UNIVERSITE HASSAN II - MOHAMMEDIA
LST ABIOCQ
Faculté des Sciences et Techniques PR. HAMID LAKHIARI
ANNEE UNIVERSITAIRE
2020-2021
TRAVAUX DIRIGES DE BIOLOGIE MOLECULAIRE
Exercice 1 :
Ecrire la structure chimique développée du tétranucléotide suivant : ApGpUpCp
- Préciser les extrémités 3’ et 5’
- Préciser les bases puriques et pyrimidiques de ce tétranucléotide
- S’agit-il d’un fragment d’ADN ou d’ARN ?
NB : Ne pas écrire la structure chimique des bases azotées, écrire juste le nom.
Exercice 2 :
Parmi les composés suivants, associer ceux qui ont la même structure : guanosine monophosphate ;
acide désoxyguanylique ; dGDP ; GTP ; désoxyguanosine monophosphate ; GMP ; guanosine
triphosphate ; dGMP ; désoxyguanosine diphosphate.
Exercice 3 :
Un homogénat tissulaire contient principalement des noyaux, des mitochondries et des ribosomes.
Une technique d’ultracentrifugation sur gradient de saccharose a permis de séparer ces différents
organites subcellulaires.
A partir du noyau ainsi séparé, on extrait l’ADN. La masse de cet ADN natif a été évaluée à 9.10 11.
Dans un brin d’ADN hélicoïdal, la distance entre les plans de 2 bases contiguës est de 0,34nm et le
poids moléculaire moyen est de 300. Après hydrolyse totale de cet ADN et dosages des bases
puriques, le rapport molaire (Adénine/Guanine) est de 1,5.
1. Combien de paire de nucléotides contient cet ADN ?
2. Quelle est la longueur de la molécule si cet ADN est sous forme hélicoïdale non compliquée
en superhélice ?
3. Quel est le rapport molaire (Adénine/Thymine) ?
4. Quel est le rapport molaire (Adénine + Thymine)/ (Guanine + Cytosine) ?
5. Lequel de ces deux rapports pourra nous aider à caractériser l’espèce ?
6. Calculer le nombre de chacun des quatre nucléotides de cet ADN
7. Le point de fusion de cet ADN est de 60°C. On le compare au point de fusion d’un autre ADN
dont le rapport (Adénine/Guanine) est de 0,8.
Faites une conclusion
Exercice 4:
L’ADN humain a une température de fusion (Tm) de 98°C et une densité de 1,732. L’ADN du germe
de blé a une Tm de 103°C et une densité de 1,74.
On chauffe un mélange des ADN à 110°C et on refroidit lentement
1. Définir la température de fusion ?
2. Qu’observe-t-on lorsqu’on analyse le mélange obtenu par centrifugation en chlorure de
césium ?
1
3. Quel intérêt présente cette expérience ?
Exercice 5 :
1. Décrire le mécanisme d’initiation de la réplication d’ADN
2. Décrire les mécanismes de réparation de l’ADN
3. Comment s’effectue l’élongation et la terminaison de la transcription chez les procaryotes ?
Exercice 6 :
Un brin isolé (+) d'ADN (composition en bases: 10% de A, 20% de G, 30% de C et 40% de T) est
répliqué par la ADN polymérase de E. coli en un brin complémentaire (-). L'ADN bicaténaire sert
ensuite de modèle à la ARN polymérase de E. coli qui transcrit le brin (-).
Indiquez la composition en bases (en % de A, C, G et T/U) du brin formé.
Exercice 7 :
Un échantillon d’ADN bactérien purifié, en solution dans NaCl 0,2 mol/L est porté à différentes
températures. On mesure l’évolution de l’absorbance à 260 nm en fonction de la température en
°C. Les résultats expérimentaux obtenus sont présentés dans le tableau ci-dessous :
en °C 68 78 81 82 83 84 85 86 88 93 98
A260 nm 0.365 0.376 0.400 0.416 0.452 0.520 0.536 0.548 0.568 0.582 0.600
1. Tracer la courbe A260 = f() et déterminer la température de fusion Tm de cet ADN.
2. Commenter l’aspect de la courbe et expliquer le phénomène observé
3. Quelle serait l’allure de la courbe si un ADN simple brin était soumis à la même expérience ?
4. Préciser sous quelle(s) forme(s) se trouve cet ADN aux températures suivantes : Tm, Tm-5°C
et Tm+5°C.
5. Comment se comportent les régions riches en A+T lors de la dénaturation thermique par
rapport aux régions riches en G+C ?
6. En déduire le pourcentage de G+C, sachant que dans les conditions standard réactionnel, Tm
est donnée par la relation suivante : Tm= 69.3 + 0.41 x (% G+C).
Exercice 8 :
Soit la séquence d'ADN bactérienne suivante:
5'- ATTTACGGGCCTTAATGGCATAACCGCCTAATGGTTAACCGCTAGCGCG -3'
1. Donner la séquence de l'ADN double brin correspondant.
2. A quelle condition cet ADN double brin serait
3. Donner la séquence du transcrit éventuelle.
Exercice 9 :
Ci-joint une représentation schématique de la structure d’un gène isolé de plantes.
1. Définir la nature de l’élément en amont du 1er exon
2. Représenter sur le schéma la position du codon d’initiation ATG et du codon stop
3. Donner les bordures probables de l`un des trois introns
4. Schématiser la structure du pré-ARNm et de l’ARNm mature formés à partir de ce gène en
décrivant brièvement les étapes de maturation.
5. Quel est l’intérêt de modifier les deux extrémités du transcrit d’ARN avant sa sortie vers le
cytoplasme ?
6. Une mutation occure au niveau du site d’épissage situé au début de l’intron 2 le rendant
inconnu par la machinerie d’épissage. Donner la structure de l’ARNm qui dérive de ce gène.
Exercice 10:
2
Le plasmide pBR322 possède un site unique de restriction pour EcoRI. Le plasmide est schématisé
ci-dessus :
On réalise successivement sur le plasmide les manipulations suivantes :
- Traitement par EcoRI
- Incubation avec la polymérase I en présence de dATP et de dTTP
- Incubation avec la ligase T4 en présence d’ATP
1. Schématiser les réactions enzymatiques et conclure
2. Quel serait le produit obtenu si le site de restriction était orienté comme suit :
Donnée : site de coupure d’EcoRI : G↑AATTC
Exercice 11 :
On propose d’établir la carte de restriction d’un plasmide circulaire double brin avec les enzymes
Pst I et EcoR V
1. Quelle est la propriété principale des sites de reconnaissance des enzymes de restriction ?
2. Schématiser les réactions catalysées par les enzymes Pst I et EcoR V. Comment nomme-t-on
les extrémités obtenues ?
3. Quelle est la probabilité théorique de trouver un site de coupure de l’ADN par Pst I et EcoR
V en supposant que la composition et la répartition des bases soient aléatoires ? Quelle serait
la taille des fragments ainsi générés ?
4. La digestion du plasmide par Pst I et EcoR V donne les résultats suivants :
Enzymes utilisées Tailles des fragments en kpb
EcoR V 4.2 3.4
Pst I 3.6 2.7 1.3
Pst I et EcoR V 2.2 2 1.4 1.3 0.7
Etablir la carte de restriction de ce plasmide sachant que les sites de restriction pour Pst I et
EcoR V sont respectivement les suivants :
- Pst I : CTGCA↑G
- EcoR V : GAT↑ATC
