République du Bénin

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MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA

RECHERCHE SCIENTIFIQUE

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UNIVERSITE D’ABOMEY CALAVI (UAC)

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ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY CALAVI

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DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE

Option : Analyses Biomédicales (ABM)

Année : 3eme Année de licence

RAPPORT DE FIN DE STAGE ACADÉMIQUE

Période : du 10 Juin au 10 Septembre 2024

Lieu : Laboratoire privée d’analyses biomédicales « Toxi Labo »

Réalisé par : Sous la direction du :

DJINADOU Rydwan-lahi kewuyemi Professeur Idrissou ABDOULAYE
Pharmacien Biologiste et Directeur
de TOXI-LABO

Année Académique : 2023-2024

16ème Promotion
 Table des Matières

1- Introduction
2- Objectifs fixés
3- Présentation du Laboratoire
- Présentation
- Description du laboratoire
- Fonctionnement du laboratoire et déroulement du stage
- Secteurs d'activités
- Salle de prélèvement
- Section de Sérologie
- Section de Biochimie
- Section d'Hématologie et hémostase
- Section d’Immunologie et Vidas
- Section de Parasitologie
- Section de Bactériologie
4- Difficultés et suggestions
5- Conclusion
 1 - INTRODUCTION

En médecine, les analyses biologiques occupent une place majeure car par ses
résultats, elles permettent aux cliniciens de parvenir à un traitement adéquat
pour le sujet souffrant. Dans le cadre de l'approfondissement de mes
connaissances en Analyses biomédicales, j’ai effectué un stage académique de
trois mois dans le laboratoire de TOXI-LABO du 10 Juin au 10 Septembre
2024, pour mieux et bien acquérir des aptitudes et méthodologies afin d’associer
la théorie qu’on nous a enseigné à la pratique. En effet, cette expérience s'inscrit
dans le cadre de ma formation à l'École Polytechnique d'Abomey-Calavi
(EPAC) et est essentielle pour la validation de mon diplôme.

2- OBJECTIFS FIXÉS

- Découvrir le milieu professionnel, ses composantes et ses exigences ;

- Comprendre le fonctionnement d'un laboratoire d'analyses biomédicales ;
- Comprendre les protocoles et procédures d'analyses des examens
hématologiques, parasitologiques, biochimiques, sérologiques et
bactériologiques ;
- Participer aux différentes étapes de réalisation des examens de biologie
médicale et savoir les réaliser en vue d'aider à poser un bon diagnostic ;
- Être capable de réaliser des examens en fonction des protocoles en
vigueur au laboratoire ;
- Avoir la capacité de cerner une quelconque difficulté au laboratoire.
 3- Présentation du Laboratoire

Présentation

Le laboratoire privé d’analyses biomédicales « Toxi-Labo » est situé dans le

septième arrondissement de Cotonou, au quartier Maro Militaire, rue 204. Fondé
par feu Docteur Falilou ADEBO, pharmacien toxicologue, il est actuellement
dirigé par le Professeur ABDOULAYE Idrissou. Toxi-Labo offre des services
de qualité à la population béninoise. Installé dans un grand bâtiment à étage, le
laboratoire fait face à l’entreprise Batimat et se trouve à proximité du Bénin
Royal Hôtel.

Description du Laboratoire

Le laboratoire Toxi-Labo est logé dans un grand bâtiment à étage faisant face à
l’entreprise Batimat, il est situé à l’angle droit de la rue faisant face à la rue de
Benin Royal. Le rez-de-chaussée abrite un hall d’attente servant de salle
d’accueil. Dans le hall se trouve la caisse où les patients se présentent pour les
différentes analyses qu’ils désirent effectuées ainsi qu’à l’obtention des
renseignements. A l’intérieur du bâtiment se trouve deux salles distinctes de
prélèvement équipées (une salle pour le prélèvement du sang et une autre pour
les prélèvements spéciaux) ; une grande salle multidisciplinaire abrite les
sections de sérologie, parasitologie, hématologie et immunologie-serologie, une
salle pour les examens biochimiques et une autre salle pour les examens
bactériologiques.

Le bâtiment héberge également au rez-de-chaussée, un magasin de stockage des

consommables et réactifs, deux toilettes (visiteurs et personnel), un vestiaire. A
l’étage, sont installés les bureaux du personnel administratif et un second
magasin de stockage de consommables et réactifs. Il y a également hors du
bâtiment, un réfectoire, une toilette et la salle du gardien.

Présentation du personnel du Toxi labo

Le personnel du laboratoire est composé d’un directeur, de huit (08) techniciens

supérieures de laboratoire, d’un (01) comptable, d’un (01) secrétaire comptable,
de trois (03) stagiaires professionnels, d’un (01) agent d’entretien, de deux (02)
gardiens et d’un technicien de surface. Que sont: le Professeur Idrissou
ABDOULAYE ; madame Monrènike HOUETO ; monsieur Saliou
ADJIBADE ; monsieur Raoul AWASSI ; madame Esméralda LOUEKE
FAGNON ; madame Widadath KOUFEIDJI SANNY- MOUFTAOU ; monsieur
Rodrigue DAN ; monsieur Aymaric IBIDOUN ; monsieur Anbdul-Waassi
AMOUSSA ; monsieur Gafarou SALAMI ; monsieur Kamal Dine ALIMI,
monsieur Bernard JANATO, Madame Kelly BACHABI, madame Hillary AYI
et Monsieur Célestin KINVI.

1-1 Fonctionnement du laboratoire et déroulement du stage

Le stage au laboratoire Toxi-labo commence du lundi au vendredi de 7h à 18h

et le samedi de 7h à 16h avec une pause-déjeuner à 12h ou 13h. Deux équipes de
quatre (04) biologistes médicaux travaillent à la réalisation des analyses. Une
équipe commence à sept (7) heures pour finir à quinze (15) heures du lundi au
vendredi tandis que la seconde commence à onze (11) heures pour finir à dix-
huit (18) heures du lundi au vendredi et de 7h à 16h le samedi. La première
semaine fut une semaine d’observation et de mise sur le terrain. On a surtout eu
à observer l’accueil des patients, les prélèvements veineux, capillaires et
spéciaux et l’acheminement des échantillons au laboratoire et le mécanisme de
sortie des résultats. En effet, durant la deuxième semaine au cours de laquelle
nous avons pratiqués les prélèvements sanguins, l’acheminement des
échantillons et la suivie puis la réalisation des analyses sérologiques et
hématologiques. Au cours de la troisième semaine de stage nous assister à la
réalisation des examens bactériologiques et parasitologiques. Pendant les
dernières semaines nous avons suivi la réalisation des examens biochimiques et
immuno-sérologiques.

1-2 Secteurs d’activités

Salle de prélèvement sanguin

Le prélèvement est la phase primordiale de tout examen biologique car il

permet d'obtenir l'échantillon à analyser. Presque 90% des erreurs au laboratoire
d'analyses biomédicales s'effectuent au niveau de la salle de prélèvement.

Après avoir rempli les formalités de la caisse, le patient se dirige vers la salle de
prélèvement en présentant son bulletin d'examen et les étiquettes préalablement
obtenues à la caisse. La salle de prélèvement sanguin est composée de 02 postes
où se réalisent les prélèvements sanguins. Dans la salle d'accueil, le personnel en
service ;

- Reçoit les patients, réceptionne leur bon d'analyses et les enregistre dans
le logiciel

- S'assure que les conditions nécessaires pour les examens à réaliser sont
respectées

- Oriente le patient vers les salles de prélèvement

Prélèvement sanguin

Mode opératoire

- Installer le patient et le mettre à l’aise ;

- Vérifier la conformité du bulletin d’analyses et des tubes de prélèvement ;

 - Vérifier la conformité du nom inscrit sur l’étiquette ;

- Se rassurer que les conditions d'examens sont respectées ;

- Mettre le garrot ; Repérer la veine ; Désinfecter la partie à piquer ;

Introduire l'aiguille dans la veine en faisant un angle de 45° avec la peau
pour recueillir le sang dans le tube de prélèvement.

- Retirer le tube ; le garrot et ensuite l’aiguille ;

- Faire un pansement puis enfin libérer le patient

LES DIFFERENTS TUBES UTILISES AU LABORATOIRE

Couleur du Couleur du Anticoagulants Rôles

bouchon bouchon
Tubes
(vacutener) (Monovette)
EDTA Violet Rose Ethylène Diamine Maintien stable les
Tétra Acétique éléments figurés du
sang
SEC Rouge Blanc Aucun Aucun
SEC Jaune Blanc Gel Sépare le culot du
sérum
Fluoré Gris Jaune Fluorure de sodium Inhibe l’absorption
du glucose par les
hématies
Citrate Bleu Vert Citrate de sodium Maintien la
stabilité des
facteurs de
coagulation
 Hépariné Verte Orange Héparine de lithium Inhibe l'action de
la thrombine
Pot stérile Rouge ou Rouge ou Aucun Aucun
blanc blanc
Citrate de Noir Violet Citrate de Sodium Maintien la
Sodium stabilité , facteurs
de coagulation

 Section de Sérologie

Le terme sérologie est tiré du latin serum qui signifie petit lait et du grec logos
discours. La sérologie est une spécialité médicale qui étudie les sérums
sanguins, en particulier leurs propriétés immunitaires et les modifications qu’ils
subissent lors de maladie, notamment infectieuses. Elle permet de détecter la
présence d’anticorps (immunoglobulines) dans le sang, indiquant un contact
antérieur avec des agents pathogènes comme des virus, bactéries ou parasites.
Dans cette section à TOXI-LABO, on réalise les examens suivants :

Protéine C REACTIVE CRP,

Séro- diagnostic de Widal SDW,

Facteur rhumatoïde (RH),

Recherche des anticorps Anti Streptolysines O ASLO,

Sérologie TPHA/VDRL,

Groupage Sanguin/Rhésus,

Sérologie TBG.

 TECHNIQUE DE REALISATION DE LA CRP (Protéine-C-Réactive)

Principe:

En présence de la suspension latex CRP la Protéine C Réactive sérique qui est

un marqueur des réactions inflammatoires, réagit pour donner une agglutination.
L'observation de cette agglutination dans les deux minutes qui suivent la
manipulation de l’echantillon, permet de déclarer positif le test.

Type de prélèvement

Sang veineux prélevé sur tube sec, centrifuge à 3000 tr/min en 5 minutes.

Technique de manipulation

- Nettoyer et sécher la plaquette de micro réactive pour CRP

- Prélever 50 µl de l’échantillon sur un spot
- Ajouter une goutte du relatif du CRP
- Chalouper pendant 2 minutes

Interprétation

Le test est déclaré positif en cas d’agglutination. Dans le cas contraire il est
dit négatif

En cas de positivité, on fait la dilution pour déterminer le taux de dilution. Pour

la dilution de la CRP positive, il faut :
- Disposer des plaquettes de CRP propres et bien nettoyées
- Prélever 50µl d'eau physiologique par spot sur la plaquette de CRP.
- Prélever 50µl du sérum positif à titrer
- Mélanger le sérum prélevé avec de l'eau physiologique du premier spot. La
dilution est de ½ sur le premier spot.
- Prélever 50µl de ce mélange et le transférer sur le deuxième
- Faire le mélange par aspiration et refoulements successifs à l'aide de la
micropipette

- Cette dilution est au quart pour le deuxième spot.

La dilution évolue de ½ chaque fois qu'on échange de spot. Ainsi on aura 1/8 au
troisième spot, 1/16 au quatrième spot, 1/32 au cinquième spot ainsi de suite.

NB : Lorsqu'on obtient la dernière positivité à un spot, on multiplie l'inverse de

la dilution par 6 mg/l pour avoir le titre du sérum positif.

 Section de Biochimie.

Les analyses biochimiques consistent à doser les constituants des liquides

biologiques. Dans cette section à TOXI-LABO, les examens suivants sont
réalisés :

La glycémie,

L’urémie, la créatininémie, uricémie

L’uricémie,

Ionogramme sanguin, la calcémie, la magnésie,

Les transaminases (GOP et GTP), Gamma GT

Les triglycérides, les cholestérols (total, HDL),

La bandelette urinaire et la micro albuminurie,

La bilirubine totale, bilirubine directe,

La Protidémie, dosage des lactates, phosphatases alcalines etc…

NB : Les examens biochimiques sont réalisés de façon automatique par
l’automate de Biochimie (Cobas C311).Cette section dispose également d’un
appareil de micro albuminurie DCA 2000, d’un agitateur, d’un
spectrophotomètre, Une centrifugeuse à tubes.

Figure1 : Image d’un automate Cobas C311

❖ Parasitologie :
En parasitologie, le but des analyses est souvent d’identifier le parasite
responsable de l’infection. Elles consistent donc à prélever un échantillon et à
rechercher l’agent pathogène soit par observation directe, soit après mise en
culture. Dans cette section, comme examens nous avons : la recherche des
Amibes Kystes Œufs de Parasites (AKOP) encore appelé coprologie parasitaire,
la Goutte Epaisse-Densité Parasitaire (GE-DP) à partir du Sang capillaires ou
d’un prélèvement veineux sur tube EDTA

• Technique de réalisation de la GE-DP :

Ne recueillir que deux microgouttes de sang (capillaire ou veineux) au centre de

la lame ;

Réaliser la goutte épaisse en écrasant délicatement de façon circulaire les

microgouttes préalablement déposées sur la lame

Vérifier si la goutte est bien faite et laisser sécher ;

Identifier la lame à l’aide de l’étiquette reçue par le client à la caisse.

Technique de coloration
-Laisser sécher la goutte
-Recouvrir la surface de la lame de solution de GIEMSA diluée au 1/10
- Attendre 10min à 15min
- Rincer la lame en faisant attention à la goutte colorée
-Aligner les lames sur le râtelier et les laisser séchées
- Faire la lecture au microscope à l'objectif X100 à l'huile à immersion

Interprétation des résultats

Après lecture de la lame au microscope, on peut avoir comme résultats :
Recherche parasitaire négative ;

Présence (rare ou nombreux) de trophozoïtes de Plasmodium falciparum. Dans

ce cas, il faut déterminer la densité parasitaire notée
 DP : (Densité Parasitaire) =Nombre de parasites comptés x Nombre de
Globules Blanc (GB)/ Nombre de leucocytes comptés.
Le nombre le leucocyte comptés doit être plus de 200
Le résultat trouvé s'exprime en Parasites/μl

❖Hématologie et Hémostase

Il s’agit dans cette section de l’analyse des cellules du sang mais d’éléments
dissouts dans le plasma comme les facteurs de coagulation ou les anticorps.
Sont réalisés les examens suivants :

- Numération Formule Sanguine (NFS),

- La Vitesse de Sédimentation (VS)
- Les tests de coagulation sanguine dont la détermination du Taux de
Prothrombine (TP) et du Temps de céphaline kaolin (TCK).
Méthode de détermination de la Vitesse de Sédimentation
Principe :
Du sang recueilli dans un tube sous vide à anticoagulant de citrate de sodium
est placé dans un long tube de verre gradué tenu en position verticale. Les
hématies tombent au fond du tube laissant surnager une couche de plasma.
La hauteur de cette couche de plasma après une heure et deux heures
d'attente traduisent la vitesse de sédimentation des hématies.

Technique et réalisation (Vitesse de sédimentation VS)

- Prélever du sang dans un tube monovette ayant pour anticoagulant le citrate
de sodium.
- Bien homogénéiser l'échantillon
- Placer le tube dans l'appareil de vitesse de sédimentation.
- Attendre une heure et noter la hauteur de la couche de plasma, en millimètres
à partir du zéro du tube ;
- Attendre deux heures et noter la couche de plasma, en mm à partir du zéro du
tube.
- Interprétation des résultats.
- Les valeurs normales de la vitesse de sédimentation sont : VS 1ère heure
<10mm ; VS 2ème heure <25mm
 Section d’Immuno-Sérologie

Dans cette section sont réalisés les examens suivants : HIV1+2, Hépatite A,
HÉPATITE B, HÉPATITE C, TSH, PSA, FPSA, FERRITINE, D DIMER,
d’HCG, TOXO IgG et IgM, ACE, AFP, T3 et T4, TROPONINE, NTproBNP ,
ŒSTRADIOL, TESTOSTERONE, CA15-3, CA19-9, CA 125, PROLACTINE,
CORTISOL, , INSULINE, RUBEOLE IgG et IgM, FSH, LH, VITAMINE D3,
VITAMINE 12, VITAMINE 9 etc… Elle est équipée d’un automate
d’immunologie Cobas e411. Le Cobas e 411 est un analyseur d'immuno-analyse
entièrement automatisé, utilisant la technologie d'électro chimiluminescence
(ECL) pour réaliser des tests quantitatifs et qualitatifs. Il est conçu pour une
large gamme d'applications, telles que les marqueurs d'anémie, hormonaux et
tumoraux, ainsi que pour le suivi des maladies infectieuses.
 Figure 2 : Image montrant l’automate Cobas e411
Toujours dans la salle multidisciplinaire, une paillasse est réservée pour la
manipulation des échantillons ayant comme examen :
Electrophorèse de l’hémoglobine ;
Electrophorèse des protéines sériques ;
Hémoglobine glyquée ;
Ces trois examens sont réalisés par le Minicap Flex Piercing. Il est un analyseur
d'électrophorèse capillaire automatisé, conçu pour tout type de laboratoire. Il
utilise la technologie d'électrophorèse pour séparer et analyser des protéines
dans des échantillons de sérum et de sang total.
Figure 3 : image montrant l’automate MINICAP FLEX-PIERCING

 Section de Bactériologie
Dans cette section les examens suivants sont y réalisés :

Etude Cytobactériologique des Urines (ECBU)

Etude Cytobactériologique du Prélèvement Vaginal (PV)
Etude Cytobactériologique du Prélèvement Urétral
Etude Cytobactériologique du Prélèvement de Pus
Spermoculture
Coproculture
Etude Cytobactériologique du Liquide céphalo rachidien
Etude Cytobactériologique du Liquide d’ascite
Etude Cytobactériologique du Liquide Pleural
 Etc…

Examen Cytobactériologiques des urines (ECBU)

Principe
L'ECBU, ou Examen Cytobactériologique des Urines, est un test médical utilisé
pour détecter la présence de germes dans les urines, essentiel dans le diagnostic
des infections urinaires telles que les cystites et les pyélonéphrites.

Milieux de culture

- Gélose éosine au bleu de méthylène EMB

- Gélose Cystine lactose Electrolyt Deficient CLED

- Gélose au Sang Frais GS

Culture
Identifier les géloses choisies préalablement, ensemencer la gélose de CLED à
partir de l'urine totale. Elle permet d’évaluer la bactériurie et de réaliser la
numérisation.

Isolement, en utilisant la stratégie d’ensemencement par épuisement ensemencer

systématiquement les géloses EMB et au sang frais GS. Enfin passer ces
différents milieux à l’étuve pour l’incubation pendant 18-24h.

Technique de manipulation
- Faire la numérotation et l'enregistrement des échantillons ;

- Mélanger délicatement l'urine.

- Faire l'examen macroscopique de l'échantillon (couleur, présence éventuelle
d'une hématurie et la turbidité de l'urine)
- Identifier un tube sec stérile et le remplir d'urine.
- Homogénéisée, Centrifuger pendant 10munites à 3000 tours/min Après
centrifugation, rejeter le surnageant en retournant rapidement le tube.

Examen microscopique :

 Mélanger le culot à l'aide d'une anse de platine (préalablement flambée)

jusqu'à l'obtention d'une substance homogène
 Prélever une goutte de la substance et monter entre lame et lamelle
 Noter le numéro de l'échantillon sur la lame Observer au microscope à
l'objectif X40
 Faire les examens cytologiques et des sédiments.
 Coloration de Gram.

L'examen du culot de centrifugation coloré au Gram permet de donner très

rapidement une orientation.

 Disposer d'un frottis bien étalé et sécher

 Fixer le frottis à la flamme du bec Bunsen
 Aligner la lame sur le râtelier.
 Verser le violet de gentiane et laisser agir pendant une minute.
 Rincer avec l'eau du robinet.
 Recouvrir la lame avec la solution de Lugol et laisser agir pendant une
minute.
 Rincer avec l'eau du robinet
 Verser l'alcool à 95°C (éthanol) et laisser agir pendant 10 secondes Rincer à
l'eau du robinet
 Recouvrir la lame avec la solution de Fuchsine dilués au 1/10 et laisser agir
pendant 1 minute. Rincer à l'eau de robinet.
 Egoutter les lames de frottis sur un papier buvable Laisser sécher sur le
râtelier Y ajouter l'huile à l'immersion et observer au microscope à l'objectif
X100.

Identification et Antibiogramme

NB : l’Identification et Antibiogramme sont réalisés de façon automatique

grâce à l’automate Vitek

Mode Opératoire

 Mettre deux tubes en plastique dans la cassette du Vitek compact (l’un pour
l’identification, le second pour l’ATB)
 Ajouter 3ml d’eau physiologique dans les deux tubes
 Prélever une colonie isolée de la culture positive monomicrobienne a l’aide
de l’anse de platine, mélanger dans le tube1 jusqu’à l’obtention d’une
solution homogène
 Mesurer la densité avec le densicheck (0.50-0.60)
 A l’aide d’une micropipette, prélever une quantité du tube 1 dans le tube 2
(145μl pour gram négatif et 280μl pour Gram positif)
 Ajouter des cartes réceptives (GP ; GN pour identification du germe et
VITEK 2AST-N233 ; VITEK 2AST-GP67 pour l’antibiogramme)
 Enregistrer et valider les informations (Numéro de cassette numéro
d’identifiant du patient Nom et prénom ID du labo) sur le poste ordinateur
relie au Vitek
 Ouvrir la porte de la première chambre du VITEK, Introduire la cassette et
appuyer sur la touche ‘‘ Lance remplissage’’
 Retirer la cassette à la fin du remplissage et introduire dans la deuxième
chambre du Vitek
 Retirer la cassette des que l’automate le notifie
 NB : L’Identification du germe dure environ 4 à 11h

4- Difficultés et suggestions

Nous avons rencontré des difficultés à cerner le mode de fonctionnement de

certains appareils du laboratoire et à suivre aussi le rythme auquel les activités
vont dans cette structure en raison de la présence des appareils qui sont très
sophistiqués pour la plupart et l’affluence des clients. En effet, il serrait
intéressant que le personnel du laboratoire réalise quelques séance pour
expliquer au futur stagiaire le mode fonctionnement des automates et de surtout
leurs expliquer comment fonctionne le labo pour qu’ils puissent vite s’adapter.

CONCLUSION

Toute formation basée uniquement sur théorie est insuffisante. La pratique est
donc indispensable pour compléter et consolider les données acquises. Nos
stages conduisent de ce fait à l'efficacité de notre travail et à la compétence dans
l'exercice du métier de biologiste médical. Au terme de ce stage nous avons
compris que les réalités du terrain ont été indispensables pour notre
perfectionnement et notre compétence. Enfin, en ce stage objectif visé a été
atteint et nous remercions beaucoup toute l'équipe du laboratoire. Le stage
adamique effectué à TOXI-LABO nous a permis d'acquérir plusieurs notions
dans le domaine de la biologie mais aussi dans le domaine du management de la
qualité. Nos remerciements vont aussi à l'endroit de tout le personnel pour
l'accueil, les conseils, la bonne ambiance partagée et l'accompagnement durant
cette période.