorant
- Rincer immédiatement et abondamment à l’eau du robinet
- Recouvrir la lame du fichisme pendant 1min
- Rincer à l’eau sécher doucement entre deux papiers buvard
- Observer au faible grossissement, ensuite passer à l’objectif x100 à l’immersion dans
l’huile et à pleine lumière

 Résultats

A l’issue de cette coloration, on peut distinguer :

- Les bactéries qui ont résisté à l’action de l’alcool, elles sont colorées en violet foncé et son dites gram (+)
- Les bactéries qui ont été sensible à l’action de l’alcool, elles ont perdu le violet et sont colorées en rose. Il
s’agit des bactéries à gram (-)
A-3) - ECBU (Examen cytobactériologique des urines)

 But

Recherche d’une infection urinaire : identification du germe en cause et antibiogramme

 Principe
L’analyse comportant un examen direct et une mise en culture des urines recueillis dans un flacon stérile après
désinfection du méat urétral

 Procédure

Examen macroscopique

Cet examen permet d’observer

- La couleur
- L’aspect : limpide, clair, louche ; trouble
- Le culot : nul, minime, moyen, important

Examen microscopique

 Cytologie
On recherche les éléments suivants :

- Cellules épithéliales
- Leucocytes
- Cristaux
- Cylindres
- Hématies
- Parasites et Autres
 Matériel

On utilise : lame, lamelle, centrifugeuse, microscope, pipette pasteur

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  Procédure
- Placer les urines dans les tubes
- Centrifuger les urines pendant 5min à 3000 tours
- Verser le surnageant tout en gardant le culot
- Placer une goutte des urines entre lame et la lamelle
- Lire à l’aide d’un microscope optique

 Coloration de gram ; elle permet de distinguer les bactéries gram (+) et les
bactéries gram (-) à partir de leur morphologie A-4) PV : Prélèvement vaginale

 But

Rechercher d’une infection vaginale et indentification du germe en cause

 Principe
Analyse comportant d’un examen directe d’une mise en culture des sécrétions recueillis dans un
écouvillon

 Matériel
- Speculum
- Ecouvillon
- Glacière, les gants

 Examen macroscopique
- Aspect du col
- Odeur du col
- Aspect des sécrétions
- Abondance des secrétions

 Procédure d’eau physiologique

- On ajoute 5°c dans l’écouvillon
- Homogénéiser jusqu’à observation des troubles
- Placer une goutte
- Lire à l’aide du microscope
b) - Parasitologie

GERH ; goutte épaisse recherche hématozoaire

 But

- Rechercher des protozoaires

- Déterminer la densité parasitaire
- Suivre le traitement du paludisme

 Mode opératoire
- Défiler le bout du doigt
- Nettoyer la surface à l’aide d’un trompons imbibé d’alcool
- Piquer le côté latéral du doigt (3ème ou 4ème)

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 - Déposer une goutte de sang sur la lame
- Recouvrir la lame de GIEMSA fille (dilué à 1/10) la coloration dure 10 à 20 min
- Laver la lame avec l’eau du robinet
- Observer au microscope avec l’huile à immersion à l’objectif x100

B. Sérologie

La sérologie est une branche de la biologie médicale qui s’allèle à l’étude des sérums et des modifications
de leurs propriétés au cours des maladies. Par le biais de l’analyse des immunoglobulines du sérum sanguin
ou d’autre liquide de l’organisme, la sérologie permet d’évaluer l’immunité à une maladie en mesurant la
qualité d’anticorps spécifiques de celle-ci. Le laboratoire de sérologie de l’hôpital de MKELEKELE met en
œuvre des analyses basées sur une réaction antigène-anticorps afin de détecter l’agent pathogène présent
dans le sang circulant dans nombreux hôpitaux, les examens réalisés dans le service de sérologie sont
automatisés c’est-à-dire qu’Is se relisent à l’aide d’automate. Hors mis ces automates, il existe des
disquettes permettant la réalisation de ces examens

TYPE DE SEROLOGIE TEST BUT

Hépatite A Recherche des anticorps
anti-VMA (type IGM et
Sérologie virale IGG)
Hépatite C Recherche des anticorps
anti-VMC
Hépatite B Recherche des anticorps
anti-VMB Recherche de
l’Ag HBS
SRV ou VIH/Sida (test de Recherche des Anticorps
dépistage du Sida VIH
Sérologie bactérienne Rubéole Recherche des Anticorps
IGM
Sérologie parasitaire Toxoplasme Recherche des anticorps
IGM

L’examen de routine effectué au sein du laboratoire de sérologie est celui de la CRP pour ‘’Creatine-
protein’’ en Anglais qui peut se traduire par Protéine créative

Méthode :

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 C) BIOCHIMIE
La biochimie est disciplinée de la biologie qui s’intéresse aux réactions chimiques se déroulant au sein de
l’organisme vivant et précisément au niveau des cellules, aussi bien animales que végétales.
Le laboratoire de biochimie de MAKELEKELE utilise uniquement un spectrophotomètre analysa ire
automatique.

Plusieurs examens sont réalisés dans ce service à savoir

- La glycémie
- Bilirubine totale ou direct
- Créatinémie
- Bilan lipidique avec HDL cholestérol, LDL cholestérol, triglycéride
Seul le premier examen sera détaillé dans ce rapport
C-1) Glycémie

La glycémie est le taux de glucose dans le sang. La glycémie représente l’un des principaux marqueurs de la
maladie du diabète. Elle varie d’un individu à une autre en fonction du moment de la journée et du contenu du
repas et de la physiologie hormonale.

La glycémie est mesurée grâce à une méthode calorimétrique. La valeur normale d’une glycémie varie entre
0,74 et 1,06g/l à jeun (avant le repas), mais elle peut aller jusqu’à 1,8g/l dans le sang après le repas.

Une glycémie au-dessous de cette norme, implique une hypoglycémie, le contraire est une hyperglycémie.

La régulation de la glycémie dans l’organisme est très complexe, puisqu’elle met en œuvre des hormones (dont
deux antagonistes : l’insuline « hormone hypoglycémiant » et le

Glucagon « hormone hyperglycémiant ») ainsi que divers organe comme le pancréas, le foie et les reins.

Mesure de la glycémie
On mesure la glycémie de deux manière : à jeun et après avoir mangé

- Glycémie à jeun : la prise de sang a lieu sans apport calorique pendant 8h au moins. La glycémie à jeun
permet de dépister et de diagnostiquer le diabète et le pré-diabète. Elle est, en générale un examen de
routine, elle est prescrite lorsque quelqu’un présente des symptômes suggérant un diabète, et
systématiquement quand une personne se présent te à l’urgence avec une infection aigue
- Glycémie postprandiale : la glycémie est vérifiée 1h30 à 2h après le début du repas

Principe
Il consiste à mélanger dans un tube le sérum et le réactif glycose, à incuber pendant 10min avant de lire
l’absorbance dans le spectrophotomètre.
Matériel et réactif

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 - Matériels de prélèvement
- Tube a bouchant sec
- Pipettes de 10 et 100 Ul
- Tube à mélanger
- Centrifugeuse
- Spectrophotomètre
- Eau distillée
- Solution de glycose

Méthode : prélever le sang au niveau du pli du coude de préférence, centrifugé

D) HEMATOLOGIE

L’hématologie est la branche qui étudie le sang est ses maladies. Elle étudie plus particulièrement
les cellules sanguine et les facteurs de coagulation Plusieurs examen sont réaliser dans ce service à
savoir :

- La NFS (numérotation formule sanguine)

- La VS (vitesse de sédimentation)
- Le GS (Groupage sanguin)
- HbA1C (Hémoglobine gliquée)
- TP-TCK (Temps de prothrombine, temps de céphaline kaolin) Seul le premier examen sera détaillé

dans ce rapport

La NFS

Des informations sur les éléments contenus dans le sang tels que les globules rouges, les globules blancs et les
plaquettes. Il permet de révéler un grand nombre de pathologie

- Fonctionnement de l’automate : cette automate détermine le nombre et le volume des cellules

sanguines. Pour faire cela elle utilise trois réactifs
 Diluant : c’est une solution isotonique aspiré à travers un orifice capillaire qui dilue le sang à
l’intérieur de l’appareil

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  Solution de lyse : elle lyse les globules rouges pour libérer l’hémoglobine
 Détergent : pour nettoyer l’appareil et éliminer le dépôt des réactif, des résidais des cellules et
les protéines du système de conduit, des chambres de mesure et du conduit d’aspiration
d’échantillon
- L’hémogramme ou NFS est un examen qui le nombre des globules blancs, des globules rouges, des
plaquettes et l’hémoglobine
 Globules blancs : on distingue les lymphocytes T, les monocytes et les granulocytes (PN, PB et
PE)
 Globules rouges : c’est le taux des globules rouges qui détermine l’absence et la présence de
l’anémie : Taux d’hémoglobine (Hb), volume globulaire moyen (VGM), hématocrite (HT), teneur
corpusculaire moyenne en hémoglobine (TCMH), concentration corpusculaire moyenne
hémoglobine (CCMH)

- But
 Evaluation de l’état de santé chez un individu
 Diagnostique et suivi des anémies
 Manifestations hémorragiques
 Infections

- Procédure
 Mettre l’automate en marche
 Enregistrer les informations du patient (Nom, prénom, sexe, Age) à partir de la touche F1 sur
l’automate
 Valider ces informations sur entrer
 Homogénéiser le callot et le plasma contenu dans l’échantillon
 Mettre le tube des flacons verticaux au niveau de l’aiguille d’aspiration des automates
 L’aspiration du sang se fait automatiquement
 Appuyer sur la touche IMP pour imprimer le résultat
NB : Les résultats de la NFS dépendent de l’Age et du sexe de l’individu

V- Constat et suggestions
1) Constat
- Au service de bactériologie, j’ai expérimente une complémentarité sur les manipulations appris au TP de
bactériologie
- L’accueil et la transmission du savoir dans tous les services étaient au rendez-vous
- J’ai apprécié la bonne collaboration du chef de service, de la coordonnatrice, du major avec ses
collaborateurs et les stagiaires
- Entre le laboratoire et les différents services
- L’accueil du patient
2) Suggestions
- Ne pas mélanger les pièces à vivre et celle du laboratoire
- Améliorer les conditions de conservations des embouts
- Les résultats doivent être vérifié et disposer en fonction du jour de retrait avant l’heure de retrait
- Améliorer le service de bactériologie, en permettant la réalisation des cultures et des
antibiogrammes
VI- Conclusion Ce stage à l’hôpital de référence de MAKELEKELE m’a permis d’approfondir mes Connaissances
notamment dans le milieu de la biologie médicale et sur les technologies biomédicales qui sont mise au service

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du patient.
Tous ces acquis vont me permettre d’aborder avec plus de sérénité et de confiances de l’année d’étude avenir

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