République Algérienne Démocratique et Populaire

Ministère de l'Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique

LA STERILISATION
Dr. Khelif. MS

Pharmacie Galénique – Cours de 3ème année Pharmacie

Plan du cours
INTRODUCTION
I. Définitions
II. Domaines d’application
III. Méthodes de stérilisation
IV. Procédé de Stérilisation par la chaleur
V. Procédé de stérilisation par les rayonnements
VI. Procédé de stérilisation par les antiseptiques gazeux
VII. Procédé de stérilisation par filtration
VIII. Conditionnement aseptique, enceintes stériles
CONCLUSION

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INTRODUCTION :
La stérilisation est une opération très importante en pharmacie puisqu’elle
constitue une qualité primordiale pour un bon nombre de produits
pharmaceutiques.
Elle fait l’objet d’un important développement dans les BPF au niveau de l’annexe
consacrée à la fabrication des médicaments stériles.
Stériliser est une nécessité pour éviter d’introduire des germes pathogènes ou non
dans l’organisme.

I. Définitions :
℘ La stérilisation : est une opération pharmaceutique faisant appel à un ensemble
de méthodes et de moyens visant à priver un médicament ou un objet
parfaitement nettoyé des micro-organismes vivants, de quelque nature et sous
quelque forme que ce soit.

℘ La stérilité : est un état éphémère défini par l’absence de micro-organismes

vivants.
Les procédés et les précautions à prendre doivent être tels qu’en fin
d’opération, la probabilité de trouver une unité non stérile soit inférieure à
10-6. C’est le « Niveau d’Assurance de stérilité (NAS) »

℘L’asepsie : ensemble de mesures propres à empêcher tout apport exogène de

micro-organismes.

℘Biocharge=Bioburden: Le nombre total de micro-organismes associés à un

élément spécifique tel que le personnel, les environnements de fabrication
(air et surfaces), l'équipement, l'emballage du produit, les matières premières
(y compris l'eau), les matériaux en cours de fabrication ou les produits finis

℘Nettoyage : Processus visant à éliminer la contamination, par exemple les

résidus de produits ou de désinfectants

℘Décontamination : Processus global d'élimination ou de réduction de tout

contaminant (produit chimique, déchet, résidu ou micro-organisme) d'une
zone, d'un objet ou d'une personne. La méthode de décontamination utilisée
(par exemple, nettoyage, désinfection, stérilisation) doit être choisie et
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 validée pour atteindre un niveau de propreté approprié à l'utilisation prévue
de l'objet décontaminé. Voir également Bio-décontamination.

℘Biodécontamination Un processus qui élimine la charge biologique viable par

l'utilisation d'agents chimiques sporicides.

℘Désinfection - Processus par lequel la réduction du nombre de micro-

organismes est obtenue par l'action irréversible d'un produit sur leur structure
ou leur métabolisme, à un niveau jugé approprié pour un objectif défini.

II. Domaines d’application :

En Pharmacie il est nécessaire de stériliser :
℘ Des médicaments : préparations injectables, collyres, produits destinés à être
appliqués sur certaines blessures et brûlures.
℘ Du matériel :
- utilisé lors d’opérations chirurgicales : instruments, lingerie opératoire
- à injection : seringues, aiguilles, cathéters, sondes
- fils à ligatures et objets de pansement
- tubes de recueil des prélèvements
- prothèses et les drains
℘ En voie entérale : la nourriture des immunodéprimés
℘ Enceintes et locaux

III. Méthodes de stérilisation :

Elles peuvent être classées en deux grands groupes :
℘ Pour les produits qui peuvent être stérilisés dans leur conditionnement
définitif :
- La stérilisation par la chaleur
- La stérilisation par irradiation
- La stérilisation par les antiseptiques gazeux

℘ Pour les produits qui ne peuvent pas être stérilisés dans leur
conditionnement définitif :
- La filtration stérilisante
- La préparation dans des conditions aseptiques

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 H2O2

IV. Procédé de Stérilisation par la chaleur :

1- Principe général : c’est une méthode physique correspondant à une
absorption de quanta d’énergie (photons) par les micro-organismes.

2- Facteurs intervenant dans la stérilisation par la chaleur :

La destruction des germes par la chaleur dépend d’un certain nombre de facteurs,
liés :
- aux micro-organismes eux-mêmes
- aux modalités de la stérilisation
- au milieu dans lequel s’effectue la stérilisation

℘ Facteurs liés aux micro-organismes eux-mêmes :

- L’espèce microbienne
- La forme : les spores sont plus résistantes que les formes végétatives.
- Le nombre de micro-organismes initialement présent :

Log N/N0 = -kt

N0 : nombre initial de germes
N : nombre de germes au temps t

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 ℘ Facteurs liés aux modalités de la stérilisation :

La température : en fonction de la T°, le temps

nécessaire à la destruction des spores d’une
espèce microbienne est représenté par la droite
suivante :

♣ Cycle de stérilisation : c’est la courbe de l’évolution de la température à l’intérieur des

récipients pendant la durée du traitement.

℘ Facteurs liés au milieu dans lequel s’effectue la stérilisation :

- Humidité : en milieu sec, les germes sont beaucoup plus difficiles à
détruire qu’en milieu humide.
- Principe actif : certains PA possèdent un pouvoir bactéricide qui ne se
manifeste qu’après élévation de température.
- pH : La destruction des microorganismes est plus aisée en milieu acide
ou alcalin.

3- Stérilisation à la chaleur sèche :

℘Principe : c’est une stérilisation à l’air chaud et à pression atmosphérique dans un

four Pasteur ou Poupinel muni d’un ventilateur assurant une homogénéité de T°.
℘ Mécanisme d’action : les micro-organismes sont détruits par oxydation grâce à
l’action de l’oxygène de l’air très chaud.
℘Température de stérilisation :
 Pour une stérilisation finale :
140°C 4H
160°C 2H minimum (Pharmacopée européenne)
170°C 1H
180°C 30min

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  +Pour une dépyrogénisation : elle doit être supérieure à 220°C.
℘ Intérêts : (applications)
- Matériel en métal ou en verre
- Dépyrogénisation des ampoules injectables
℘ Appareillage :
- Four Pasteur ou stérilisateur Poupinel (opérations discontinus)
- Fours tunnels (opérations continus)

℘ Avantages :
- Procédé très simple et efficace si contrôlé
- Seul procédé dépyrogénisant (Emballages primaires en verre)
℘ Inconvénients :
- Cycle long et coût énergétique élevé
- Problèmes de sécurité dus à la température élevée
- Problèmes d’homogénéité de la température (l’air mauvais conducteur
thermique)
- Tendance de certains matériaux à carboniser
- Aucune efficacité sur les ATNC (Agent Transmissible Non
Conventionnel) : le prion
- Appareils hospitaliers ne permettant pas un contrôle sérieux (pas
d’enregistrement)

4- Stérilisation à la chaleur humide :

℘ Principe : c’est une stérilisation à la vapeur d’eau chaude et à pression élevé,
réalisée dans un autoclave.
La vapeur d’eau joue un double rôle :
- Rôle d’apport d’énergie, d’où un temps de chauffage de la charge
raccourci
- Rôle d’apport d’eau qui permet l’hydrolyse.

℘ Mécanisme d’action : L’action conjuguée de la vapeur d’eau saturée sous

pression et de la chaleur provoque une augmentation de la perméabilité de
la membrane des spores entrainant la diffusion de la vapeur par osmose à
l’intérieur de la spore, provoquant la dénaturation des protéines
plasmatiques par hydrolyse.

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 ℘ Température de stérilisation : 121°C avec un excès de pression d’une
atmosphère et pendant 15min.
℘ Intérêts :
- S’applique à tout objet thermorésistant.
- A l’hôpital : - linge, pansements (134°C)
- instruments de chirurgie (134°C)
- objet en latex et caoutchouc (121°C)
- Industrie pharmaceutique : solutés médicamenteux de produits
thermorésistants (sérum glucosé, eau physiologique)
℘ Appareillage : Autoclave (simple ou industriel)

Enceinte classiquement cylindrique, en acier inoxydable munie

d’un couvercle. L’étanchéité est assurée par un joint en
caoutchouc. À l’intérieur se trouve un panier métallique perforé
dans lequel seront placés les objets et produits à stériliser, au-
dessus d’une petite quantité d’eau. Différents systèmes de
contrôle et de sécurité sont fixés sur le couvercle :
- un manomètre gradué en pression et en
température
- une soupape de sécurité pour éviter les surpressions
- un robinet d’évacuation de l’air ou de la vapeur.

Le chauffage est assuré électriquement ou avec de la vapeur surchauffée.

℘ Contrôle en cours de stérilisation :

- Paramètres physiques : T°, pression, et durée
- Indicateurs de passage : tubes témoins ou rubans adhésifs indiquant
le passage à une température donnée par changement de coloration.
- Test d’étanchéité
- Essai de distribution de la chaleur, essais microbiologiques, ...
℘ Avantages :
- Procédé le plus fiable, le plus rapide et le plus efficace même sur des
ATNC
- Paramètres réduits et maîtrisables : température, pression et temps
- Libération paramétrique de la charge ;
- Utilisation d’un produit non toxique : l’eau ;
- Procédé peu coûteux par rapport aux autres.
℘ Inconvénients :
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 - Limitée aux objets thermorésistants et hydrorésistants ;
- Utilise un appareil sous pression
- Nécessite une maintenance rigoureuse

V. Procédé de stérilisation par les rayonnements :

1- Rayons ultraviolets :
- Entre 2000 et 3000 Ǻ, ils sont microbicides mais ne traversent que l’eau pure.
- En dessous de 2000 Ǻ, leur action microbicide devient considérable mais ils
sont arrêtés par une mince couche d’eau.

℘ Intérêt : stérilisation de l’atmosphère des enceintes stériles et pour le

maintien de la stérilité de l’eau distillée dans des cuves de stockage.
℘ Inconvénients :

-Non appliqués aux préparations en ampoules et flacons, (UV arrêtés par le verre)
-Dangereux : obligation de porter des lunettes de protection

2- Les rayonnements ionisants :

Cette radio-stérilisation est obtenue :
- soit par des radioéléments, type Cobalt 60, qui émet des photons gamma, très
bactéricides et très pénétrants,
- Soit par des accélérateurs d’électrons qui émettent un rayonnement bêta
moins pénétrant.
℘ Applications :
Ce type de procédé est applicable pour le matériel à usage unique : matériel
médicochirurgical ; seringue, aiguilles, sondes et article de pansement et de
suture. La stérilisation est effectuée dans l’emballage définitif.

℘ Avantages :
- permet la stérilisation des objets thermosensibles, température ambiante
- pas de radioactivité induite
- stérilisation courte et économique (paramètres aisément mesurés)

℘ Inconvénients :
- Peuvent modifier la coloration (verre) et la structure des produits soumis à
leur action (matières plastiques)
- Pas d’installation hospitalière ; coût de l’installation très élevée

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 VI. Procédé de stérilisation par les antiseptiques gazeux :
C’est des techniques de stérilisation à basse température, efficaces, faciles à
mettre en œuvre et valables autant pour le matériel médicochirurgical
thermosensible que pour les locaux.
Il n’existe pas de gaz stérilisant idéal qui ait une activité intense et rapide contre
les micro-organismes et qui ne soit dépourvu de toxicité pour l’homme.
Quatres gaz sont actuellement utilisés mais leurs emplois est limité par
leur toxicité.
Le formol et l’oxyde d’éthylène qui agissent par alkylation
L’acide peracétique et le peroxyde d’hydrogène qui agissent par oxydation
1- Le formol :
- Très efficace en milieu humide mais assez réactif, et n’est utilisé que pour la
stérilisation du matériel et des enceintes stériles.
- Il faut compter 1 à 3 g/m3 en atmosphère très humide et laisser en contact
plusieurs heures, toute une nuit par exemple, puis l’éliminer par ventilation
avec de l’air stérile car il est irritant et toxique pour le personnel.
- Gaz peu pénétrant donc uniquement un désinfectant de surface.
- Des précautions particulières doivent être prises (effets cancérigènes).

2- L’oxyde d’éthylène :
- Utilisé pour le matériel médico-chirurgical qui ne supporte pas la stérilisation
à l’autoclave (PVC, polyéthylène, certains caoutchoucs…)
- Comme les rayonnements ionisants, il présente l’avantage de pouvoir être
utilisé pour des articles placés dans leur emballage définitif.
- Intérêt principal : peut être employé dans les établissements pharmaceutiques
et dans les hôpitaux.
- Malheureusement, la manipulation de ce gaz n’est pas sans danger et ne peut
être effectuée que par un personnel entraîné et expérimenté.
- L’oxyde d’éthylène agit sur les micro-organismes par alkylation des acides
nucléiques des cellules.

3- L’acide péracétique :
- Agent d’oxydation très puissant. Son efficacité est due à la libération
d’oxygène sous forme atomique.
- Très peu pénétrant mais son action stérilisante est plus puissante que le
formol
- Utilisation adaptée à la stérilisation des « bulles » ou isolateurs utilisés pour
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 les fabrications stériles.
- Provoque la corrosion des métaux. Tout le matériel doit être en verre ou en
matière plastique.

4- Le peroxyde d’hydrogène :
- Agent stérilisant : H2O2 à 59% ou H2O2 à 94%
- Pouvoir stérilisant diminue avec humidité, cellulose, cuivre
- Cycle court, Ne nécessite pas d’aération, pas de résidus toxiques !
- Actif sur prions(ATNC)
- Utilisation d’Emballages spécifiques (sans cellulose)
- Echec avec Dispositifs Médicaux (DM) humides

VII. Procédé de stérilisation par filtration :

1- Principe : C’est l’un des deux procédés ne permettant pas de stériliser dans
l’emballage définitif et le seul procédé qui élimine les microorganismes au
lieu de les détruire.

2- Mécanisme d’action :

Ce procédé est basé sur la rétention des micro-organismes et particules par un

réseau filtrant. Cette rétention se fait par l’un des deux mécanismes suivants ou
par la combinaison des deux :

 Le criblage : phénomène mécanique, le filtre retient toutes les particules

dont le diamètre est supérieur au diamètre des pores. On parle de filtre écran
ou de filtre membrane.
 L’adsorption (ou filtration en profondeur) : phénomène physique, ce
mécanisme consiste à retenir à l'intérieur du réseau poreux du filtre des
particules dont la taille peut être inférieure au diamètre des pores.
Selon la taille des particules à retenir, on parle de :
- Filtration : lorsque la taille des particules est > 10 μm
- Microfiltration : lorsque la taille des particules est comprise entre 0,02 μm
et 10 μm
- Ultrafiltration : lorsque la taille des particules est < 0,02 μm

3- Intérêt : Ce mode de stérilisation est applicable aux fluides :

• liquides monophasiques (solution ne supportent pas un traitement
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 stérilisant final par l’un des autres procédés en raison de leur sensibilité à
la chaleur, l’eau, aux gaz ou aux radiations ionisantes). C’est à dire que ce
procédé ne peut être appliqué ni aux suspensions ni aux émulsions.
• gaz :
- L’air fourni dans les salles blanches, spécialement les zones de production
aseptique
- L’azote sous pression utilisé lors du conditionnement de Produits sensibles
à l’oxygène ou comme pousseur en nutrition parentérale.
4 -Avantages :
• Permet la stérilisation des fluides thermosensibles
• Prévient le passage des particules vivantes et non vivantes et ainsi peut
servir également à la clarification des liquides ou des gaz.

5 - Inconvénients :
• Elimine les corps des micro-organismes susceptibles d’entrainer des
réactions pyrogènes, mis pas les substances pyrogène elles-mêmes déjà
libérées dans le milieu ;
• N'est pas utilisable pour les solutions visqueuses, les suspensions et les
émulsions.

VIII. Conditionnement aseptique, enceintes stériles :

Les produits qui ne peuvent pas être stérilisés dans leur conditionnement définitif
nécessitent des précautions particulières de fabrication. Ils sont préparés dans des
enceintes où règne une asepsie aussi rigoureuse que possible. Ces enceintes font
partie des « zones d’atmosphère contrôlée » des BPF.

℘ Filtration stérilisante de l’air :

L’élimination des micro-organismes en suspension dans l’air se fait
essentiellement par filtration à l’aide de filtres stérilisants (en papier, cellulose,
membrane de cellulose, ...) précédés de préfiltres qui assurent le dépoussiérage.
Par mesure de sécurité supplémentaire, des tubes à UV germicides peuvent être
placés dans les gaines d’entrée d’air après les filtres stérilisants.

Avec les enceintes à flux d’air laminaire, l’emploi des filtres dits
« absolus » ou « HEPA » (haute efficacité pour les particules de
l’air) s’est répandu. Ce sont généralement des filtres de fibres de
verre en plaques pliées en accordéon pour augmenter leur surface
et maintenues dans des cadres de bois ou de métal.
11
 ℘ Enceintes stériles : Filtre « HEPA »

On peut distinguer les enceintes classiques et les enceintes à flux d’air laminaire :
1- Enceintes stériles classiques
- les mouvements de l’air sont difficilement contrôlés.
- On y distingue : les isolateurs (clos et manipulateur à l’extérieur) et les salles
ou blocs stériles (manipulateur à l’intérieur).

Bulle ou isolateur

2- Enceintes stériles à flux d’air laminaire :

- Enceintes traversées par un flux d’air qui se déplace à une vitesse uniforme
le long de lignes parallèles avec le minimum de tourbillons.
- Salles blanches stériles. Elles sont de trois types :
• Enceintes à flux vertical : L’air arrive par le plafond constitué par des
filtres HEPA et s’en va à travers le sol constitué d’un grillage.
• Enceintes à flux horizontal : L’air va de « mur à mur
•Les enceintes mixtes : De mur à sol ou de plafond à mur
- Hottes ou postes de travail blancs stériles : de taille réduite et réservés à
des opérations nécessitant des appareils peu encombrants.

℘ Classification des zones d’atmosphère contrôlée :

Aux fins de la fabrication de médicaments stériles, quatre classes de zones
d’atmosphère contrôlée sont définies par les BPF et les BPP :

- Classe A (ISO 5) : les points où sont réalisées des opérations à haut risque (le
point de remplissage, les emplacements des bols vibrants de bouchons, les
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 ampoules et flacons ouverts ou les points de raccordements aseptiques). Les
postes de travail sous flux d’air laminaire satisfont normalement aux conditions
requises pour ce type d’opérations.
- Classe B : dans le cas d’opérations de préparation et de remplissage aseptiques,
environnement immédiat d’une zone de travail de classe A

- Classes C (ISO 7) et D (ISO8) : zones à atmosphère contrôlée destinées aux

étapes moins critiques de la fabrication des médicaments stériles.

IX. Contrôles de la stérilisation :

-Contrôles des paramètres physiques (monitoring mécanique) :

Pression, température, humidité, durée du cycle……
-Indicateur chimiques (IC)
sont utilisés pour évaluer si les conditions opératoires ex la température requis ont été
atteints au cours du processus de stérilisation.
Un type d'IC affiche un changement de couleur s’il a été exposé à la chaleur.
Bien que les IC ne soient pas censés indiquer qu'un produit a été stérilisé, ils peuvent aider
à détecter les défaillances et identifier les erreurs de procédure.
-Indicateur biologique(IB)
Une population de micro-organismes inoculés sur un milieu approprié et placés dans un
stérilisateur pour déterminer l'efficacité du cycle de stérilisation, Le micro-organisme de
provocation est sélectionné et validé en fonction de sa résistance au processus donné.
Voir 5.1.2 pharmacopée européenne 11e :
Geobacillus stearothermophilus et Bacillus subtilis pour la chaleur humide
Bacillus atrophaeus pour la chaleur sèche et OE
Bacillus pumilus pour les radiations ionisantes (non obligatoires)
Brevundimonas diminuta ou Acholeplasma laidlawii pour la filtration stérilisante

-Contrôles de stérilité:
Il doit être réalisé dans des conditions étudiées pour éliminer tout risque de contamination
accidentelle du produit ou du milieu du culture au cours d’essai (hotte à flux d’air
laminaire).
 Germes aérobies et des bactéries anaérobies : milieu thioglycolate – résazurine
(30-35°C )
 Bactéries aérobies et des champignons : milieu à l’hydrolysat de caséine et de
soja (milieu de Sabouraud) (20-25°C)
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 • Méthode par filtration sur membrane ou ensemencement direct , incubation de
7 à 14 jours.

Conclusion
Avant d’aborder une méthode de stérilisation, il faut prouver qu’elle convient au
produit et s’orienter vers les moyens qui permettent la stérilisation à l’intérieur du
conditionnement étanche définitif.
Lorsqu’elle est réalisable, la stérilisation par la chaleur est la méthode de choix.
Chaque procédé de stérilisation doit être validé.

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