Filière SVI

Semestre 5
Module M32: Biologie Moléculaire

Pr Taha RHOUDA
Année universitaire: 2014/2015
Recommandations
 Plan
1- Introduction : Le Dogme Central
2- La réplication (Rappels)
3 - la transcription
3.1 – Introduction : particularités du génome eucaryote
3.2 – L’i itiatio de la t a sc iptio
3.3 – L’ lo gatio de la t a sc iptio
3.4 – Les modifications post-transcriptionnelles
4 - La traduction
4-1. L’appa eil de t aductio et so fo ctio e e t
4-2. Les étapes de la synthèse protéique
5- Les mutations et leurs conséquences
6- Régulation génétique chez les bactéries (opéron Isoleucine et
opéron lactose)
 Le dogme central

Le flu de l’i fo atio g ti ue

La réplication est une réaction rapide et la vitesse varie entre les
eucaryotes et les procaryotes:
- Chez les procaryotes (Ex: E. Coli ) le génome se réplique en 42 min
- Chez les eucaryotes (Ex: H. Sapiens) le génome se réplique en 8 heures

Réplication
Les nucléosomes représentent une barrière ralentissant la
polymérase
Réplication
Réplication
Un gène est une unité d'information ; une séquence d'acide
désoxyribonucléique (ADN) qui spécifie la synthèse régulée d'une
chaîne de polypeptides ou d'un acide ribonucléique (ARN)
fonctionnel.

Transcription
Gène # Unité de transcription

Transcription
P: région d’ADN qui possède des éléments de séquence nécessaires à
la mise en place du complexe d’i itiatio à la transcription

R: Régions impliquées dans le régulation de l’e p essio des gènes

Transcription
Chez les bactéries, le promoteur est constitué des régions consensus (TTGACAT) et
(TATAAT).
ce sont des motifs communs (consensus) comportant entre six et sept paires de
bases appelés respectivement séquence -10 (TATA) et -35.

Transcription
 Au niveau de ces consensus il y a des éléments invariants
mais on constante que si on modifie par mutations les
séquences consensus il y a altération de la transcription.

 La région entre les 2 boites -10 et -35 est importante car si on

modifie cette distance en réalisant des délétions il ’ a plus de
transcription. Cette distance permet de positionner
correctement le complexe d’i itiatio de la transcription.

 Certains promoteurs sont dits forts/faibles : les promoteurs

forts sont les séquences -10 et -35 qui sont proches du site +1 et
qui assurent l’i itiatio très efficace de la transcription ; les
promoteurs faibles ont une efficacité moins importante et on les
trouve généralement loin du site +1.

Transcription
Chez les eucaryotes, les facteurs
généraux de la transcription se
fixent sur le promoteur
situé en amont de la région
transcrite. Le complexe de pré-
initiation (PIC) est
constitué des facteurs généraux
sur lesquels se met en place
l’ARN polymérase.
Il y aura des contacts
protéine/protéine et
protéine/ADN. Les facteurs de
transcription sont des protéines
modulaires avec un domaine
d’activation DA et un domaine
de fixation à l’ADN DBD.
Transcription
 Type I: ARN ribosomique
5,8S
18S
28S

Type III:
Type II:
ARNt
hnRNA
ARNr 5S
snRNA
snRNA & scRNA

Transcription
Les règles de la transcription

Les ARN sont synthétisés par copie d’u

des 2 brins de l’UT et ce ’est pas
toujours le même brin qui est copié tout
au long de la molécule d’ADN.

Transcription
Les règles de la transcription

Transcription
Les règles de la transcription

Transcription
Transcription
Transcription
 3

1 2

Transcription
 Au lieu d'être reliés par une
liaison ester-phosphorique entre le
groupement OH porté par le
carbone 3' du ribose du nucléotide
à guanine et l'acide phosphorique
alpha du premier nucléotide de
l'ARN natif, les deux nucléotides
sont reliés par une liaison
anhydride d'acide entre les acides
phosphoriques des deux
nucléotides.
 Le cycle imidazole de la guanine
terminale est méthylé sur son
azote 7.
 Le ribose du premier nucléotide
de l'ARN natif est méthylé sur
l'oxygène porté par le carbone 2'.
Transcription
Si le nucléotide initial comprend une adénine celle-ci peut être
méthylée sur l’azote n°6. Transcription
Pour ajouter la coiffe, un
complexe multienzymatique
exerce trois activités :
1- L’h d ol se du phosphate
γ du nucléotide 5’ terminal
du transcrit primaire
2-Le transfert sur le
phosphate β restant d’u
guanylate à partir d’u GTP
3- la méthylation de ce
guanylate sur l’azote n°7.

Transcription
 Protection de l’e t it 5’ des ARNm contre l’actio
des Rnases

 Rôle au cours du transport des ARNm du noyau vers le

cytoplasme

Rôle important au cours de l’i itiatio de la traduction

Transcription
Transcription
 Protection de l’ARNm contre les dégradations en 3’

 Lo s u’elle sera le messager vieilli sera détruit

totalement pour être remplacé par un messager neuf: La
longueur du Poly A définit la durée de vie de l'ARNm

 Facilite le transport de l’ARNm vers le cytoplasme

Transcription
• La queue polyA est très importante pour les
biologistes moléculaire car elle est très utile pour
séparer des ARNm d'autres ARN grâce à des
colonnes d'oligo-dT (ou U) Sépharose et elle permet
aussi la synthèse d'ADNc en appariant un fragment
dT qui sert d'amorce à la reverse transcriptase
• Les histones!!!!!
Epissage

Transcription
 Les introns, parties non codantes des gènes des
eucaryotes, sont coupés (excision) de la structure
primaire des RNA au cours de la maturation des
messagers.
 Les exons, parties codantes, sont ensuite liés entre
eux bout à bout (épissage), pour établir la séquence
primaire du RNA messager.
Transcription
La snRNA U1 s'associe au site
Guanosyl-Uridyl à l'extrémité 5'
(5'GU) de l'intron,
La snRNA U2 se fixe sur le point de
branchement situé à une distance
de 20-40 nucléotides de la paire
AG qui forme l'extrémité 3' de
l'intron
Les snRNAs U4 et U6 s'associent
par un long appariement puis le
snRNA U5 se lie aux deux
précédents créant le
complexeU4/U5/U6. De plus U6 se
fixe sur U2 tandis que U5 va se
fixer sur l'extrémité 3' de l'exon à
proximité de U1 (le splicéosome
est alors au complet), rapprochant
les extrémités de l'intron à exciser.
Transcription
U1 est libéré, U5 glisse sur l'intron
et U6 se fixe à l'extrémité 5' du
site de clivage
U4 est libéré, U6 et U2 catalysent
la réaction de transestérification
et l'extrémité 5' de l'intron est
coupée. Se forme une structure en
boucle appelée lasso.
l'extrémité 3' de l'intron est
coupée, ce qui libère l'intron.
Ensuite, les exons sont liés. Enfin,
le complexe se dissocie.

Transcription
L'épissage alternatif est le processus qui permet à un
même gène de générer différents transcrits selon la
combinaison des exons qui formeront l'ARN messager
mature.
Transcription
1 : site d'épissage
alternatif 5'
2 : site d'épissage
alternatif 3'
3 : rétention
d'intron
4 : exclusion
mutuelle
d'introns
5 : exclusion /
inclusion d'exon

Transcription
un gène peut générer des protéines aux fonctions biologiques
différentes. Ex: le gène codant pour le récepteur aux oestrogènes
alpha. Par épissage alternatif, la protéine produite peut changer de
taille et de localisation dans la cellule; le récepteur dit canonique,
d’u poids moléculaire de 66 kiloDaltons (kDa), se trouve dans le
noyau où il active l’e p essio d’u grand nombre de gènes en
réponse à l’est og e. En revanche le récepteur de 36 kDa est
cytoplasmique, assurant ainsi les effets non génomiques de
l’ho o e estrogénique.

L’ pissage alte atif chez l’Ho e est u e gle, et o

pas une exception
Transcription
La majorité des gènes possèdent en moyenne une dizaine
d’e o s, les possibilités du saut ou d’i clusio des exons
alternatifs sont donc quasi-illimitées. Ainsi, chaque gène
peut produire potentiellement des dizaines, voire des
centaines de transcrits distinctifs. Un gène comme
DSCAM, impliqué dans l’adhésion cellulaire, peut produire
plus de 15.000 transcrits différents
L’ pissage alternatif, une source de diversité fonctionnelle
des produits des gènes Transcription
un même gène peut donner naissance à des protéines
aux fonctions opposées au sein d’u processus
physiologique. Par exemple, les différentes isoformes
générées par épissage alternatif du facteur de
croissance des cellules endothéliales vasculaires
(VEGF) sont capables de se lier à leur récepteur avec la
même affinité, mais elles ne l’active t pas
complètement de la même manière. Ainsi, l’isoforme
VEGF-165b inhibe les effets pro7 angiogéniques
(favorisant la formation de nouveaux vaisseaux
sanguins) médiés par l’isoforme VEGF-165.

Transcription
Parfois, la diversité fonctionnelle offerte par l’ pissage
alternatif peut affecter des processus biologiques
complètement différents.
Par exemple, les transcrits primaires du gène CALCA
produisent, par épissage alternatif dans la glande
thyroïdienne, la Calcitonine (CT), une hormone impliquée
dans le métabolisme du phosphore et du calcium. En
revanche, dans le système nerveux central, les transcrits
CALCA produisent un peptide nommé CGRP, un
vasodilatateur et médiateur de la douleur

Transcription
L’a cie dogme basé sur l’h poth se « un gène, une
protéine, une fonction » ’est plus concevable.
Aujou d’hui, un gène correspond à un ensemble de
fonctions souvent différentes et parfois opposées.
La fonction d’u « gène » ne peut donc être
réellement appréhendée u’e analysant la
fonction de chacun de ses variants d’ pissage.

Transcription
 Type I: ARN ribosomique
5,8S
18S
28S

Type III:
Type II:
ARNt
hnRNA
ARNr 5S
snRNA
snRNA & scRNA

Transcription
Transcription
Transcription
ADN

ARN pol I

Procaryotes
Pre ARNr
Ribonucléases spécifiques
CH3 CH3 CH3 CH3

CH3 CH3 CH3 CH3

ARNr mature
Eucaryotes
Pre ARNr
Ribonucléases spécifiques
CH3 CH3 CH3 CH3

CH3 CH3 CH3

ARNr mature
Transcription
Transcription
 Type I: ARN ribosomique
5,8S
18S
28S

Type III:
Type II:
ARNt
hnRNA
ARNr 5S
snRNA
snRNA & scRNA

Transcription
G e de l’ARNr 5S:
-ARNr 5S seul dans une petite UT
-UT répétée en tandem

Gènes des ARNt :

- Gènes répétés
- Certains sont interrompus par un intron

Transcription
Transcription
ARN pol III
Coupure

Exonucléase

Ajout de la CCA

Modification de certaines bases

Splicing

Transcription
Dihydrouridine

Pseudouridine

Inosine
Ribothymidine

Transcription
Transcription
Epissage

Transcription
Transcription