TP18 : Identification du genre Bacillus
Compte rendu :
1) Rappeler la définition de la spore
Une spore est une cellule spécialisée montrant une résistance accrue à des facteurs d'environnement
défavorables, notamment à une température élevée, à l'absence d'éléments nutritifs ou à la
dessiccation que diverses espèces bactériennes ont la faculté de former.
2) Gélose de Mossel
2.1) Donner les caractéristiques de cette gélose
La gélose de Mossel est recommandé pour la recherche et la numération des spores et des formes
végétatives de bacillus cereus dans les denrées alimentaires. Il correspond aux caractéristiques d’un
milieu suffisamment sélectif pour détecter de faibles quantités de cellules ou de spores de Bacillus
cereus en présence d’un grand nombre d’autres contaminants des aliments.
2.2) Quel est l’intérêt de l’addition de la polymyxine et du jaune d’œuf stérile
La polymyxine inhibe ou retarde la croissance d’autre espèces, tandis que le jaune d’oeuf améliore la
précipitation et favorise la sporulation. L’addition des deux permet donc de rendre le milieu sélectif.
2.3) Quelles sont les caractéristiques recherchées ?
Les colonies rouges sont mannitol -
Les colonies jaunes sont mannitol + .
Les colonies entourées d'un halo de précipitation sont lécithinase +. En règle générale, le halo trouble
dépasse le halo clair dû à la lipo-protéinase pour Bacillus cereus. Les bactéries cultivant résistent à la
polymyxine.
2.4) La polymyxine a une concentration de 0,010 g.L-1. Nous voulons obtenir une concentration dans
le flacon de 0,1 mg.L-1. Dans la fiche technique, nous devons rajouter 1 mL de jaune d’œuf pour 90
mL de milieu Mossel. Présenter les calculs justifiés des volumes de polymyxine et d’émulsion de
jaune d’œuf stérile nécessaire pour compléter 20 mL de gélose de Mossel.
Polymyxine :
Ci = 0,010 g.L-1 = 10 mg.L-1
Cf = 0,1 mg.L-1
Volume gélose = 20 mL
Vpolymyxine = ( Cf x Vgélose ) / Ci = ( 0,1 x 20 ) / 10 = 0,2 mL
Emulsion de jaune d’oeuf :
1 mL de jaune d’œuf pour 90 mL de milieu Mossel.
Donc pour un volume de 20mL de milieu Mossel (produit en croix)
Vjaune oeuf = ( 20 x 1 ) / 90 = 0,22 mL = 220µL
3) Faire l’organigramme de la manipulation (détailler la technique de la gélose au lait)
4) Sachant que la souche est un Bacillus cereus, prévoir les résultats que l’on devrait
obtenir dans ce TP.
Nous devrions obtenir les résultats suivants :
- Gram : +
- GTS : colonies blanches, aspect granuleux de 2 à 3 mm
- Gram + donc catalase : Catalase +
- Viande Foie : aéro-anaérobie facultatif
- Hugh et Leifson : fermentative
- Gélose Mossel : Lécithinase +, bactérie rose/rouge = mannitol -
- Gélose au lait :
