Rapport de

stage de
Bactériologie

 Réalisé par : El Maymouni Omar

 Encadré par : Mme Lhlou
 Option : Laboratoire
 Promotion : 2018-2021

Du 19/04 au 06/05/2021

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  Remerciements :

Je tiens à remercier dans un premier temps, toute l’équipe pédagogique de

L’ISPITS RABAT et les intervenants professionnels responsables de la formation

de la Bactériologie pour avoir assuré la partie pratique et théorique de celle-ci

surtout madame Lhlou de m’avoir encadré.

Je tiens à exprimer toute ma reconnaissance à notre coordinatrice madame

El-Mehdaoui, ainsi madame Saadoni. Je les remercie de m’avoir orienté, aidé et

conseillé.

Je tiens à remercier tout particulièrement et à témoigner toute ma

reconnaissance aux personnels de l’hôpital militaire d’instruction Mohammed V

pour l’expérience enrichissante et pleine d’intérêt qu’elles m’ont fait vivre durant

ce stage.

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  Table des matières :

I.Introduction :.........................................................................4
II.Information à propos du stage :...........................................4
III.Présentation du lieu de stage :............................................5
IV.Les services bactériologiques au niveau du Laboratoire :...6
V.Conclusion :........................................................................24

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I. Introduction :

Ce stage opérationnel de la Bactériologie nous a permis de mettre en pratique

des connaissances acquises au cours de la formation et à développer des

compétences en milieu professionnel.

Durant ce stage au sein du secteur de bactériologie au laboratoire de biologie

médicale de l'hôpital militaire, j'ai eu l'occasion de pratiquer diverses études

bactériologiques sur des prélèvements aussi variés que les urines, dans ce cas

là nous pratiquions ce que l'on appelle un ECBU (étude cytobactériologique des

urines), les prélèvements vaginaux, les prélèvements cutanés, supérieurs où

profonds, l'étude de crachats et d'aspirations bronchiques, ou encore la

recherche de germes dans les selles et dans le liquide céphalo-rachidien (ou

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LCR).

II. Information à propos du stage :

 Durée :
Du 10 AOÛT jusqu’au 20 AOÛT 2020.

 Lieu :
J’ai effectué mon stage à l’hôpital militaire d'instruction Mohammed V.

 Service :
J’ai réalisé ce stage au sein du service de bactériologie.

III. Présentation du lieu de stage :

- Milieu du stage :

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 - Composition du service :
Le service de bactériologie est composé de :
• Bureau du chef de service
• Bureau de l’infirmier chef
• Salle de repos
• Paillasse pour l’examen cytobactériologique des urines
• Salle pour les examens sérologiques
• Salle pour la lecture des lames BK
• Paillasse pour la coproculture, crachat, pus et l’hémoculture ainsi que
l’analyse des liquides de ponction
• Salle de préparation des milieux
• Salle de BK
• Salle d’antibiogramme
- Les ressources humaines :
Les taches et les fonctions du service bactériologique sont assurées par nombreux
personnels médicales et paramédicales qui sont :
• Chef de service
• Majeur
• Médecin biologiste
• Ingénieurs
• Techniciens
• Responsable de stockage
• Femme de ménage

IV. Les services bactériologiques au

niveau du Laboratoire :
- Service BK : (Bacille de koch)
Réception de l’échantillon et identification de l’aspect du crachat sur
la bande

Identification du matériel de travail

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 Examen microscopique sur l’hôte

L’étalement de la lame
Séchage de la lame

Coloration de l’auramine

 Recouvrir le frottis de solution d’auramine pendant 15.

 Recouvrir le frottis de solution d’acide alcool pendant 5 à 10 minutes.

 Rincer.

 Recouvrir le frottis de rouge de thiazine phéniquée pendant 1.5 à 2

minutes.

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 La lecture
Si on a un doute ou présence des barres BAAR on passe à la coloration de
Ziehl-Neelsen.
- La culture de BK :

- Sur l’hôte aussi :

Partager une quantité d’échantillon sur un tube flacon

Ajouter la solution décontaminant

Vortexer

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 Mettre dans l’étuve pendant 15 min

Agiter pendant 15 min

Ajouter un neutralisant jusqu’à ce qu’à ce que le milieu devient jaune

Centrifuger pendant 10 min

Eliminer le surnagent

Prendre à l’aide d’une pipette une quantité du culot et le mettre dans le

milieu LJ Löwenstein-Jensen

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Conserver ce milieu de culture dans l’étuve jusqu’à l’apparition de colonie
- Diagnostique de BK par génie expert :
Prendre une quantité de prélèvement et le mettre dans un tube flacon

Ajouter le réactif de lyse

Vortexer et laisser 5 min et vortexer une deuxième fois

Prendre une quantité de surnageant et le mettre dans une cartouche

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 Passer à l’automate génie-expert

- ECBU : Examen cytobactériologique des urines

 Définition :
L'examen cytobactériologique des urines, est un examen simple de biologie
médicale, susceptible de procurer des éminents renseignements
particulièrement utiles pour le diagnostic des maladies de l'arbre urinaire, et
notamment des infections urinaires d'un patient.
 Les étapes de l’ECBU :
- L’examen macroscopique :
Couleur :
 Normalement jaune.
 Rose à rouge : hématurie.
 Orange-acajou : ictère (jaunisse)
Aspect : clair : Normal
 Trouble : (présence de leucocytes, de bactéries).
PH :
 PH normal est acide. (5,5 – 8.0)
 Un pH alcalin suggère une infection urinaire.
Odeur

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 - L’examen microscopique :

- Culture bactériologique :
Ensemencement dans un milieu de culture ordinaire BBC ou CLED.

BBC CLED

Si on a présence de levures on fait la culture sur milieu Saborand

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Mode d’ensemencement

Incubation pendant 24H

Etude des caractères culturants

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 Coloration de contrôle
Le but de cette méthode est de confirmer la présence des espèces des
bactérie qui sont à Gram positif ou à Gram négatif pour éviter toute sorte
d’erreurs

Test de différenciation

*Le test de l’oxydasse :

-Définition du test :
Le test consiste à mettre en évidence une enzyme : la phénylène diamine
oxydase que possède la bactérie pour oxyder un réactif incolore (la NN-
diméthyle-paraphénylène diamine) en un dérivé rose violacé.
-Technique :
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*Le test de la catalase :
-Définition du test :
La catalase est une enzyme qui catalyse la dégradation du peroxyde
d’hydrogène (H2O2) selon la réaction.
-Technique :

Catalase + : on suspecte un staphylocoque après on passe vers le test de

coagulase, Dnase
*Le test de la Coagulase :
-Définition du test :
La coagulase ou staphylocoagulase est une enzyme capable de faire coaguler le
plasma sanguin.
-Technique :

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*le test de la DNASE :
-Définition du test :
Le test d'hydrolyse de l'ADN ou test de désoxyribonucléase (DNase) est utilisé
pour déterminer la capacité d'un organisme à hydrolyser l'ADN et à l'utiliser
comme source de carbone et d'énergie pour sa croissance
-Technique :
-Préparation d'un milieu de culture dnase
-Ensemencement par oese sous forme d'un trait
-Incubation à 37 c pdt 24
-Après 24 lectures avec des réactifs de révélation

Si oxydase négative on s’oriente à la famille des entérobactéries donc

ensemencement sur milieu chromogène

Incubation pendant 24 H

La lecture

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  Antibiogramme :
- Définition :
Un antibiogramme est une technique de laboratoire visant à tester la sensibilité
d'une souche bactérienne vis-à-vis d'un ou plusieurs antibiotiques supposés ou
connus.
- Technique :
Ensemencement par inondation

Placer les disques des antibiotiques dans la boite de pétri à l’aide d’un tampon

Incubation pendant 24 H

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 Lecture

- Prélèvement ponction -Respiratoires-Coproculture :

EXPECTORATION / ASPIRATION PDP

MACROSCOPIE : salivaire, purulent, mucopurulent, hémopurulent…

GR / cellule épithéliales :

 <10 GR : présence

 10<GB OU CELL. EPIT <25 ou absence

>25

GRAM

CULTURE : culture :
 En cadrant sur G.  En cadrant sur G.
SANG (PUR) Sang (PUR)
 En étude sur G.  En étoile su G.
CHOC. (Dilution 10 4 et 106) (dilution 106)
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 IBA LIQUIDE DE PONCTION COPROCULTURE

MACROSCOPIE : MACROSCOPIE : MACROSCOPIE :

Clair, trouble, Aspect (Clair, Diarrhéique ou
hématique... trouble, non (pateuse,
Volume hématique...à molle, dures…)
Viscosité

CYTOLOGIE
EF : cytologie EF : présence ou
Recherche des absence GB/ GR/
BLEU DE microcristaux (liq. LEV
METHYLENNE : Articulaire)
FORMULE
(recherche de GRAMME :
macrophages+++) Abondance de la
flore équilibre
BLEU DE
METHYLENNE :
GRAM CULTURE : en cadrant :
FORMULE
Si Si non :
diarrhéique :
CULTURE :  SS
GRAM
 En cadrant  SS
sur G. SANG (PUR)
 YES
 En étoile CULTURE : en spot sur :
sur G. CHOC.  G. SANG  CAMP
(Dilution 104 et  G. CHOC
Si LEV +++ SABOUILLAUD
106)
ENRICHISEMENT : sur
 CC ou ENRICHISEMENT : sur
Flacon  SELLENTE ou RAPPAPORT
d'hémoculture (si
prédominance PNN +++)
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 *LCR : si GB >ou = 200/mm3(méningite) ou = 8/mm3 (méningo-encéphalite)

GB>ou = 30(chez le nouveau-né)

Liquide d’ascite : si GB> ou = 200/mm3

Liquide pleural : si GB> ou = 500/mm3

Liquide articulaire : si GB> ou =200/mm3

- Les prélèvements divers :

Hémoculture Pus les biopsies

SONICATION

Bactec P. Superficiel P. profond

Congélation
Ecrasement dans un mortier

Positive Gram
Culture : Culture :
+
G. Sang G. Sang Culture :
G. chocolat G. chocolat
Aérobie Anaérobie G. Sang
G. Chapman
G. Schaedler G. chocolat

Culture : G. Sang ANC G. Schaedler

Culture :
G. Sang Enrichissement : G. Sang ANC
G. chocolat
G. chocolat  Bouillon Enrichissement :

G. Sang ANC  Cœur  Bouillon

 Cervelle  Cœur

Antibiogramme à partir du  Bouillon  Cervelle

bouillon en fonction du Schaedler
 Bouillon
Gram
20 Schaedler
 Les drains Les cathéters

GRAM Rincer avec 1 ml d’eau stérile

SONICATION
Culture :

G. Sang
G. Chapman
Culture :

-G. Sang (10 ul en étoile)

- L’hémoculture :
Définition de l’hémoculture :
 Est un examen bactériologique qui permette de :
 Rechercher une cause bactérienne, responsable de la clinique
 Isoler et identifier dans le sang la bactérie responsable
 Antibiogramme si nécessaire
Technique :

Mettez les flacons dans BACTEC

Principe = détecteur de CO2 au fond du flacon contenant un indicateur de pH, séparé
du bouillon par une membrane ½ perméable au CO2

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 Détection de la croissance bactérienne

Ensemencer sur : gélose au sang ; Gélose au chocolat ; par 3 points sur la

gélose puis faire des stries sur la gélose

Les germes rencontrés

 S. aureus,

 E. coli,

 Entérobactéries,

 P. aeruginosa,

 C. albicans

Antibiogramme

- La coproculture :
Définition de la coproculture :
La coproculture ou l’examen bactériologique des selles a pour but de rechercher les
bactéries pathogènes du type :

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  Salmonella : agent de la Typhoïde.
 Shigella : agent de la dysenterie bacillaire...
 E. Coli : agent de gastro-entérite infantile

Technique :

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V. Conclusion :
Ce stage au service de bactériologie à l'hôpital militaire Mohammed V m’a
permis d’approfondir mes connaissances, notamment dans le milieu de la
biologie médicale.

Il m’a permis également de mieux assimiler la théorie qui m’a été

enseignée pendant ce semestre(S4).

Tous ces acquis vont me permettre d’aborder avec plus de sérénité les
tâches qui me seront attribuées prochainement, dans mes nouvelles
fonctions.

Le fait de travailler en équipe et utiliser des procédés et des méthodes

existantes m’a permis de m’intégrer dans un groupe de travail et de voir en
quoi consistait le travail d’un biologiste au sein d’un établissement
sanitaire.

En fin je veux dire merci beaucoup, à toute personne m’a donné

l’opportunité de passer ce stage.

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