Biocapteur
Présenté par: Dr. HAFID Abdelakram
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Biocapteurs
Un biocapteur est un appareil d'analyse utilisé pour déterminer
la présence et la concentration d'une substance spécifique dans
un analyte biologique.
2 Récepteur biologique
1 composé à analyser 5 Processeur
4 Transduction 2
3 Méthode d’immobilisation
Type de surface
Biocapteurs
1. La molécule d'analyte (Que voulez-vous détecter)
- Protéines, toxines, peptides, vitamines, sucres, ions métalliques
2. Manipulation des échantillons (Comment délivrer l'analyte dans la région
sensible?)
- Augmentation / diminution de la concentration, Filtration / sélection
Desired molecule
Signal
Biorecepteur Transducteur
Processing
Bio-échantillon Display
Biocapteur 3
Recognition Transduction Signal Processing
Exemple
Infectious disease biosensor
from RBS
Glucose
Pregnancy test
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Caractéristiques de
base d'un biocapteur
1. LINÉARITÉ La linéarité du capteur doit être élevée pour
permettre la détection d'une concentration élevée de
substrat.
2. SENSIBILITÉ Valeur de la réponse de l'électrode par
concentration de substrat.
3. SÉLECTIVITÉ Les produits chimiques, les interférences
doivent être minimisées pour obtenir le résultat correct.
4. TEMPS DE RÉPONSE Temps nécessaire pour obtenir
95% de la réponse.
Biocapteurs
Biorecepteur Transducteur
Absorption
Antibody Fluorescence
Interference
Optical
potentiometric
Enzyme Electrochemical amperometric
conductimetric
Nucleic Acid (DNA) Mass based
Cell Temperature based
Dielectric properties
Electric & Permeability properties
MIP 6
Magnetic Voltage or Current
LES RECEPTEURS BIOLOGIQUES
BIORECEPTOR
Récepteur biocatalytique
- enzyme (mono or multi enzyme)
- cellules entières (bacterie, champignon,
levure,cellule eukaryote)
- organites (mitochondrie, membrane cellulaire)
- tissu (plant or animal tissue slice)
Récepteur d’affinité
- reaction anticorps-antigène
- fragment d’ADN
- tissu animal ou végétal
Membranes biomimétiques
Biorecepteurs
➢ Enzyme
Enzyme est une grosse molécule de protéine qui joue le
rôle de catalyseur dans les réactions chimiques.
Les enzymes sont souvent choisies comme biorécepteurs
en fonction de leurs capacités de liaison spécifiques ainsi
que de leur activité catalytique
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Biorecepteurs
Bioreceptor
Display
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Biorecepteurs
➢ Enzyme
Catalysent les réactions : Amplification
du signal
Enzymes REDOX s (reductases, oxidases, oxydo-réductases).
Electrons produits/consommés.
Transducteur ampéromètrique.
Enzymes hydrolytiques (proteases, lipases, esterases).
Protons produits/consommés.
Transducteurs potentiomètrique ou conductimètrique.
Réactions enzymatiques couplées : avec la peroxidase, la
luciferase donne une réaction colorée ou emet des photons
photons.
Transducteurs optiques.
Biorecepteurs
➢Cellule vivante
Nourriture
Produit
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Biorecepteurs
Bioreceptor
Display
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Biorecepteurs
➢ ANTICORPS Les ANTICORPS sont des molécules
biologiques qui présentent des capacités de
liaison très spécifiques pour des structures
spécifiques (antigènes).
membrane
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➢Antigène Il peut être reconnu par un anticorps.
Biorecepteurs
Bioreceptor
Display
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Biorecepteurs
ANTICORPS
Très sélectifs et interactions très fortes
sites de fixation de l’antigène
Désavantage:
pas d’effet catalytique , nécessité de
marquage (souvent fluorescent) de
l’anticorps ou de l’antigène pour des
transducteurs optiques
Chaîne
légère
Chaîne
lourde
Transducteur piezo electric :
modification de la fréquence de
vibration du quartz lors de la réaction
antigène -anticorps
Biorecepteurs
➢Structure de l'ADN
Un autre mécanisme de bio-reconnaissance
implique l’hybridation de l’acide
désoxyribonucléique (ADN) ou de l’acide
ribonucléique (ARN), qui sont les éléments
constitutifs de la génétique et peuvent être
synthesisés au laboratoire.
Il est utilise pour le diagnostic basés sur
l’ADN et L’ARN dans le format chip
utilisé pour la détection des modifications
génétiques ou expression des proteins.
L’hybridation peut être controlée
facilement à l’aide de la température.
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Quatre bases chimiques:
L’hybridation peut être analysée • adenine(A), guanine (G),
optiquement. • cytosine (C), et thymine (T)
Biorecepteurs
Principes des biocapteurs à ADN
Hybridation d'acide nucléique
(Séquence cible)
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ssDNA (Probe) (Hybridization) (Stable dsDNA)
Biorecepteurs
Bioreceptor
Display
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Biorecepteurs
➢MIP (polymère à empreinte moléculaire)
L’élaboration des MIPs consiste à créer un matériau polymérique qui
contient les empreintes d’une molécule d’intérêt . Ces matériaux sont
obtenus par impression ou moulage à l’échelle moléculaire. En d’autres
termes, ils sont obtenus par polymérisation de monomères autour
d’une molécule patron en présence d’un agent de réticulation et d’un
amorceur de polymérisation.
Après l’élimination de la molécule patron, on obtient un polymère
poreux contenant ses empreintes, à savoir des cavités possédant des
sites de reconnaissance spécifique de cette molécule (fi gure 1B). Ces
cavités se révèlent donc complémentaires au niveau spatial et
fonctionnel de la molécule patron et le matériau produit est doté de
propriétés de reconnaissance moléculaire. 19
Biorecepteurs
➢MIP (polymère à empreinte moléculaire)
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Biorecepteurs
MIP en tant que biorécepteur
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conductimetric
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Transducteurs - Méthodes électrochimiques
Le principe sous-jacent de cette classe de biocapteurs est
que de nombreuses réactions chimiques produisent ou
consomment des ions ou des électrons, ce qui à son tour
modifie quelque peu le fonctionnement électrique.
Les propriétés de la solution pouvant être détectées ainsi et
etre utilisées comme paramètre de mesure
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Transducteurs - Méthodes électrochimiques
Potentiométrique:
Mesure du potential, la valeur du potential est reliée à la concentration en ion
(échelle logarihmique)
Utilisé principalement pour quantifier des inorganiques incluant H+.
Dans les biocapteurs utilisant les réactions enzymatiques qui induisent un
changement de pH : penicillinase, urease, esterase.
Nécessite une électrode de référence(H, AgCl)
V Electrode de travail
Echantillon
Pont salin
Electrode de Enzyme souvent immobilisée
référence à la surface de l’électrode
Transducteurs - Méthodes électrochimiques
Ampérométrique:
Un potentiel est appliqué entre une électrode de référence et une
électrode de travail
Un potentiel est mesuré en continu dans la cellule
Quand le potentiel d’oxydation d’un composé est atteint, il est oxydé et
produit des électrons qui servent à mesurer un courant
Le courant est proportionnel à la concentration du composé oxydé
Les principales réactions concernent le enzymes REDOX
. Glucose oxidase, cholesterol oxidase, etc.
Transducteurs - Méthodes électrochimiques -
Ampérométrique
biocapteurs de glucose ampérométriques 26
Transducers-Electrochemical methods-amperometric
Biocapteurs de glucose ampérométriques
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Avantages des transducteurs électrochimiques
Avantages:
Faciles à utiliser
Interface directe avec le potentiostat
Possibilité de miniaturiser (temps de réponse plus court)
Désavantages:
Sélectivité faible, souvent il est nécessaire d’employer des médiateurs
Ne peut fonctionner qu’avec des réctions biologiques avec transfert
d’électronique
Transducteurs - méthodes optiques
capturer l'analyte et détecter la liaison par une
étiquette optique ou un phénomène optique sensible à
la liaison
Absorption
I1/I0 = e−αlc
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l est la longueur du passage
C est la concentration de matériau absorbant
α est le coefficient d'absorption
Transducteurs - Méthodes optiques - Absorption
Dispositif permettant de déterminer la teneur en oxygène du sang d’un patient:
«l’oxymètre»
Les spectres d'absorption (α) de l'hémoglobine (Hb) et de l'oxyhémoglobine (HbO2) 30
diffèrent, ce qui permet de mesurer le rapport des deux concentrations dans le sang en
mesurant l'absorption de la lumière de deux longueurs d'onde différentes, par exemple.
660 nm et 805 nm.
Transducteurs - Méthodes optiques - Florescence
La fluorescence est une absorption
moléculaire de la lumière à une longueur
d'onde et son émission instantanée à des
longueurs d'onde plus grandes. Certaines
molécules produisent une fluorescence
naturelle et d'autres, comme l'ADN,
peuvent être modifiées pour la détection de
la fluorescence par fixation de colorants
fluorescents spéciaux.
Un système optique pour
la mesure de la
fluorescence
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Surface Plasmon Resonance (SPR)
Avantages des transducteurs optiques
Avantages:
• Facile à utiliser
• Peut répondre simultanément à plusieurs réactants
• Très précis, spécialement quand plusieurs longueurs d’ondes peuvent
être utilisées
• Possibillité d’utiliser des fibres optiques pour un transport efficace des
photons
• Très grande sensibilité (bio-luminiscence, SPR))
Désavantages:
• Dépend de la possibilité des réctifs
• Domaine dynamique restreint
• Difficile à miniaturiser
• Réponse peut être lente
Méthodes transducteurs-température
Ce type de biocapteur exploite l'une des propriétés
fondamentales des réactions biologiques, à savoir
l'absorption ou la production de chaleur, ce qui modifie à son
tour la température du milieu dans lequel la réaction a lieu.
Ils sont construits en combinant des molécules d'enzyme
immobilisées avec des capteurs de température .
Lorsque l'analyte entre en contact avec l'enzyme, la réaction
thermique de l'enzyme est mesurée et est étalonnée par
rapport à la concentration en analyte. La chaleur totale
produite ou absorbée est proportionnelle à l'enthalpie
molaire et au nombre total de molécules dans la réaction
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Tranducteurs piezo-electrique
anticorps
La fréquence d’oscillation (f) du
crystal piézo electrique cristal dépend de la masse (m) du
cristal et de tout matériau adsorbé
sur sa surface (A).
antigène
La fréqence d’oscillation décroît
en fonction de la masse déposée
selon l’équation de Sauerbrey:
Δf = -2.3 x 106 f2Δm/A
Matériaux piézo electrique :
Quartz (SiO2 crystals), céramiques, polyméres organiques.
Avantages des transducteurs piézo-électriques
Avantages:
• Très sensibles : peuvent détecter environ un picogram .
• Détection des antigènes en phase gaz aussi bien qu’en phase liquide.
• Portable, Les tests immunologiques peuvent être réalisés partout.
• Temps de réponse rapide.
• Pas besoin de marquer les composés (Tags).
Désavantages:
• Adsorption non spécifique sur la surface peut fausser les résultats
Méthodes transducteurs-électriques
Capteur capacitif par
Diélectrique MIP
Variation de
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Méthodes transducteurs-électriques
F = 20KHz, amplitude alternative de 40 mV
crête à crête
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Méthodes basées sur les transducteurs et la masse
Le principe est de changer la fréquence de l'élément
vibrant. lorsque la masse augmente en raison de la
liaison de produits chimiques, la fréquence
d'oscillation du dispositif change et le changement
résultant peut être mesuré électriquement et utilisé
p o u r d ét e r mi n e r l a ma s s e s u p p l é me n t a ir e .
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Méthodes basées sur les transducteurs et la masse
Détection par cantilevers
Force 40
Méthodes basées sur les transducteurs et la masse
Détection par cantilevers
(a) Un résonateur mécanique en porte-à-faux
contenant un canal microfluidique incorporé.
(b) Diminution de la fréquence de résonance
lorsque la densité dans le canal intégré
augmente.
c) Modulation de fréquence par mouvement
d'une seule particule
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Méthodes basées sur les transducteurs et la masse
Détection par cantilevers
Technologie Microcantilever: a) avec protéine
immobilisée pour une bactérie spécifique b) flexion
après adsorption de la bactérie sur la protéine
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Application des biocapteur
❖ Analyse des aliments
❖Etude des biomolécules et de leurs interactions
❖Développement de médicaments
❖Utilisation contre la criminalité
❖Diagnostic médical (utilisation clinique
et en laboratoire)
❖Surveillance environnementale de terrain
❖Contrôle de qualité
❖Contrôle de processus industriel
❖Systèmes de détection d'agents de guerre
biologiques
❖Fabrication de produits pharmaceutiques
et d'organes de remplacement
