Projet de Fin d’Etudes

Licence Sciences & Techniques

Sciences Biologiques Appliquées et Santé
(LST - SBAS)

Présenté par : Mlle. Kassimi Fatima

Encadré par :

• Pr. TAHRI JOUTI Mohammed Ali (FST Fès)

• Pr. BENBELLA Imane (Laboratoire central CHU Hassan II Fès)

Soutenu le : 07/07/2021

Devant le jury composé de :

[Link] JOUTI Mohammed Ali FST-Fes
[Link] Najoua FST-Fes
[Link] Imane CHU-Fes
Stage effectué à :
Le laboratoire centrale des analyses médicales au CHU Fès – unité de
biochimie

Année universitaire 2020-202

 ﷽
32: ‫سورة البقرة آ‬ ﴾ ‫ت ْال َع ِلي ُم ْال َح ِكيم‬ َ ‫س ْب َحان ََك ََل ِع ْل َم لَنَا ِإ اَل َما‬
َ ‫علا ْمتَنَا ۖ ِإنا َك أَ ْن‬ ُ ﴿

DEDICACE

Avec l’expression de ma reconnaissance je dédie ce modeste travail à

ceux qui, quels que soient les termes embrassés, je n’arriverais jamais à
leur exprimer mon amour sincère.

A mon adorable mère, qui n’a épargné aucun effort pour mon confort,
mon bonheur, et ma réussite

A mon chère père, qui m’a toujours fait confiance, m’a toujours
encouragé, et a toujours voulu mon bien.

A mes chères sœurs et mes chers frères, qui ont rendu mon travail
amusant

A mes chères amies, chacune avec son nom, que je suis fière de les avoir
dans ma vie, et fière de notre amitié.

A ma chère copine en particulier Fatima Zahra Sayouri, pour son soutien,

sa patience, sa compréhension, je la remercie de tout mon cœur.
 REMERCIEMENT

D’abord je remercie ALLAH le tout puissant de m’avoir donné la santé et

la volonté d’entamer et de terminer ce travail.

Mes remerciements s’adresse au [Link] Said, pour son organisation

de notre filière durant cette année, et qui nous a consacrer de son temps
précieux, pour nous orienter, et nous aider pour trouver un stage de fin
d’études dans les meilleures établissements.

Mes remerciements s’adressent également à Mme. BENBELLA Imane,

professeure responsable au laboratoire des analyses biochimique au sein
du centre hospitalier Hassan ΙΙ, et à toute l’équipe du laboratoire pour leur
aide pratique, leur suivi et leur encouragement durant la période de
stage.

Je tiens aussi à exprimer mes remerciements au [Link] Najoua

qui a accepté de juger ce travail. Qu’elle trouve ici l’expression de ma
considération et ma reconnaissance les plus distingués.

Mes estimes et ma profonde reconnaissance sont adressées

particulièrement à monsieur TAHRI JOUTI Mohammed Ali. Je le remercie
pour la qualité de son encadrement exceptionnel, pour sa patience, sa
rigueur et sa disponibilité durant ma préparation de ce rapport.

SOMMAIRE
I. RESUME ........................................................................................................ 8
II. PRÉSENTATION DE LA STRUCTURE D’ACCUEIL ............................................... 9
III. INTRODUCTION ............................................................................................. 9

Hémoglobine glycosylée .................................................................................................. 11

Aperçu historique sur HbA1c ........................................................................................... 12

Critères biologiques de diagnostic du diabète sucré ...................................................... 13

Classification du diabète sucré ........................................................................................ 14

Méthode immunologique ................................................................................................ 15

Méthodes électrophorétiques......................................................................................... 16
16
Méthodes chromatographiques ...................................................................................... 17

Métabolisme anormal de l’Hb ou des GR ........................................................................ 18

Présence de variantes d’Hb ......................................................................................... 18
Présence d’autres Hb modifiées .................................................................................. 18
Médicaments et toxiques ................................................................................................ 18
L’intérêt du dosage d’HbA1c chez les diabétiques .......................................................... 19
Corrélation entre l’HbAIc et la glycémie ....................................................................... 19
Valeurs usuelles ........................................................................................................... 19
Utilité pour le diagnostic de diabète ........................................................................... 20

IV. OBJECTIF DU TRAVAIL ................................................................................. 21

V. MATERIEL ET METHODES ............................................................................ 22

La phase pré-analytique .................................................................................................. 22

Phase analytiques ............................................................................................................ 22
Phase post-analytique validation des résultats ................................................................ 23
 Caractéristiques [23] ...................................................................................................... 24
Etapes de mesure d’HbA1c avec ADAMS ™ a1c HA8180v .......................................... 25
Réception des échantillons ........................................................................................ 25
Etalonnage ................................................................................................................... 25
Mode du travail ............................................................................................................ 26
Interprétation du chromatogramme : ............................................................................. 28

VI. RESULTATS ET DISCUSSION .......................................................................... 29

Conception de l’étude et sélection des patients ............................................................. 29

Comparaison avec les normes marocaines ..................................................................... 31

Comparaison avec les normes mondiales ....................................................................... 31
Pourquoi HPLC ? .............................................................................................................. 32

VII. CONCLUSION ............................................................................................... 34

VIII. BIBLIOGRAPHIE ..................................................................................... 35
IX. WEBOGRAPHIES .......................................................................................... 36
 LISTE DES ABREVIATIONS

HbA1c : Hémoglobine glyquée

Hb : Hémoglobine

CHU : Centre Hospitalier Universitaire

DCCT: Diabetes Control and Complication Trial

UKPDS: United Kingdom Prospective Diabetes Study

IFCC: International Federation of Clinical Chemistry

CLHP/HPLC : Chromatographie Liquide Haute Performance

NGSP: National glycohemoglobin standardization program

EPO: Erythropoïétine

ADA : American diabete association

OMS : Organisation Mondiale De Santé

SFBC : Société Française De La Biologie Clinique

LCR : Liquide Céphalo-Rachidien

CRP : Protéine C Réactive

LP : Liquide Pleural

HGPO : Hyperglycémie Provoquée Par Voie Oral

ENPSF : Enquête Nationale Sur La Population Et La Santé Familiale

CIQ : Contrôle Interne de Qualité

CV : Coefficient de variation
 LISTE DES FIGURES

Figure 1:Tétramère d'hémoglobine avec l'emplacement du tétramère-dimère et les interfaces dimère-

monmère indiqués par des flèches. La couleur cyan indique les hélices E et F, tandis que le reste de
chaque sous-unité est gris. L'hème est rouge............................................................................................... 11
Figure 2: Formation d'HbA1c à partir de la liaison du glucose à l'hémoglobine A. ................................... 12
Figure 3: types d’hémoglobine à l’âge adulte chez une personne en bonne santé. .................................... 13
Figure 4: Diagnostic biologique de diabète sucré ....................................................................................... 14
Figure 5 : Dosage d’HbA1c par méthode immunologique.......................................................................... 16
Figure 6 : Représentation schématique d’un appareillage d’électrophorèse ............................................... 16
Figure 7 : résultat de séparation d'Hb par EC .............................................................................................. 17
Figure 8 : Appareil de centrifugation .......................................................................................................... 22
Figure 9 : Principe général de la technique HPLC ...................................................................................... 23
Figure10: Analyseur ADAMS ™ A1C HA-8180V .................................................................................... 24
Figure 11 : Etapes de dosage d’HbA1c par la technique d’HPLC .............................................................. 26
Figure 12: Colonne ARAKRAY échangeuse d’ions ................................................................................... 27
Figure 13: Exemple du chromatogramme. .................................................................................................. 28

LISTE DES TABLEAUX

Tableau 1: Caractéristiques des diabètes de type 1 et 2 .............................................................................. 14

Tableau 2 : HbA1c comme indicateur du contrôle du diabète .................................................................... 20
Tableau 3: Résultats de l’étude de la répétabilité ........................................................................................ 25
Tableau 4: Répartition des patients selon le taux d’HbA1c mesuré ............................................................ 29
Tableau 5: Répartition des patients selon l’âge et le taux d’HbA1c ........................................................... 29
 I. RESUME

Ce rapport constitue le résultat de mon travail accompli dans le cadre du projet de fin d’étude au
sein du laboratoire des analyses biochimiques au CHU-Fès, l’objectif de ce projet est la
détermination des différentes techniques de dosage de l’hémoglobine glyquée et son intérêt chez
les diabétiques.

Le travail dans ce projet s’est déroulé comme suit : j’ai commencé par définir les différents termes
qui sont en relation avec le sujet de mon travail ; l’hémoglobine et l’hémoglobine glyquée (HbA1c),
la physiopathologie du diabète sucré et son diagnostic à travers le dosage d’HbA1c par les
différentes techniques utilisées dans les laboratoires des analyses.

Ensuite, la détermination des valeurs du dosage d’HbA1c standardisées en se basant sur les
différentes études réalisées par NGSP/ IFCC et d’autres associations internationales, Ainsi les
facteurs et les limites qui interfèrent ce dosage.

L’étape suivante consiste à étudier la technique de chromatographie liquide à haute performance

pour le dosage d’HbA1c utilisée dans le laboratoire de biochimie au CHU-Fès, et apprécier sa
fiabilité et sa praticabilité par rapport aux autres techniques.

Enfin, j’ai pu réaliser une étude statistique sur un échantillon de 401 patients venus au laboratoire
pour réaliser le test de dosage d’HbA1c pendant une période déterminée ,et à partir des résultats
obtenus , j’ai pu discuter la prévalence de diabète selon l’âge et le sexe et comparer ces résultats
avec les normes marocaines puis avec les normes mondiales .

Page | 8
 II. PRÉSENTATION DE LA STRUCTURE D’ACCUEIL

Le stage de fin d’étude est considéré indispensable pour chaque étudiant vu son importance
dans l’acquisition des connaissances, l’apprentissage de nouvelles techniques omniprésentes dans
le marché de travail, mais également pour l’amélioration de l’esprit analytique et pratique dans son
domaine de spécialité. Dans le cadre de préparation de mon projet de fin d’étude, j’ai effectué un
stage pratique d’initiation d’une durée de 2 mois, au laboratoire centrale des analyses médicales
de CHU Fès, au sein de l’unité de (biochimie). Le Laboratoire

Central d’Analyses Médicales (CHU Hassan II –Fès) est situé au bâtiment J est conçu comme un
pôle d’activité hospitalière comportant plusieurs spécialités d’analyses médicales :

Le laboratoire central des

analyses médicales

biochimie/Pharmacotoxicologie : Hématologie :
Tests de dosage des constituants des NFS, groupage ABO, vitesse de
liquides de l’organisme (les urines, le sédimentation, test TCA, test TP
sang, LCR, LP…)

Anatomie pathologique :
Parasitologie :
Tests sur les
Tests sur des sels, sang tissues (immunohistochimie,
immunofluorescence)
Mycologie : crachat, cheveux

Bactériologie /Immunologie : Génétique :

ECBU : examen cytobactériologique Diagnostic des maladies génétiques

des urines. par : PCR, séquençage, réalisation
Examen bactériologique : de PDP, des caryotypes
LBA, Pus, ponctions …

III. INTRODUCTION

Page | 9
Le sang est composé essentiellement de globules rouges qui représentent une fraction de 52% de
la composition sanguine chez les hommes et 42% chez les femmes. Un globule rouge est une cellule
discoïde biconcave dépourvue de noyau, de mitochondries et de ribosomes, et contenant une
grande quantité d'hémoglobine lui donnant sa coloration. Les globules rouges fixent l'oxygène dans
les tissus grâce au fer contenu dans l'hémoglobine, leur pigment rouge.

Les érythrocytes transportent le dioxygène (O2) des poumons à toutes les cellules de l'organisme
et une partie du dioxyde de carbone (CO2) des cellules aux poumons. A maturité, les globules
rouges normaux prennent une forme des disques biconcaves anucléés contenant de l’hémoglobine
et des enzymes nécessaires pour le métabolisme érythrocytaire. [22]

Hémoglobine
L’hémoglobine est le principal composant du globule rouge, c’est un complexe qui associe une
protéine et un pigment ferreux rouge contenu dans les érythrocytes .La molécule de l’hémoglobine,
de poids moléculaire 68000 daltons, est formée de quatre hèmes, chacun contenant un atome de fer
ferreux Fe2+, et de quatre chaines de globines .Plusieurs formes d’hémoglobines existent, différant
par la composition de leur chaine de globine. Chaque molécule
d’hémoglobine est liée de manière réversible à quatre molécules d’oxygène pour former une
molécule d’oxyhémoglobine rouge vif. Au fur et à mesure de leur fixation, les molécules d’oxygène
modifient la forme de l’hémoglobine. Lors de leur dissociation les phénomènes se passent en sens
inverse, chaque molécule d’oxygène libérée facilite la libération de la molécule suivante. Cela
explique que la courbe de dissociation ait une forme de sigmoïde. L’hémoglobine réduite, rouge
foncé, ayant délivré son oxygène aux tissus, transporte du dioxygène de carbone lié à la globine
sous forme de carbhémoglobine. L’hémoglobine est un important composant des systèmes
tampons qui limitent les variations de pH sanguin. Chez le fœtus, il existe une hémoglobine
spéciale HbF qui a une grande affinité pour l’oxygène, ce qui compense la basse pression partielle
en oxygène du placenta (le fœtus recevant l’oxygène par la circulation fœto-maternelle). Dans la
petite enfance, l’hémoglobine fœtale est presque entièrement remplacée par l’hémoglobine A (HbA

Page | 10
et HbA1). Normalement les adultes ont entre 11.5 et 18g d’hémoglobine pour 100 ml de sang, les
concentrations les plus élevées se trouvent chez l’homme. [1]

Figure 1:Tétramère d'hémoglobine avec l'emplacement du tétramère-dimère et les interfaces

dimère-monmère indiqués par des flèches. La couleur cyan indique les hélices E et F, tandis que le
reste de chaque sous-unité est gris. L'hème est rouge.

Hémoglobine glycosylée

Les protéines sont fréquemment glyquées au cours de diverses réactions enzymatiques lorsque
les conditions sont physiologiquement favorables. Cependant, dans le cas de l'hémoglobine, la
glycation se produit par la réaction non enzymatique entre le glucose et l'extrémité N-terminale de
la chaîne β, qui forme une base de Schiff. Lors du réaménagement, la base de Schiff est convertie
en produits d’Amadori, dont le plus connu est l'HbA1c (fig. 2).

Dans la première étape de la formation d'hémoglobine glyquée, l'hémoglobine et le glucose sanguin

interagissent pour former de l'aldimine dans une réaction réversible. Dans l'étape secondaire,
irréversible, l'aldimine est progressivement transformée en forme de cétoamine stable. Les
principaux sites de glycosylation de l'hémoglobine, dans l'ordre de prévalence, sont β-Val-1, β-
Lys-66 et α-Lys-61. L'HbA1c représente environ 5% de la fraction d'HbA totale. Comme
mentionné ci-dessus, le glucose dans le format à chaîne ouverte se lie à l’extrémité N-terminal pour
former une aldimine avant de subir un réarrangement d'Amadori pour former une cétoamine plus
stable. Il s'agit d'un processus non enzymatique qui se produit en continu in vivo. La formation de
l'hémoglobine glyquée fait partie du cycle normal des fonctions physiologiques. Cependant, à

Page | 11
mesure que la glycémie moyenne augmente, la quantité d'hémoglobine glyquée dans le plasma
augmente également. Cette caractéristique spécifique du biomarqueur de l'hémoglobine est utilisée
pour estimer la glycémie moyenne au cours des deux à trois mois précédents. [2]

Figure 2: Formation d'HbA1c à partir de la liaison du glucose à l'hémoglobine A.

Aperçu historique sur HbA1c

C’est en 1958 que l’HbA1c a été séparée par chromatographie des autres formes d’hémoglobine
par Titus [Link], un néerlandais spécialiste de l’hémoglobine (États-Unis). Elle a été
caractérisée, en 1968, comme une glycoprotéine par Robert M. Bookchin, un hématologue, et Paul
Myron Gallop. Peu après, son augmentation dans le diabète a été décrite de façon fortuite par
Samuel Rahbar, un chercheur de l’université de Téhéran (Iran), qui s’intéressait aux
hémoglobinopathies, très fréquentes en Iran. [3]
En 1969, Samuel Rahbar et ses collègues ont découvert des concentrations plus élevées de fractions
rapides de l'hémoglobine chez les patients diabétiques que chez les sujets non diabétiques. Après
cela, il a fallu un certain temps avant que Trivelli suggère une relation entre les fractions
d'hémoglobine rapide, les concentrations moyennes de glucose dans le sang et les complications à
long terme chez les patients diabétiques. Le terme "rapide" est dérivé du fait que ces composants
sont élués plus rapidement dans une colonne échangeuse de cations que les autres composants. Les
fractions ont été décrites dans l'ordre dans lequel elles ont été éluées de la colonne : HbAla, HbA1b
et HbAlc, respectivement. Finalement, vers 1977 la première méthode commerciale d'HbA1c est
devenue disponible. Il a fallu attendre 8 ans pour que l'OMS mentionne dans son rapport de 1985
1'utilité potentielle de l'HbA1c dans le traitement du diabète. Aujourd'hui l'HbA1c devient un
"ETALON-OR" pour la gestion du glucose chez les patients diabétiques. [4]

Page | 12
Figure 3: types d’hémoglobine à l’âge adulte chez une personne en bonne santé.

Physiopathologie du diabète
Le diabète sucré est défini par l’élévation chronique de la concentration de glucose dans le sang
(hyperglycémie) et regroupe, dans un véritable syndrome, plusieurs maladies de pathogénie
différente (trouble de la sécrétion et/ou de l’action de l’insuline). L’hyperglycémie chronique est
la cause principale de la survenue des complications dégénératives de la maladie diabétique mais
celles-ci sont néanmoins susceptibles d’être évitées ou tout au moins retardées par un traitement
adéquat. [5]

Critères biologiques de diagnostic du diabète sucré

Selon les critères actuels, le diabète sucré est défini par une glycémie plasmatique à jeun 1,26 g/L
ou > 2g/L quel que soit l’heure du prélèvement en présence de symptômes cliniques. Ce diagnostic
peut également être posé devant une valeur de 2 g/L à la 120ème minute d’une épreuve
d’hyperglycémie provoquée par voie orale (HGPO. Le diagnostic biologique de routine du diabète
sucré repose dorénavant sur la mesure de la glycémie à jeun et non sur l’HGPO qui est moins
physiologique, peu reproductible et plus coûteuse. Une glycémie à jeun modérément augmentée (³
1,1g/L mais < 1,26 g/L) correspond à une « glycémie à jeun anormale», état qui indique un trouble
de l’homéostasie glucidique. Cette catégorie est, grosso modo, équivalente à la classique
intolérance au glucose définie par une glycémie 1,4g/L mais < 2 g/L à la 120ème minute de l’HGPO
(Figure 4).

Page | 13
 Figure 4: Diagnostic biologique de diabète sucré

Classification du diabète sucré

La classification nosologique du diabète publiée en 1997 par un groupe d’experts sous la
responsabilité de l’Association Américaine du Diabète (ADA) classe les différentes catégories du
diabète comme suit :

· Diabète de type 1
· Diabète de type 2 (à dominance d’insulinorésistance ou d’insulinopénie)
· Autres diabètes spécifiques (dits "secondaires")
· Diabète gestationnel
Altération de l’homéostasie glucidique : - glycémie à jeun anormale - intolérance glucidique Cette
classification met en exergue les différences de physiopathologie des diabètes de type 1 et de type
2. Dans le diabète de type 1, l’hyperglycémie est due à une carence absolue en insuline, secondaire
à la destruction auto-immune des cellules b des îlots de Langerhans même si certains cas rares de
ce diabète apparaissent idiopathiques, Ce diabète est appelé aussi « diabète maigre » car il débute
en général chez des enfants ou des adolescents, mais il peut apparaître également chez l'adulte
avant 30 ans. Dans le diabète de type 2, la carence en insuline est relative et l’hyperglycémie est
liée à l’association, à des degrés divers, d’une insulinorésistance et d’une insulinopénie, il est
également appelé « diabète gras » et plus fréquent que celui de type 1, vu qu’il touche essentiellement les
personnes de plus de 40 ans. . Ces 2 types de diabète ont de nombreuses caractéristiques cliniques et
biologiques différentes (Tableau1).

Page | 14
 Tableau 1: Caractéristiques des diabètes de type 1 et 2

Les diabètes dits "spécifiques" sont secondaires à une maladie pancréatique, à une endocrinopathie,
iatrogènes ou encore liés à des anomalies génétiques. Le diabète gestationnel correspond à un
trouble de la tolérance glucidique apparaissant entre la 24ème et la 28ème semaine de grossesse et
disparaissant après l’accouchement. Son diagnostic repose à l’heure actuelle sur la pratique d’une
HGPO avec 100g de glucose.
La classe "altération de l’homéostasie glucidique" correspond à des anomalies minimes de la
régulation glycémique qui traduisent une augmentation du risque de diabète et de maladies
cardiovasculaires.
La présentation clinique d’un diabète sucré est très variable et le diabète peut être révélé par l’une
de ses complications chroniques.

Les différentes techniques de dosages de l’HbA1c

Le dosage de l’HbA1c s’est progressivement affiné et standardisé. Au fil des années, Des sociétés
savantes comme le NGSP (National Glycohemoglobin Standardization Program) et l’IFCC
(International Federation of Clinical Chemistry) ont contribué à sa standardisation, ce qui permet
une comparaison inter-laboratoire des résultats. Son dosage fait appel à des méthodes
chromatographiques, électrophorétiques ou encore immunologiques [6].

Méthode immunologique
Utilisent des anticorps dirigés contre le peptide N-terminal glyquée des chaînes β. L’HbA1c est
calculée par rapport à l’Hb totale à l’aide d’une gamme d’étalonnage titrée. La spécificité est bonne,

Page | 15
cependant l’interférence des variants de l’hémoglobine peut se manifester ou non suivant la
caractéristique des anticorps [7].

Figure 5 : Dosage d’HbA1c par méthode immunologique

Méthodes électrophorétiques
Séparent les fractions d’hémoglobine selon leur charge et leur quantification. Des applications de
l’électrophorèse capillaire ont permis d’améliorer la précision de ces techniques électrophorétiques
et permettent de doser l’HbA1c [7]. Cette dernière est caractérisée par une haute résolution des
différentes variantes de l’hémoglobine [8].

Figure 6 : Représentation schématique d’un appareillage d’électrophorèse

Page | 16
.

Figure 7 : résultat de séparation d'Hb par EC

Méthodes chromatographiques
Les méthodes d'affinité ont maintenant été adaptées pour être utilisées sur des analyseurs de chimie
automatisés, et l’HPLC (chromatographie liquide à haute performance) sur gel d'affinité est
désormais largement utilisée dans le monde entier. Les deux adaptations sont calibrées à l'aide du
matériel du fabricant. [9]

Standardisation

En biologie clinique, la standardisation est indispensable pour permettre une comparaison inter-
laboratoire des résultats. Cette standardisation se base sur les études prospectives réalisées par le
Diabetes Control and Complications Trial (DCCT) et l’United King-dom Prospective Diabètes
Study (UKPDS). Ces études ne définissant l’étalon que par des critères chromatographiques, elle
est sujette à de nombreuses interférences Un groupe de travail de l’International Fédération of
Clinical Chemistry (IFCC) a décrit en 2002 une méthode de référence qui repose sur une HPLC en
phase inverse couplée à la spectrométrie de masse. Ici, l’étalon est défini chimiquement :
l’hexapeptide N-terminal glyqué de la chaîne. Cette technique est plus spécifique et donne des
résultats 1 à 2 % plus bas que ceux de la NGSP/DCCT (Diabetes Control and Complication Trial)
Une équation directrice permet la conversion entre les deux systèmes: Les résultats de la NGSP
sont exprimés en % et ceux de l’IFCC en mmol/mol (depuis 2007), ce qui a l’avantage de marquer
clairement le type de standard. De plus, il est actuellement recommandé d’exprimer les résultats
d’HbA1c selon les deux unités dans les comptes rendus d’analyses médicales : NGSP = [0, 0915
× IFCC] + 2,15 [10].

Page | 17
 Limites et interférences de dosage
Il existe différents paramètres qui faussent le dosage de l’HbA1c et qui rendent ce dosage inutile
quel que soit la méthode utilisée. [12]

Métabolisme anormal de l’Hb ou des GR

Traitement stimulant l’hématopoïèse, Hémorragies, Transfusions, Traitement antirétroviral

Splénectomie,
Hypertriglycéridémie (> 15 mmol/l) ou hyper-bilirubinémie (interférence avec les méthodes basées
sur un immuno-essai)
Grossesse (abaissement de l’HbA1c par dilution) [12]
Présence de variantes d’Hb

Conséquences physiopathologiques :
- Diminution de la durée de vie des GR + hémolyse
- Cinétique de glycation différente
Conséquences analytiques (dépendent de la méthode)
- Detection du variant
- Interprétation et rendu des résultats [12]

Présence d’autres Hb modifiées

La fixation de substances non glucidiques sur l’Hb peut modifier ses propriétés physico-chimiques
et augmenter les valeurs d’HbA1c
- Acétylation avec aspirine ou au cours de l’éthylisme chronique ou l’Hb acétylée peur
représenter 2 à 3%
- Carbamylation de l’Hb lors d’insuffisance rénale : fixation d’isocyanate provenant de la
décomposition de l’urée. [12]

Médicaments et toxiques

Vitamine C à haute dose (inhibition de la glycation)

Aspirine à hautes doses (valeurs faussement élevées, formation Hb acétylée)
Ethylisrne chronique (valeurs faussement élevées, formation Hb anormale avec acétaldéhyde)

Page | 18
 L’intérêt du dosage d’HbA1c chez les diabétiques
Le dosage de l’hémoglobine glyquée (HbA1c) est le reflet le plus simple du taux moyen de
glycémie, elle permet aux soignants et aux patients d’évaluer facilement le contrôle du diabète et
de fixer des objectifs thérapeutiques [16].

Corrélation entre l’HbAIc et la glycémie

Les premiers travaux montrant un lien entre l’augmentation de l’hémoglobine glyquée et le diabète
ont été publiés dans les années [Link] la base principalement de l’analyse des résultats de l’étude
DCCT, on a pu établir une corrélation entre le taux moyen de glycémie et la valeur de l’HbA1c :
Glycémie moyenne (mmol/l)=2xHbA1c (%) – 6,0 [16].
Une augmentation de l'HbA1c observée dans des conditions de mauvais contrôle du diabète a été
associée à une augmentation de la viscosité du sang.
La glycosylation de l'hémoglobine et l'augmentation des taux de glucose ont tendance à affecter
les propriétés des globules rouges, réduisant la flexibilité des globules rouges et augmentant leur
tendance à l'agrégation, entraînant une augmentation de la viscosité du sang. La glycosylation de
l'hémoglobine peut également affecter les interactions entre les lipides membranaires et les
protéines dans les globules rouges, altérant leur viscosité interne, modifiant les propriétés
viscoélastiques des membranes érythrocytaires et altérant la déformabilité des globules rouges [2]

Valeurs usuelles
Depuis juin 2011, les résultats d’HbA1c doivent être exprimés à la fois en mmol/mol (IFCC) et en
pourcentage (NGSP). Les valeurs usuelles sont de 4 à 6 % (NGSP) et 20 à 42 mmol/mol(IFCC)
.Le dosage de l’HbA1c doit se faire à une fréquence de 2 fois par an si l’objectif thérapeutique est
atteint ; si ce n’est pas le cas ou lors d’un changement de traitement, il doit être réalisé chaque
trimestre. Pour ce qui est de l’utilisation de ce marqueur dans le diagnostic du diabète l’OMS retient
les critères suivants :
•HbA1c≥ 6,5 % (48 mmol/mol) à deux reprises
•HbA1c≥ 6,5 % et glycémie à jeun > 2 g/L [10]. Les valeurs, basées sur différentes unités, sont
illustrées dans le tableau ci- dessous [2].

Page | 19
 Tableau 2 : HbA1c comme indicateur du contrôle du diabète

Les normes d’HbA1c (selon étude DCCT) ont été définies pour [12] :
- Une durée de vie normale des hématies: 120 jours (absence d’hémolyse, de transfusion.)
- Une synthèse normale d’hémoglobine
- Une population de patients homozygotes A/A (HbA0 > 95%)

Utilité pour le diagnostic de diabète

Premièrement, l'HbA1c donne une indication de la glycémie chronique plutôt que d'être un test de
glycémie à un moment donné. Il donne un index intégré de la glycémie sur toute la durée de vie de
120 jours du globule rouge, mais dans cette période de 120 jours, la glycémie récente a la plus
grande influence sur la valeur de l'HbA1c, avec 50 % de l'HbA1c formée dans le mois avant
l'échantillonnage et 25 % dans le mois précédent. Il semble donc logique qu'un tel test soit
approprié pour diagnostiquer une maladie caractérisée par une hyperglycémie chronique et une
évolution progressive vers des complications. Deuxièmement, il s'agit d'un test relativement
pratique, qui n'oblige pas le patient à jeûner et n'utilise qu'un seul échantillon de sang. Il s'agit d'une
considération importante, car elle peut permettre une meilleure utilisation des tests et une meilleure
détection du diabète, étant donné la grande proportion des cas du diabète qui ne sont pas
diagnostiqués. Contrairement au glucose plasmatique, l'HbA1c présente une variabilité pré-
analytique minimale. Elle est très stable après prélèvement sans modification de sa concentration
« dans le tube de prélèvement (une semaine à 4 °C) [16].

Page | 20
 IV. OBJECTIF DU TRAVAIL

L’hémoglobine glyquée (HbA1c) est considérée comme un « Etalon d’or » utilisé pour le
diagnostic de diabète et le contrôle glycémique à long terme, son dosage alors permet de
déterminer la quantité de glucose cumulée dans les globules rouges pendant une période de 120
jours. A cet effet, le dosage d’hba1c bénéficie actuellement d’une trentaine de techniques
différentes disponibles sur le marché.

Ce travail a pour objectif la détermination des différentes techniques recommandées et utilisées

pour le dosage de l’hémoglobine glyquée à l’échelle mondial, et l’appréciation de la technique
HPLC utilisée dans le laboratoire des analyses biochimiques au niveau de CHU-Fès .

De même qu’apprécier de ce dosage pour l’exploration de la pathologie de diabète et la

surveillance de cette maladie chez les personnes diabétiques.

Page | 21
 V. MATERIEL ET METHODES

Etapes des analyses biochimiques

Les étapes des analyses médicales dont j’ai appris de suivre et pratiquer dans le laboratoire de
biochimie peuvent être résumées dans les suivantes :

La phase pré-analytique
- Réception des échantillons : prélèvement du sang, liquides biologiques du corps humain
- Etiquetage des tubes selon les analyses biochimiques demandées :

Le code doit être Applications

terminé par

Tube vert 29 Biochimie

Tube rouge 28 Electrophorèse
Tube violet 27 Hémoglobine glycosylée
Tube gris 26 LCR
- Centrifugation.

Figure 8 : Appareil de centrifugation

Phase analytiques
- Deux automates ARCHITECT C8000 dosage biochimique du sang , urine , LCR, LP :
(ionogramme , vitamines , glycémie , créatinine , CRP , ferritine , test dans les urines
bilirubine , enzymes , triglycérides ….)

Page | 22
 - Appareil d’électrophorèse SEBIA séparation des protéines plasmatiques,
immunofixation
- Appareil HPLC ADAMS HbA1c (dosage direct d’hémoglobine glyquée), sans passer
par la centrifugation

Phase post-analytique validation des résultats

Mon sujet de stage se focalise sur la technique HPLC de dosage de l’hémoglobine glyquée utilisée
dans le laboratoire.

Principe général d’HPLC

Cette technique est utilisée afin de séparer, identifier et quantifier la composition d’un mélange,
sauf que dans cette technique d’HPLC (chromatographie liquide à haute performance), la phase
mobile qui est constituée d’un solvant ou d’un mélange de solvant est forcée par une pompe. cette
pompe permet d’avoir un débit d’écoulement élevé de la phase mobile ou de l’éluant ce qui permet
de diminuer le temps nécessaire pour la séparation des composés d’un mélange tout au long de la
phase stationnaire.
La séparation se fait dans une colonne chromatographique contenant la phase stationnaire,
généralement elle est sous forme de Film polymérique qui recouvre ou qui est greffé sur la paroi
interne de la colonne.
Cette méthode de CLHP est certifiée de NGSP pour le dosage d’HbA1c , la séparation alors est
améliorée et l’automatisation est quasi complète.

Figure 9 : Principe général de la technique HPLC

Page | 23
 Appareil de dosage D’HbA1c :
Le dosage de l’HbA1c dans le laboratoire de biochimie au niveau de CHU-Fès repose sur une
méthode d’HPLC avec l’analyseur ADAMS ™ A1C HA-8180V.

Figure10: Analyseur ADAMS ™ A1C HA-8180V

Caractéristiques [23]
Type d'analyseur HbA1 analyseur entièrement automatisé
Principe de mesure Chromatographie liquide haute performance par échange
d'ions
Plage de mesure garantie HbA1C: 4 à 15% (20 à 140 mmol / mol)
HbF: 0,3 à 5%
Longueur d'onde de mesure 420 nm / 500 nm (colorimétrie à deux longueurs d'onde)
Consommation d'échantillon Environ 14 µL (sang total)
Volume d'échantillon requis Tube d'échantillon: 10 mm du bas
du tube
Débit 37 tests / heure
Vitesse de traitement 90 secondes / test
Capacité du rack d'échantillons 10 échantillons / rack
Mémoire 900 résultats (y compris les résultats d'étalonnage)
Environnement de mésure Température: 10 - 30ºC
Humidité: 20-80% HR (sans condensation)

Page | 24
 Etapes de mesure d’HbA1c avec ADAMS ™ a1c HA8180v

Réception des échantillons

Les échantillons du sang sont prélevés par une ponction veineuse et le Sang total collecté dans des
tubes K2-EDTA ou K3-EDTA (un agent anticoagulant) avec une couleur lavande de bouchon. Le
sang ainsi prélevé est acheminé directement au laboratoire pour doser l’HbA1c.

Etalonnage
Avant de commencer le dosage il faut une calibration de l’appareil en réalisant deux contrôles: le
premier contrôle détermine la valeur de référence d’un cas non diabétique qui est en moyenne de
5.6% d’HbA1c et le deuxième contrôle pour vérifier la deuxième valeur de référence chez un
patient diabétique qui est en moyenne de 10.5% .Le système utilise l'étalonnage IFCC et fournit
une valeur NGSP (certifiée par cette dernière. Les résultats de l’étude de la répétabilité avec les
coefficients de variations calculés pour les deux niveaux sont respectivement de 0.338 % et 0.171
% (tableau 3). En les comparant avec le CV (coefficient de variation) fournisseur et celui retenu
par la SFBC (Société Française de Biochimie Clinique, on constate que les résultats sont conformes
[13].
Tableau 3: Résultats de l’étude de la répétabilité

Page | 25
 Mode du travail
Après avoir déposé le portoir des tubes dans l’analyseur ADAMS ™ A1C HA-8180V, l’appareil
doué d’automatisme commence par une agitation douce des tubes afin d'éviter la sédimentation du
sang, suivi d’une lecture des codes barre, puis il entame la réaction de dosage.

Figure 11 : Etapes de dosage d’HbA1c par la technique d’HPLC

Le processus de dosage peut être identifié en trois étapes principales :
1- L’hémolyse
Le sang est aspiré automatiquement puis dilué par une solution d’hémolyse constituée de
Polyéthylène glycol éther p-octylphénylique (≤ 0,1) et de De l'azide de sodium (≤ 0,02) .cet
échantillon dilué est injecté dans la colonne, un volume de 3,4 μl du sang total automatiquement
dilué est injecté.
2- la séparation
La colonne ARKRAY en acier inoxydable, se compose d'un préfiltre pour se débarrasser des
impuretés de l’échantillon hémolysée et d’une colonne analytique remplie d’une résine échangeuse
d'ions (un polymère hydrophile d'un copolymère méthacrylate ester) (fig.12) [7].

Page | 26
 Figure 12: Colonne ARAKRAY échangeuse d’ions
Le mélange à analyser est injecté puis transporté à travers le système chromatographique, les
composés en solution se répartissent alors suivant leur affinité entre la phase mobile et la phase
stationnaire [14]. L'élution est réalisée dans un gradient de tampon phosphate en cinq étapes avec
augmentation de la force ionique.
Il y a trois tampons (80A, 80B et 80CV) dans des emballages en aluminium :
- éluant 80A : composé de Perchlorate de sodium (<0,1%) et de l'azide de sodium(<0,1%)
- éluant 80B : composé de Perchlorate de sodium (≤3,0%) et de l'azide de sodium(<0,1%)
- éluant 80CV : composé de Perchlorate de sodium (≤3,0%) et de l'azide de sodium(<0,1%)

La colonne échangeuse d’ions utilise la polarité des solutés pour les séparer. Les fractions
d’hémoglobines possèdent chacune un potentiel de charge différent, ce qui détermine l’affinité de
chaque type par rapport à la phase stationnaire polaire. Les composés qui ont le potentiel de charge
le plus grand sont les plus retenus par la résine et qui sont élués en dernier (HbA1c). En revanche,
ceux qui ont le potentiel de charge le plus faible, ils prennent plus de temps à être retenus
complétement et ils sortent les premiers(HbA0).

3- Détection

Les fractions d’hémoglobines éluées sont identifiées et quantifiées par l’absorption de la lumière
émise par un détecteur avec une double longueur d'onde (420 – 500 nm) LED-photodiode. Au bout
de 90 min , les résultats sont affichés sous forme des pics caractérisant les différentes solutés
obtenus et l'ensemble des pics enregistrés est appelé chromatogramme. Le pourcentage d’HbA1c
peut être obtenu même en présence de HbA, HbC, HbE, HbF et HbS , sans aucune interférence[7].

Page | 27
 La détection des pics séparés se fait par un intégrateur qui mesure la surface sous un pic, et qui
dépend de 2 paramètres [14] :

* la largeur attendue des pics

* le seuil d’intégration (sensibilité)

La largeur de pic détermine la fréquence d’échantillonnage du signal. Le pic est alors découpé en
tranches. Le seuil d’intégration est la valeur du signal à partir de laquelle le calculateur repère un
début de pic, Le résultat rapporté est dérivé du rapport HbA1c/HbA totale, ajustée pour
l’étalonnage et exprimé dans les deux unités IFCC (mmol/mol) et NGSP (%), le résultat est figuré
ci-dessous :

Taux d’HbA1c

Hba1c stable est la

variété cible

Pic correspondant
à la valeur
d’HbA1c stable Temps de rétention

Figure 13: Exemple du chromatogramme.

Interprétation du chromatogramme :
Une bonne séparation des pics désigne une bonne caractérisation des différentes fractions
d’hémoglobine, le traçage de la courbe se fait par la mesure de la densité optique en fonction de
temps pris par la molécule pour son élution complète.

Le temps de rétention Tr : est le temps mis par un soluté pour traverser la colonne et pour qu’il
soit complètement retenu par le solvant. Ce temps est caractéristique d'un soluté dans des
conditions d'analyse donnés. La surface du pic est en fonction de la quantité du constituant

Page | 28
 VI. RESULTATS ET DISCUSSION

Résultats
Conception de l’étude et sélection des patients
Il s’agit d’une étude statistique dans un but analytique chez 401 patients au laboratoire des analyses
biochimiques de CHU-FES durant la période du 17/05/2021 jusqu’au 2/06/2021, afin de
diagnostiquer ou surveiller leur état de diabète en réalisant le test de dosage d’hémoglobine
glyquée (HbA1c).
L’objectif de cette étude est de déterminer l’intérêt de dosage d’HbA1c dans la gestion du diabète
et ses variations selon l’âge et le sexe.
Notre population d’étude composée de 401 patients est répartie selon le sexe entre 263 femmes et
138 hommes.
Les données de cette étude sont saisies et traités sur Excel.
Tableau 4: Répartition des patients selon le taux d’HbA1c mesuré

Sexe Féminins Masculins État de patient % dans la population

HbA1c en % (n=263) (65%) (n=138) (34%) (n= 401)
<7% 173 (65%) 98 (71%) Normale 67%
=7% 5 (2%) 1 (0.7%) Pré-diabétique 1,5%
>7% 85 (32%) 39 (28%) Diabétique 31%

Tableau 5: Répartition des patients selon l’âge et le taux d’HbA1c

Féminins (n=263) Masculins (n=138)

%HbA1c <7% =7% >7% <7% =7% >7% % dans la

Âge population
<18 ans 1 0 2 3 0 1 7 (1,75%)
18 – 45 ans 46 1 13 23 0 2 85 (21%)
>45 ans 126 4 70 72 1 36 309(77%)
% dans la catégorie 65% 2,5% 32,5% 69% 1% 30%
(F ou M)

Page | 29
Notre population constituée de 401 patients est hétérogène : le nombre de femmes (65% de la
population) est supérieur au nombre des hommes (34% de la population)
La moyenne d’âge de la population étudiée est 55 ans avec un écart type de 21,92
La moyenne de taux d’HbA1c mesuré est 6,1% avec un écart-type de 1,41 ce qui correspond à
une moyenne de 49,25 mmol /mol, avec un écart-type 16,97.

Page | 30
 Discussion
Comparaison avec les normes marocaines
A partir de cette étude, on peut constater que la prévalence de diabète est 1.14 fois plus élevée chez
les femmes (32%) que chez les hommes (28%), et elle est également élevée chez les gens ayant
plus de 45 ans dans les deux catégories et qui représente 26,5% de la population totale, par
conséquence le diabète gras qui est le plus répandu.
En 2018, le ministère de santé a réalisé une enquête nationale sur la population et la santé familiale
(ENPSF) afin d’actualiser les données sur les maladies chroniques au Maroc, y compris le diabète.
Cette étude a retrouvé une prévalence du diabète, estimée sur la base des déclarations recueillies
au moment de l’enquête ménage, est de 4,8%, montrant une augmentation par rapport aux résultats
de ENPSF – 2011 (3,3%). Cette prévalence est 1,7 fois plus élevé en urbain (5,7%) qu’en rural
(3,3%) et 1,4 fois plus élevé chez les femmes (5,6%) que chez les hommes (3,9%). Les tranches
d’âge de 50-59 ans et de 60 ans et plus enregistrent des prévalences respectivement de 13,4% et de
20%. Chez les moins de 30 ans la prévalence est inférieure à 1% et pour les 30 à 49 ans, elle est
inférieure de 5,9%. On peut déduire qu’il y a une compatibilité entre les résultats de notre étude et
les résultats obtenus par l’ENPSF-2018 [17].

Comparaison avec les normes mondiales

Le diabète, qu’il soit de types 1 ou 2, est plus fréquent dans la population masculine. On observe
ce dysmorphisme sexuel partout à travers le monde, à l’exception de certains pays d’Afrique sub-
[Link] hommes sont 26% plus susceptibles de souffrir de diabète. Les chiffres les plus
récents de Public Health England montrent que 9,6 % des hommes âgés de 16 ans et plus souffraient
de diabète, contre 7,6 % des femmes.
En 2014, le sexe masculin a enregistré près de deux fois plus de décès dus au diabète dans la
tranche d'âge 15-64 ans que les femmes (hommes 493, femmes 255, (ONS 2014). La prévalence
du diabète diagnostiqué par un médecin a augmenté entre 1994 et 2015, passant de 2,9 % à 6,7 %
chez les hommes et de 1,9 % à 5,1 % chez les femmes. Les hommes d'origine africaine, africaine
caribéenne, sud-asiatique ou chinoise sont plus à risque de développer un diabète de type 2 à un
plus jeune âge. Ils ont également une tendance à progresser d'une intolérance au glucose à plus de
deux fois le taux de la population blanche [18].

Page | 31
Il a été démontré que le taux d’hémoglobine glyquée est augmenté d’une manière physiologique
chez les hommes que chez les femmes en raison de la différence bien connue du taux
d'hémoglobine entre les deux sexes [19].
On se trouve alors devant une incompatibilité entre les résultats obtenus et les normes mondiales,
dans ce cas on peut expliquer cette différence par plusieurs facteurs :
• Variation essentiellement régionale : plusieurs facteurs génétiques et environnementaux
influençant le processus de la glycation, la déglycation, la durée de vies des hématies, la
perméabilité membranaire au glucose et modifient potentiellement la valeur d’HbA1c qui
peut varier d’une région à une autre. C’est ce qui est prouvé par l’étude précédente [20].
• conditions pathologiques : influencent le diagnostic de diabètes (autres maladies
chroniques, anomalies des érythrocytes, modification de ph sanguine, hémolyse…)
• Administration des médicaments: Dapsone, antiviraux, interféron, fer, EPO…
• Conditions non pathologiques: L’ethnie est un facteur de variabilité important des valeurs
d’HbA1c, Une étude récente a montré la possible surestimation des diagnostics de diabète
chez 1,8 % de la population noire américaine (contre 0,3 % de surestimation chez les
“Blancs” non hispaniques) selon les critères récemment entérinés par l’ADA[21] .
• limites de la relation “moyenne glycémique/HbA1c”: les critères de corrélation entre la
glycémie et le taux d’hba1c peuvent être non respectés probablement en raison de la
capacité de glycation ou de pénétration du glucose au sein des érythrocytes chez l’individu,
de la présence d’une anémie, d’une grossesse, d’une hémoglobinopathie, de traitement
interférant avec le dosage de l’HbA1c ou encore en raison d’une variabilité glycémique trop
importante. [20]

Pourquoi HPLC ?

Le choix de la technique et sa fiabilité est l’un des facteurs déterminants de la qualité des résultats
des analyses au sein des laboratoires de biologie médicale. Depuis 1996, la chromatographie
liquide à haute performance par échange d’ions devenait une technique recommandée et utilisée
par les laboratoires des analyses biochimiques à l’échelle internationale pour le dosage et la
quantification précise de l’hémoglobine glyquée dans les hématies [15]. Ce dosage, fréquemment
prescrit, entraîne un recrutement important et permet, de ce fait :

Page | 32
• Une phase pré-analytique très réduite.
• Mettre en évidence de manière fortuite d’anomalies de l'hémoglobine.
• Une grande précision de mesure, par détection de variants d’Hb
• Une bonne alternative aux autres techniques en termes de performances analytiques, de
praticabilité, de qualité des résultats, notamment lors des anomalies de l’hémoglobine.
• Un test de dosage est très court et plus pratique pour un laboratoire qui reçoit nombre élevé
d’échantillons par jour. Les autres méthodes immunologiques et électrophorétiques
nécessitent plus de temps que ça soit pour la préparation des échantillons ou pour la réaction
de dosage.
• Pas d’interférences qui peuvent fausser l'interprétation des résultats obtenus.

Page | 33
 VII. CONCLUSION

Le taux d’HbA1c reflète l’équilibre glycémique sur une période de deux à trois mois. Sa
concentration exprimée en pourcentage et en mmol/mol ; une valeur située entre 4 et 6 % (20 à 42
mmol/mol) est souhaitable. Ce dosage est recommandé et très utilisé dans les structures de santé
pour le diagnostic du diabète sucré et le suivi de son évolution chez les patients diabétiques.
Cependant, le dosage de ce biomarqueur peut être faussé et interféré par plusieurs facteurs
pathologiques ou physiologiques donnant des résultats incorrects, La connaissance de ces limites
d’interprétation permet également de relativiser la mise en place des correspondances entre HbA1c
et moyenne glycémique dont l’utilisation tend à se généraliser.
Une variation régionale de prévalence du diabète est enregistrée ; elle est plus élevée chez les
femmes que chez les hommes au Maroc , alors que les résultats sont considérablement différents
dans les autres régions du monde qui connaissent une prévalence élevée du diabète chez les
masculins que les féminins. D’autre part, le diabète gras est le plus répandu chez les deux sexes et
à l’échelle mondiale.

Page | 34
 VIII. BIBLIOGRAPHIE

[1] Christine Brooker. Le corps humain : Étude, structure et fonction. Deuxième édition traduite de
l’anglais , publié en 1998 Masby international limited

[2] Sherwani, S. I., Khan, H. A., Ekhzaimy, A., Masood, A., & Sakharkar, M. K. (2016). Significance of HbA1c
test in diagnosis and prognosis of diabetic patients. Biomarker insights, 11, BMI-S38440.

[3] Schlienger, J. L. (2018). Le demi-siècle de l’hémoglobine glyquée. Médecine des Maladies

Métaboliques, 12(1), 93-96.

[4] Lenters-Westra, E., Schindhelm, R. K., Bilo, H. J., & Slingerland, R. J. (2013). Hemoglobin A1c:
Historical overview and current concepts. Diabetes research and clinical practice, 99(2), 75-84.

[5] Jouli La Reine . Médecine Nucléaire - Imagerie fonctionnelle et métabolique - 2001 - vol.25 -
n°2. ACADEMIA Accelerating the world's research.

[6] The glycated hemoglobin: Indication, interpretation and limitations M. Zendjabil Laboratoire
de biochimie, établissement hospitalier universitaire d’Oran 1er-Novembre-1954, BP 4166 Ibn
Rochd, Oran, Algérie Reçu le 20 aôut 2014 ; accepté le 7 mars 2015 Disponible sur Internet le 6
avril 2015

[7] AMADOU SEIBOU, B. (2016). Vérification de la méthode de dosage de l’HbA1c par CLHP sur
l’automate ARKRAY ADAMS A1c HA-8180V nouvellement acquis au laboratoire de Biochimie-
Toxicologie de l’HMIMV (Doctoral dissertation).

[8] Pr Garry John,biochimiste clinicien à l’Hôpitaluniversitaire de Norfolk et Norwich(Royaume

Uni).Sebia : marquage CE pour l’HbA1c en électrophorèse.

[9] HISTOIRE HBA1C :John, WG, Mosca, A., Weykamp, C. et Goodall, I. (2007). Standardisation de
l'HbA1c: histoire, science et politique. Les revues de biochimiste clinique , 28 (4), 163.

[10] Zendjabil, M. (2015, April). The glycated hemoglobin: indication, interpretation and
limitations. In Annales pharmaceutiques françaises (Vol. 73, No. 5, pp. 336-339).

[12] IXème Congrès Maghrébin d'Endocrinologie et Diabétologie, 23-25 Novembre 2012- Alger

[13] Chemsi, H., & Kamal, N. (2020). Vérification de la méthode de dosage de l’HbA1c par HPLC
au laboratoire de biochimie. Revue Francophone des Laboratoires, 2020(523), 22-27.

[14] C Yvelin, Catherine Chauvin, F Colomb . HPLC Principe et appareillage . Biochimie et Bio
moléculaire - Biotechnologie & Biologie et Physiopathologie humaine - Académie de Rouen ,
mercredi 20 janvier 2010

Page | 35
[15] Lemée, V., Hue, G., Lahary, A., & Lavoinne, A. (1999, November). Détection fortuite
d’anomalies de l’hémoglobine lors du dosage de l’hémoglobine glyquée par une technique de
chromatographie liquide haute pression. In Annales de Biologie Clinique (Vol. 57, No. 6, pp. 713)

[16] Florkowski, Chris. « HbA1c en tant que test de diagnostic du diabète sucré – examen des
preuves ». The Clinical Biochemist Reviews 34.2 (2013): 75.

[19] Bae, JC, Suh, S., Jin, S.-M., Kim, SW, Hur, KY, Kim, JH, … Kim, K.-W. (2013). Les valeurs
d'hémoglobine A1c sont affectées par le taux d'hémoglobine et le sexe chez les Coréens non
anémiques. Journal of Diabetes Investigation, 5 (1), 60-65.

[20] Wojtusciszyn, A. (2012). Les pièges de l’HbA1c. Revues générales. [Cité 13 oct 2020].
Disponible sur: [Link] realites-cardiologiques.

[21] OLSON DE, RHEE MK, HERRICK K et al. Screening for diabetes and pre-diabetes with proposed
A1C-based diagnostic criteria. Diabetes Care, 2010 33 : 2 184-2 189.

IX. WEBOGRAPHIES

[17] ENQUETE NATIONALE SUR LA POPULATION ET LA SANTE FAMILIALE (ENPSF-2018)

[Link]

[18] CRISE DU DIABÈTE MASCULIN : POUVEZ-VOUS AIDER ? MENS [Link]

HTTPS://[Link]/MALE-DIABETES-CRISIS-CAN-YOU-HELP

[11] eurofins clinical diagnostics France © 2012 biomnis – précis de biopathologie analyses
médicales spécialisées. [Link]
[22] : Futura-santé
[Link]

[23] : ARKRAY USA Diagnostic Clinique

[Link]

Page | 36