SN1 Cours 07 Réplication de 2024-10-28
l'ADN
PLAN
Quelques rappels sur l’ADN
• Expérience de Chargaff
A • Le modèle de Watson & Crick
LE MÉCANISME DE RÉPLICATION DE L’ADN
B • Expérience de Meselson-Stahl
• Les molécules impliquées dans la réplication
• Le processus de réplication
RÉPLICATION DE L’ADN : PARTICULARITÉS & APPLICATIONS
TECHNOLOGIQUES
C • Les télomères eucaryotes
• La réparation des mutations
• Les biotechnologies
L’ADN EST LE MATÉRIEL
GÉNÉTIQUE
PARTIE A
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Quel est le matériel génétique ?
1890-1920: on découvre que les chromosomes sont faits d’ADN et
de protéines.
Croyance scientifique de l’époque : les protéines portent l’info. génétique.
PROTÉINES ADN
• Milliers de types différents • Molécule simple
• Structures très complexes.
• Motif plutôt répétitif.
Chargaff Et al. (1952) et la complémentarité des
bases azotées
Équipe de Chargaff
démontrent que
quantité de A est
27,4
25,3 24
équivalente à celle
19,8 19,8 de T.
21,0 21,0 29,0
29,1 21,2 21,1 28,6 Même chose pour
les bases C et G.
La structure de l’ADN
o 1953: James Watson et
Francis Crick découvrent la
structure de l’ADN, d’après
l’analyse des travaux de
Rosalind Franklin.
o R. Franklin meurt du cancer
des ovaires en 1958. Watson
et Crick reçoivent le prix
Nobel en 1962.
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Watson & Crick : une publication choc !
James Francis
Watson Crick
Pas de prix nobel pour Rosalind
Rosalind Franklin
Maurice Wilkins
Le célèbre cliché 51 de R. Franklin
Cristallographie au rayon X de l’ADN
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RAPPEL : l’ADN d’un eucaryote est condensé selon le niveau
d’activité ¢aire
¢ en INTERPHASE
De la double hélice à la fibre de chromatine
10
RAPPEL : l’ADN d’un eucaryote est condensé selon le niveau
d’activité ¢aire
¢ en cours de division (Phase M)
De la fibre de chromatine au Xsome métaphasique
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La structure moléculaire de l’ADN (rappel)
o Groupement phosphate(P)
attaché au Carbone 5’ 5’
o Groupement -OH attaché au
Carbone 3’
o La base azotée peut être:
Adénine
PURINES
Guanine
Cytosine
PYRIMIDINES
Thymine
3’
Uracile (ARN seulement)
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La structure moléculaire de l’ADN (rappel)
o STRUCTURE SECONDAIRE:
Double hélice de polynucléotides anti-//
squelette de sucre-phosphate.
o BASES AZOTÉES :
pointent vers l’intérieur
liées par des liens H.
o COMPLÉMENTARITÉ DES BASES :
A-T 2 ponts H
C-G 3 ponts H
13
Fig. 16.7 (p. 351) Portez attention aux types de liaisons/
forces participant à la structure de l’ADN
14
Indiquez avec précision les
Fig. 16.7 (p. 351) extrémités et l’orientation des 2 brins
P OH
OH P
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LE MÉCANISME DE
RÉPLICATION DE L’ADN
PARTIE B
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Comment l’ADN se réplique-t-il ?
Modèle conservateur Modèle semi-conservateur Modèle dispersif
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L’expérience de Meselson-Stahl (1950)
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L’expérience de Meselson-Stahl (1950)
MODÈLE
SEMICONSERVATEUR
devient le modèle de
réplication accepté.
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Origine(S) de réplication
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PROCARYOTES
1 SEULE ORIGINE de réplication
œil de
réplication
3’ 5’
5’ 3’
XSOME EN RÉPLICATION
Fourche de réplication
3’ 5’ 5’ 3’ 5’
3’ 3’ 3’ 3’
5’ 5’ 5’
EUCARYOTES PLUSIEURS ORIGINES de réplication Les nouveaux brins sont en rouge
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Une amorce est nécessaire pour initier le processus !
o Les amorces (« primers ») sont de courts fragments d’ARN.
o Elles permettent d’exposer un groupement –OH libre du côté 3’
nécessaire pour la polymérase.
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Les ADN polymérases
o Les ADN polymérases sont des enzymes qui peuvent
synthétiser un nouveau brin d’ADN si et seulement si:
Elles ont un brin matrice soit de l’ADN à copier par complémentarité;
Elles ont une amorce côté 3’ libre avec 1 OH disponible.
o E. coli : polymérases I, II, III …
o Eucaryotes: des centaines de différents types de polymérases
(α, β, ε, ẟ, …)
22
La synthèse se fait par une extrémité 3’-OH libre
Un brin est 5’3’ et le brin complémentaire est en direction opposé (3’ 5’)
23
La réplication de l’ADN
3’
1 - L’helicase sépare les deux brins et ouvre l’oeil de
5’
Hélicase réplication
3’
5’ 5’
3’
Sens d’ouverture
L’ADN gyrase (non illustrée) coupe et recolle
l’ADN en amont pour éviter la torsion des brins.
24
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La réplication de l’ADN
2 - Ces protéines gardent les brins 3’
Protéines fixatrices d’ADN
monocaténaire (sb) séparés le temps de la replication. 5’
3’
5’ 5’
3’
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La réplication de l’ADN
Amorce au début de
3’
3 – Une primase synthétise des ce brin (non illustrée)
amorces qui sont de courtes 5’
sequences d’ARN.
3’
5’ Amorce d’ARN 5’
3’
primase
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La réplication de l’ADN
4 – Une ADN polymerase synthétise le nouveau brin à partir de l’amorce.
3’
Ajout de nucléotide du côté 3’-OH libre seulement, ça va bien ici…
5’
ADN polymérase III
Sens ouverture
ADN/ hélicase
3’
5’ 5’
3’
De ce côté c’est plus difficile, on doit y
aller “à reculons” car le côté 3’-OH est Fragment d’Okazaki
OPPOSÉ à l’endroit où l’on ouvre l’ADN. en cours de synthèse
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Brins directeurs et discontinus
Si ADN matrice orienté 5’→ 3’ Si ADN matrice orienté 3’→ 5’
o ajout de nucléotides en
o ajout de nucléotides dans
s’éloignant du sens
le sens d’ouverture de la
d’ouverture de la fourche de
fourche de réplication.
réplication.
= BRIN DIRECTEUR
o Formation de courts segments
d’ADN dits d’Okazaki.
= BRIN DISCONTINU
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La réplication de l’ADN
3’
5 – Une ADN polymérase remplace 5’
l’amorce d’ARN par une séquence d’ADN.
3’
5’ 5’
3’
ADN polymérase I
Fragment d’Okazaki
en cours de synthèse
29
La réplication de l’ADN
3’
6 – Une ADN ligase lie les fragments
d’Okazaki et complète le brin discontinu. 5’
3’
ADN ligase 5’
5’
3’
Fragment d’Okazaki
en cours de synthèse
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En résumé …
Protéines fixatrices d’ADN brin directeur 3’
monocaténaire
5’
Hélicase
ADN polymérase III
5’
ADN
3’ brin discontinu = ligase
Fragment d’Okazaki
3’
Primase
5’
Sens d’ouverture
ADN polymérase I
Gyrase (non illustrée)
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Résumé des enzymes requises :
La machinerie de réplication (réplisome)
o (α)-Primase: ajoute une amorce d’ARN
(chaque fragment = 1 amorce).
o ADN Pol III (ẟ): synthétise le nouveau brin
d’ADN.
o ADN Pol I (ɛ): remplace l’ARN de l’amorce
par de l’ADN.
o ADN Ligase: lient les fragments d’Okazaki.
32
Résumé des enzymes requises :
La machinerie de réplication (réplisome)
o Hélicase: sépare et déroule la double
hélice.
o Protéines Fixatrices d’ADN Monocaténaire:
stabilise l’ADN simple brin.
o ADN Gyrase (ou Topoisomérase):
coupe et recolle l’ADN en amont de la
fourche de réplication
relâche la torsion qui se crée lors du
déroulement de l’ADN.
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RÉPLICATION DE L’ADN :
PARTICULARITÉS &
APPLICATIONS
TECHNOLOGIQUES
PARTIE C
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Les Xsomes eucaryotes raccourcissent !
o RAPPEL : les Xsomes n’ont pas tous la même structure selon les organismes.
o TÉLOMÈRES : Extrémités qui sont des séquences ADN répétitives, non codantes,
riches en G/C (ex: TTAGGG)
• Structures de protection (empêchent fusion Xsomes, protègent contre cancer, etc … )
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LES TÉLOMÈRES Après 1 cycle de réplication, le
brin discontinu est incomplet
Après 2 cycles
de réplication
MOLÉCULES-FILLES PLUS COURTES !
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Les Xsomes eucaryotes raccourcissent !
o Les Xsomes eucaryotes sont LINÉAIRES…
• À chaque division, ils raccourcissent !
• Procaryotes ont Xsome circulaire = pas de problème.
o Les eucaryotes doivent compenser le raccourcissement:
1. Souvent, séquences télomères TTAGGG répétées des milliers de
fois comme non-codantes, pas d’incidence
2. Ou encore, certaines ¢ (les + actives) ont des enzymes, les
TÉLOMÉRASES qui rallongent les télomères
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La TÉLOMÉRASE allonge les télomères
ALLONGEMENT
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MÉSAPPARIEMENT DES BASES
Les ADN polymérases font du « proof-reading » : Correction en
cours de lecture
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La réparation des mutations
o Les agents chimiques mutagènes et les radiations peuvent
provoquer des dimères de thymine.
o Peut être spontané !
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La réparation des mutations
Réparation par excision-resynthèse grâce à une endonucléase
(éndo = à l’intérieur de) + (nucléus = noyau) + (ase = enzyme) .
Le dimère de thymine
déforme l’ADN
Une endonucléase
coupe le dimère
Resynthèse par ADN
polymérase (Pol II ou Pol )
On rattache le tout
[Link]
bases-moleculaires-de-heredite avec une ADN ligase
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XERODERMA PIGMENTOSUM
L’ABSENCE DE RÉPARATION DE L’ADN ENTRÂINE L’APPARITION DE NOMBREUSES
MUTATIONS
[Link]
02969-1/MediaObjects/13256_2021_2969_Fig1_HTML.jpg
Épiderme sain Épiderme atteint
[Link] [Link]
[Link] vp-DD_1YIyWhFrLiOiuC0bWKYVRJG6tjjX3L-spDNnDMpguY4ZQjVR_72Op77MKE09kvhmfo
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Technique de l’ACP (ou PCR)
o ACP = Amplification par Réaction en Chaîne
o Ou PCR = Polymerase Chain Reaction.
o Permet d’amplifier exponentiellement un brin d’ADN. Besoin de:
Amorces d’ADN, TAQ polymérase, Nucléotides (ou dNTP), Brin d’ADN à amplifier
(matrice), Thermocycleur…
[Link]
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Analyse sur Gel
o Électrophorèse sur gel d’agarose
• Les brins d’ADN sont séparés selon leur charge électrique et leur taille.
• [Link]
[Link]
o Enzymes de restrictions.
• Coupe l’ADN à des endroits précis.
o Échelle de poids moléculaire.
• Permet de visualiser sur un gel des brins d’ADN de taille connue.
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Autoévaluation
• Exercices en fin de chapitre: 1 à 8
• Exercice sur LÉA
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[Link] 15
