DOSAGE PSA :
PREPARER POUR LA REACTION :
- bandes de microtitrage dans des portes bandes détachables avec 8 puits (cupules),
couverts par streptavidine
- 6 calibrateurs (solution de contrôle) ayant chacune sa concentration : A (0 ng/ml), B
(5 ng/ml), C (10 ng/ml), D (25 ng/ml), E (50 ng/ml), F (100 ng/ml).
- Conjugué anticorps-enzyme
- Solution de lavage (20 ml réactif de lavage + 1000ml eau distillée)
- Réactif de travail : Substrat A (méthylbenzidine) + Substrat B (eau oxygenée d’urée)
en proportions égales. A préparer fraichement le jour du dosage de PSA.
Exple : pour 2 malades à tester, on a besoin d’utiliser en double 1 cupule pour chaque
malade, 1 cupule pour chacun de 6 calibrateurs, soit 8 cupules x 2= 16 cupules. On doit
utiliser 100µl de réactif dans chaque cupule, soit 100 x 16 = 1600µl, et donc 800µl de
substrat A + 800µl de substrat B.
- Solution pour arrêter la réaction (contient l’acide hydrochlorique)
- Bandes gommées (couvercle) ou papier aluminium.
- Sérum du malade
MODE OPERATOIRE :
- Pour chaque calibrateur, utiliser 2 cupules et introduire dans chacune d’elle 25µl de
solution de contrôle correspondante.
- Pour chaque malade, utiliser 2 cupules et introduire dans chacune d’elle 25µl de
sérum du malade correspondant.
- Ajouter dans chacune des cupules ainsi placées 100µl de conjugué anticorps-enzyme
- Agiter doucement le mélange obtenu par des mouvements latéraux de gauche à droite,
de haut en bas.
- Couvrir l’ensemble avec les bandes gommées si disponibles ou alors du papier
aluminium pendant 30 minutes.
- Oter les bandes gommées et laver l’ensemble avec la solution de lavage : 300µl de
solution de lavage dans chaque cupule (normalement). Puis retourner le bac pour
verser le liquide introduit. A répéter 3 fois de suite. La dernière fois, après lavage,
tamponner légèrement la surface retournée vers le bas sur du papier adsorbant (papier
hygiénique), pour assécher.
- Ajouter 100µl de réactif de travail dans chaque cupule. Incuber le mélange pendant 15
minutes en le recouvrant des bandes gommées.
- Oter les bandes gommées, et ajouter dans chaque cupule 50µl de solution pour arrêter
la réaction.
- Lecture sur l’appareil prévu pour (se trouvant en hémato), à 450 nm, aussi vite que
possible, ou dans les 30 minutes maxi.
- Relever les résultats des differentes cupules utilisées (cupules des calibrateurs et de
sérum malade).
- A l’aide des résultats des calibrateurs, tracer sur papier millimétré une courbe ayant en
abscisse les concentrations en ng/ml et en ordonnée les D.O équivalentes.
- Placer la D.O du malade sur la courbe et projeter pour trouver la concentration
équivalente qui est la PSA voulue en ng/ml.
