République Algérienne Démocratique et Populaire.
Ministère de l'Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique.
Université Larbi Ben M'hidi -Oum el Bouaghi.
Faculté des sciences exactes et des sciences de la nature et de la vie.
Département des sciences de la nature et de la vie.
Deuxième année Master -Biochimie appliquée
Les quetions du copmte rendu du
TP n°2 :
Détermination des proteines totales selon la
methode de buiret
-Realisé par : -sous déssus par :
Bounana bewbe echeikh Dr : Djeffal
Khaled Hadil
Abbad Chahinez
Anné universitaire : 2024/2025
1) Réaction entre l'ion Cu²⁺ et la liaison peptidique
L'ion cuivre (Cu²⁺) interagit avec les liaisons peptidiques des protéines pour former des
complexes de coordination. Cette réaction est souvent utilisée dans des tests colorimétriques
pour quantifier les protéines, comme notre test dans ce TP méthode de Biuret .
Mécanisme de la réaction
1. Complexation : Les ions Cu²⁺ se lient aux atomes d'azote et d'oxygène présents dans les
liaisons peptidiques.
2. Changement de couleur : La complexation entraîne un changement de couleur,
généralement vers le bleu, ce qui est proportionnel à la concentration de protéines dans
l'échantillon.
Schéma de la réaction
Cu²⁺ + Peptide → Complexe Cu²⁺-Peptide (bleu)
2) Rôle des produits Tartrate double et Iodure de potassium (KI) dans la préparation
du réactif de Biuret
- Tartrate double :Le tartrate de potassium (ou tartrate double) est utilisé pour stabiliser l'ion
Cu²⁺ en empêchant la précipitation et en permettant une meilleure solubilité du cuivre dans la
solution. Cela aide à obtenir une réaction plus uniforme lors du dosage des protéines.
- Iodure de potassium (KI) : L'iodure de potassium est souvent ajouté pour réduire les ions
Cu²⁺ en Cu⁺, ce qui améliore la sensibilité du test. Il aide également à stabiliser les ions de
cuivre, ce qui est essentiel pour une réaction précise.
3) Autres méthodes de dosage des protéines totales
1. Méthode de Bradford :Utilise le colorant Coomassie Brilliant Blue, qui change de couleur
en fonction de la concentration en protéines.
2. Méthode de Lowry :Basée sur la réaction des protéines avec le cuivre et la réduction de
phosphomolybdène, produisant un changement de couleur mesurable.
3. Méthode de Bicinchoninic Acid (BCA) :Utilise un complexe de cuivre et produit un
changement de couleur mesurable à 562 nm.
4. Spectrophotométrie à 280 nm :Mesure l'absorbance de la lumière à 280 nm, où les acides
aminés aromatiques absorbent la lumière.
5. Méthode Kjeldahl :Mesure la quantité d'azote dans les protéines pour estimer leur
concentration.
