Chapitre 1 :
Topologie et dynamique des biomembranes
Isolement des biomembranes
Fractionnement cellulaire
Centrifugation sur gradient de densité
Centrifugation différentielle (séparation selon la taille)
(séparation selon leur masse volumique)
Isolement des biomembranes
Fractionnement cellulaire
Isolement des PBMC utilisation du Ficoll
peripheral blood mononuclear cells
Isolement de la membrane plasmique a partir
de globules rouges
Fantômes
ouverts
Fantômes
fermés
Vésicules scellées a
polarité conservée
Vésicules scellées a
polarité inversée
-The preparation of sealed and unsealed red blood cell ghosts and of right-side-
out and inside-out vesicles.
-The orientation of the membrane in these vesicles can be either right-side-out or
inside-out, depending on the ionic conditions used during the disruption procedure.
Composition approximative des lipides dans
différentes membranes
Table 10-1 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Structure of membranes 'phospholipids
Neutral charge Negative charge Neutral charge Neutral charge
Sphingomyelin (SM) structure
Acides gras saturés et insaturés:
température de fusion
The main fatty acids
The presence of a double bond determines the three-dimensional
structure of the fatty acid and therefore of the phospholipid
Figure 10-2 2008
Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Acide arachidonique 20:4 ω-6
Specific membrane phospholipids
Specific membrane phospholipids
Cardiolipin : Role in H+ attraction and ATP synthase function
Specific membrane phospholipids
Plasmalogens
liaison Vinyle
Structure of Cholesterol
Cholesterol is a regulator of membrane fluidity
Glycolipids: Ceberosides
Glycolipids: Globosides (example of ABO Blood types)
Glycolipids: Gangliosides (Contain a silaic acid)
Sialic acid structure
Glycolipids: Sulfatides
An example of the role of membrane glycolipids:
interaction with carbohydrate receptors ‘the lectins’
Liposome and nanoparticles structure : an important drug
delivery system
Liposome and nanoparticles structure : an important drug
delivery system
Steps of liposomes preparation
Types of protein interactions with biomembranes
-
+ +
-
Na+
Cl-
Protéines membranaires intrinsèques
Secondary structure of proteins
-Prédiction des hélices α transmembranaires
-Exemple d’une protéine membranaire intrinsèque plusieurs feuillets béta :
VDAC(voltage-dependent anion channel) = porine mitochondriale
Protéines intrinsèques fixées à la membrane par un acide gras ou un
groupement prényle
réversible
réversible
Irréversible
-Les groupements farnesyl et geranylgeranyl ne sont pas des lipides mais des
composés à caractère lipidique (lipoides)
15
carbones
20
carbones
-Protéine intrinsèque fixée à la membrane par un glycolipide
spécifique : glycosylphosphatidylinositol = GPI
4
3
2
1
-Détergents ioniques et non ioniques
=
dénaturants et non dénaturants
Triton X100
non ionique
-Exemple de protéines membranaires: protéines membranaires du
globule rouge
SDS polyacrylamide-gel
electrophoresis pattern of the
proteins in the human red blood
cell membrane.
The gel in (A) is stained with
Coomassie blue. The positions of
some of the major proteins in the gel
are indicated in the drawing in (B)
-Exemple de protéines membranaires: protéines membranaires du
globule rouge
Architecture des membranes
Modèle de la mosaïque fluide
Fluidité membranaire
Transition conformationnelle de la membrane
Mouvements des lipides membranaires
Mouvements des lipides membranaires
-les translocases: assurent le mouvement transversale des lipides
membranaires= instauration et maintien de l’asymétrie membranaire
Redistribution de fluorescence après photoblanchiment
(fluorescence recovery after photobleaching, FRAP)
Marquage fluorescent de la molécule d’intétret
Inhibition irréversible de sa fluorescence dans une
zone restreinte de l'échantillon
Photoblanchiment de cette zone restreinte à l'aide d'un laser
Si réapparition de la fluorescence dans la zone
restreinte
=
présence de mouvement de molécule
Fluorescence recovery after photobleaching, FRAP
Asymétrie membranaire
Une Méthode d’étude de l’asymétrie des phospholipides
Technique au Trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS)
-Non pérmeant aux cellules
-réagit avec la fonction amine primaire
-les rafts ne sont pas désorganisés par les détergents
-les radeaux sont impliqués dans les synapses immunologiques: donc rôle
important dans les réponses immunitaires.
