-Section immunologie
La section immunologique se charge de la recherche des marqueurs
immunologiques notamment les antigènes et anticorps dont la présence dans le
sang provient d'une imflammation ou découle d'une maladie.
Les examens qui y sont réalisés sont:
-Le dosage de la procalcitonine(PCT)
-La détermination du taux de lymphocytes T CD4
-La recherche de marqueurs de la syphilis ( VDRL et TPHA)
-Le diagnostic rapide du VIH et son typage
-Le diagnostic rapide de la dengue
-Le diagnostic rapide de l'hépatite C
Le diagnostic rapide de l'hépatite B
-Le diagnostic de la rougeole et de la rubéole
1) La détermination du taux de CD4
Pour se faire nous utilisons un automate le BD FACS Presto
Principe
C'est de détecter les lymphocytes T CD4 a l'aide d'anticorps couples au
fluorochrome
Procédure de réalisation
Prélever le sang total sur tube EDTA
Bien homogèniser le tube
Prélever 200µl du sang total
Placer dans le 1er puit de la cassette
Incuber pendant 18min
Au bout de 18min retirer
Placer ensuite cette cassette dans l’automate
BD FACTS Presto
2) Sérodiagnostic de la syphilis (TPHA et VDRL)
a) VDRL
Encore appelé RPR( rapid plasma reagin) est un test de floculation lipidique non
tréponémique pour la détection rapide de la syphilis
Rectif utilisé: SPINREACT
Principe de fonctionnement du RPR CHARBON
A la CHU-CDG nous utilisons la technique manuelle sur une carte t'est
Le ractif principal du RPR CHARBON ne comporta aucune fraction de Treponema
pallidum pallidum.c'est uniquement une suspension stabilisée de cristaux de
cholestérol additionné de lécithine et de cardiolipide afin que le seuil de
floculation des particules de charbon qu'il contient serve de révélateur
En pratique il se comporte comme une solution antigénique qui provoque une
floculation rendu visible par les particules de charbon
Mode opératoire
Recevoir l'échantillon dans un tube sec( rouge)
Mettre les réactifs à température ambiante
Centrifuger les tubes a 3500tours/min pendant 5min
Sortir les cassettes de leurs emballages et numéroter (identifier)
Pipeter et mettre une goutte de sérum positif dans le premier cercle de la
carte test
Pipeter et mettre une goutte de sérum négatif dans le deuxième cercle de
la carte test
Pipeter et mettre 50µL du sérum a testé dans le troisième cercle de la carte
test
Ajouter une goutte de diluant (le carbone) dans le premier et le deuxième
cercle
Ajouter une gouttes de diluant (le carbone) dans le troisième cercle
Homogénéiser à l’aide d’un agitateur pendant 8 minutes
Résultats :
Le contrôle du témoin positif provoque l’apparition d’une agglutination visible à
l’œil nu. Le contrôle du témoin négatif ne provoque pas l’apparition d’une
agglutination
Si notre échantillon analyser est positif il aura une agglutination s’il est négatif il
n’y aura pas d’agglutination.
b) Le TPHA
Principe
Mode opératoire
Nous avons besoin d'une place possédant plusieurs puits
A A1 A2
B B1 B2
Etpape1
Mettre 10µL du contrôle (+) ajouter 190µL du diluant dans le puit A
C C1 C2
Mettre 10µL du contrôle (-) ajouter 190 µL du diluant dans le puit B
Mettre 10µL du sérum de l'échantillon ajouter 190 µL du diluant dans le puit C
Étape 2
Prélever 25 µL du puit A et mettre dans le puit A1 et 25ul du puit A et mettre dans
le puit A2
Prélever 25 µL du puit B et mettre dans le puit B1et 25ul du puit B et mettre dans
le puit B2
Prélever 25 µL du puit C et mettre dans le puit C1 et 25ul du puit C et mettre dans
le puit C2
Étape 3
Ajouter 75 µL de la cellule contrôle (CC) dans le puit A1 et 75µL de la cellule t'est
dans le puit A2
Ajouter 75 µL de la cellule contrôle (CC) dans le puit B1 et 75µL de la cellule t'est
dans le puit B2
Ajouter 75 µL de la cellule contrôle (CC) dans le puit C1 et 75µL de la cellule t'est
dans le puit C2
Incuber pendant 45 minute et lire le résultat
Resultat : si dans les puit de la ligne échantillons ressemble à ceux de la ligne
contrôle positif alors le résultat est positif s'il ressemble à ceux de la ligne
contrôle négatif alors le résultat est négatif.
3)Les test de diagnostic rapide ou chromatographie
Le principe de ces test repose sur la migration du réactif immunologique le long
d'un support vers les autres réactifs immobilisés sur le même support
a-Diagnostic rapide du VIH
Ces TDR sont basés sur la présence d’antigènes de synthèse correspondant
exclusivement aux antigènes d’enveloppe des VIH-1 etVIH-2.
En cas de positivité du test il faut déterminer s'il s'agit du type 1 ou du type 2 ou
les deux
Mode opératoire
Recevoir l'échantillon dans un tube sec(rouge)
Mettre les réactifs à la température ambiante.
Centrifuger les tubes de sang a 3500tours/min pendant 5min Sortir les
cassettes de leurs emballages et numéroter.
A laide dune micropipette pipeter et déposer 50µL de sérum sur la bande
du détermine
Laisser le sérum migrer
Attendre 15 à 20 minutes pour faire la lecture
Lorsqu’on observe une bande rouge au niveau du contrôle et une autre au
niveau du témoin, le résultat est positif.
Lorsqu’on observe une seule bande rouge au niveau du contrôle, le résultat
est négatif
Le trait du contrôle doit impérativement apparaitre pour que le test soit
valide.
( Image)
Détermination du type de VIH
Sortir les cassettes de leurs emballages et numéroter.
Pipeter et mettre 50µL de sérum dans le puit
Ajouter 2 gouttes de diluant
Attendre 15min avant de lire
Lorsqu’on observe une bande rouge au niveau du contrôle et une autre au
niveau du témoin 1 : il s’agit du VIH de type 1
Lorsqu’on observe une bande rouge au niveau du contrôle et une autre au
niveau du témoin 2 : il s’agit du VIH de type 2
Lorsqu’on observe une bande rouge au niveau du contrôle et une autre au
niveau du témoin 1 et 2 : il s’agit du VIH de type 1 et 2
Lorsqu’on observe une seule bande rouge au niveau du contrôle, le
résultat est négatif. Le trait du contrôle doit impérativement apparaitre
pour que le test soit valide.
b) sérologie de la dengue
C- Diagnostic de l'hépatite
D-Diagnostic de l'hépatite C
