‫ا‬ ‫ا‬ ‫ا‬ ‫ا ج ائ‬ ‫اج‬

République Algérienne Démocratique et Populaire

‫ا حث ا‬ ‫ا ا‬ ‫ا‬ ‫ا‬
Ministère de L’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique

‫با ف‬ ‫بن ب‬ ‫حس‬ ‫جا‬

Université Hassiba Ben Bouali à Chlef

‫ا‬ ‫ا‬ ‫ا‬

Institut des Sciences Agronomiques

MEMOIRE

Présenté par:

Mr. MEROUANE Abdelaziz

EN VUE DE L’OBTENTION DU DIPLOME DE:

MAGISTER EN AGRONOMIE

Option : Ressources phytogénétiques et développement Durable

THEME:

Caractérisation, activité antimicrobienne et antioxydante

des huiles essentielles de trois espèces de sauges (Salvia
algeriensis, Salvia argentea et Salvia barrelieri).

Soutenu le: 04/07/2013

Devant le jury:

Mr. M’HAMMEDI B. M Professeur Univ Chlef Président

Mr. SAADI. A Maitre de conférences -A- Univ Chlef Promoteur

Mme. MEDJAHED. F Maitre assistant -A- Univ Chlef Co-promotrice

Mr. ADDA. A Maitre de conférences -A- Univ Tiaret Examinateur

Mr. KOUIDRI. M Maitre assistant -A- Univ Chlef Examinateur

Année universitaire: 2012/2013

Dédicace,
 REMERCIEMENTS

Ma première gratitude va au tout-puissant ALLAH (‫ )ه‬, le créateur du

tout, pour me donner la vie, le bénédicité et la force pour accomplir ce travail.
Je suis en effet reconnaissant à mon promoteur, Dr. SAADI. A pour ses
immenses contributions, critiques constructives, patience, compréhension,
conseils, et appui au cours de réalisation de ce travail.
Les relations avec ma Co-promotrice sont toujours uniques et comment
remercier Mme MEDJAHED. F, toujours à l'écoute. Cette thèse n'aurait pas été
possible sans ses conseils, son aide, son appui, son encouragement, sa
patience et ses critiques constructives...Merci et je suis extrêmement
reconnaissant.
Mes remerciements s’adressent également à Mr. M’HAMMEDI
BOUZINA. M, professeur à l’université de Chlef qui me fait l’honneur d’être
le président de jury de mon mémoire.
Je suis également très honorée de la présence, dans ce jury de
Mr. ADDA. A maitre de conférences à l’université de Tiaret.
Je veux également remercier Mr. KOUIDRI. M maitre assistant à
l’université de Chlef, il était toujours prêt à m'aider avec les dosages, les
analyses, la spectrophotométrie UV, l'extraction et les conseils, …etc., toutes
fois que je l'ai approché, et aussi pour avoir accepté d’être un membre de jury.
Mes reconnaissances particulières vont à Mr. BARBAR. M, laborantin à la
clinique privée EL-IHSANE (Chlef), Melle Sara laborantine à L’EPSP de Oued
R’hiou (Relizane) -dont je ne connais pas son nom- et aussi Melle HALIMA
MANSOUR. S doctorante à l’université de Chlef, pour leurs aides dans la
réalisation des tests antibactériens.
Mes remerciements spécifiques de profond de mon cœur vont à mon ami
intime NOUI. A pour son aide, sa disponibilité et son bon accueil. Je veux
également remercier mes amis (es) MEDJAHED. H ; ZABEL. S; NEDJARI BEN

Page i
 REMERCIEMENTS
HADJ ALI. K, ZATOUT. A; YAHIA SAMET. I avec eux j'ai partagé un énorme
paquet de sciences, de rêves et d'amitié.
Je veux bien remercie Melle GADOUCHE. D ingénieur de laboratoire de
Biotechnologie Végétale pour son aide et sa longue patience durant
l’expérimentation.
Je voudrais vivement reconnaître Mr. BENMOUSSA. A surveillant médical
de l’Établissement Publique de Santé de Proximité (EPSP) de Beni-Haoua
pour son accueil et son aide au travail.
Je suis très reconnaissant à tous mes collègues de travail: ACHOUR. F ;
AMRANI. Y; ALI MERINA. Y; AMRANI. F; ASSENINE. Z; BENHENNI. M ;
BOUALI. A; BOUKHELLOUF. S; BOURKAIB. A; MAABOU. S et NEGGADI. W
pour leurs compréhension, gentillesse, sympathie, encouragements et
patience envers moi. Et j’aimerais bien profiter cette occasion pour remercier
tous le personnel de l’EPSP Beni-Haoua.
Je remercie également mes parents, mes frères et sœurs de leurs prières,
encouragements et conseils qui m'ont soutenu et permis d'étudier pendant
toutes ces années.
Enfin, je voudrais passer mes vifs remerciements et excuses à tous ceux
qui mon aidé de prés ou de loin, non cités dans ce mémoire, ils seront toujours
dans ma mémoire.

MEROUANE ABDELAZIZ

Page ii
Liste des abréviations
Liste des tableaux
Liste des tableaux
Introduction

Partie 01 : Synthèse bibliographique

Chapitre 01 : Généralités sur les plantes aromatiques et médicinales (PAM) et les sauges
1.1. Aperçu historique des PAM ---------------------------------------------------------------------------------6
1.2. Le marché des PAM dans le monde ------------------------------------------------------------------------7
1.3. La famille des Lamiaceae ------------------------------------------------------------------------------------8
1.3.1. Présentation botanique ----------------------------------------------------------------------------------8
1.4. Le genre Salvia ------------------------------------------------------------------------------------------------9
1.4.1. Description botanique -----------------------------------------------------------------------------------9
1.4.2. Diversification, taxonomie et distribution géographique ---------------------------------------- 10
1.4.3. Usage et importance des sauges --------------------------------------------------------------------- 12
1.5. Importance économique dans la zone méditerranéenne ------------------------------------------- 13
Chapitre 02 : Substances actives des plantes : Huiles essentielles et Composés phénoliques

2.1. Les huiles essentielles -------------------------------------------------------------------------------------- 14

2.1.1. Définition et historique -------------------------------------------------------------------------------- 14
2.1.2. Répartition et localisation----------------------------------------------------------------------------- 15
2.1.3. Les techniques d'extraction des HE ----------------------------------------------------------------- 16
2.1.4. La composition chimique des HE ------------------------------------------------------------------- 19
2.1.5. Les facteurs influençant la composition des HE -------------------------------------------------- 19
2.1.6. Les propriétés des HE --------------------------------------------------------------------------------- 22
2.1.7. Toxicité des HE ---------------------------------------------------------------------------------------- 26
2.1.8. Applications des HE ----------------------------------------------------------------------------------- 26
2.2. Les composés phénoliques --------------------------------------------------------------------------------- 29
2.2.1. Définition------------------------------------------------------------------------------------------------ 29
2.2.2. Diversité ------------------------------------------------------------------------------------------------- 29
2.2.3. Les flavonoïdes ----------------------------------------------------------------------------------------- 29
2.2.4. Effets des composés phénoliques -------------------------------------------------------------------- 31
Partie 02 : Matériel et méthodes
Chapitre 01 : Matériel et méthodes

1.1. Matériel végétal---------------------------------------------------------------------------------------------- 33

1.1.1. Présentation des espèces étudiées ------------------------------------------------------------------- 33
1.1.2. Récolte et préparation des échantillons ------------------------------------------------------------- 34

Page iii
 1.1.3. Matériel biologique ------------------------------------------------------------------------------------ 35
1.2. Méthodes ----------------------------------------------------------------------------------------------------- 36
1.β.1. Extraction des HE par entraînement à la vapeur d’eau ------------------------------------------- 36
1.β.β. Méthode d’extraction des HE ------------------------------------------------------------------------ 37
1.2.2. Calcul du rendement ----------------------------------------------------------------------------------- 39
1.2.3. Analyse des propriétés organoleptiques et physiques -------------------------------------------- 39
1.2.4. Analyse des propriétés chimiques ------------------------------------------------------------------- 40
1.2.5. Activité antibactérienne des HE --------------------------------------------------------------------- 41
1.β.6. Evaluation de l’activité antioxydante --------------------------------------------------------------- 43
1.2.7. Dosage des composés phénoliques totaux --------------------------------------------------------- 45
1.2.8. Dosage des flavonoïdes totaux ----------------------------------------------------------------------- 47
1.3. Analyses statistiques ---------------------------------------------------------------------------------------- 47
Partie 03 : Résultats et discussion
Chapitre 01 : Caractéristiques et composition des HE

1.1. Extraction et rendement en huile essentielle --------------------------------------------------------------- 49

1.2. Étude des caractéristiques physiques des huiles essentielles -------------------------------------------- 50
1.3. Composition chimique des huiles essentielles ------------------------------------------------------------- 52
1.3.1. Composition chimique des HE de S. algeriensis ----------------------------------------------------- 52
1.3.2. Composition chimique des HE de S. barrelieri ------------------------------------------------------ 54
Chapitre 02 : Activité antioxydante et antibactérienne des HE

2.1. Activité antioxydante des huiles essentielles -------------------------------------------------------------- 59

2.1.1. Activité antioxydante sur CCM ------------------------------------------------------------------------- 59
2.1.2. Activité antioxydante par spectrophotométrie -------------------------------------------------------- 60
2.2. Activité antibactérienne des huiles essentielles ------------------------------------------------------------ 62
2.2.1. Aromatogramme par la méthode des disques --------------------------------------------------------- 62
[Link]. Pouvoir antibactérien des HE de S. algeriensis ------------------------------------------------- 63
[Link]. Pouvoir antibactérien des HE de S. argentea ---------------------------------------------------- 64
[Link]. Pouvoir antibactérien des HE de S. barrelieri --------------------------------------------------- 66
Chapitre 3: Teneur en composés phénoliques et flavonoïques

3.1. Teneur en composés phénoliques et flavonoïques totaux ------------------------------------------------ 69

Conclusion

Références bibliographiques

Annexes

Page iv
 Liste des abréviations
% : Pourcentage.

µg : Microgramme.

µl : Microlitre.

AAR: Activité antioxydante relative.

AFNOR: Association Française de normalisation.

Amp 10 : Ampicilline à 10 microgramme/disque.

BHT: Butylhydroxytoluène.

BMH: Bouillon Mueller Hinton.

CCM : Chromatographie sur couche mince

cm: Centimètre

CMI: Concentration minimale inhibitrice

CRL: Laboratoires Charles River.

DD : Diamètre d’inhibition.

DO: Densité optique

DPPH: 2,2-diphényle-1-picrylhydrazyle.

EAG: Equivalent d’acide gallique.

EQs: Equivalent Quercétine.

FAO: Organisation internationale des aliments et d’agriculture.

FE: Feuilles.

FR: Fleurs.

GC-MS: Chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse.

Gent 50 : Gentamycine à 50 microgramme/disque.

h: heure

HE: Huile essentielle.

Page v
IAEA: Agence internationale de l’énergie atomique.

ISO : Organisation internationale de normalisation.

mg : milligramme.

MHA: Mueller Hinton Agar.

min : Minute.

mm : millimètre.

MS: Matière sèche.

NA : Non actif.

NCCLS: Committee for Clinical Laboratory Standards.

nm : nanomètre.

OMS: Organisation mondiale de la santé.

Oxa 5 : Oxacilline à 5 microgramme/disque.

PAM: Plantes aromatiques et médicinales

S: Salvia

UFC: Unité formant de colonie

USD: Dollar Américain.

UV-V: Ultraviolet à visible.

Page vi
 Liste des tableaux

Tableau I: Dates et lieux de récolte des échantillons de feuilles et de fleurs selon l’espèce de
sauge étudiée…………………………………………………………………………………γ5

Tableau II : Indice de réfraction et densité relative des HE extraites à partir de fleurs et de

feuilles de trois espèces de sauge (S. algeriensis, S. argentea et S. barrelieri)………………50

Tableau III : Composition chimique des huiles essentielles de Salvia algeriensis………….5β

Tableau IV: Composition chimique des huiles essentielle de Salvia barrelieri…………….54

Tableau V: Effet antibactérien des HE de feuilles et fleurs de S. algeriensis contre quelques

espèces de bactéries pathogènes……………………………………………………………..6γ

Tableau VI: Effet antibactérien des HE de S. argentea contre quelques espèces de bactéries
pathogènes……………………………………………………………………………………65

Tableau VII: Activité antibactérienne des HE de S. barrelieri contre quelques espèces de

bactéries pathogènes………………………………………………………………………….66

Tableau VIII : Teneur en composés phénoliques et flavonoïques totaux des extraits de

feuilles (FR) et de fleurs (FR) de trois espèces de sauge……………………………………69

Page vii
 Liste des figures

Figure 01 : Répartition géographique du genre Salvia dans le monde……………………..11

Figure 02: Scanographie des trichomes glandulaires sur la surface des feuilles de sauge
([Link])…………………………………………………………………………………16

Figure 03: différentes classes des composés phénoliques………………………………......γ0

Figure 04: Aspect général des trois espèces de sauge étudiées : Salvia algeriensis(A); Salvia
argentea (B) et Salvia barrelieri(C)…………………………………………………………γγ

Figure 05 : Schéma descriptif de l`installation semi-pilote d`entrainement à la vapeur…...γ7

Figure 06: Ampoule à décanter (A) et Evaporateur rotatif (Rotavapor) (B)……………….γ8

Figure 07 : Rendement (%) en huile essentielle obtenu à partir de fleurs et de feuilles de trois
espèces de sauge (S. algeriensis, S. argentea et S. barrelieri)……………………………….49

Figure 08:révélation de l’activité antiradicalaire des huiles essentielles sur CCM…………59

Figure 09: Les valeurs des IC50 obtenues selon les HE extraites de feuilles (FE) et fleurs (FR)
de S. algeriensis, S. argentea et S. barrelieri et les standards………………………………..60

Figure 10: Taux d’inhibition du test _carotène/acide linoléique obtenus par les huiles de
feuilles (FE) et de fleurs (FR) de Salvia algeriensis, S. barrelieri et S. argentea……………61

Page
viii
Page ix
Introduction

Page 1
 Introduction

INTRODUCTION

Depuis la plus haute antiquité, les plantes ont fait partie de la vie quotidienne de l’homme,
puisqu’elles s’en servent pour se nourrir, se soigner et parfois dans ses traditions
superstitieuses et religieuses. Les propriétés odorantes et thérapeutiques des plantes étaient,
déjà, connues par l’ancienne Egypte et en Chine (FELLAH et al., 2006).

Selon l’organisation mondiale de la santé (OMS), 75 à 95% des populations rurales

(particulièrement dans les pays en développement) font recours à la médecine traditionnelle
faite en grande partie à base de plantes (OMS, 2003).

Il est actuellement prouvé qu’environ β0% des espèces végétales poussant dans le monde
entier possèdent des vertus thérapeutiques ou cosmétiques, car elles contiennent des
molécules ou des principes actifs à différentes propriétés biologiques, qui trouvent leur
application dans divers domaines (médecine, pharmacie, cosmétologie et agriculture, etc.)
(SUFFREDINI et al., 2004). Parmi ces molécules ou ces constituants chimiques figurent les
huiles essentielles.

Avec l’apparition des effets secondaires des médicaments synthétiques et l’augmentation

de la résistance des microorganismes pathogènes vis-à-vis des antibiotiques classiques, une
bonne partie des recherches scientifiques s’orientent actuellement vers la voie de l’usage des
extraits biologiques actifs des plantes aromatiques et médicinales, notamment vers les huiles
essentielles (ESSAWI et al., β000). C’est une voie très prometteuse et très efficace pour lutter
contre les germes bactériens et même les virus puisqu’elle ne présentent, à long terme, aucune
résistance de la part des organismes bactériens (LIS-BALCHIN et al., 1997 ; SAXENA,
1997).La complexité des constituants chimiques des huiles essentielles rend extrêmement
difficile aux germes bactériens de développer une résistance.

En plus des huiles essentielles, les plantes constituent aussi une source importante de
substances naturelles (molécules) qui présentent un grand potentiel antioxydant (LIS-
BALCHIN et al., 1997). Le développement et l'utilisation de ces substances antioxydantes
efficaces, d'origine naturelle, sont hautement désirés (KIVRAK et al., 2009). Ces molécules
assurent la protection des cellules du corps des dommages causés par les radicaux libres
(molécules très réactives qui seraient impliquées dans le développement des maladies

Page 2
 Introduction

cardiovasculaires, de certains cancers et d’autres maladies liées au vieillissement)

(WILLCOX et al., 2004).

Les molécules antioxydantes naturelles, contrairement aux synthétiques, semblent être

très privilégiées par les utilisateurs dans l'industrie alimentaire afin d’empêcher la
détérioration oxydante des denrées par les radicaux libres. En effet, l’emploi d’antioxydants
synthétiques tels que le butylhydroxyanisole (BHA), le butylhydroxytoluène (BHT), et le tert-
butylhydroquinone (TBHQ), sont suspectés d'avoir des effets secondaires cancérogènes
(AMES, 1983).

L’Algérie, compte parmi les pays du bassin méditerranéen les plus riches en
ressources phytogénétiques à intérêt aromatique et médicinal, vu la diversité de ses étages
bioclimatiques. On dénombre à plus de 300 espèces à usage thérapeutique ou aromatique
existant parmi les 3 150 espèces végétales que compte notre pays (MOKKADEM, 1999).

Le genre Salvia, de la famille des labiées ou lamiacées, font partie de la gamme variée
des plantes médicinales et aromatiques spontanées caractérisant la flore Algérienne. Le genre
en question compte, à lui seul, plus de 900 espèces, (BEKTAS et al., 2005; KIVRAK et al.,
2009). Les espèces décrites en Algérie sont au nombre de dix huit (QUEZEL ET SANTA,
1963)

De par le monde, ces espèces (à grande valeur ajoutée) occupent une place
économique très privilégiée. Les huiles essentielles extraites à partir de ces espèces, possèdent
un large spectre d’utilisation. Elles sont utilisées en phytothérapie et en aromathérapie pour
traiter l'anxiété, la nervosité, et les insomnies, mais aussi pour soulager les rhumatismes et
soigner les infections des voies respiratoires. Outre leur application dans le domaine de la
phytothérapie et de l’aromathérapie, ces huiles entrent aussi dans d’autres domaines dans les
préparations culinaires, les confiseries, en cosmétique et parfumerie, etc. (KARAMAN et al.,
2007). Les huiles de ces espèces possèdent également des propriétés antibactérienne et
antifongique (BARICEVIC et BARTOL, 2000).

Page 3
 Introduction

Malgré leur importance (en termes de diversité et de superficies couvertes dans la

région de Chlef) très peu d’étude ont été conduites sur les espèces de sauge d’Algérie (dont
certaines sont endémiques comme les Salvia algeriensis en vue de les préserver ou les
valoriser. La présente étude s’inscrit dans ce contexte et vise à déterminer la composition
chimique des huiles essentielles extraites, de feuilles et de fleurs, de trois espèces de sauges
spontanées (Salvia algeriensis, Salvia argentea et Salvia barrelieri). Certaines propriétés
biologiques des huiles comme l’activité antibactérienne et antioxydante seront également
étudiées. Nous avons aussi procédés au dosage des composés phénoliques et flavonoïques
totaux extraits de feuilles et de fleurs des trois espèces étudiées.

Page 4
 Synthèse
bibliographique

Page 5
 PARTIE I : Synthèse bibliographique

Chapitre 1 : Généralités sur les plantes aromatiques et médicinales (PAM) et les sauges

1.1. Aperçu historique des PAM

L’histoire des plantes aromatiques et médicinales est intimement liée à l’évolution des
civilisations. Dans toutes les régions du monde, l’histoire montre que l’homme s’est toujours
servi des plantes pour se nourrir, s’habiller, s’abriter, chasser et se soigner (COCK, 2011). La
connaissance des préparations médicinales et de leur potentiel toxique a été transmise au
cours des générations par la tradition orale et parfois transcrite en littérature des remèdes en
herbes.

Les premiers documents ayant décrit l'utilisation des plantes en médecine datent de plus
de 6000 ans. Les tablettes d'argile Sumériennes (4000 av. J. Christ) détaillent l’utilisation de
plus de 1000 plante médicinales et aromatiques (AFZAL et ARMSTRONG, 2002 ; LEVETIN
et MCMAHON, 2003).

Le Pun-tsao, un document chinois contient des milliers de traitements en extraits

végétaux date d’environ β500 av. J. Christ. Le corpus Hippocratique (une collection des textes
de médication en plantes) par le médecin Grec HIPPOCRATE a été écrit vers la fin du
cinquième siècle avant Jésus Christ et des écritures romaines ˝De Materia Medica˝ par
DISCORIDES, documentent plus de 600 espèces avec leurs valeurs médicinales (LEVETIN
et MCMAHON, β00γ). Ces références historiques n’ont pas seulement une valeur
anthropologique ou archéologique, mais elles nous fournissent une compréhension des
préparations médicinales des plantes antiques, dont certaines sont toujours actuellement en
service.

En Moyen-Orient, notamment l’ère Arabo-musulmane a aussi connu ses lettres de

noblesse dans la pratique de la médicine par les plantes. Nous pouvons citer quelques noms de
savants célèbres comme ABU BAKR AL-RAZI ou RHAZES (865-925), persan d'origine,
qui fut l'un des grands médecins de son temps et aussi le précurseur de la psychothérapie. Il
fut suivi par IBN-SINA ou AVICENNE (980-10γ7) qui écrivit à Téhéran une œuvre qui
s'intitule Canon de la médecine. Mais le plus grand d'entre eux fut sans aucun doute IBN AL-
BAYTAR (1197-1248) qui rédigea, en Orient, le très complet Somme des Simples (livre qui
contenait une liste de 1400 préparations et plantes médicinales) (HENNEZEL-
WHITECHURCH, 2007).

Page 6
 PARTIE I : Synthèse bibliographique

Vers le XVème siècle, Christophe Colomb et Vasco De Gama, rapportent de leurs

expéditions des plantes médicinales. On parle des "Plantes de la Découverte". Au XVI ème
siècle, Paracelse définit la notion de principe actif. Des recherches se font sur la morphologie
des plantes pour expliquer leur activité thérapeutique. On parle de la "Théorie des signatures".

Depuis, l'homme n'a cessé de poursuivre sa quête vers la connaissance des plantes, leurs
secrets et leurs vertus bénéfiques. Aujourd'hui, les progrès de la science sont tels que de
nouveaux horizons s'ouvrent pour la phytothérapie : nouvelles méthodes scientifiques de
pointe pour connaître les principes actifs des plantes, découverte de nouvelles propriétés,
nouvelles formes d'utilisation plus pratiques, conçues pour s'adapter aux besoins de la vie
actuelle. Désormais, les plantes sont devenues d'authentiques médicaments (WALSH, 2003).

1.2. Le marché des PAM dans le monde

Les statistiques des nations unies basées sur l'exportation et l'importation de 162 pays
pour la période 1991 à 2000, rapportent 2924 produits frais ou sec, écrasé ou en poudre
d’origine de 1β11 plantes médicinales ou aromatiques. Ces produits se composent
principalement des racines, des feuilles, de l'écorce, du bois, des fleurs, des graines sèches, ou
parfois, de plusieurs parties ou même d’une plante entière, si les constituants exigés sont
répartis dans plusieurs organes (LANGE, 2004).

L'importance globale des PAM est énorme. Dans les années quatre vingt dix, son
importation globale annuelle est rapportée à 400 000 tonnes avec une valeur de 1.224 trillion
de dollar Américain (USD). Ce secteur est dominé seulement par peu de pays: 82 % de
l'importation mondiale est occupée par 12 pays et 12 pays étaient responsables de 80 % de
l'exportation globale des PAM. Le rôle de l'Asie et de l'Europe dans ce commerce est
dominant, car les pays de l'Asie tempérée sont responsables de 42 % de l'importation
mondiale annuelle et l'Europe de l’un tiers (LANGE, β004; LANGE, 1997).

En effet, Hong Kong est le premier importateur important des PAM avec une moyenne
annuelle de 67000 tonnes, il est suivi du Japon avec une importation moyenne d'environ 51
350 tonnes puis des Etats-Unis avec 49 600 tonnes par an. L'Allemagne suit dans la 4ème place
avec une moyenne de 45 350 tonnes par an, dans la suite respectivement on trouve la France,
la Chine, l’Italie, le Pakistan, l’Espagne, le Royaume-Uni et la Singapore. Du côté
exportation, la Chine est à la tête de la liste des pays principaux exportateur du monde. Elle a
exporté en moyenne environ 147 000 tonnes dans la période 1991-2000. Ces quantités

Page 7
 PARTIE I : Synthèse bibliographique

représentent le double de celles exportées de Hong Kong (63 150 tonnes y compris les
réexportations), et quatre fois plus hautes que les quantités exportées d'Inde (33 900 tonnes),
et de dix fois plus hautes que celles d'Allemagne (15 100 tonnes) et des Etats-Unis (13 500
tonnes), le reste des pays exportateurs sont respectivement le Mexique, l’Egypte, le Chili, la
Bulgarie, la Singapore, le Maroc et le Pakistan (LANGE, 2004).

En conséquence, le Japon est le premier consommateur, suivi des Etats-Unis, de

l'Allemagne et de la Corée du sud, et encore les quatre pays européens: la France, l'Italie, le
Royaume-Uni et l'Espagne. Dans ces pays européens, la matière première des PAM est
principalement traitée par l’industrie, puis vendue comme produits finis dans les marchés
locaux ou exportée. Sur l’autre côté, la Chine est le premier fournisseur de la matière première
des PAM, suivi de l'Inde en Asie. Dans l'Europe, la Bulgarie et l'Albanie sont les principaux
pays de source des PAM, dans l'Amérique du Nord, le Mexique, et en Afrique, l’Egypte et le
Maroc (LANGE, 2004 ; LANGE, 1998).

1.3. La famille des Lamiaceae

1.3.1. Présentation botanique

La famille des Lamiacées (Lamiaceae ou Labiateae) est une famille botanique très large.
La majorité de ces espèces ont une grande importance, vu leurs valeurs économiques
(DUARTE et LOPEZ, 2007). Elle comporte environ 264 genres et 6990 espèces
(GURCHAN, 2004) d’herbes, parfois arbre ou arbustes, annuelles ou pluriannuelles,
habituellement aromatiques à tiges quadrangulaires. Les feuilles opposées, rarement
verticillées ou alternées, simples à pennées ou composées, sans stipules (LIHSI et al., 1994).

L’inflorescence est généralement composée, parfois par des fleurs solitaires ou en cyme,
verticillée de deux à plusieurs fleurs. les fleurs bisexuées, zygomorphes (HILAN et al., 2006).
Le calice est tubuleux ou en cloche persistant à cinq dents et deux lèvres; la lèvre supérieure
tridentée ou entière; la lèvre inférieure bidentée ou quadri-dentée. La corolle a souvent deux
lèvres; la lèvre supérieure bilobée rarement entière, la lèvre inférieure fragmentée de 3 à 5
lobes. Les étamines sont libres au nombre de deux à quatre, rarement apparentés (LIHSI et
al., 1994). L’ovaire varie depuis le type arrondit jusqu'à celui de profondément 4-lobé et le
style terminal à gynobasique (WALTER et al., 2002).

Page 8
 PARTIE I : Synthèse bibliographique

Le fruit, est composé d’habitude de quatre noyaux, une gousse indéhiscente à quatre
graines ou un schizocarpe (tétrakène lisse) pouvant rarement avoir un aspect charnu ou
drupacé, la graine, pratiquement exhalbuminée, avec ou sans endosperme (HANNEBELLE,
2006; LIHSI-WEN, 1994).

Les lamiacées possèdent un appareil sécréteur externe, constitué par des poils sécréteurs
à essence. Elles vivent dans des endroits secs et présentent des adaptations leur permettant de
résister à la transpiration: feuilles velues à limbe replié par-dessous, à stomates enfoncés, à
hypoderme collenchymateux très développé (CRETE, 1965).

Les espèces de la famille des lamiacées sont considérées comme étant les plus évoluées
parmi toutes les plantes dicotylédones. Elles sont distribuées dans les différentes zones
tempérées du monde entier, mais concentrées en grande partie dans la région
méditerranéenne. Cette famille inclut plusieurs espèces utilisées dans la cuisine, la
phytothérapie et la cosmétologie notamment celles appartenant aux genres: Lavandula,
Mentha, Stachys, Thymus, Rosmarinus et Salvia (GURCHAN, 2004).

1.4. Le genre Salvia

1.4.1. Description botanique

Le genre Salvia comprend des espèces annuelles, bisannuelles ou vivaces. Les tiges
sont généralement quadrangulaires inclinées comme les autres membres de la famille des
lamiacées. Les feuilles sont généralement entières, mais parfois dentées ou pennées. Les
hampes florales portent de petites bractées inégales (SCULLY, 2008).

Les fleurs se regroupe en inflorescences de type grappes ou panicules, et produisent

généralement un joli étalage formé de fleurs dont les couleurs vont du bleu au rouge, et
moins souvent du blanc au jaune. Le calice est tubulaire ou en forme de cloche. La corolle est
formée de deux lèvres. La lèvre supérieure est généralement entière ou à trois dents. La lèvre
inférieure a généralement deux lobes. Les étamines sont réduites à deux structures courtes
avec deux cellules d’anthères, la cellule supérieure fertile, et l'inférieure stérile. Les fruits sont
ovoïdes lisses ou nutlets oblongues et dans de nombreuses espèces ils ont un revêtement
mucilagineux (SUTTON, 1999).

Page 9
 PARTIE I : Synthèse bibliographique

Beaucoup de sauges sont pourvus de trichomes (poils) au niveau des feuilles, des tiges
et des fleurs. Ces organes aident à réduire la transpiration (perte d'eau) chez certaines espèces.
Parfois, les poils sont glandulaires et sécrètent des huiles volatiles donnant généralement une
odeur distincte de la plante. Lorsque les poils sont frottés ou brossés, certaines des cellules
oléifères sont rompues, libérant ainsi l'huile essentielle. Souvent les sauges sont peu
attrayantes pour les animaux de pâturage et certains insectes (SUTTON, 1999).

1.4.2. Diversification, taxonomie et distribution géographique

Le genre Salvia est considéré comme étant le genre le plus large et le plus important de la
famille des lamiacées (Lamiaceae ou Labiatae) (BAGCI et al., 2008 ; WALTER et al., 2002).
Il rassemble, à lui seul, plus de 900 espèces identifiées autour du monde (BEKTAS et al.,
2005; KIVRAK et al., 2009).

Le nom vernaculaire « sauge » est attribué aux différentes espèces aromatiques du genre
Salvia (KAROUSOU et al., 2000).Le nom scientifique de la sauge indique clairement
l'importance de son rôle en phytothérapie : Salvia vient de « salvare » qui, en latin, signifie
«sauver» (BARAN, 2010; ULUBELEN, 2000 ; BARICEVIC et al., 2000; NICOLETTE et
al., 2000; STANLEYet al., 2000). Ce nom est corrompu populairement en « Sauja » et
« Sauge » en Français et « Sawge » en ancien anglais, devenu actuellement « Sage », en
référence à ces propriétés médicinales, connues depuis les anciennes civilisations
(ANTHONY, 2000).

En Algérie, les espèces qui ont été déterminées sont au nombre de dix huit : Salvia
Balansae de Noé ; S. officinalis L. ; S. Chudaei Batt. et Trab. ; S. triloba L. fils ; S.
lavandulaefolia Vahl. ; S. Aucheri Benth. ; S. phlomoides Asso. ; S. Jaminiana de Noé ; S.
verbenaca (L.) Briq. ; S. Horminum L. ; S. aegyptiaca L. ; S. silvestris L. ; S. tingitana
Ette. ; S. Sclarea L. ; S. Æthiopis L. ; S. algeriensis Desf. ; S. Barrelieri Ettling. et S.
argentea L. (QUEZEL ET SANTA, 1963)

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 PARTIE I : Synthèse bibliographique

Selon QUEZEL et SANTA, (1963) le genre Salvia appartient à la classification suivante :

Règne: Plantes

Sous règne: plantes vasculaires

Embranchement: Phanérogames

Sous Embranchement: Angiospermes

Classe: Magnoliopsida

Sous classe : Astéride

Ordre: Lamiales (Labiales)

Famille: Lamiacées

Genre: Salvia

Les espèces Salvia représentent un groupe d’espèces cosmopolites, qui montrent une
gamme remarquable de variation (PISTELLI, 2006). Ce genre est distribué dans trois régions
principales dans le monde:5γ0 espèces à l’Amérique centrale et latine, β50 espèces en Asie
centrale et en régions méditerranéennes, γ0 en Afrique du Sud et 90 espèces en Asie de l’Est
(figure 01) (WALKER et al., 2004).

Figure 01 : Répartition géographique du genre Salvia dans le monde,

selon WALKERet al.,(2004).

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 PARTIE I : Synthèse bibliographique

1.4.3. Usage et importance des sauges

La majorité des espèces du genre Salvia sont utilisées à des fins diverses : aliments,
médicaments, parfums et produits cosmétiques (BAGCI et al.,, 2008 ; KARAMAN et al.,
β007). Dès l’antiquité, quelques membres de ce genre ont servi à parfumer et à odorer les
corps et les temples (ARSLAN et al., 2008).

[Link]. Usages pharmaceutiques

Les sauges ont été employées comme des plantes à propriétés médicinales salutaires
pendant des milléniums. La sauge était un composant fréquent des mélanges de tisanes,
recommandés pour les patients tuberculeux. L'huile essentielle de la sauge est encore utilisée
en condiments d'assaisonnement, viandes traitées et liqueurs. Outre ces utilisations, les
feuilles de la sauge (S. officinalis), montrent une gamme des activités biologiques;
antibactérienne, antifongique, antivirale et astringente (BARICEVIC et BARTOL, 2000).

La sauge est avérée active dans les préparations combinées pour le traitement de la
bronchite aiguë et chronique. Les études in vivo, montrent que les extraits de sauge ont un
effet hypotensif et déprimant sur le système nerveux central (NEWALL et al., 1996), et vu
leurs activités antimicrobiennes et astringentes, ces extraits entrent souvent dans la
constitution des dentifrices (FARAG et al., 1986).

Malgré tous ces bienfaits des espèces de sauges et de ses préparations commerciales,
leurs utilisations doivent être contrôlées. L’inhalation ou l’ingestion des huiles essentielles de
la sauge officinale sont avérées provoquant des convulsions qui proviennent de l’effet sur le
système nerveux central (GRIMAUD-GASPARI, 1979).

[Link]. Usages cosmétologiques

Les espèces Salvia ont un grand intérêt en cosmétologie, dont les extraits de S. officinalis
et S. lavandulaefolia sont largement introduits dans les produits de beauté et les parfums
(NICOLETTE et al., 2000). La sauge est peut être utilisée comme compresse ou infusion ou
même dans les préparations des masques de visage et leurs crèmes sont souvent appliquées
sur des blessures froides près de bouches (BACK, 1987).

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 PARTIE I : Synthèse bibliographique

[Link]. Usages alimentaires

Au Mexique et à l'Amérique latine, les graines de quelques espèces de sauge sont

intensivement employées par les Américains indigènes comme source de nourriture et aussi
pour préparer ses boissons (NOLL, 1951).

La découverte des antioxydants a augmenté l’usage des extraits de sauge officinale

connue par son activité antioxydante élevée (KÜPELI AKKOL et al., 2007) due
essentiellement à l’acide Rosmarinique et l’acide carnosique (CUVELIER et al., 1994), afin
de protéger les denrées alimentaires contre la détérioration oxydative (MADSEN et
BERTELSEN, 1995).

1.5. Importance économique dans la zone méditerranéenne

Le commerce des sauges dans le monde est moins développé comparativement à la

lavande et il concerne essentiellement: Salvia officinalis, S. fruticosa, S. lavandulaefolia, S.
verbenaca, S. sclarea et S. tomentosa. Les statistiques de l’année 1996 montre que l’Espagne
a produit plus de 40 milles tonnes d’HE de S. lavandulaefolia avec un rendement qui varie
entre 0,8 à 1 % (P/P), alors que le Maroc et la Turquie, considérés comme des pays sources de
la matière première, ont exporté 81,4 tonnes de feuilles sèches de S. officinaliset S. verbenaca
et 68,1 tonnes de feuilles sèches de S. fruticosa respectivement, ce qui évalué à environ 1,5
million USD dans le cas de la Turquie ( HUSNU CAN BASER, 2000).

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 PARTIE I : Synthèse bibliographique

Chapitre 2: Substances actives des plantes : Huiles essentielles et

Composés phénoliques

2.1. Les huiles essentielles

2.1.1. Définition et historique

Selon la norme AFNOR: "les huiles essentielles (HE) sont des produits obtenus à partir
d'une matière végétale, soit par entraînement à la vapeur d'eau, soit par des procédés
mécaniques, soit par distillation à sec et qui sont séparés de la phase aqueuse par des procédés
physiques (AFNOR, 1989).

Le terme « huile essentielle » a été conçu empiriquement. Le mot « huile » souligne le

caractère visqueux et hydrophobe de ces substances; cependant, le mot «essentielle» se
comprenant comme étant le caractère principal de la plante (BERNARD et al., 1988).
Certaines huiles pressées à froid sont considérées comme étant des huiles essentielles, malgré
leur composition chimique qui est faite principalement de triglycérides et d’acides gras sans
composants de parfum d'huiles essentielles, comme l’huile de pépins de raisin et l'huile de
noix de coco (BALANDRIN et al., 1985).

Sur le plan historique, les grandes civilisations connues pour avoir utilisé les plantes
aromatiques sont : l'Inde, la Chine et le bassin méditerranéen. Ces civilisations ont légué à
l'humanité des procédés et des connaissances dans le domaine des huiles essentielles dont la
validité est toujours d'actualité. Selon NTEZURUBANZA (2000), l'histoire de
l'aromathérapie, qui est celle des HE, peut se résumer en quatre époques :

- L'époque où les plantes aromatiques étaient utilisées telles quelles ou en infusion

ou en décoction ;
- Ensuite celle, dans laquelle les plantes aromatiques étaient brûlées ou mises à
infuser ou à macérer dans une huile végétale. A cette époque, intervient la notion
d'activité liée à la substance odorante ;
- La troisième époque correspond à la recherche de l'extraction de cette substance
odorante. Il apparaît le concept "HE" qui aboutit à la création et au développement
de la distillation ;

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 PARTIE I : Synthèse bibliographique

- Enfin, la dernière époque qui est la période moderne dans laquelle la connaissance
des composants des HE intervient et explique les effets physiques, chimiques,
biochimiques, physiologiques, voire électroniques des arômes végétaux.
- Ainsi, l'industrie des plantes médicinales est devenue, en peu de temps, le secteur
de l'industrie pharmaceutique connaissant la plus forte croissance annuelle, soit 15
à 20% (SMALL et CATLING, 2000).

2.1.2. Répartition et localisation

C’est souvent chez les végétaux supérieurs qu’on rencontre les HE. Les plantes qui les
élaborent sont réparties dans un nombre restreint de familles comme : Lamiaceae, Apiaceae,
Asteraceae, Cupressaceae, Lauraceae, Myrtaceae, Poaceae, Rutaceae, etc.) (DESMARES et
al., 2008). On les rencontre dans tous les organes végétaux ; écorce (cannelier) ; rhizomes
(gingembre) ; racines (vétiver) ; bois (camphrier) ; feuilles et sommités fleuries (lavande).
Elles peuvent être présentes à la fois dans différents organes avec une composition variante
d’un organe à l’[Link] teneur en HE d’un végétal varie selon l’espèce et elle est de l’ordre
de 1% à 3 % : (géranium: 0,15-0,3%) ; (vétiver: 1-2,5%) ; (ylang-ylang: 1,6-2,0%) ;( rose de
Provence: 0,007%). Il existe, cependant, quelques exceptions comme les clous de girofle (15-
20%) ou la badiane de Chine (5%) (SMAJDA, 2009).

La production d’HE dans les plantes est, généralement, associée avec la présence des
structures spéciales sécrétrices ; des cellules sécrétrices, des poils sécréteurs, des poches
sécrétrices, des canaux sécréteurs et des trichomes glandulaires qui existent dans toutes les
parties aériennes de la plante (KAROUSOU et al., 2000 ; SMAJDA, 2009).

Chez les lamiacées, l’organe sécréteur majeur est le trichome glandulaire (figure 02)
(VENKATACHALAM et al., 1984). Deux types de trichomes sont décrits, les trichomes
peltates et les trichomes capitates, qui sont distingués l’un de l’autre par la structure et le
mode de sécrétion. Le premier est formé d’une base cellulaire épidermique, un col cellulaire
et une tête de 4-16 cellules. Dans les trichomes matures, la sécrétion est accumulée au large
de l’espace sub-cuticulaire, qui forme au-dessus les cellules sécrétrices. Les trichomes
capitates sont très différents en forme (court, long, avec une tête unicellulaire ou
pluricellulaire) (MALECI, 2006).

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 PARTIE I : Synthèse bibliographique

Figure 02: Scanographie des trichomes glandulaires sur la surface des feuilles de sauge
(S. officinalis) (VENKATACHALAM et al. 1984).

2.1.3. Les techniques d'extraction des HE

Parmi les paramètres qui influencent fortement la composition chimique des huiles, on
retrouve la technique d’extraction. En effet, le choix d’une technique d’extraction approprié à
une plante donnée reste une étape très importante puisqu’elle peut avoir des répercussions et
sur le rendement et sur la qualité de l’huile produite. Il existe plusieurs techniques
d’extraction. Les plus importantes peuvent être résumées comme suit :

[Link]. Enfleurage et Macération

Cette technique, la plus ancienne, très coûteuse et peu employée aujourd'hui. On

l’emploie pour des fleurs sensibles, ne supportant pas un chauffage trop élevé, comme par
exemple le jasmin, la violette et la rose. Les fleurs sont mises à macérer dans des graisses ou
des huiles et chauffées (bain-marie ou soleil) et étalées sur des châssis en bois pendant
plusieurs jours. Une fois gorgés de parfum, les corps gras sont filtrés au travers de tissus de
lin ou de coton. Les huiles sont ensuite lavées a l’alcool pur, filtrées et évaporées
(BRUNETON, 1993 ; SOUSA et al., 2002 ; ADIO, 2005).

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 PARTIE I : Synthèse bibliographique

[Link]. Extraction par expression à froid

L’expression à froid est réservée à l’extraction des composés volatils dans les péricarpes.
Il s’agit d’un traitement mécanique qui consiste à déchirer les péricarpes riches en cellules
sécrétrices. L’essence libérée est recueillie par un courant d’eau, puis séparé par décantation
(AFNOR, 1986).

[Link]. Extraction par distillation

Selon BENJILALI (2000), Il existe trois méthodes de distillation qui repose sur le
principe d’entraînement des constituants volatils du matériel végétal par la vapeur d’eau :
l'hydrodistillation, la distillation à la vapeur d'eau ou évapohydrodistillation et la distillation à
la vapeur directe.

La différence entre ces trois modes réside dans le degré de contact entre l'eau liquide et le
matériel végétal. Dans le premier type, le matériel végétal se trouve en contact direct avec
l'eau bouillante. L’évaporation de l'eau dans l'alambic peut être réalisée par chauffage direct
ou par injection de vapeur surchauffée. La seconde technique utilise une grille ou une plaque
perforée placée à une distance adéquate du fond de l'alambic, permettant d’éviter le contact du
matériel végétal avec l’eau. La distillation à la vapeur directe utilise aussi la grille, sauf que
cette fois il n’y a pas d'eau au fond de l'alambic. La vapeur provient d'une chaudière
indépendante et traverse la masse végétale de bas en haut (BOARD, 1999).

[Link]. Hydrodiffusion

Cette technique consiste à faire passer, du haut vers le bas et à pression réduite, la vapeur
d'eau au travers de la matrice végétale. L'avantage de cette méthode est d'être plus rapide donc
moins dommageable pour les composés volatils. Cependant, l'HE obtenue avec ce procédé
contient des composés non volatils, ce qui lui vaut une appellation spéciale: « essence de
percolation » (FRANCHOMMEET al., 1990 ; RICHARD, 1992).

[Link]. Extraction par micro-onde

La technique d’extraction par micro-onde a été développée au cours des dernières

décennies pour des fins analytiques. Le procédé d’extraction est basé sur l’absorption de
l’énergie de la micro-onde par les composantes du matériel végétal et qui sont mesurées par

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 PARTIE I : Synthèse bibliographique

une constante diélectrique. Cette absorption dépend aussi de la fréquence de l’onde et de la

température du matériel végétal (BENAYAD, 2008).

[Link]. Extraction par solvant organique

Cette technique est basée sur la solubilité des essences aromatiques dans les solvants
organiques. Les solvants les plus utilisés actuellement sont l’hexane, cyclohexane, l’éthanol
moins fréquemment, le dichlorométhane et l’acétone. L’emploi de cette méthode est limité
par son coût, les problèmes de sécurité et de toxicité, ainsi que la règlementation liée à la
protection de l’environnement (LAGUNEZ RIVERA, β006).

[Link]. Extraction par fluide à l’état supercritique

L’extraction par gaz liquéfié ou par fluide à l’état supercritique met en œuvre
généralement le dioxyde de carbone vu son inertie et inflammabilité. Dans ce système le
solvant est utilisé en boucle par interposition d’échangeurs de chaleur afin de porter le solvant
à l’état désiré à chaque stade du processus. La séparation de l’extrait a lieu en phase gazeuse
par simple détente (MOURA et al., 2005).

Cette technique présente énormément d'avantages. Tout d'abord, le CO 2 supercritique est

un solvant idéal puisqu'il est naturel, inerte chimiquement, non toxique, sélectif, aisément
disponible et peu coûteux. De plus, il s'élimine facilement de l'extrait sans laisser de résidus.
Outre ces avantages, le principal point fort est la qualité irréprochable de l'extrait
puisqu'aucun réarrangement ne s'opère lors du processus. Son unique point faible est le coût
très élevé de son installation (PELLERIN, 1991). En jouant sur les conditions de température
et de pression, il est possible de rendre l'extraction plus sélective aux composés odorants et
ainsi obtenir des extraits de composition tout à fait semblable aux huiles essentielles, non
chargé en molécules non volatils. Ainsi, la température et la pression à ne pas dépasser pour
extraire uniquement les principes volatils est 60 °C et 60 bars (RICHARD, 1992). Cette
technique est aujourd'hui considérée comme la plus prometteuse car elle fournit des extraits
volatils de très haute qualité et qui respecterait intégralement l'essence originelle de la plante
(WENQIANG et al., 2007).

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18
 PARTIE I : Synthèse bibliographique

2.1.4. La composition chimique des HE

Les HE sont des mélanges complexes et très variables des composants qui appartiennent
à deux groupes : les composés terpénoïdes et les composés aromatiques, dont les
monoterpènes qui sont formés de deux molécules d’isoprènes constituent les principales
composés terpénoïdes, avec présence des diterpènes et des sesquiterpènes (SEIGLER, 1998).
Les composés aromatiques sont des dérivés contenant le noyau benzénique. Ces deux groupes
sont accumulés dans tous les types d'organes végétaux : fleurs, feuilles, écorces, bois, racine,
rhizomes, fruits et graines (BRUNETON, 1999). Il est observé que les HE lorsqu'ils sont
produites dans différents organes de la même plante présentent des profils de composition
chimique différentes (BALANDRIN et al., 1985).

Les HE sont principalement composées des monoterpènes et sesquiterpènes avec la

formule générale (C5H8)n (BAUER et al., 2001). Les composés oxygénés dérivés de ces
hydrocarbures comprennent les alcools, les aldéhydes, les esters, les éthers, les cétones, les
phénols et les oxydes. Ces composants sont regroupés en composés majeurs et mineurs selon
leurs pourcentages dans l’HE (OKOH, 2010).Les composés majeurs peuvent constituer
jusqu'à 85 % de l'HE, alors que d'autres composés sont présents uniquement sous forme de
trace (SENATORE, 1996).

2.1.5. Les facteurs influençant la composition des HE

La composition des HE d’une espèce donnée dépend de plusieurs facteurs d’origine

intrinsèques (spécifiques de l’équipement génétique de la plante) et extrinsèques (liées aux
conditions environnementales de la plante). Ces facteurs peuvent influencer à la fois et la
quantité et la qualité des huiles produites. Le temps de récolte, l'humidité relative, la
photopériode, la méthode d'extraction, la position de l’organe sur la plante (son
emplacement), les techniques culture des plantes aromatiques si elles sont cultivées, la
structure du sol et le climat font partie de ces facteurs (PANIZZI et al., 1993).

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 PARTIE I : Synthèse bibliographique

[Link]. Les facteurs Intrinsèques

a. Facteur génotypique

Les variations de la composition des HE provenant d’un même phénotype se développant

dans le même environnement sont l’expression de différences génotypiques. Elles peuvent
être attribuées à des hybridations, à un polymorphisme génétique ou à des mutations
(polyploïdies, aberration chromosomique).

- Les hybridations introduisent une hétérogénéité dans un peuplement végétal et sont

à l’origine de modifications dans la composition chimique des essences ;
- En cas de polymorphisme génétique, la composition de l’HE varie au sein du
même genre (BERNARD et al., 1988) ;
- La composition des HE change selon les races chimiques ou chémotypes ou
parfois des formes physiologiques quand il s’agit de la même espèce (GARNERO,
1985) et HEINRICH et al., 1983).
- Les facteurs de mutation, qui conduisent à des cas de polyploïdies, favorisent une
augmentation du rendement avec une fluctuation de la composition chimique
(GARNERO, 1985).

b. Facteur structural

Le potentiel et la composition de l’essence dépendent de l’organe. Ainsi la racine,

l’écorce et les feuilles peuvent produire des HE différentes (PINGOT, 1998). Ils dépendent
également de la nature des glandes sécrétrices. Selon HEINRICH et al. (1983), les poches
situées dans l’exocarpe ou dans l’endocarpe des fruits de Poucirus trifoliota génèrent des
essences qui différent en monoterpènes et sesquiterpènes.

La position de l’organe végétal (sur la plante mère) qui sert à l’extraction des huiles
influence à son tour la composition chimique. Selon ALFATUNI (2005), pour obtenir une
composition parfaite d’HE à partir des feuilles, il est conseillé de les récolter de la partie
basale de la plante, puisqu’elles contiennent plus de menthol et donnent une huile renfermant
la majorité des composés d’autres organes.

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 PARTIE I : Synthèse bibliographique

c. Facteur évolutif

La biosynthèse des principes odorants évolue lors de la maturation de la plante. Elle est
prédominante pendant les périodes de forte croissance ou pendant celles correspondantes à
des activités métaboliques intenses telles que la floraison et la fructification (BERNARD et
al., 1988). Une récolte précoce ou tardive entraîne un faible rendement en HE. Pour certains
auteurs, ils recommandent de récolter la plante après l’achèvement de la floraison pour
obtenir un rendement élevé en HE (PANIZZI et al., 1993).

Toujours, dans ce même registre, DELAQUIS (2002) signale que les huiles produites
durant ou immédiatement après la période de floraison possèdent la plus forte activité
antimicrobienne.

[Link]. Les facteurs extrinsèques

Les facteurs extrinsèques peuvent être de nature diverse comme :

a. L’o igi e géog aphi ue, l’é ologie et le li at

Les rendements des HE ainsi que leur composition diffèrent suivant l’origine
géographique de la plante (EL ABED et KAMBOUCHE, 2003). Les caractéristiques
écologiques exercent une influence directe sur la production et la quantité de l’essence
(DUPONT, β000). La durée d’exposition au soleil, la température nocturne et diurne,
l’humidité, le régime du vent, la pluviométrie, …etc, sont des paramètres responsables des
modifications de la proportion de l’essence et de la composition chimique (CLARCK et
MENARY, 1980).

b. Nature des sols et techniques culturales

La nature du sol (calcaire, siliceux, …), les aspects culturaux comme la densité de
culture, l’apport d’engrais, le nombre de récolte par an et l’alimentation en eau affecte d’une
manière déterminante la qualité des HE et leur rendement (EL ABED et KAMBOUCHE,
2003).

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21
 PARTIE I : Synthèse bibliographique

. Des fa teu s d’o igi e te h ologi ue

Le mode d’extraction d’une HE marque de son empreinte la composition chimique de

celle-ci. En effet, l’hydrodistillation et la distillation par solvant volatil ne conduisent pas à la
même quantité et qualité d’essence. La durée et la vitesse de distillation, ainsi que la masse du
végétal à traiter ont une grande influence (CLARK et MENARY, 1984). Selon BRUNETON
(1999), un changement très léger dans la durée de distillation peut entrainer des manques de
18 à 20% dans les constituants chimiques des huiles. Lors de l’hydrodistillation d’une plante
aromatique, l’eau, l’acidité et la température peuvent induire des réactions chimiques
d’altération (hydrolyse, élimination, cyclisation, réarrangement et autres …) sur les composés
terpéniques thermosensible de l’essence (MORIN et al., 1985).

Les molécules aromatiques d'une huile essentielle sont fragiles et facilement détruites ou
altérées par des températures élevées et donc, le processus de distillation doit utiliser des
méthodes de basses températures (DURIYAPRAPAN et al., 1986). Les températures élevées
semblent affecter le pH, l’équilibre des charges électropositives et électronégatives des HE
produites. Même le rendement en huile peut être affecté en cas ou la distillation est réalisée à
température élevée (OKOH, 2010).

2.1.6. Les propriétés des HE

[Link]. Propriétés antibactériennes

La résistance contre les agents antimicrobiens est devenue de plus en plus un problème
majeur et urgent dans le monde (TIM CUSHNIE et al., 2005), ce qui a orienté les recherches
des agences et des autorités de la santé vers les ressources phytogénétiques pour trouver une
solution à ce problème (SUDANO ROCCARO, 2004).

Selon GHASEMI PIRBALOUTI et al. (β010) l’utilisation des HE comme agents

antibactériens semble être une solution alternative intéressante pour contrôler la présence des
bactéries pathogènes dans les aliments, dont beaucoup de ces huiles ont des activités
antibactériennes remarquables contre un large spectre.

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 PARTIE I : Synthèse bibliographique

Les HE qui ont des activités antibactériennes déstabilisent la bicouche phospholipidique

de la membrane bactérienne, bien qu’elles interviennent dans les systèmes enzymatiques et
matériel génétique des bactéries (KIM et al., 1995). En outre, un certain nombre de
constituants des huiles essentielles présentent des propriétés antibactériennes significatives
lorsqu’ils sont testés séparément en intervenant par différents mécanismes (ULTEE et al.,
1998).

Il est évident que les propriétés antibactériennes des huiles essentielles sont plus
fortement expliquées par l'effet additif de leurs principaux composés antimicrobiens en raison
de leurs constituants mineurs qui apparaissent, à jouer un rôle significatif en synergie
(LATTAOUI et al., 1994).

Certains constituants d'HE tels que le carvacrol, le thymol et l’eugénol (composé

phénolique) ont été prouvés antibactériens. Les composés Aldéhydes des huiles essentielles
sont quelque peu antibactériens; les constituants aldéhydes : néral, géranial, citronnellal et
cuminal sont les plus largement utilisés. L'action antibactérienne des éthers est certaine, mais
irrégulière; les terpènes ont été prouvés intéressants, mais sont surtout diffusées dans l'air
(KIM et al., 1995).

[Link]. Propriétés antivirales

Les huiles essentielles des différentes familles botaniques présentent des actions
antivirales, mais le degré d'efficacité varie selon la souche et la structure virale. C'est en
raison de structures moléculaires particulières trouvés dans chaque type viral, que les huiles
essentielles pénètrent dans les entités à des degrés divers (DAVIDSON et al., 2005).

Les recherches ont découvert qu'un certain nombre d'huiles essentielles ont une activité
antivirale contre certaines souches virales de la grippe, les adénovirus, les souches de la fièvre
glandulaire, de l’entérite virale, de l’entérocolite virale et le VIH-1 (SCHNITZLER et al.,
2001). Des chercheurs ont montré que certains composés spécifiques des huiles essentielles,
testés séparément, possèdent une activité antivirale remarquable. Il s'agit de l'acétate
d'anéthole, carvone, bêta-caryophyllène, citral, eugénol, limonène, linalol et linalyle
(BELAICHE, 1979).

Les virus sont très sensibles aux molécules aromatiques et certaines infections virales
graves peuvent montrer une grande amélioration par la phytothérapie (HAYASHI et al.,

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 PARTIE I : Synthèse bibliographique

1994). La synergie entre les composés d’huile tels que cinéole-monoterpénol a été utilisée
pour traiter des infections virales des voies respiratoires; cétones et composés cryptones des
huiles essentielles ont montré une capacité de lutte contre les virus nus (BHASKARA-
REDDY et al., 1998).

Plusieurs méthodes d’action antivirales ont été proposées pour les huiles essentielles bien
que pour leurs composés. Certaines huiles interfèrent avec la glycoprotéine de surface dans
l'enveloppe virale, empêchant ainsi l'attachement du virus avec la cellule hôte. On croit que
les autres huiles attaquent le virus dans la cellule hôte, possiblement au niveau de la
membrane cellulaire (BELAICHE, 1979).

[Link]. Propriétés antifongiques

Les infections fongiques ont augmenté durant ces dernières années en raison du nombre
croissant de patients à haut risque, particulièrement les hôtes immunodéprimés (personne avec
système immunitaire déficient). L'augmentation de la résistance fongique vis-à-vis les
médicaments classiques, les frais de traitement et le fait que les antifongiques les plus
disponibles n’ont que l'activité fongistatique, justifient la recherche de nouvelles stratégies
(RAPP, 2004). Les huiles essentielles de nombreuses plantes sont reconnues qu’elles
possèdent une activité antifongique (KALEMBA et al., 2003), cependant, seulement des
informations limitées existent sur l'activité vers les champignons pathogènes humains
(OKOH, 2010).

[Link]. Propriétés insecticides

La conservation des denrées entreposées est généralement assurée par des insecticides
synthétiques qui peuvent être le moyen le plus efficace et le moins coûteux pour contrôler les
insectes. Cependant l’utilisation abusive des insecticides chimiques a des effets nocifs
(GUARRERA, 1999), ce qui oriente les travaux actuels vers la recherche des substances
extraites des végétaux qui présentent une activité insecticide, répulsive ou anti-appétant à
l'égard des insectes (BARKIRE, 1996).

En effet les plantes constituent une source de substances naturelles qui présente un grand
potentiel d’application contre les insectes et d’autres parasites des plantes et du monde animal
(BOUZOUITA et al., 2008).

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24
 PARTIE I : Synthèse bibliographique

[Link]. Propriétés antioxydantes

a. L’o igi e du st ess o datif

Le stress oxydatif est le déséquilibre entre la génération des espèces réactives de

l’oxygène et la capacité du corps à les neutraliser et à réparer les dommages oxydatifs (BOYD
et al., 2003). Il correspond à une perturbation du statut oxydatif intracellulaire (MOREL et
BAROUKI, 1999).

La peroxydation lipidique est un processus complexe de stress oxydatif, qui se produit

dans les cellules, en aérobiose et reflète l'interaction entre l'oxygène moléculaire et des acides
gras polyinsaturés (JANERO, 1990). L’asthme, l'inflammation, l'arthrite, la
neurodégénérescence, la maladie de Parkinson, le mongolisme et la démence sont des
résultats de l'effet de formation de radicaux libres (PERRY et al., 2000).

b. Les radicaux libres

Un radical libre est une molécule ou un atome ayant un ou plusieurs électrons non
appariés, ce qui le rend extrêmement réactif (VANSANT, β004). L’ensemble des radicaux
libres et de leurs précurseurs est souvent appelé : espèces réactives de l’oxygène (FAVIER,
β00γ). L’appellation n’est pas restrictive, elle inclut les radicaux libres de l’oxygène
proprement dit, mais aussi certains dérivés oxygènes réactifs non radicalaires dont la toxicité
est importante tel le peroxyde d’hydrogène (H2O2), le péroxynitrite (ONOO-) (NOVELLI,
1997).

Les radicaux libres sont produits par divers mécanismes physiologiques (inflammation,
cycle de redox,…etc.) afin de détruire des bactéries au sein des cellules phagocytaires
(macrophage, polynucléaires) ou pour réguler des fonctions cellulaires létales telle la mort
cellulaire programmée ou apoptose (FAVIER, 2003).

L’ingestion d’alcool est suivie de la formation de radicaux libres selon divers

mécanismes, également des antibiotiques, des anticancéreux (HADI, β004) l’infection au VIH
a pour effet d’accroitre la production de radicaux libres dans l’organisme (HOSEIN et
LYTLE, 2001).

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25
 PARTIE I : Synthèse bibliographique

c. Les antioxydants

Un antioxydant est définit comme toute substance qui peut retarder ou empêcher
l’oxydation des substrats biologiques (BOYD et al., 2003). Ce sont des composés qui
réagissent avec les radicaux libres et les rendent ainsi inoffensifs (VANSANT, 2004).

Les antioxydants sont en fait des agents de prévention. Ils bloquent l’initiation, en
complexant les catalyseurs, en réagissant avec l’oxygène, ou des agents de terminaison
capables de dévier ou de piéger les radicaux libres. Ils agissent en formant des produits finis
non radicalaires. D’autres en interrompant la réaction en chaine de peroxydation ou en
réagissant rapidement avec un radical d’acide gras avant que celui-ci ne puissent réagir avec
un nouvel acide gras. Tandis que d’autres antioxydants absorbent l’énergie excédentaire de
l’oxygène singulet pour la transformer en chaleur (BERSET et CERVELIER, 1996).

Au cours de ces dernières années, il y a eu un intérêt croissant pour la recherche

d'antioxydants naturels. Les propriétés antioxydantes de nombreuses herbes et épices ont été
signalées pour être efficace à cet égard, notamment les espèces appartenant à la famille des
Lamiaceae qui possèdent une activité antioxydante appréciable (GUTTERIDGE et al., 1994).

2.1.7. Toxicité des HE

Les HE utilisées depuis des siècles présentent souvent des propriétés biologiques
intéressantes. Cependant, certaines d’entre-elles peuvent révéler une toxicité qui peut être
redoutable en raison de leur passage par voie transdermique et de leur impact sur certaines
cibles de l’organisme. Elles peuvent par mésusage être utilisées non diluées et s’avérer
toxiques en particulier chez l’enfant (DESMARES et al., 2008).

2.1.8. Applications des HE

Les HE des plantes sont largement utilisées en aromathérapie, en pharmacie, en

parfumerie, en cosmétique et dans la conservation des aliments. Leur utilisation est liée à
leurs larges spectres d’activités biologiques reconnues (AMARTI, β010 ; SCHELZ et al.,
2010).

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26
 PARTIE I : Synthèse bibliographique

[Link]. Applications en cosmétologie

L'utilisation des HE dans la production des produits cosmétiques peut avoir plusieurs
fins, comme un arôme agréable, assurant la protection contre les microorganismes et dans
certains cas, améliorent les propriétés dermato-cosmétiques et la préservation des produits
cosmétiques (MANOU et al., 1998). Les problèmes de cheveux comme les pellicules et la
dermatite séborrhéique causée par Malasseizia furfur pouvait être corrigée à l'aide d'huile de
théier grâce à la présence de terpinen-4-ol qui s'est avéré efficace. L’ajout d'HE comme agents
colorant ou odorant dans le produit cosmétique final est souvent déconseillée et considérée
comme une perte potentielle en raison de leur volatilité et leur caractère lipophile
(MCLAUGHLIN et al., 1999).

[Link]. Applications en santé et soins

Des HE ont été utilisées depuis des siècles dans la guérison, la modification des humeurs
et l'amélioration de la conscience (WAGNER et al., 1998). Elle affecte l'état émotionnel,
mental, spirituel et physique d'un être humain. Quelques études montrent que les composés
aromatiques peuvent exercer des effets sur le cerveau, en particulier sur l'hypothalamus et le
système limbique (le siège des émotions). Certaines HE peuvent considérablement augmenter
l'oxygénation et l'activité du cerveau, et inhiber la croissance bactérienne (OKOH, 2010).

L’usage des HE en médecine ne fut jamais abandonné malgré la découverte de processus

de synthèse organique et la naissance de l’industrie pharmaceutique. Elles sont considérées
comme un réservoir irremplaçable des principes actifs (OURAЇNI et al., 2005).
L’aromathérapie est une branche de la phytothérapie qui utilise les HE pour traiter un certain
nombre de maladies. En effet, les HE sont largement utilisés pour traiter certaines maladies
internes et externes (infections d’origine bactérienne ou virale, troubles humoraux ou
nerveux). En médecine dentaire, plusieurs HE ont donné des résultats cliniques très
satisfaisants dans la désinfection de la pulpe dentaire, ainsi que dans le traitement et la
prévention des caries (SCHWARTZ et al., 1992 ). De même, des études très récentes ont
montré que le géraniol a une action sur les cellules cancéreuses du colon (CARNESECCHI et
al., β001), en plus de l’activité anti-inflammatoire, récemment mise enévidence par SIANI et
al. (1999).

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27
 PARTIE I : Synthèse bibliographique

[Link]. Applications en industrie alimentaire

Dans ces dernières années, une attention croissante est tirée vers l’exploration des
ressources naturelles à cause de la demande élevée des aliments sans additifs chimiques
synthétiques, les HE par leurs propriétés antimicrobiennes et antioxydantes sont considérées
le leader pour répondre à cette tendance (WANG et al., 2010).

Les HE peuvent servir d'additifs alimentaires ou d’agents de conservation qui soutiennent

la production, la transformation et maintiennent les propriétés organoleptiques désirées. Elles
peuvent assurer plusieurs fonctions dans l'industrie alimentaire tel que l’amélioration de la
valeur nutritive des aliments; le maintien de la salubrité des aliments et l'appétibilité; le
contrôle d'acidité/alcalinité; l’amélioration de la saveur et la couleur (FOULK et al., 2002).

Comme agent de conservation, les huiles essentielles peuvent servir d’agents

antimicrobiens ou d'antioxydants, comme agents antimicrobiens, elles empêchent la
croissance des moisissures, levures et bactéries, comme agents antioxydants, elles empêchent
les aliments de rancissement, brunissement et développement de black spots, par la
suppression de la réaction qui se produit lorsque les aliments se combinent avec l'oxygène en
présence de lumière, la chaleur et certains métaux afin de minimiser les dommages à certains
acides aminés essentiels et la perte de certaines vitamines (OKOH, 2010).

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28
 PARTIE I : Synthèse bibliographique

2.2. Les composés phénoliques

2.2.1. Définition

Les composés phénoliques ou polyphénols sont des métabolites secondaires caractérisés

par la présence d’un cycle aromatique portant des groupements hydroxyles libres ou engagés
avec un glucide. Ils sont présents dans toutes les parties des végétaux supérieurs (racines,
tiges, feuilles, fleurs, pollens, fruits, graines et bois) et sont impliqués dans de nombreux
processus physiologiques comme la croissance cellulaire, la rhizogenèse, la germination des
graines ou la maturation des fruits (BOIZOT et al., 2006).

2.2.2. Diversité

Les polyphénols naturels peuvent varier de molécules simples telles que l'acide
phénolique à gros composés hautement polymérisées comme les tanins (figure 03). Les
formes conjuguées de polyphénols sont les plus courantes, où divers sucres, acides organiques
et lipides (graisses) sont liées à la structure phénolique (BOUCHET et al., 1998).

Les composés phénoliques peuvent être regroupés en plusieurs classes qui se

différencient d’abord par la complexité du squelette, ensuite par le degré de modification de
ce squelette (degré d’oxydation, d’hydroxylation et de méthylation, etc.). Enfin par les
liaisons possibles de ces molécules de base avec d’autres molécules (glucides, lipides,
protéines, …etc.) (MACHEIX et al., 2005).

2.2.3. Les flavonoïdes

Les flavonoïdes sont des composés polyphénoliques, omniprésents dans la nature.

Plusieurs structures sont regroupées autour de la structure chimique des flavonoïdes (figure
03), flavone, flavanone, isoflavones, anthocyanidiques, catéchine 61 et chalcone. Plus de 4
000 flavonoïdes ont été identifiés, dont beaucoup sont largement distribués dans les aliments
végétaux et comprennent: les lignines ; les proanthocyanines; les anthocyanes /
anthocyanidines; les isoflavones; la Génistéine; les catéchines; les tanins; et la quercétine
(NAKATAMI et al., 2000).

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29
PARTIE I : Synthèse bibliographique

Page
30
Figure : Les différentes classes des polyphénols (Gervaise, 2004)
 PARTIE I : Synthèse bibliographique

2.2.4. Effets des composés phénoliques

Il est actuellement admis que les polyphénols aident dans la prévention du cancer, la
protection contre les maladies cardiaques et l'hypertension (BOUCHET et al., 1998).
L’ingestion de ces polyphénols par l’intermédiaire des fruits et des légumes pourrait permettre
à notre organisme de renforcer ses moyens de défense, grâce à leurs propriétés antioxydantes,
anti-inflammatoires, et anticancéreuses (KHAN, 2010).

[Link]. Effet antioxydant

Les polyphénols sont capables de piéger les radicaux libres et d'activer les autres
antioxydants présents dans le corps. Cette activité permet aux polyphénols de réguler les
radicaux libres comme l'oxyde nitrique qui permet une bonne circulation sanguine, coordonne
l'activité du système immunitaire avec celle du cerveau et module la communication entre les
cellules cérébrales (MASQUELIER, 2006).

[Link]. Effet anticancéreux

Les polyphénols possèdent un pouvoir anticancéreux prouvé, dont ils agissent comme
agents bloquants (protection des acides nucléiques), ce qui minimisent les mutations au
niveau d’ADN et comme agents suppresseurs de tumeurs par l’inhibition de la prolifération
cellulaire (KHAN, 2010).

[Link]. Effet anti-inflammatoire

L’effet anti-inflammatoire des polyphénols a été mis en évidence chez le lapin par la
prévention des lésions dues à une application externe d'huile de croton (HELME et al., 1999),
et chez les rats par test des flavonoïdes sur une réaction inflammatoire induite par une
substance appelé carrageenan (EMIM et al., 1994). Les hypothèses formulées concernent la
stabilisation de la membrane des mastocytes évitant la libération d'histamine et d'autres
médiateurs de l'inflammation, et l'inhibition de l'activité de la phospholipase (HELME et al.,
1999).

Page
31
Matériel
&
Méthodes

Page
32
 PARTIE II : Matériel et Méthodes

Chapitre 1 : Matériel et Méthodes

1.1. Matériel végétal

1.1.1. Présentation des espèces étudiées

[Link]. Salvia algeriensis

Salvia algeriensis est une sauge annuelle, native des régions du nord-ouest Algérien et
nord-est Marocain. Elle pousse à l’état spontané jusqu’à une altitude supérieur à 600 m. Les
tiges de S. algeriensis sont droites, tétragones, velues. Dans son habitat naturel, l’espèce
pousse jusqu’à atteindre des tailles d’environ 1 m de hauteur. Ses feuilles, en forme ovale,
peuvent avoir près de 8 cm de longueur. La floraison commence durant le mois de mars.
Chaque plante produit de 3 à 4 inflorescences. Ses fleurs violettes zygomorphes à deux lèvres
sont disposées en verticilles au sommet des rameaux (figure 04) (SANTA et QUEZL, 1963).
Elles sont munies d’un calice velu à cinq dents, et d’un style plus long que la corolle. Elle
donne par distillation une huile essentielle camphrée, dans laquelle résident leurs principales
vertus (ROQUES, 1809). Les fleurs dégagent de légères odeurs similaires à celle du thym
(CLEBSCH et al., 2010; SURHONE et al., 2010).

(A) A B (B)

(C)

Figure 04: Aspect général des trois espèces de sauge étudiées : Salvia algeriensis(A) ; Salvia
argentea (B) et Salvia barrelieri(C).

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 PARTIE II : Matériel et Méthodes

[Link]. Salvia argentea

Salvia argentea, est une plante bisannuelle. Elle est répondue en Afrique du nord et en
Europe méridionale. Au cours de son développement, elle commence par former une rosette
basale de feuilles veloutées qui s’étale jusqu’à atteindre 1 mètre de diamètre, en fin d’hiver.
En début d’été, lorsqu’elle atteint environ 1m de hauteur, elle fleurit en développant une
panicule de petites fleurs blanches ou jaunes (BURNIE et al., β006). L’espèce se caractérise
non seulement par ses fleurs de coloration jaunâtres mais aussi par ses inflorescences
terminées par les bractées et par leurs grandes feuilles velues crénelées-dentées, étalées en
rosette (figure 04) (BENISTON et al., 1984).

[Link]. Salvia barrelieri

Salvia barrelieri est une plante herbacée, annuelle avec fleurs bicolores contenant le bleu
violacé approché du mauve et le blanc. Elle pousse à l'état sauvage dans les régions nord-
africaines entre 150 et 1β00 m d’altitude. Elle s’adapte aux différents habitats qui incluent les
bords de champs, les broussailles, les forêts de chênes et les pentes herbeuses. L’espèce
Salvia barrelieri peut atteindre 1à 2 mètres de hauteur. Ses feuilles sont grandes, ondulées,
grises-vertes et recouvrent entièrement la partie inférieure de la plante formant un monticule
qui atteint 45 cm de hauteur au début d’été (figure 04). Habituellement, sa floraison
commence au début de juin et peut s’étaler jusqu’à un mois après (CLEBSCH, 2008).

1.1.2. Récolte et préparation des échantillons

Les plantes ayant fait l’objet de cette étude appartiennent à trois espèces de sauges :
Salvia algeriensis, S. argentea et S. barrelieri. Les échantillons de feuilles et de fleurs qui
seront soumis à l’extraction des huiles essentielles ont été récoltés à des dates et dans des
localités différentes, selon l’espèce étudiée (Tableau I).Une fois récoltées, dans des sacs en
plastiques, les feuilles et les fleurs fraîches sont soumises à un séchage à l’ombre dans un
endroit sec et aéré du laboratoire pendant 5 à 7 jours. Devenues sèches, les parties utilisées
seront soumises à l’extraction.
Une partie de la matière végétale (de chaque échantillon) est récupérée pour préparer des
extraits destinés au dosage des composés phénoliques et flavonoïdes totaux.

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 PARTIE II : Matériel et Méthodes

Tableau I : Dates et lieux de récolte des échantillons de feuilles et de fleurs selon l’espèce de
sauge étudiée.

Espèce étudiée Date de récolte Lieu de récolte

Salvia algeriensis Mars 2012 OuledFarès (Chlef)
Salvia barrelieri Mai 2012 Thaniet El-had (Tissemsilt)
Salvia argentea Juin 2012 Sidi -Ameur (Chlef)

1.1.3. Matériel biologique

Les expériences réalisées lors de cette étude en vue de mettre en évidence l’effet
antibactérien ont été conduites sur plusieurs espèces de bactéries pathogènes. En tout, la
collection comprend dix (10) souches de bactéries pathogènes. L’origine de provenance des
souches est diverse. Six souches (Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris,
Proteus mirabilis, Salmonella typhimirium, Citrobacter ssp proviennent du laboratoire
d’analyses médicales Al-Ihssan (Chlef), trois autres (Staphylococcus aureus ATCC 25923,
Escherichia coli ATCC 25922 et Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853) de l’Institut Pasteur
d’Alger et une souche (Helicobacter pylori) du laboratoire de microbiologie de la faculté de
biologie d’université de Chlef.

Page 35
 PARTIE II : Matériel et Méthodes

1.2. Méthodes

1.2.1. Extraction des HE par entraînement à la vapeur d’eau

Ce procédé consiste à récupérer les HE des sauges étudiées, à partir de feuilles et fleurs,
en faisant passer un courant de vapeur d’eau, à travers l’échantillon du végétal. Ces vapeurs
saturées en composées organiques volatiles sont condensées et récupérées sous forme de
distillat aromatisé.

[Link]. Description de l’appareil de distillation

L’appareil utilisé se compose de trois parties : la chaudière, le distillateur et le condenseur

qui sont reliées entre elles par de minces tubes en cuivre.
a. La chaudière et le distillateur

Il s’agit d’un autoclave qui a été adapté pour effectuer l’extraction des HE par
entrainement à la vapeur d’eau (figure 05). C’est un récipient de forme cylindrique de hauteur
égale à 80 cm et de diamètre égale à 30 cm fabriqué en acier (INOX) à double enveloppe et
sont séparés entre eux par une plaque perforée. Le niveau d'eau dans la chaudière est contrôlé
par un tube en verre fixé le long de la paroi latérale du bac. La vapeur produite à l'aide d'un
chauffage électrique s'échappe par un trou situé au centre de la plaque supérieure qui sépare
la chaudière du distillateur. Ce dernier se termine à sa partie supérieure par un couvercle, sur
lequel est fixé un manomètre pour contrôler la pression qui règne à l'intérieur de l'enceinte et
une vanne commandant la sortie de la vapeur d'eau saturée d'HE.
b. Le condenseur

Le condenseur est un bac métallique (inox) de forme circulaire de 40 cm de diamètre et

60 cm de hauteur (figure 05). Il est alimenté en eau courante froide. A l'intérieur du bac
baigne un serpentin en cuivre qui accueille le mélange vapeur d’eau et HE provenant du
distillateur. La vapeur, ainsi refroidie, se condense en gouttelettes et arrive dans un flacon de
récupération.

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 PARTIE II : Matériel et Méthodes

Figure 05 : Schéma descriptif de l`installation semi-pilote d`entrainement à la vapeur d’eau.

1) Le serpentin; β) Tuyau de sortie d’eau ; γ) Condenseur;4)Vanne de sortie;5) Tuyau de
récupération de distillat; 6) indicateur de pression; 7)Vanne d’entrée d’eau;8)Interrupteur; 9)
Lampe témoin; 10) La chaudière et le distillateur; 11) Indicateur de niveau d’eau dans la
chaudière; 12) Vanne de décharge de chaudière.

1.2.2. Méthode d’extraction des HE

[Link]. Extraction des HE par entrainement à la vapeur d’eau

L’extraction des huiles essentielles à partir de fleurs et de feuilles, s’est faite par
entrainement à la vapeur d’eau, dans une installation semi-pilote décrite précédemment
(Figure 05). L’extraction dure deux heures, à la température de 100°C et une pression de 1,2
bar. La vapeur d’eau enrichie de constituants volatils est condensée et récupérées dans des
flacons opaques de 1 litre chacun.
a. Décantation

Elle est réalisée dans une ampoule à décanter dans laquelle le distillat se sépare en deux
phases non miscibles : une phase aqueuse et une phase organique (comprenant l’HE et le
solvant organique). La séparation s’est effectuée en suivant les étapes suivantes :
 Verser dans une ampoule à décanter β0 ml d’hexane pour chaque100 ml de
distillat ;
 Reboucher l’ampoule à décanté, la sortir de son support et agiter en dégazant de
temps en temps. L’opération est appelée « dégazage » ;
 Replacer l’ampoule sur son support, la déboucher puis laisser décanter β à
3minutes. Cette étape est qualifiée de décantation ;
 Les deux phases organiques liquides non miscibles se séparent progressivement,
jusqu’à ce que deux phases distinctes soient observées ;

Page 37
 PARTIE II : Matériel et Méthodes

 Ouvrir le robinet de l’ampoule pour éliminer la phase aqueuse et récupérer la

phase organique (figure 06A).
b. Elimination du solvant organique

Le solvant de la phase organique est éliminé à l’aide d’un évaporateur rotatif. Le principe
de cet appareil est basé sur l’abaissement du point d’ébullition sous pression réduite (figure
06B). L’élimination du solvant se fait selon les étapes suivantes :
 Placer la solution contenant le solvant à évaporer dans le ballon et le placer sur
l’évaporateur rotatif à l’aide d’un raccord.

 Placer le ballon de récupération du solvant à l’aide d’un deuxième raccord.

 Faire plonger le ballon dans le bain marie réglé probablement à la température

d’évaporation du solvant.

 Mettre le ballon en rotation.

 Mettre en marche la circulation d’eau froide dans le réfrigérant.

 Après disparition complète du solvant du ballon, récupérer les HE, les pesées puis les
mettre dans des flacons en verre et les conservées à froid à l’abri de la lumière.

A B
(B)
(A)

Figure 06: Ampoule à décanter (A) et Evaporateur rotatif (Rotavapor) (B).

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 PARTIE II : Matériel et Méthodes

1.2.2. Calcul du rendement

Le rendement en HE (RHE en %) d’une plante est le rapport entre le poids de l’huile

extraite(MHE) et le poids de la matière végétale sèche (MS). Le rendement, exprimé en
pourcentage, est calculé selon la formule :

RHE (%) = (MHE / MS) x 100

1.2.3. Analyse des propriétés organoleptiques et physiques

La détermination des propriétés physiques de nos HE comme: la densité, l’indice de

réfraction a été réalisée conformément aux normes A.F.N.O.R (1989).
[Link]. L’odeur

L’odorat est un sens chimique très sensible et l’habilite des parfumeurs à classer et
caractériser des substances chimiques parvient à doser les produits naturels et leur perception
peut aller jusqu'à dix millionièmes de grammes par litre d’air. L’appréciation de l’odeur de
nos huiles a été faite par moi-même et par l’enseignant encadreur.
[Link]. La couleur

La coloration d’une huile essentielle dépend des produits qui la constituent. Dans notre
cas, elle a été appréciée et décrite visuellement.
[Link]. Aspect physique

De même, l’aspect d’une essence végétale change selon les produits qui la constituent.
Elle peut apparaître sous différentes formes : solide, liquide ou solide - liquide.

Page 39
 PARTIE II : Matériel et Méthodes

[Link]. La densité

On pèse chaque huile à l’aide d’un pycnomètre taré, puis on calcule la densité, en
appliquant la formule suivante:
D = m2 – m0 / m1 –m0

m0 : est la masse (g) du pycnomètre vide ; m1 : est la masse (g) du pycnomètre rempli
d’eau distillée ; m2 : est la masse (g) du pycnomètre rempli d’HE.
[Link]. L’indice de réfraction

L’appareil ayant servi à mesurer l’indice de réfraction des liquides est le Réfractomètre
ABBE qui a un usage assez recommandé. Pour calculer l’indice de réfraction ηtD, on applique
la relation suivante : η20D = ηtD + (t – 20) * 0.0004

t : Température de laboratoire ; D : La raie de sodium ; 0,0004 : d’indice de réfraction quand la

température varie de 1° C.

1.2.4. Analyse des propriétés chimiques

[Link]. Analyse quantitative au GPC (chromatographie en phase

gazeuse)

L’analyse quantitative des constituants chimiques des HE a été réalisée par un appareil de
chromatographie en phase gazeuse GPC. L’appareil de CPG est un Hewlett Packard
Agilent6890N piloté par Chemstation (NIST98). Les conditions opératoires sont :
-Injection de 0,5 µl en mode split1/50

-Température de l’injecteur : β50°C

- Colonne capillaire HP5MS (30 m x 0.25 mm x 0.25µm)

- Programmation de température : 50°C Pendant 5 min; 4 °C/min jusqu’à β50°C

pendant 10 min.

- Débit du gaz vecteur : Hélium (1ml/min).

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 PARTIE II : Matériel et Méthodes

[Link]. Analyse qualitative au GC/MS (chromatographie en phase

gazeuse couplée à un spectromètre de masse)

L’analyse qualitative des constituants chimiques des HE a été réalisée à l’aide d’un
appareil de chromatographie phase gaz (Agilent 6890) couplée à un spectromètre de masse
(Agilent 5973) (GC-MS). Les conditions opératoires sont:
-Températures : interface (280°C), source (230°C), quadripôle (150°C)
-L’énergie d’ionisation est de 70 ev.
L’identification des constituants est basé sur la comparaison des temps de retentions avec
ceux des échantillons authentiques et sur les spectres de masse de la base de données de
l’appareil. En plus de la comparaison des indices de retentions des composés obtenus avec les
indices de retentions théoriques de la même colonne HP5MS.
En basant sur la série d’alcanes relatifs analysée en parallèle aux mêmes conditions
chromatographiques que les HE, l’indice de rétention est calculé selon la formule suivante
donnée par VAN DEN DOOL et KRATZ (1963) in SOUICI et al. (2007).
�� � − �� � − 1
��� = 100 � + 100
�� � + 1 − �� � − 1
Où:
IRx: indice de rétention du composé
n: nombre de carbone de l’alcane classé avant le composé
TRx: temps de rétention du composé
TR(n-1): temps de rétention de l’alcane classé avant le composé
TR(n+1): temps de rétention de l’alcane classé après le composé

1.2.5. Activité antibactérienne des HE

Les méthodes utilisées pour étudier l’interaction entre les HE et les espèces microbiennes
sont basées sur la diffusion de ces huiles dans des milieux de culture pour inhiber la
croissance d’un microorganisme pathogène.

Page 41
 PARTIE II : Matériel et Méthodes

[Link]. Préparation de l’inoculum

Les espèces cibles (souches bactériennes choisies) ont été revivifiées et repiquées dans la
gélose nutritive, puis incubées à des températures optimales de développements (37C°)
pendant 18 heures pour l’obtention d’une culture jeune. Par la suite, des suspensions troubles
de ces souches seront réalisées en prélevant 3 à 5 colonies bien isolées et identiques. On les
dépose dans 5 ml d’eau physiologique stérile puis on agite au vortex. Les concentrations
bactériennes de l’inoculum sont évaluées par turbidité et sont exprimées par la mesure de la
densité optique (DO à 600 nm) sur un spectrophotomètre. Une DO de 0.08 à 0.1 correspond à
une concentration de 108 UFC/ml (ATHAMENA et al., 2010 ; KARATAS et al., 2010 ;
SARAC et al., 2007; YEN TAN et al., 2006 ; RAHAL et al.,2005).
[Link]. Test de l’aromatogramme (méthode des disques)

Pour réaliser le test de l’aromatogramme, nous avons réalisé par les étapes suivantes :
 Une suspension de chaque germe est préparée dans l’eau physiologique stérile et
ajustée à environ 108UFC/ml.

 Chaque souche est ensemencée par inondation sur des boites de pétri contenant le
milieu Muller – Hinton. La surface des milieux est ensuite séchée sous hotte à flux
laminaire en laissant le couvercle des boites de pétri légèrement ouvert.

 Dépôt de disques (papier Whatman stériles de 0.6 cm de diamètre) préalablement

imprégnés de 15 µl d’HE à la surface du milieu Muller–Hinton agar (MHA)
contenant une souche donnée (NCCLS, 1997 in MUSTAFA et BEKTAS, 2008).

 Des disques vides sont déposés à la surface du milieu gélosé ensemencé avec les
différentes souches bactériennes pour préparer les témoins.

 Enfin, les boites sont incubées à 37°C pendant 18 à β4 heures, à l’exception de la

bactérie Helicobacter pylori où la durée d’incubation est prolongée à 7β h
(FRANZIN et al., 2000).

Les résultats sont évalués par la mesure de diamètre du halo de la zone d’inhibition en
mm. La sensibilité ou la résistance des souches est exprimée en suivant les fourchettes des
diamètres données par BELAICHE, (1979) (Tableau I en annexe II).

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 PARTIE II : Matériel et Méthodes

[Link]. Détermination de la concentration minimale inhibitrice

(CMI)

Les concentrations minimales inhibitrices (CMI) des HE ont été déterminées selon la
méthode recommandée par NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards)
avec quelques modifications (NCCLS, 1997 in MUSTAFA et BEKTAS, 2008). Les tests ont
été réalisés dans le bouillon de Muller-Hinton contenant du Tween 80 à 0.5% (v/v).
Les concentrations bactériennes de l’inoculum sont évaluées par turbidité et sont
exprimées par la mesure de la densité optique qui correspond à 10 8UFC/ml sur un
spectrophotomètre.
Une série de dilution allant de 1/25 (VHE/VMHB) à 1/800 (VHE/VMHB) des huiles essentielle
a été réalisées dans des tubes Eppendorf au lieu d’une microplaque.
Des témoins, contenant le milieu de culture, le tween 80 et la suspension bactérienne sont
également préparés. L’incubation se fait à 37°C pendant 24 heures à l’exception
d’Helicobacter pylori dont la durée est prolongée à 72 h (FRANZIN et al., 2000).
La croissance bactérienne est indiquée par la présence d’un culot blanc qui se forme au
fond du tube. Les résultats sont exprimés par la présence ou l’absence de croissance
bactérienne.

1.2.6. Evaluation de l’activité antioxydante

[Link]. Test du DPPH sur CCM

Pour mettre en évidence l’activité antioxydante des HE, nous avons effectué le test DPPH
sur chromatographie sur couche mince (CCM) selon la méthode de BEKTAS et al. (2005)
modifiée.
Le principe du test se résume en réduction du radical 2,2-diphényle 1-picrylhydrazyle
(DPPH) par les substances anti-radicalaires qui sont dans notre cas les huiles essentielles. Une
dilution de 1:1 de chaque HE est préparée dans le méthanol. Après dilution, un volume de15
µl de chaque huile est déposé sur une plaque CCM (MERCK : TLC silicagel 60 F254 glass
plate) en plus d’une solution témoin de BHT à βmg/ml.
La phase mobile est composée de méthanol et acétate d’éthyle à un ratio de (1:1). La
révélation est effectuée par pulvérisation d’une solution 0.016 % de DPPH dans le méthanol
suivie d’une incubation à une température ambiante pendant γ0 min. Le blanchissement de la

Page 43
 PARTIE II : Matériel et Méthodes

couleur du DPPH par des spots jaunes, sur fond violé, est l’indication d’une activité
antioxydante.
[Link]. Test du DPPH par spectrophotométrique

Le principe du test se résume en la capacité des huiles à réduire le radical libre DPPH
(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) de couleur violette foncée, qui se transforme en coloration
jaunâtre (après réduction). Cette décoloration est mesurable par spectrophotométrique
(BRAND-WILLIAMS et al., 1995).
Le test de DPPH est réalisé en suivant la méthode décrite par BEKTAS et al.
(2005). où 50µl de chacune des solutions méthanoliques des HE testées à différentes
concentrations (0.9, 1.8, 2.7, 3.6, 4.5, 5.4, 6.3, 7.0, 8.1, 9.0 mg/ml) sont mélangées avec 5ml
d’une solution méthanolique de DPPH (0.004%). Après une période d’incubation de γ0
minutes à une température ambiante, l’absorbance est lue à 517nm.

a. Déte i atio du pou e tage d’i hi itio

Selon SHARIFIFAR et al. (β007), l’inhibition du radical libre de DPPH en pourcentage

(I %) est calculée de la manière suivante:

I % = [(A blanc – A échantillon) / A blanc] x 100

A blanc : Absorbance du blanc (DPPH dans le méthanol)

A échantillon : Absorbance du composé d'essai.

Les concentrations en HE en fonction des pourcentages du DPPH inhibés, ont été tracées
à la fin de la réaction afin d'obtenir l'index IC50. Ce paramètre est défini comme la
concentration d'antioxydant requise pour diminuer la concentration du DPPH initiale de 50%
(SHARIFIFAR et al., 2007).
[Link]. Test du ß-carotène- acide linoléique

Par ce test, l’activité antioxydante est déterminée en mesurant l’inhibition des composés
organiques volatils et des hydroperoxydes conjugués diène résultant de l'oxydation d'acide
linoléique (MUSTAFA et BEKTAS, 2008).
Le test du - carotène-acide linoléique est réalisé en suivant la méthode décrite par
MUSTAFA et BEKTAS, (β008). On dissous β mg de - carotène dans 1 ml de chloroforme.
La solution obtenue est introduite dans un ballon contenant β mg d’acide linoléique et β00

Page 44
 PARTIE II : Matériel et Méthodes

mg de Tween 40. Après évaporation du chloroforme sous vide, 100 ml d’eau distillée saturée
en oxygène est ajouté avec agitation vigoureuse. De cette nouvelle solution 2.5 ml sont
transférés dans des tubes, et 350µl de chaque huile essentielle à une concentration de (2g/l)
dans l’éthanol. Ce système d'émulsion a été incubé pendant 48 heures à l’obscurité, le même
procédé est répété avec l’antioxydant synthétique l'hydroxytoluène buthylé (BHT) utilisé
comme contrôle positif et aussi avec un tube blanc (contenant l'éthanol à la place de l’HE).
Après incubation, l’absorbance est mesurée à 490 nm pour les échantillons, quant au
BHT, elle est immédiatement mesurée.
a. Déte i atio de la valeu d’a tivité

Selon MUSTAFA et BEKTAS, (2008), l’activité antioxydante relative après 48 heures est
calculée selon la formule suivante :

AAR = (A échantillon / A BHT) * 100

AAR : activité antioxydante relative ; A échantillon : absorbance de l’échantillon après 48

heures ; A BHT : absorbance du BHT.

1.2.7. Dosage des composés phénoliques totaux

Le principe de la méthode de dosage repose sur l’oxydation des composés phénoliques

par le réactif de Folin-Ciocalteu (mélange de complexes des acides phosphotungstène
(H3PW12O40) et phosphomolybdène (H3PMo12O40) de couleur jaune). Cette réaction
entraîne la formation d’un nouveau complexe molybdène-tungstène de couleur bleu qui
absorbe entre 725 et 750 nm(GERVAISE, 2004). Le dosage de polyphénols totaux est
effectué par la comparaison de la D.O observée à celle obtenue par un étalon d’acide gallique
de concentration connue (FAO/IAEA, 2000; DUARTE et LOPEZ et al., 2007).

Page 45
 PARTIE II : Matériel et Méthodes

[Link]. Extraction des composés phénoliques totaux

Pour extraire les composés phénoliques, nous avons adopté le protocole cité par BOIZOT
et al. (2006) modifié. Les polyphénols sont extraits par macération et agitation de 200 mg de
poudre végétal fine dans 10 ml de solvant organique (acétone 80%), pendant 24 H et à 4°C
pour empêcher l’action de polyphénoloxydases qui dégraderaient les composés phénoliques.
Après centrifugation (3000 g pendant 10 min à 4°C) le surnageant contenant les polyphénols
est récupéré. On procède à une deuxième extraction identique sur le culot pour extraire le
reste de polyphénols supplémentaires et donc d’obtenir un dosage plus exhaustif. Les
surnageants sont réunis avant d’être concentrés à sec sous vide. Puis récupérés dans 5 ml de
méthanol.
[Link]. Mode opératoire du dosage

Les composés phénoliques totaux des extraits végétaux obtenus, sont déterminés selon la
méthode préconisée par DUARTE et LOPEZ et al., (2007) qui utilise le réactif Folin-
Ciocalteu et l’acide gallique comme standard.
500 µl de réactif Folin-Ciocalteu et 450 µl d’eau distillée sont ajoutés dans un tube
contenant 50 µl d’extrait, puis agités vigoureusement. Après 3 minutes, on additionne 400µl
de Na2CO3 (75g.L-1). Lors de cette opération, il y aura formation d’un précipité blanc qui sera
éliminé par une simple centrifugation. Cela n’affecte en rien les résultats obtenus ni leur
reproductibilité (SCALBERT et al., 1989).
Les tubes sont incubés, à l’obscurité, à la température ambiante pendant 40 minutes.
L’absorbance est lue à7γ5 nm contre un blanc (50 µl méthanol +500µl de réactif de Folin-
Ciocalteu +950µl H2O + 400µl de Na2CO3).
La teneur en composés phénoliques des extraits est déterminée à partir de la courbe
d’étalonnage d’acide gallique et les résultats sont exprimés en µg équivalent acide gallique
par mg de matière sèche (µg EAG/mg MS).

Page 46
 PARTIE II : Matériel et Méthodes

1.2.8. Dosage des flavonoïdes totaux

[Link]. Extraction des flavonoïdes

Les composés flavonoïques sont extraits selon le protocole préconisé par RISPAIL et al.,
(β005). Une prise d’essai de 50 mg de poudre très fine du matériel végétal (feuille ou fleurs)
est mise en macération dans 5 ml de méthanol 70% avec agitation pendant 15 min à
température ambiante. Après centrifugation (3000 g, pendant 5 min), le supernagent est
récupéré. Le culot va mener deux rinçage successifs par 5 ml de méthanol 70 % enfin
d’épuiser l’extrait. Les trois supernagents sont réunis puis évaporés à sec, l’extrait sec est
récupéré par 05 ml de méthanol 100%.
[Link]. Mode opératoire du dosage

Le contenu en flavonoïdes totaux est déterminé par la méthode spectrophotométrique

d’AlCl3, selon le protocole préconisé par BEKTAS et al. (2011).On additionne 1ml de
l’extrait flavonoïque et 1ml d’aluminium trichloride (AlCl3) à 2% in méthanol. Après une
incubation de 10 min à la température de laboratoire et à l’obscurité, l’absorbance est lue à
415 nm.
La teneur en flavonoïdes totaux des extraits est déterminée à partir de la courbe
d’étalonnage du quercétine et les résultats sont exprimés en µg équivalent quercétine par mg
de matière sèche (µg EAG/mg MS).

1.3. Analyses statistiques

Les résultats des tests sont exprimés en moyenne ± SD. Les valeurs d’IC50 (concentration
inhibitrice à 50%) sont calculées par la méthode de régression linéaire à partir de la courbe [%
inhibition = f (concentrations)]. La différence entre le contrôle et les différents tests, est
déterminée par l’analyse de la variance (ANOVA) univariée suivie du test de Dunnett/Tukey
ou Test de Newman & keuls pour les comparaisons multiples des moyennes et la
détermination des taux de signification. Les valeurs de p ≤ 0.05 sont considérées
statistiquement significatives. Les programmes informatiques utilisés sont: STATISTICA 6.1
Copyright©StatSoft. Inc. 1984-2003(pour les corrélations) et XLSTAT version 7. 5. 2
Copyright© 1995-2004 Addinsoft (pour l’ANOVA).

Page 47
Résultats
&
Discussion

Page 48
 PARTIE III : Résultats et Discussion

Chapitre 1 : Caractéristiques et composition des HE

1.1. Extraction et rendement en huile essentielle

L’extraction des huiles essentielle, par entrainement à la vapeur, à partir de feuilles et de

fleurs des espèces de sauge étudiées (Salvia algeriensis, S. argentea et S. barrelieri), nous a
permis d’obtenir des rendements de l’ordre de 1.51 à 1.7β % pour les fleurs et de 0.83 à 0.87
% pour les feuilles (figure 09).Nous constatons, de manière générale, que les rendements en
huiles obtenus avec les fleurs sont meilleurs que ceux des fleurs et cela quelle que soit
l’espèce étudiée. Aussi, les différences de rendements en huiles entre les espèces étudiées ne
sont assez grandes. On note cependant, un léger avantage en faveur de l’espèce S. argentea
qui fournies des taux de 1.72 (fleurs) et 0.87 % (feuilles) (figure 07).

2
1,8 1,72
1,63
1,6 1,51
1,4
1,2
1 0,83 0,87 0,86
0,8
0,6
0,4
0,2
0
FR FE FR FE FR FE

S. algeriensis S. argentea S. barrelieri

Figure 07 : Rendement (%) en huile essentielle obtenu à partir de fleurs et de feuilles de trois
espèces de sauge (S. algeriensis, S. argentea et S. barrelieri).

La comparaison de nos rendements avec ceux rapportés par la bibliographie montre que
nos espèces sont plus riches en huiles. En effet, les rendements en huile obtenus avec des
espèces de sauge comme S. tomentosa et S. hydrangea, à partir de feuilles, étaient
respectivement de l’ordre de 0.51 % et 0.53 % (BEKTAS et al., 2005 et KOTAN et al.,
2008). Une espèce comme S. potentillifolia a donné un rendement avoisinant les 0.88 %
(KIVRAK et al., 2009).

Page 49
 PARTIE III : Résultats et Discussion
Les fluctuations et les variations dans les rendements, constatées dans nos résultats et
ceux des autres espèces de sauge, peuvent être attribuées à plusieurs facteurs. La diversité
interspécifique ; la nature des organes sur lesquelles les huiles ont été extraites, la localité où
sont récoltés les échantillons, sont autant de paramètres qui peuvent avoir une influence sur le
rendement en huile (RODOLFO et al., 2006).Même, la méthode d’extraction peut influer sur
le rendement et sur la qualité des HE. À titre d’exemple, le rendement en HE de Salvia
potetillifolia obtenu par la technique d’hydrodistillation était de 0.88% alors qu’avec
l’entrainement à la vapeur d’eau elle n’a atteint que 0.55% (KIVRAK et al., 2009).

1.2. Étude des caractéristiques physiques des huiles essentielles

Les huiles extraites de trois espèces de sauge, avaient un aspect liquide de coloration
jaune claire pour les feuilles et jaune foncée pour les fleurs, Elles dégagent toutes une très
forte odeur. L’étude de leurs propriétés physiques constitue un moyen de vérification et de
contrôle de qualité.

Deux principales propriétés physiques de nos huiles ont été déterminées à savoir : la
densité relative et l’indice de réfraction. Les résultats des analyses sont présentés dans le
tableau II.

Tableau II : Indice de réfraction et densité relative des HE extraites à partir de fleurs et de

feuilles de trois espèces de sauge (S. algeriensis, S. argentea et S. barrelieri).

Huiles essentielles
[Link] S. algeriensis S. argentea S. barrelieri

(ONIPPAM)* FR FE FR FE FR FE
Densité 0.910 – 0.930 0.883 0.902 0.887 0.914 0.896 0.918
Indice de 1.458 - 1,474 1.443 1.447 1.455 1.451 1.442 1.443
réfraction
*ONIPPAM : Office Nationale Interprofessionnelle des Plantes à Parfums Aromatiques et
Médicinales, France in (FELLAH, 2006).

La détermination de la densité d’une huile nous renseigne sur sa pureté. Elle est en
fonction de la composition chimique des huiles (KARLESKIND, 1992). Dans notre étude,

Page 50
 PARTIE III : Résultats et Discussion
nous avons déterminé ce critère de pureté à la température 20 °C, chez toutes les huiles
extraites.

Les résultats révèlent que les valeurs moyennes des densités varient de 0.883 à 0.918.
Les densités relatives des HE extraites de feuilles semblent toutes supérieures à celles des
huiles de fleurs et cela quelle que soit l’espèce. Pour une même espèce, nous constatons que
les densités des huiles de S. barrelieri (0.896 et 0.918) sont légèrement élevées par rapport
aux huiles des deux autres espèces à savoir S. algeriensis (0.883 et 0.902) et S.
argentea (0.887 et 0.914).

La comparaison des densités de nos huiles avec celles rapportées par la bibliographie,
montre qu’elles sont très proches. En effet, l’étude réalisé par l’Office Nationale
Interprofessionnelle des Plantes à Parfums Aromatiques et Médicinales, France in
(FELLAH, 2006) a montré que les densités de l’huile de Salvia officinalis affichent des
valeurs allant de 0.910 à 0.930.

Quant aux indices de réfraction des HE, ils ont été calculés et ramenés à β0°C à l’aide
d’un réfractomètre. Les résultats, représentés dans le tableau II, montrent que les indices de
réfraction des différentes huiles possèdent des valeurs très proches les unes des autres et cela
quelle que soit l’espèce de sauge étudiée. Ces valeurs varient de 1.442 (S. barrelieri) à 1.455
(S. argentea) et sont toutes supérieures à l’indice de réfraction de l’eau qui est de 1.γγ56.

Selon les référentiels classiques (Pharmacopée Européenne, ISO, AFNOR), la

détermination de ces grandeurs physiques est une étape nécessaire dans l’évaluation de la
qualité des HE (DESMARES et al., 2008), mais demeure insuffisante pour caractériser l'HE
surtout avec la non détermination des autres paramètres physico-chimiques (indice d’acide,
indice d’esters, indice de peroxyde, angle de rotation optique, point de solidification, résidu
d’évaporation, solubilité dans l’alcool …). Il sera donc primordial de déterminer le profil
chromatographique de nos essences aromatiques.

Page 51
 PARTIE III : Résultats et Discussion

1.3. Composition chimique des huiles essentielles

L’analyse par GC/MS, des HE des trois espèces étudiées, est effectuée dans le
laboratoire de recherche et développement de la société Algériennes des aérosols. Les
résultats de ces analyses sont présentés dans les tableaux (III) et (IV). Seule l’analyse des HE
de l’espèce Salvia argentea ne seront pas présentés à cause des résultats aberrants obtenus.

1.3.1. Composition chimique des HE de S. algeriensis

Tableau III : Composition chimique des huiles essentielles de Salvia algeriensis.

Composé IR FE(%) FR(%) Composé IR FE(%) FR(%)
Benzeneacetic acid, .alpha.,4-
1-Octen-3-ol 999 - 0,55 dihydroxy- 1438 0,87 -
5,9-Undecadien-2-one, 6,10-dimethyl-,
Benzaldehyde 927 1 0,79 (Z)- 1446 0,72 -

Eucalyptol 1009 - 4,88 3-tert-Butyl-4-hydroxyanisole 1450 - 0,31

Benzene, 1,4-dimethyl-2,5-bis(1-
Limonene 1026 0,34 - methylethyl)- 1454 0,61 -
Ethanone, 1-[5-(2-furanylmethyl)-2-
2-Decen-1-ol 1047 - 0,39 furanyl]- 1459 1,96 -

1-Octanol 1066 0,36 0,57 Benzene, 1-ethyl-4-(1-methylethyl) 1463 0,97 -

Camphor 1070 - 15,27 6-Acetamido-1,4-benzodioxane 1465 1,08 -

L-Fenchone 1084 0,77 - Benzene, 1-ethyl-3,5-diisopropyl- 1477 2,47 -
3-Buten-2-one, 4-(2,6,6-trimethyl-1-
1,6-Octadien-3-ol, 3,7-dimethyl- 1095 1,33 0,72 cyclohexen-1-yl)-, (E)- 1479 2,63 -
Naphthalene, 1,2-dihydro-2,5,8-
Nonanal 1100 0,61 0,22 trimethyl- 1497 0,41 -
Fenchol, exo- 1101 - 0,56 Phenol, m-tert-butyl- 1501 1,44 -
Bicyclo[2.2.1]heptan-2-one, 1,7,7-
trimethyl- 1132 - 7,73 Phenol, 2,4-bis(1,1-dimethylethyl) 1507 0,54 -

Butanoic acid, 1-cyclopentylethyl ester 1140 - 1,77 Phenol, 2-(1,1-dimethylethyl)- 1511 1,51 -
Bicyclo[2.2.1]heptan-2-one, 1,7,7- 2(4H)-Benzofuranone, 5,6,7,7a-
trimethyl-, (1R)- 1143 0,46 - tetrahydro-4,4,7a trimethyl- 1531 0,78 -
1,3,4-Thiadiazol-2-amine, 5-[(1-
Isoborneol 1158 - 0,76 methylethyl)thio]- 1549 - 0,2
3-Cyclohexen-1-ol, 4-methyl-1-(1- 1-(3-Methylbutyl)-2,3,5,6-
methylethyl)-, (R)- 1167 - 1,51 tetramethylbenzene 1564 - 0,45
Formic acid, 1-(4,7-dihydro-2-methyl-7-
oxopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-,
Thymol 1173 - 0,28 methyl ester 1568 - 0,45
Cyclohexene,1-methyl-3-(1- 1H-Indene, 3-ethenyl-2,3-dihydro-1,1-
methylethenyl)- 1182 - 1,93 dimethyl- 1574 - 0,83

p-menth-1-en-8-ol 1192 1,08 - 2-Butanone, 1-(2,3,6trimethylphenyl)- 1581 6,31 -

Page 52
 PARTIE III : Résultats et Discussion
Composé IR FE(%) FR(%) Composé IR FE(%) FR(%)
1,3-Cyclohexadiene-1-carboxaldehyde, Disiloxane, 1,1,3,3-tetramethyl-1,3-
2,6,6-trimethyl- 1195 0,36 - bis[3-(oxiranylmethoxy)propyl]- 1582 - 0,37

Fenchyl acetate 1205 - 1,22 β-Gurjunene 1587 - 4,05

2,4-Cycloheptadien-1-one, 2,6,6-
trimethyl- 1207 - 0,24 beta.-Panasinsene 1595 2,43 -

2-Pentene, 2,4-dimethyl- 1209 2,4 - beta.-guaiene 1603 11,31 34,32

1-Cyclohexene-1-carboxaldehyde,
2,6,6-trimethyl- 1216 1,29 - Megastigmatrienone I 1617 0,66 -
4-Methyl-1,3-pentadiene 1228 0,32 - Megastigmatrienone II 1621 1,46 -
2-Cyclohexen-1-one, 3-methyl-6-(1-
methylethyl)- 1246 - 0,25 Megastigmatrienone III 1626 2,15 -
Bornyl acetate 1280 - 5,99 1,4-Benzenediol, 2,6-dimethyl- 1646 - 0,9
1H-Inden-1-one, 2,3-dihydro- 1281 0,75 - Patchoulene 1653 - 0,85
2-Undecanone 1295 0,73 - [Link].-ionone 1662 0,61 -
1,3-di-n-Propyladamantane 1314 0,33 - delta.-Selinene 1697 - 0,54
Benzene, 1-methyl-3-(1-methylethyl) 1324 - 0,3 Hexanal, 4,4-dimethyl- 1750 - 0,33
Myrtenyl acetate 1325 0,54 4,66 Ledol 1834 - 1,53
2-Naphthalenamine, 5,6,7,8-
tetrahydro- 1331 3,9 - Propyphenazone 1863 - 0,28
Eugenol 1352 2,36 - Benzene, (1-methyldodecyl)- 1903 - 0,33
4-(1H-Pyrazol-1-yl)benzeneamine 1377 - 0,6 Tridecanoic acid 1967 0,73 -
beta.- demascenone 1379 22,96 0,88 1-Nonadecene 2046 0,52 -
Propofol 1388 - 0,22 Phytol 2058 0,82 -
1-(2-Cyanoethyl)-2-ethyl-4-
methylimidazole 1396 4,24 - TOTAL (%) / 94,61 98,03
1,3-Benzodioxol-2-one, 5-(1,1-
dimethylethyl)- 1404 1,47 -
Benzeneethanal, 4-[1,1- IR :indice de rétention calculé ;
dimethylethyl]-.alpha.-methyl- 1426 4,02 - FE : Feuilles ; FR : Fleurs

Les résultats de l’analyse des HE de Salvia algeriensis effectuée par GC-MS montrent
qu’il existe un total de 45 composés (94.61 %) identifiés chez les feuilles et 39 autres (98.03
%) chez les fleurs (tableau III). Les constituants majoritaires des HE de feuilles sont
représentés par -demascenone (22.96 %) ; -guaiene (11.31 %) ; 2-Butanone, 1-(2,3,6-
trimethylphenyl)- (6.31 %) ; 1-(2-Cyanoethyl)-2-ethyl-4-methylimidazole (4.24 %) ;
Benzeneethanal, 4-[1,1-dimethylethyl]-.alpha.-methyl- (4.02 %) et 2-Naphthalenamine,
5,6,7,8-tetrahydro- (3.9 %). Les HE des fleurs comptent sept (7) constituants majoritaires : -
guaiene (34.32 %) ; camphor (15.27 %) ; Bicyclo [2.2.1]heptan-2-one, 1,7,7-trimethyl- (7.73
%) ; Bornyl acetate (5.99 %) ; Eucalyptol (1,8 Cinéole) (4.88 %) ; Myrtenyl acetate (4.66 %)
et -Gurjunene (4.05 %). Ces constituants majoritaires des feuilles et des fleurs représentent
respectivement 52.74 % et 76.9 % des constituants totaux.

Page 53
 PARTIE III : Résultats et Discussion
Les résultats du tableau III montrent aussi que certain composé majoritaire comme le -
guaiene est commun pour les HE de feuilles et de fleurs. D’autres par contre, sont spécifiques
à l’huile comme le -Damascenone (chez les feuilles) ou le camphor (chez les fleurs).

Les différences relevées entre les constituants chimiques des huiles, de la même espèce,
peuvent être attribuées essentiellement à la nature de l’organe ayant fait l’objet d’extraction.
En effet, les métabolites secondaires produits par la plante ne se distribuent pas de la même
manière dans tous les organes. Ce qui peut expliquer les différences enregistrées dans la
composition des huiles de feuilles et de fleurs.

1.3.2. Composition chimique des HE de S. barrelieri

Tableau IV: Composition chimique des huiles essentielle de Salvia barrelieri.

Composé IR FE (%) FR(%) Composé IR FE(%) FR(%)

alpha.-Pinene 903 - 0,22 2-Buten-1-one, 1-(2,6,6-trimethyl-1,3- 1371 8,05 -

cyclohexadien-1-yl)-, (E)-
2-Furancarboxaldehyde, 5-methyl- 959 - 0,21 1-(2-Cyanoethyl)-2-ethyl-4-methylimidazole 1388 0,74 -
Benzaldehyde 962 0,97 0,42 Benzene, 1,2-dimethoxy-4-(2-propenyl)- 1391 - 1,85
1-Decen-3-one 996 1,69 1,24 2-Azidomethyl-1,3,3-trimethyl-cyclohexene 1393 0,23 -
beta.-Myrcene 994 - 2,53 2,3,3,4,7-Pentamethyl-2,3- 1397 0,73 -
dihydrobenzofuran
Benzene, 1-methyl-2-(1- 984 0,25 - 3-(4-Isopropyl-phenyl)-acrylic acid 1398 - 0,2
methylethyl)-
beta.-Phellandrene 1009 - 2,7 6,8-Nonadien-2-one, 6-methyl-5-(1- 1401 - 0,46
methylethylidene)-
Eucalyptol 1010 - 1,29 Caryophyllene 1413 0,48 3,18
Benzeneacetaldehyde 1023 0,65 0,84 4-Butyl-indan-5-ol 1419 0,76 0,19
1,4-Cyclohexadiene, 1-methyl-4- 1031 0,53 - gamma.-Elemene 1422 - 0,55
(1-methylethyl)-
cis-Linalol oxide 1045 0,09 - 4,7-Methanoazulene, 1,2,3,4,5,6,7,8- 1435 - 0,44
octahydro-1,4,9,9-tetramethyl-,[1S-
([Link].,[Link].,[Link].)]-
Linalool 1084 1,07 3,81 6-Methyl-6-(5-methylfuran-2-yl)heptan-2one 1431 0,53 -
Phenylethyl Alcohol 1087 0,31 - Cyclobutaneethanol, 1-methyl-2-(1- 1440 1,63 -
methylethenyl)-, (1R-cis)-
Nonanal 1089 0,67 0,5 5,9-Undecadien-2-one, 6,10-dimethyl-, (E)- 1443 - 0,52
1H-Pyrazole, 4,5-dihydro-5,5- 1096 0,28 - m-Cymene, 5-tert-butyl- 1447 0,81 -
dimethyl-4-isopropylidene-
Terpineol, [Link].- 1109 - 0,28 alpha.-Caryophyllene 1451 - 1,41
2,6,6-Trimethyl-2-cyclohexene- 1122 0,34 - 1-(3-Methylbutyl)-2,3,5-trimethylbenzene 1452 2,08 -
1,4-dione
2-Cyclohexen-1-ol, 1-methyl-4-(1- 1128 - 0,25 gamma. Dodecalactone 1459 1,08 -
methylethyl)-, cis-

Page 54
 PARTIE III : Résultats et Discussion
Composé IR FE(%) FR(%) Composé IR FE(%) FR(%)
2,6-Nonadienal 1131 0,17 - Benzene, 1-ethyl-3,5-diisopropyl- 1470 2,01 0,25
Cyclohexene,3-butyl- 1136 - 0,24 3-Buten-2-one, 4-(2,6,6-trimethyl-1- 1472 1,25 0,19
cyclohexen-1-yl)-
Benzenemethanol,4(1,1- 1149 0,19 - Hexylresorcinol 1476 0,37 -
dimethylethyl)
Naphthalene, decahydro-2,2- 1151 0,21 - 2-Tridecanone 1489 0,31 -
dimethyl-
4-Ethylbenzoic acid, 2-phenylethyl 1154 0,36 - Phenol, m-tert-butyl- 1494 1,07 -
ester
Borneol 1159 0,27 0,25 Phenol, 2-(1,1-dimethylethyl)- 1504 0,8 -
Octanoic Acid 1165 0,58 - Phenol, 3-methoxy-2,4,5-trimethyl- 1511 - 7,06
Hexanoic acid 1166 0,09 - 3,7-Benzofurandiol, 2,3-dihydro-2,2 1512 - 0,28
dimethyl-
3-Cyclohexen-1-ol, 4-methyl-1-(1- 1168 0,76 1,14 cis, cis-3-Ethylbicyclo[4.4.0]decane 1516 0,57 -
methylethyl)-
Furan, 2,4-dimethyl- 1175 - 1,8 2(4H)-Benzofuranone, 5,6,7,7a-tetrahydro 1524 0,57 -
4,4,7a-trimethyl-
3-Cyclohexene-1-methanol, 1177 1,58 - Anisindione 1532 - 0,77
.alpha.,.alpha.4-trimethyl-
1,3-Cyclohexadiene-1- 1180 0,9 - 1H-Inden-1-one, 2,3-dihydro-3,3,5,7 1540 0,39 -
carboxaldehyde, 2,6,6-trimethyl- tetramethyl-
α-Terpineol 1185 - 4,53 3,7-Cyclodecadiene-1-methanol, 1545 - 0,56
.alpha.,.alpha.,4,8-tetramethyl-, [s-(Z,Z)]
Anisole, p-allyl- 1186 - 1,01 Cyclohexane, 1-ethenyl-1-methyl-2-(1- 1557 - 1,12
methylethenyl)-4-(1-methylethyl idene)-
Decanal 1188 0,26 - Dodecanoic acid 1558 0,77 -

3-Nonen-5-one 1195 2,52 - Benzene, 1,4-dimethyl-2,5-bis(1- 1573 - 1,48

methylethyl)-
1-Cyclohexene-1-carboxaldehyde, 1201 0,78 - Benzene, 1,2,4,5-tetraethyl- 1574 8,59 -
2,6,6-trimethyl-
Furan, 3-phenyl- 1204 0,15 - Caryophyllene oxide 1581 0,52 4,66

Benzofuran, 2,3-dihydro- 1210 - 1,13 beta.-Panasinsene 1593 0,47 -

Thiazole, 5-methyl- 1225 0,41 - Carotol 1600 1,39 -

Propanal, 2-methyl-3-phenyl- 1235 7,32 1,84 Ledene oxide-(II) 1606 - 0,45

2,6-Octadien-1-ol, 3,7-dimethyl-, 1244 - 0,76 2,3,5,6-Tetrafluoroanisole 1615 - 0,41

(E)-
3-Cyclohexen-1-one, 2-isopropyl- 1251 - 13,72 Megastigmatrienone I 1618 2,76 0,33
5-methyl-
2,6-Octadien-1-ol, 3,7-dimethyl- 1237 0,6 - Megastigmatrienone II 1619 2,03 0,43

2-Cyclohexen-1-one, 3-methyl-6- 1242 0,61 - Megastigmatrienone III 1620 6,59 1,10

(1-methylethyl)-
Benzeneacetaldehyde,alpha.- 1258 0,24 - Cedren-13-ol, 8- 1625 - 0,24
ethylidene-
2,6-Octadienal, 3,7-dimethyl- 1262 - 0,3 Eudesma-4(14),11-diene 1631 - 0,5

Nonanoic acid 1264 0,68 - Neopentylidenecyclohexane 1636 - 1,55

Page 55
 PARTIE III : Résultats et Discussion
Composé IR FE(%) FR(%) Composé IR FE(%) FR(%)
1,5-Cyclohexadiene-1-methanol, 4- 1267 - 0,6 Epi-bicyclosesquiphellandrene 1640 - 1
(1-methylethyl)-
1,2,5,5,6,7-Hexamethylbicyclo 1272 0,58 - Azulene, 1,2,3,4,5,6,7,8-octahydro-1,4 1654 - 1,5
[4.1.0]hept-2-en-4-one dimethyl-7-(1-methylethylidene)-, (1S-cis)-
1-Cyclohexene-1-carboxaldehyde, 1274 0,47 1,12 Isolimonene 1666 - 1
4-(1-methylethyl)-
alpha.-Thujenal 1280 3,28 - Isoaromadendrene epoxide 1668 - 0,5

2,5-Cyclohexadien-1-one, 4-ethyl- 1283 - 0,7 1-Hexadecanol 1672 0,38 -

3,4-dimethyl-
Benzenemethanol, .alpha.-propyl- 1284 1,59 - gamma.-Neoclovene 1675 - 0,39

Benzenemethanol, 4-(1- 1288 - 0,6 Guaia-3,9-diene 1697 - 0,32

methylethyl)
beta.-Acetylacrylic acid 1291 0,29 - Crotonophenone, 2',5'-dimethyl- 1706 - 0,3

2-Methoxy-4-vinylphenol 1307 0,94 2,7 Bicyclo[2.2.2]octa-2,5-diene, 1,2,3,6- 1710 - 0,2

tetramethyl-
Benzene, 1-ethyl-3,5-dimethyl- 1323 1,39 0,29 Santolina triene 1713 - 0,39
(+)-4-Carene 1342 - 1,3 (-)-Spathulenol 1745 - 0,29

Eugenol 1344 1,41 - Tetradecanoic acid 1757 1,24 -

Naphthalene, 1,2-dihydro-1,1,6- 1347 0,64 - Isolongifolene, 4,5-dehydro- 1779 - 0,33

trimethyl-
2-Buten-1-one, 1-(2,6,6-trimethyl- 1350 0,74 - 2-Pentadecanone, 6,10,14-trimethyl 1836 0,54 0,38
1,3-cyclohexadien-1-yl)-
3,3-Dimethyl-2,5-bis-(2-oxo- 1351 - 0,68 1,2-Benzenedicarboxylic acid, bis(2- 1853 0,51 0,26
propyl)-cyclopentanone methylpropyl) ester
2,6-Octadien-1-ol, 3,7-dimethyl- 1352 - 1,45 Dibutyl phthalate 1950 0,45 0,28
,acetate, (Z)-
Geranyl acetate 1373 - 9,2 n-Hexadecanoic acid 1959 2,91 0,22

1,3-Cyclooctadiene 1358 1,42 - Phytol 2055 2,8 0,33

Spiro[4.5]decan-1-one 1359 0,81 - 9,12,15-Octadecatrien-1-ol, (Z,Z,Z)- 2068 0,47 -

1,4-Cyclooctadiene, (Z,Z)- 1363 1,34 - TOTAL (%) / 99,44 99,96

n-Decanoic acid 1366 0,63 -

8-Quinolinol, 2-methyl- 1380 - 1,25 IR : indice de rétention calculé ; FE : feuilles ; FR : fleurs

Les résultats de l’analyse des HE des feuilles de Salvia barrelieri effectuée par GC-MS
ont permis d’identifier 81 composés (99.44 %) chez les feuilles (tableau IV). Les constituants
majoritaires, représentant environ 40.32 % des composés totaux, sont formés de : 2-Buten-1-
one, 1-(2,6,6-trimethyl-1,3-cyclohexadien-1-yl)-, (E)- (8.05 %) ; Propanal, 2-methyl-3-
phenyl- (7.32 %) ; Megastigmatrienone III (6.59 %) ; alpha.-Thujenal (3.28 %) ; n-
Hexadecanoic acid (2.91 %) ; Phytol (2.8 %) ; Megastigmatrienone I (2.76 %) ; 3-Nonen-5-

Page 56
 PARTIE III : Résultats et Discussion
one (2.52 %) ; 1-(3-Methylbutyl)-2,3,5-trimethylbenzene (2.08 %) ; 1-(3-Methylbutyl)-2,3,5-
trimethylbenzene (2.01 %).

Avec les HE des fleurs de Salvia barrelieri, l’analyse GC/MS a montré l’existence de
76 composés (99.96 %) (Tableau IV). Au total, sept (7) composés chimiques qui représentent
environ 46,16 % de la composition totale, sont majoritaires. Il s’agit de : 3-Cyclohexen-1-one,
2-isopropyl-5-methyl- (13.72 %) ; Geranyl acetate (9.2 %) ; Phenol, 3-methoxy-2,4,5-
trimethyl- (7.06 %) ; Caryophyllene oxide (4.66 %) ; α-Terpineol (4.53 %) ; Linalool (3,81
%) ; Caryophyllene (3.18 %).

La comparaison de la composition des HE provenant de feuilles et de fleurs de S.

barrelieri montre qu’il n’existe aucune ressemblance entre les constituants majoritaires
malgré l’appartenance des deux huiles à la même espèce pour ne pas dire à la même plante.
Cependant, on dénombre à plus de vingt (20) constituants chimiques communs parmi les
composés minoritaires.

D’après les résultats de la composition chimique des HE des trois espèces de sauge
étudiées, nous relevons quelques observations qui peuvent être résumées comme suit :

Il y a d’abord les différences qui existent dans la composition des huiles provenant de
fleurs ou de feuilles au sein d’une même espèce. Cette différence touche à la fois et à la
qualité et à la quantité des constituants chimiques des HE comme le confirme la composante
des constituants majoritaires. La variabilité constatée dans la composition chimique des huiles
peut être expliquée soit par l’existence d’un polymorphisme intraspécifique soit par une
distribution différente des métabolites secondaires vers les différents organes composants la
plante. L’étude moléculaire, utilisant la technique du RAPD, réalisée par SBIHI, (2012) sur
plusieurs populations de S. algeriensis a mis en évidence l’existence d’un polymorphisme
intra-population et inter-population. Des observations similaires ont été faites dans une étude
portant sur les HE de Lavandula stoechas où le polymorphisme existant au sein d’une même
population était déterminant dans la composition chimique (BENABDELKADER et al.,
2011).

La deuxième différence dans la composition des huiles est liée aux espèces de sauge
étudiées. En effet très peu de ressemblance existe entre la composante de leurs HE.
Particulièrement les composés majoritaires. Seulement deux composés (1,8 cinéole et
bornéol) semblent être présents dans la composition des HE de nombreuses espèces

Page 57
 PARTIE III : Résultats et Discussion
appartenant au genre Salvia y compris les nôtres (KIVRAK et al., 2009). La variabilité dans
la composition chimique est surement due à l’effet génotypique mais pas seulement puisque
l’environnement peut avoir aussi sa part d’influence.

En faisant une comparaison de la composition chimique de nos HE avec celles de la

bibliographie, nous nous somme parvenu à faire plusieurs constatations.

La première, concerne la rareté des études publiées sur les HE conduites sur les mêmes
espèces de sauge à savoir S. algeriensis, S. barrelieri et S. argentea. Cela nous a privé à faire
une confrontation entre nos résultats et ceux de la bibliographie. Les résultats de la présente
étude sont donc originaux.

La deuxième, est liée à la comparaison de nos résultats avec les études menées sur
d’autres espèces de sauge. Les études avec lesquelles nous avons confronté nos résultats
montrent que la composante des constituants majoritaires est totalement différente des nôtre.
C’est le cas des résultats de l’analyse des huiles de S. ceratophylla, qui a permis d’identifier
53 composés dont dix forment les constituants majoritaires : -muurolene (11.4%), α-pinene
(7.6%), -cadinene (5.7%), trans-pinocarvylacetate (5.3%), α-copaene (4.7%), α-thujone
(4.6%), 1-epi-cubenol (3.9%), cis- -guaiene (3.4%), p-cymene (3.2%) et α -muurolene (3.0%)
(NEVCIHAN et al., 2012). Dans une autre étude conduite sur S. piliferai montre que les
composés majoritaires sont représentés essentiellement par deux composés : α-thujene (36,1
%) et α-pinene (13,8 %) (MUSTAFA et BEKTAS, 2008).

Parfois, certains composés identifiés dans nos huiles comme majoritaires, sont cités
comme tels dans la composition des huiles d’autres espèces de sauge. L’étude conduite par
MUSTAFA et BEKTAS, (2008) sur les HE de S. aucheri var. aucheri et de S. aramienesis
montre que le 1,8-cineole et le camphor font partie des composés majoritaires. C’est aussi le
cas de S. palaestina où les constituants majoritaires sont représentés par : caryophyllene
oxide (16.1%) et (E)- caryophyllene (4.5%) (GÜRSOY et al., 2012). Toujours avec l’espèce
S. palaestina, RUSTAIYAN et al, (2005) et SALEHI et al, (2005), rapportent tous deux, que
le -caryophyllene figure dans la liste des composés majoritaires des HE. Dans notre étude,
certains de ces constituants se retrouvent dans le pool des composés majoritaires de l’huile de
fleur de S. algeriensis (1,8-cineole et le camphor) et des feuilles de S. barrelieri
(caryophyllene oxide et caryophyllene).

Page 58
 PARTIE III : Résultats et Discussion

Chapitre 2: Activité antioxydante et antibactérienne des HE

2.1. Activité antioxydante des huiles essentielles

2.1.1. Activité antioxydante sur CCM

La chromatographie sur couche mince est employée pour tester qualitativement

l’activité antioxydante des huiles essentielles, dont une solution méthanolique de DPPH
(0.016 %) est utilisée pour révéler la présence ou l’absence d’une activité antiradicalaire
(figure 08).

Figure 08: révélation de l’activité antiradicalaire des huiles essentielles sur CCM.
1: FE S. barrelieri; 2: FR S. barrelieri; 3: FE S. argentea; 4: FR S. argentea; 5: FE S. algeriensis; 6: FR S. algeriensis; 7: BHT.

La figure n° (08) montre que toutes les HE, quelles que soient leurs origines ont réagi
positivement aux tests anti-radicalaires avec le DPPH. Cependant, les réponses diffèrent
d’une espèce de sauge à une autre. Les meilleurs résultats (surface des spots) sont ceux
obtenus avec les huiles de S. argentea, suivi de S. algeriensis et de S. barrelieri. Les
différences d’aptitude enregistrées à l’égard de l’activité antioxydante des huiles peuvent être
attribuées à divers facteurs comme la composition chimique de chaque HE, la nature et la
teneur en composés réagissant avec le radical DPPH. Le spot 7 est le témoin, représenté par le
BHT.

Page 59
 PARTIE III : Résultats et Discussion

2.1.2. Activité antioxydante par spectrophotométrie

L’activité antioxydante des HE est évaluée en utilisant deux essais complémentaires à

savoir : le test du DPPH (figure 09) et le test du _carotène/acide linoléique (figure 10). Les
résultats de ces deux tests nous permettent de mieux apprécier les propriétés antioxydantes de
nos huiles.

Figure 09: Les valeurs des IC50 obtenues selon les HE extraites de feuilles (FE) et fleurs (FR)
de S. algeriensis, S. argentea et S. barrelieri et les standards.

Selon les résultats de l’activité antioxydante (Figure 09), les huiles de l’espèce S.
algeriensis semblent présenter les meilleures réponses avec des valeurs d’IC 50 égales à 8,91 ±
0,76 mg/ml (avec les FE) et 8,44 ± 0,37 mg/ml (avec les FR). Elle est suivie par S. barrelieri
qui enregistre des IC50 de 8,29 ± 0,32 mg/ml (avec les FE) et 8,69 ± 0,39 mg/ml (avec les
FR). Les huiles les moins efficaces sont celles de l’espèce S. argentea.

Malgré les résultats positifs de nos huiles sur l’activité antioxydante, les témoins se
montrent plus performants. En effet, les valeurs IC50 des antioxydants synthétiques obtenues
avec le BHT et acide ascorbique ont atteints respectivement 17,55 ± 0,35 µg/ml et 4,89 ± 0,13
µg/ml.

Page 60
 PARTIE III : Résultats et Discussion
Les propriétés antioxydantes de nos huiles peuvent avoir une liaison avec les
constituants chimiques qui les composent. En effet, un constituant chimique tel que le
damascenone, composé majoritaire des HE de S. algeriensis et dérivés du groupe des
caroténoïdes, possèdent de forte activité antioxydante (SACHIHIKO et al., 1973). De même
pour l’eucalyptol, un autre constituant majoritaire, pourvu d’une bonne capacité antioxydante
(YUN et al., β000). En plus de l’action individuelle antioxydante que génère un composé
chimique d’une huile, il existe aussi l’effet synergique qui peut s’établir entre les différents
constituants.

De nombreuses études conduites avec d’autres espèces de sauges confirment leur

pouvoir antioxydant. C’est le cas de l’étude réalisée sur l’espèce S. tomentosa par BEKTAS
et al. (2005) et dans laquelle l’IC50 maximal a atteint les 145 µg/ml. Ces valeurs comparées
aux nôtres paraissent plus efficaces, même ceux signalés par MUSTAFA et BEKTAS,
(2008), paraissent meilleurs que les nôtres. En effet, les huiles de Salvia aucheri var aucheri,
S. aramiensis et S. pilifera donnent des IC50 de 18,8 ± 1,2 µg/ml, 12,2 ± 1,0 µg/ml et de 24,1
± 0,7µg/ml respectivement.

Les molécules antioxydantes contenues dans les HE possèdent des propriétés

biologiques diverses telles que les actions : anti-inflammatoires, anti-athéroscléroses et anti-
cancérogènes. Ces propriétés peuvent être liées à leurs activités antioxydantes (CHUNG et
al., 1998).
asco
rbiq
argentea BHT ue

91,64
A.

96,85
FR 42,91
S.

FE 42,14
algerien barrelier

FR 50,28
S.

FE 52,61
FR 54,82
sis
S.

FE 56,87

0 20 40 60 80 100 120

% d'inhibition

Figure 10: Taux d’inhibition du test _carotène/acide linoléique obtenus par les huiles de
feuilles (FE) et de fleurs (FR) de Salvia algeriensis, S. barrelieri et S. argentea.

Page 61
 PARTIE III : Résultats et Discussion
L’évaluation de l’activité antioxydante des HE par le test de la _carotène/acide
linoléique a donnée des résultats intéressants. L’activité la plus élevée est enregistrée avec S.
algeriensis (FE: 56,87 ± 0,74 % ; FR: 54,82 ± 1,54 %), suivie de S. barrelieri (FE: 52,61 ±
1,66 %; FR: 50,28 ± 1,34 %), et de S. argentea en dernier rang avec une inhibition de (FE:
42,14 ± 1,08 % ; FR: 42,91 ± 1,02 %). Aucun de ces résultats n’a dépassé le taux d’inhibition
des témoins positifs : BHT (96,85 ± 0,41 %) et acide ascorbique (91,64 ± 0,52 %) (Figure 10).

La comparaison des résultats des deux tests (DPPH et _carotène/acide linoléique) nous
a permis de déduire qu’il existe des différences dans le classement basé sur les valeurs de
l’activité antioxydante entre les espèces expérimentées. Avec le test DPPH, l’activité
antioxydante de S. algeriensis (FE) ˃S. barrelieri (FE) ˃ S. algeriensis (FR) ˃ S. barrelieri
(FR) ˃ S. argentea (FE) ˃ S. argentea (FR). Par contre avec le test du _carotène/acide
linoléique, l’activité antioxydante de S. algeriensis (FE) ˃ S. algeriensis (FR) ˃ S. barrelieri
(FE) ˃ S. barrelieri (FR) ˃ S. argentea (FR) ˃ S. argentea (FE).

Cependant, il y a lieu de noter que les deux tests confirment la supériorité de l’espèce S.
algeriensis, suivie de S. barrelieri. Les résultats des deux tests classent l’espèce S. argentea
comme étant la moins performante. Ce n’était pas le cas avec l’espèce S. palaestina où les HE
sont révélées plus efficaces que l’emploi du BHT comme antioxydant par le test
_carotène/acide linoléique (80.57% avec les huiles contre 41,53 % avec le BHT) (GÜRSOY
et al., 2012).

Statistiquement (test Dunnett), une différence significative est enregistrée entre les
valeurs de l’activité antioxydante des HE des trois espèces de sauge (S. algeriensis; S.
argentea et S. barrelieri) avec celles des témoins positifs BHT et acide ascorbique (annexe
II).

2.2. Activité antibactérienne des huiles essentielles

2.2.1. Aromatogramme par la méthode des disques

En milieu solide l’action antibactérienne des HE des trois sauges testées se traduit
par l’apparition de zone d’inhibition autour des disques. Le diamètre des zones d’inhibition
(DD) diffère d’une bactérie à une autre et d’une huile à une autre. Les résultats des
expériences portant sur l’effet antimicrobien des HE de feuilles et de fleurs des trois espèces
de Salvia sont présentés dans les tableaux V, VI, VII.

Page 62
 PARTIE III : Résultats et Discussion
De manière générale, nous constatons que toutes les huiles expérimentées manifestent
des propriétés antibactériennes à l’égard de la majorité des bactéries pathogènes testées. Nous
présentons ci-après les résultats de l’aromatogramme obtenus avec chaque espèce de sauge.

[Link]. Pouvoir antibactérien des HE de S. algeriensis

Les résultats du tableau V montrent que les huiles de S. algeriensis sont toutes pourvues
de pouvoir antibactérien. On note cependant, des différences d’efficacité, entre les huiles
provenant de feuilles ou de fleurs. A ce sujet, l’activité antibactérienne des huiles de feuilles
est plus efficace que celle des fleurs. Les huiles de feuilles ont eu des effets antibactérien
importants vis-à-vis de S. typhimirium, S. aureus ATCC 25923 et P. vulgaris, avec des
diamètres des zones d’inhibition (DD) ayant atteint γ0,0 mm et une CMI de 1/400), (DD :
19,5 mm, 1/800) et (DD : 19,5 mm, CMI: 1/400) respectivement. D’autres réponses positives
ont été enregistrées avec deux autres souches de bactéries : E. coli ATCC 25922 (DD : 13,5
mm, CMI: 1/400) et E. coli (DD : 12,0 mm, CMI: 1/400).

Tableau V: Effet antibactérien des HE de feuilles et fleurs de S. algeriensis contre

quelques espèces de bactéries pathogènes.

Souches bactériennes Feuilles Fleurs

DD CMI DD CMI
E. coli ATCC 25922 13,5 1/400 11,5 1/400
P. aeruginosa ATCC 27853 7,5 1/400 8,0 1/400
S. aureus ATCC 25923 19,5 1/800 9,5 1/800
E. coli 12,0 1/400 10,5 1/400
S. typhimirium 30,0 1/400 7,5 1/100
S. aureus 9,0 1/200 12,0 1/400
P. vulgaris 19,5 1/400 19,0 1/400
P. mirabilis 9,5 1/100 7,5 1/100
H. pylori 10,5 1/100 9,0 1/200
Citrobacter ssp 8,5 1/100 10,5 1/200
DD : Dia t e d’i hi itio en mm incluant 6 mm de disque; CMI : Concentration minimale inhibitrice

Page 63
 PARTIE III : Résultats et Discussion
Les seules souches bactériennes qui semblent avoir résisté aux HE de feuilles de S.
algeriensis sont : P. aeruginosa ATCC 27853, Citrobacter ssp, P. mirabilis, S. aureus et H.
pylori et les DD obtenus étaient de 7,5 mm ; 8,5 mm ; 09 mm et 10,5 mm, respectivement.
L’activité anti H. pylori est remarquable, mais la CMI est élevée (1/100).

Concernant les HE des fleurs de S. algeriensis, elles ont montré une activité
antibactérienne moins efficace que celle des feuilles. En effet, les résultats ont révélé
l’existence de quatre germes seulement qui paraissent sensibles à l’égard de ces huiles. Il
s’agit de P. vulgaris (19,0 mm, CMI: 1/400) ; suivie de S. aureus avec (12,0 mm, CMI:
1/400) ; E. coli ATCC 25922(11,5 mm, CMI: 1/400) et de Citrobacter ssp (10,5 mm,
CMI:1/200). Les six souches de bactéries restantes à savoir : S. typhimirium, P. mirabilis, P.
aeruginosa ATCC 27853, H. pylori, S. aureus ATCC 25923, semblent être moins à peu
sensibles à nos huiles compte tenu des faibles DD obtenus (7,5 mm et 9,5 mm).

A travers ces résultats, nous pouvons dire que les HE de S. algeriensis surtout celles des
feuilles, se sont montrées très efficaces vis-à-vis de certaines bactéries pathogènes comme S.
typhimirium ou P. vulgaris. Cependant, l’efficacité de ces mêmes huiles s’est révélée moindre
sur d’autres souches de bactéries telles P. aeruginosa ATCC 27853, P. mirabilis et H. pylori.

[Link]. Pouvoir antibactérien des HE de S. argentea

Les huiles de S. argentea enregistre une activité antibactérienne très efficiente à l’égard
des dix bactéries testées par rapport à S. algeriensis. Selon les résultats du tableau VI, nous
avons noté que trois souches de bactéries parmi les dix se montrent sensibles aux huiles de
feuilles. Les espèces, représentées par E. coli ATCC 25922 ; S. aureus ATCC 25923 ; E. coli
et P. vulgaris, ont donné des DD dépassant les 20 mm et des CMI de 1/400 et 1/200.

Page 64
 PARTIE III : Résultats et Discussion
Tableau VI: Effet antibactérien des HE de S. argentea contre quelques espèces de
bactéries pathogènes.

Souches bactériennes Feuilles Fleurs

DD CMI DD CMI
E. coli ATCC 25922 22,0 1/400 21,5 1/800
P. aeruginosa ATCC 27853 9,5 1/200 8,0 1/400
S. aureus ATCC 25923 22,0 1/400 7,5 1/200
E. coli 22,0 1/400 19,5 1/400
S. typhimirium 12,5 1/400 10,0 1/400
S. aureus 8,0 1/200 9,5 1/200
P. vulgaris 20,5 1/200 20,0 1/400
P. mirabilis 15,0 1/200 16,0 1/400
H. pylori 17,0 1/400 16,5 1/400
Citrobacter ssp 8,5 1/100 7,0 1/100
DD : Diamètres des zones d’inhibition en mm incluant 6 mm de disque; CMI : Concentration minimale inhibitrice

Toujours selon les résultats du tableau VI, nous avons relevé que la sensibilité de
certaines bactéries à nos huiles était moyenne, comme c’est le cas de P. vulgaris (DD : 20,5
mm, CMI: 1/400) ; H. pylori (DD : 17,0 mm ; CMI: 1/400) ; P. mirabilis (DD : 15,0 mm ;
CMI: 1/200), à faible avec S. typhimirium, (DD de 12,5 mm ; CMI de 1/400).

S’agissant des HE de fleurs de S. argentea, les réponses étaient presque les mêmes que
celles produites par les huiles de feuilles (tableau VI). Parmi les germes qui se sont montrés
sensibles figurent : E. coli ATCC 25922 (DD : 21,5 mm ; CMI très faible 1/800) ; P. vulgaris
(DD : 20,0 mm, CMI: 1/400). D’autres semblent être moins sensibles que les premiers,
comme E. coli (DD : 19,5 mm, CMI: 1/400) ; H. pylori (DD : 16,5 mm, CMI: 1/400) et P.
mirabilis (DD : 16,0 mm, CMI: 1/400). Les seules souches qui paraissent être, une fois de
plus, récalcitrantes à nos huiles sont : S. typhimirium (DD : 10,0 mm, CMI: 1/400) ;
Citrobacter ssp (DD : 7,00 mm, CMI : 1/100) ; P. aeruginosa ATCC 27853 (DD : 8,0 ;
1/400) et S. aureus ATCC 25923 (DD : 7.5, CMI : 1/200).

L’inhibition importante constatée chez les HE de S. argentea contre des bactéries

pathogènes comme E. coli ATCC 25922, ou H. pylori peut les classer comme un agent
antibactérien puissant pour lutter contre certaines maladies. Ces deux germes causent des
maladies très graves de type diarrhéiques (pour E. coli ATCC 25922) (PANG et al., 2013) ou
gastroduodénales: ulcère duodénal, ulcère gastrique, lymphome gastrique du MALTE et aussi

Page 65
 PARTIE III : Résultats et Discussion
cancer gastrique (pour H. pylori) (MEGRAUD, 2004). La sensibilité de ces germes à nos
huiles essentielles peut constituer donc une piste sérieuse pour trouver un remède ou un
moyen de lutte naturel efficace contre ces bactéries pathogènes.

[Link]. Pouvoir antibactérien des HE de S. barrelieri

Contrairement aux huiles des espèces précédentes, celles de S. barrelieri s’avèrent

moins performantes sur le plan activité antibactérienne que les autres. Il n’existe pas une
grande différence en termes d’effet antimicrobien entre les HE de feuilles et de fleurs
(tableau VII). Le plus grand halo d’inhibition (DD) est celui obtenu, en présence des huiles de
fleurs avec l’espèce S. aureus ATCC 25923 (18,5 mm ; CMI: 1/800) et des huiles de feuilles
avec l’espèce P. mirabilis (18 mm ; CMI: 1/400).

Tableau VII: Activité antibactérienne des HE de S. barrelieri contre quelques espèces

de bactéries pathogènes.

Souches bactériennes Feuilles Fleurs

DD CMI DD CMI
E. coli ATCC 25922 9,0 1/400 11,5 1/400
P. aeruginosa ATCC 27853 10,0 1/200 11,5 1/400
S. aureus ATCC25923 8,0 1/200 18,5 1/800
E. coli 8,5 1/400 10,5 1/400
S. typhimirium 7,0 1/400 11,5 1/400
S. aureus 13,5 1/400 9,5 1/400
P. vulgaris 13,0 1/400 14,5 1/400
P. mirabilis 18,0 1/400 12,0 1/200
H. pylori 10,0 1/100 12,0 1/400
Citrobacter ssp 14,5 1/400 9,5 1/100
DD : Diamètres des zones ’inhibition en mm incluant 6 mm de disque; CMI : Concentration minimale
inhibitrice.

Il est utile de souligner aussi que la sensibilité de certains germes peut changer selon
l’origine de l’huile appliquée. En effet, l’espèce S. aureus ATCC 25923 semble être sensible
aux huiles des fleurs mais pas à celles des feuilles et c’est l’inverse pour l’espèce Citrobacter
ssp. Cependant, certaine souche comme P. aeruginosa ATCC 27853 parait développer la
même sensibilité à l’encontre des HE appliquées au milieu de culture quelle que soit son
origine (tableau VII).

Page 66
 PARTIE III : Résultats et Discussion
Les souches bactériennes ayant développées une forte résistance à l’égard des HE
provenant de feuilles et de fleurs ne sont pas toujours les mêmes. Ce sont les Citrobacter ssp
et S. aureus et E. Coli qui paraissent les moins sensibles lorsqu’on applique les HE de fleurs
alors qu’avec les huiles de feuilles, on retrouve S. aureus ATCC 25923 ; E. coli, S.
typhimirium ; E. coli ATCC 25922 et P. aeruginosa ATCC 27853 (tableau VII).

Les valeurs de CMI les plus élevées (1/100) sont obtenues pour des bactéries gram
négatif notamment P. mirabilis, H. pylori et Citrobacter ssp, alors que les bactéries Gram
positif S. aureus ATCC 25923 et S. aureus ont trouvées sensibles vis-à-vis quelques HE des
trois espèces de sauge à des dilutions de CMI très faibles (1/800). Nos résultats concordent à
l’étude de BEKTAS et al. (2005) effectuée sur Salvia tomentosa et à celle de MUSTAFA et
BEKTAS, (2008) réalisées sur Salvia aucheri var. aucheri, S. aramiensis et S. pilifera qui
confirment la résistance des bactéries Gram négatif vis-à-vis les HE des espèces du genre
Salvia par rapport aux bactéries Gram positif.

D’une façon générale, toutes les huiles essentielles testées avaient enregistré un pouvoir
antibactérien sur la totalité des souches étudiées. Quoi que cet effet balance sur une échelle de
sensibilité variante et dépendante de l’origine de l’huile. Cette variance est due
essentiellement à la composition chimique (BAYDAR et al., 2004; DORMAN et al., 2000;
PANIZI et al., 1993), notamment aux constituants majoritaires tel que: linalool, alpha
terpinéol connus pour leurs bonnes antibactérienne (SOON-NANG et al., 2012). Des
composés du genre camphre, bornéol, eucalyptol, bornyl acétate, caryophyllene, oxyde de
caryophyllène et myrcène ont tous été cités par de nombreux auteurs comme étant des
molécules à grand pouvoir antimicrobien (DORMAN et al., 2000 ; DUKE, 2013). Beaucoup
de molécules parmi celles qu’on vient de citer figurent dans la composition chimique de nos
huiles.

Il est utile de rappeler que le pouvoir antimicrobien d’une huile essentielle ne résulte
pas nécessairement de l’action d’un constituant chimique seule, mais de l’action d’un
ensemble de composés qui interagissent entre eux. Donc, des phénomènes de synergie et
d’antagonisme entre les différents constituants peuvent être à l'origine d'une activité
beaucoup plus prononcée que celle prévisible par les composés majoritaires (BOUAOUN et
al., 2007).

Page 67
 PARTIE III : Résultats et Discussion
En outre, la méthode d’évaluation de l’activité antibactérienne, l’effet de la matrice
biologique, le type et la structure moléculaire des composants actifs, la dose ajoutée, le type
des microorganismes ciblés sont des facteurs pouvant largement influencer l’activité
antibactérienne des huiles essentielles (MALECKY, 2007).

Le mécanisme d'action des HE à l’égard des bactéries n'est pas complètement

élucidé mais on pense qu’il provoque une rupture de la membrane par des composés
lipophiles (COWAN, 1999). L’activité antimicrobienne des HE est difficile à corréler à un
composé particulier en raison de leur complexité et de leur variabilité. Il a souvent été
rapporté que les bactéries Gram (+) sont plus sensibles à l'HE que les bactéries Gram (-). La
tolérance des bactéries Gram (-) à l’HE a été attribuée à la présence d'une membrane
hydrophile externe qui bloque la pénétration des HE hydrophobes dans la membrane de la
cellule cible. Cela n’est pas toujours juste, car la sensibilité des bactéries est, en fait,
dépendante des HE utilisées (DEANS et RITCHI, 1987).

Page 68
 Partie III : Résultats et discussion

Chapitre 3: Teneur en composés phénoliques et flavonoïques

3.1. Teneur en composés phénoliques et flavonoïques totaux

Afin de caractériser les extraits préparés à partir des feuilles et fleurs des espèces de
sauge étudiées, un dosage des composés phénoliques totaux et des flavonoïdes a été effectué.
La raison principale pour le choix de ces substances réside dans le fait que la majorité des
propriétés antioxydantes des plantes leur sont attribués.

La méthode de dosages des composés phénoliques totaux choisie est celle de Folin-
Ciocalteu, universellement employée par les laboratoires de recherche (FAO/IAEA, 2000 ;
BOIZOT et al., 2006 ; LOPEZ et al., 2007). Ladite méthode est très satisfaisante sur le plan
faisabilité et reproductibilité (HUANG et al., β005). L’acide gallique a été utilisé comme
standard.

Le dosage des flavonoïdes a été réalisé selon la méthode au trichlorure d’aluminium en

utilisant la quercétine comme solution standard (BEKTAS et al., 2011). Les résultats sont
représentés dans le Tableau VIII après lecture sur les courbes d’étalonnages (annexe I).

Tableau VIII : Teneur en composés phénoliques et flavonoïques totaux des extraits de

feuilles (FR) et de fleurs (FR) de trois espèces de sauge.

Salvia algeriensis Salvia argentea Salvia barrelieri

FE FR FE FR FE FR
Phénolsb 34,66±1,38 31,58±0,82 29,64±0,38 28,55±0,54 30,11±0,24 29,83±0,92

Flavonoïdesc 10,32±0,33 10,05±0,25 8,32±0,23 8,37±0,20 11,03±0,15 10,54±0,25

a
les valeurs exprimées sont des moyennes de trois mesures parallèles± ET.
b
valeurs exprimées en µg EAG/mg de matière sèche de la plante.
c
valeurs exprimées en µg EQ/mg de matière sèche de la plante.

Les résultats rapportés dans le tableau VIII indiquent que les teneurs en composés
phénoliques varient sensiblement d’une espèce à une autre. C’est l’espèce S. algeriensis qui
présente les meilleures teneurs en composés phénoliques comparativement aux autres espèces
étudiées que ce soit dans les extraits de feuilles ou de fleurs. En effet, les extraits de feuilles
sont pourvus de 34.66 ± 1.38 µg EAG/mg de MS, suivie de S. barrelieri (30.11 ± 0.24 µg

Page 69
 Partie III : Résultats et discussion

EAG/mg de MS). Cette richesse de S. algeriensis en composés phénoliques s’est traduite

aussi dans les extraits de fleurs en donnant des teneurs de 31.58 ± 0.82 µg EAG/mg de MS
contre 29.83 ± 0.92 µg EAG/mg de MS pour S. barrelieri.
Les faibles teneurs en composés phénoliques sont fournies par S. argentea (29.64 ± 0.38
µg EAG/mg de MS avec les extraits de feuilles et 28.55 ± 0.54 µg EAG/mg de MS les extraits
de fleurs).
Les résultats du tableau VIII montrent aussi que les feuilles des trois espèces étudiées
sont plus riches en composés phénoliques que les fleurs. L’examen des résultats a permis de
mettre en évidence une corrélation linéaire positive (r 2 = 0.9γ, p ≤ 0.05) entre la teneur des
extraits des feuilles et ceux des fleurs. Cela signifie que plus les feuilles d’une espèce sont
riche en composés phénoliques plus la teneur de ses fleurs en ces composés augmente.

La détermination quantitative des flavonoïdes totaux par la méthode du trichlorure

d’aluminium révèle que les extraits de S. algeriensis et S. barrelieri sont les plus riches en
flavonoïdes avec des teneurs de (FE : 10.32 ± 0.33 µg EQ/mg de MS; FR : 10.05 ± 0.25 µg
EQ/mg de MS) et (FE : 11.03 ± 0.23 µg EQ/mg de MS; FR : 10.54 ± 0.20 µg EQ/mg de MS)
respectivement. Les extraits de S. argentea (FE : 8.32 ± 0.15 µg EQ/mg de MS; FR : 8.37 ±
0.25 µg EQ/mg de MS).

L’examen des résultats des composés phénoliques et flavonoïdes totaux a permis de

mettre en évidence une corrélation linéaire positive (r2 = 0.99 ; p≤0. 05) entre la teneur des
extraits en flavonoïdes et en composés phénoliques. Ceci est logique étant donné que les
flavonoïdes comptent parmi les constituants dominants formant les composés phénoliques des
trois espèces de sauge.

La confrontation de nos résultats avec certains travaux de la bibliographie nous laissent

penser que nos extraits sont réellement riches en composés phénoliques et en flavonoïdes. Les
résultats de l’étude menée par M’HAMMEDI, (2006) sur plusieurs espèces végétales de la
région de Tlemcen confirment cela. Les meilleures teneurs en composés phénoliques par
espèces étaient comme suit : Lavandula stoechas (06.9 µg EAG/mg de MS) ; Cistus
ladaniferus (10.4µg EAG/mg de MS) ; Crataegus oxyacanthe (04.6µg EAG/mg de MS) et
Smyrnium olysarum (0.9 µg EAG/mg de MS). Alors qu’avec nos extraits, les teneurs
oscillaient entre 34.66 ± 1.38 µg EAG/mg de MS et 28.55 ± 0.54 µg EAG/mg de MS).

Page 70
 Partie III : Résultats et discussion

Des teneurs plus élevées ont été obtenues dans les extraits de feuille de Salvia
miltiorrhiza (entre 39.0 ± 1.13 and 54.3 ± 1.1 µg EAG/mg de MS) (ZHANG et al., 2010).
Parmi les composés phénoliques dominants dans les extraits de feuilles de Salvia miltiorrhiza
figurent l’acide rosmarinique et l’acide salvianolic (ZHANG et al., 2010). Ces deux composés
peuvent être considéré comme des contributeurs principaux à l’activité antioxydante
(ZHANG et al., 2010).

S’agissant des flavonoïdes totaux des feuilles et des fleurs de nos extraits, leurs teneurs
sont aussi élevées si nous les comparons avec les résultats de l’étude conduite par
M’HAMMEDI, (2006). Les valeurs de nos extraits varient entre 11.03 ± 0.35 µg EQ/mg MS
et 8.37 ± 0.31 µg EQ/mg de MS alors que ceux de M’HAMMEDI, (2006) sont lavandula
stoechas (0,88 µg EQ/mg de MS) ; Cistus ladaniferus (0.42 µg EQ/mg de MS) ; Crataegus
oxyacanthe (0.74 µg EQ/mg de MS) et Smyrnium olysarum (0.2 µg EQ/mg de MS).

Les composés phénoliques sont des métabolites secondaires qui peuvent être associés à
l’inhibition des cancers et de l’athérosclérose (ALIM et al., 2009). La richesse de nos espèces
de sauge en ces composés phénoliques peut faire d’elles une source potentielle de molécules
antioxydantes pouvant être employée en alimentation, en pharmacie, en cosmétique ou en
industrie neutraceutique.

L’analyse de la variance (ANOVA) a révélé que la teneur en composés phénolique des

extraits est fortement liée aux facteurs espèces et nature de l’organe (feuilles ou fleurs). Pour
les teneurs en flavonoïdes totaux, c’est plutôt le facteur espèce seul qui semble les influencer
de manière significative. L’interaction des deux facteurs (espèce*nature de l’organe) reste
sans effet pour les deux types de métabolites secondaires.

Page 71
Conclusion

Page 72
 Conclusion et Perspectives

En guise de rappel, la présente étude vise à atteindre un objectif global qu’est la

valorisation de trois espèces spontanées de sauge (Salvia algeriensis, S. argentea et S.
barrelieri). Pour contribuer à cela, nous nous sommes intéressés à trois aspects de recherche
à savoir : l’extraction et l’identification de la composition chimique des huiles essentielles
extraites de fleurs et feuilles ; l’évaluation de l’activité antioxydante et antibactérienne de ces
huiles essentielles et le dosage des composés phénoliques et des flavonoïdes à partir des
extraits de feuilles et de fleurs des espèces étudiées.

L'extraction des huiles qui s’est faite par entrainement à la vapeur d’eau nous a permis
d’obtenir des rendements très appréciables avec les fleurs (1,51 - 1,72 %) et acceptables avec
les feuilles (0,83 - 0,87 %).

Les analyses effectuées par GC-MS des différentes huiles essentielles ont conduits aux
résultats suivants :

- Pour l’espèce S. algeriensis, les HE des feuilles sont pourvues de deux composés
majoritaires (beta- demascenone (22.96 %) et beta-guaiene (11.31 %)) et celles des
fleurs de trois : beta-guaiene (34.32 %) ; Bicyclo[2.2.1]heptan-2-one, 1,7,7-
trimethyl- (15.27 %) et Camphor (7.73 %).
- L’espèce S. Barrelieri, les huiles des feuilles sont riches en : 2-Buten-1-one, 1-
(2,6,6-trimethyl-1,3-cyclohexadien-1-yl)-, (E)- (8.05 %) ; Propanal, 2-methyl-3-
phenyl- (7.32 %) et Megastigmatrienone III (6.59 %). Quant aux fleurs, les trois
composés majoritaires sont : 3-Cyclohexen-1-one, 2-isopropyl-5-methyl- (13.72
%) ; Geranyl acetate (9.2 %) et Phenol, 3-methoxy-2,4,5-trimethyl- (7.06 %).

Concernant l’activité antioxydante, le test qualitatif réalisé par DPPH sur CCM a
d'abord permis de découvrir un pouvoir antioxydant chez toutes les six huiles essentielles
testées. Par la suite, et guidé par les valeurs obtenues par deux tests quantitatifs de l’activité
antioxydante; le test DPPH et le test carotène/acide linoléique, S. algeriensis a dévoilé
l’activité antioxydante la plus élevée avec un IC 50 égale à 8. 91 ± 0.76 mg/ml ; 8.44 ± 0.37
mg/ml et un taux d’inhibition de 56.87±0.74 % ; 54,82±1.54 % pour les FE et les FR
respectivement. Cette activité est suivie par celle des huiles essentielles de S. barrelieri (FE:
52.61 ± 1.66 %, IC50 = 8.69 ± 0.39 mg/ml ; FR: 50.β8 ± 1.γ4 % et l’IC50 =8.29 ± 0.32 mg/ml)
et au denier ordre les huiles extraites de S. argentea.

Page 73
 Ces résultats avèrent être très intéressants, en comparaison à d’autres HE extraites des
espèces du genre Salvia, n'ont jusqu'alors jamais été publiés ou exploités.

La détermination de la teneur en composés phénoliques totaux a gardé le même

classement obtenue avec l’activité antioxydante, dont S. algeriensis est la plus riche en
contenu phénolique (FE : 34.66 ± 1.38 µg EAG/mg de MS; FR : 31.58 ± 0.82 µg EAG/mg de
MS) en comparaison avec S. barrelieri (FE : 30.11 ± 0.24 µg EAG/mg de MS; FR : 29.83 ±
0.92 µg EAG/mg de MS) et S. argentea (FE : 29.64 ± 0.38 µg EAG/mg de MS; FR : 28.55 ±
0.54 µg EAG/mg de MS). Ceci confirme le rôle important et célèbre de ces métabolites
secondaires dans la protection contre l’effet oxydatif des radicaux libres.

L’effet antibactérien, des huiles essentielles, testé par deux méthodes: la diffusion sur
disques et la CMI (Concentration Minimale Inhibitrice) donne une sensibilité avec la majorité
de dix souches testées. Une supériorité est remarquée chez les huiles essentielles extraites de
S. argentea (feuilles et fleurs) par rapport à celles de S. algeriensis et S. barrelieri.

Page 74
Comme perspectives:

À travers les résultats de cette étude, plusieurs nouvelles pistes de recherche peuvent
être empruntées et envisagées dans le futur. Parmi les travaux de recherche à prévoir nous
pouvons citer :

- Confirmer certains résultats que nous avons obtenus lors de cette étude ;
- Pousser les recherches sur les composés phénoliques contenus dans les extraits de
feuilles, de fleurs et d’autres organes (racines, graines, etc.) en procédant à une
analyse physico-chimiques fine par HPLC ;
- Prévoir une analyse moléculaire par RAPD, SSR, ISSR, …etc. pour mettre en
évidence l’existence ou pas de polymorphisme ;
- Elargir la panoplie des espèces de sauge dans nos études ;
- Prévoir une étude portant sur la régénération in vitro des chémotypes intéressants
de sauge ;
- Prévoir une étude ethnobotanique sur l’utilisation des sauges.

Page 75
 Références
bibliographiques
 Références Bibliographiques

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Les annexes
 Annexes I: Huiles essentielles et composés phénoliques

I. Les huiles essentielles

FE FR

Figure 01: Les huiles essentielles extraites de Salvia algeriens

FE FR

Figure 02: Les huiles essentielles extraites de Salvia argentea.

FR FE

Figure 03: Les huiles essentielles extraites de Salvia barrelieri

 Annexes I: Huiles essentielles et composés phénoliques

II. Dosage des polyphénols et flavonoïdes totaux

Figure 04: Gamme d’étalonnage en acide gallique

(La flèche indique l’ordre croissant de la concentration).

Figure 05: Gamme d’étalonnage des phénols et flavonoïdes totaux

(La flèche indique l’ordre croissant de la concentration).

 Annexes I: Huiles essentielles et composés phénoliques
Tableau I : Préparation de la courbe d’étalonnage des composés phénoliques en acide
gallique

Tube Acide Folin- Na2CO Eau Acide

gallique Ciocalte 3 distillé galliqu
0.1mg/m u μl (75g.L- e e
l μl 1)
μl μg
Blan 00 500 400 1000 00
c
01 50 500 400 950 05
02 100 500 400 900 10
03 150 500 400 850 15
04 200 500 400 800 20
05 250 500 400 750 25
06 300 500 400 700 30

2,500

y = 0,053x + 0,002
2,000
R² = 0,997
Absorbance à 735 nm

1,500

1,000

0,500

0,000
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
Acide gallique (µg)

Figure 06: Courbe d’étalonnage des composés phénoliques totaux.

 Annexes I: Huiles essentielles et composés phénoliques
Tableau II : Préparation de la courbe d’étalonnage des flavonoïdes en quercétine

Tube Quercétine AlCl3 0,2% Méthanol Teneur en

. g/ l μl quercétine
μl μl μg
Blanc 00 1000 1000 00

01 50 1000 950 05

02 100 1000 900 10

03 150 1000 850 15

04 200 1000 800 20

05 250 1000 750 25

06 300 1000 700 30

07 350 1000 650 35

1,4

1,2 y = 0,034x
R² = 0,988
1
Absorbance à 415 nm

0,8

0,6

0,4

0,2

0
0 5 10 15 20 25 30 35 40
Quercétine (µg)

Figure 07: Courbe d’étalonnage des flavonoïdes totaux.

 Annexes I: Huiles essentielles et composés phénoliques

III. GC/MS des huiles essentielles

A b u n d a n c e

T IC : M E R O U A 1 0 .D \ d a ta .m s

1 5 5 0 0 0 0

1 5 0 0 0 0 0

1 4 5 0 0 0 0

1 4 0 0 0 0 0

1 3 5 0 0 0 0

1 3 0 0 0 0 0

1 2 5 0 0 0 0

1 2 0 0 0 0 0

1 1 5 0 0 0 0

1 1 0 0 0 0 0

1 0 5 0 0 0 0

1 0 0 0 0 0 0

9 5 0 0 0 0

9 0 0 0 0 0

8 5 0 0 0 0

8 0 0 0 0 0

7 5 0 0 0 0

7 0 0 0 0 0

6 5 0 0 0 0

6 0 0 0 0 0

5 5 0 0 0 0

5 0 0 0 0 0

4 5 0 0 0 0

4 0 0 0 0 0

3 5 0 0 0 0

3 0 0 0 0 0

2 5 0 0 0 0

2 0 0 0 0 0

1 5 0 0 0 0

1 0 0 0 0 0

5 0 0 0 0

5 .0 0 1 0 .0 0 1 5 .0 0 2 0 .0 0 2 5 .0 0 3 0 .0 0 3 5 .0 0 4 0 .0 0 4 5 .0 0 5 0 .0 0 5 5 .0 0 6 0 .0 0
T im e - - >

Figure 08: Chromatogramme de l’huile essentielle des FE de S. algeriensis.

A b u n d a n c e

T IC : M E R O U A 1 2 .D \ d a ta .m s
5 4 0 0 0 0 0

5 2 0 0 0 0 0

5 0 0 0 0 0 0

4 8 0 0 0 0 0

4 6 0 0 0 0 0

4 4 0 0 0 0 0

4 2 0 0 0 0 0

4 0 0 0 0 0 0

3 8 0 0 0 0 0

3 6 0 0 0 0 0

3 4 0 0 0 0 0

3 2 0 0 0 0 0

3 0 0 0 0 0 0

2 8 0 0 0 0 0

2 6 0 0 0 0 0

2 4 0 0 0 0 0

2 2 0 0 0 0 0

2 0 0 0 0 0 0

1 8 0 0 0 0 0

1 6 0 0 0 0 0

1 4 0 0 0 0 0

1 2 0 0 0 0 0

1 0 0 0 0 0 0

8 0 0 0 0 0

6 0 0 0 0 0

4 0 0 0 0 0

2 0 0 0 0 0

5 .0 0 1 0 .0 0 1 5 .0 0 2 0 .0 0 2 5 .0 0 3 0 .0 0 3 5 .0 0 4 0 .0 0 4 5 .0 0 5 0 .0 0 5 5 .0 0 6 0 .0 0
T im e - - >
 Annexes I: Huiles essentielles et composés phénoliques

Figure 09: Chromatogramme de l’huile essentielle des FR de S. algeriensis.

Abundance

T IC : M E R O U A 1 3 .D \ d a ta .m s
4400000

4200000

4000000

3800000

3600000

3400000

3200000

3000000

2800000

2600000

2400000

2200000

2000000

1800000

1600000

1400000

1200000

1000000

800000

600000

400000

200000

5 .0 0 1 0 .0 0 1 5 .0 0 2 0 .0 0 2 5 .0 0 3 0 .0 0 3 5 .0 0 4 0 .0 0 4 5 .0 0 5 0 .0 0 5 5 .0 0 6 0 .0 0
T im e -->

Figure 10: Chromatogramme de l’huile essentielle des FR de S. barrelieri.

 Annexes I: Huiles essentielles et composés phénoliques
Abundance

T IC : M E R O U A 1 4 .D \ d a ta .m s
3600000

3400000

3200000

3000000

2800000

2600000

2400000

2200000

2000000

1800000

1600000

1400000

1200000

1000000

800000

600000

400000

200000

5 .0 0 1 0 .0 0 1 5 .0 0 2 0 .0 0 2 5 .0 0 3 0 .0 0 3 5 .0 0 4 0 .0 0 4 5 .0 0 5 0 .0 0 5 5 .0 0 6 0 .0 0
T im e -->

Figure 11: Chromatogramme de l’huile essentielle des FE de S. barrelieri.

A b u n d a n c e

T IC : M E R O U A N 8 .D \ d a ta .m s
2 .3 2 9

5 5 0 0 0 0 0

5 0 0 0 0 0 0

4 5 0 0 0 0 0 5 .5 5 0 2 1 .6 0 7

1 7 .7 7 5
9 .3 4 7
4 0 0 0 0 0 0
1 3 .5 8 2
2 8 .5 0 3
4 2 .6 7 5
3 5 0 0 0 0 0

3 4 .5 2 6
3 0 0 0 0 0 0

3 7 . 3 4 02 . 0 4 0
3 1 .5 3 5 4 9 .6 3 5
2 5 0 0 0 0 0

2 0 0 0 0 0 0
1 .9 9 7

2 .8 4 9
1 5 0 0 0 0 0

1 0 0 0 0 0 0

2 .1 6 8 1 2 .1 4 0
5 0 0 0 0 0
2 .2 4 2
1 1 .6 1 9
2 . 5 54 3. 6 3 9 2 4 .9 0 7 4 4 .9 7 7
0
5 .0 0 1 0 .0 0 1 5 .0 0 2 0 .0 0 2 5 .0 0 3 0 .0 0 3 5 .0 0 4 0 .0 0 4 5 .0 0 5 0 .0 0 5 5 .0 0 6 0 .0 0
T im e -->

Figure 12: Chromatogramme de la série d’alcane.

 Annexes II: Activité antibactérienne

IV. Composition de milieux de culture

Mueller Hinton (q. s. p 1 litre)
Infusion de viande de bœuf………………..300 ml
Hydrolysat de Caséine ………………….…17,5 g
Amidon…………………………………….1,5 g
Agar ………………………………….…….10 g
pH………………………………………….7.4

V. Activité antibactérienne

1/800
1/400
1/200
1/100
1/50
1/25
Blanc sans
Blanc sans
bactéries

HE

Figure 01: Concentration minimale inhibitrice (1/200 v/v) des huiles

essentielles des fleurs de Salvia algeriensis sur Helicobacter pylori.

Tableau I : Fourchette de sensibilité selon le diamètre du halo de la zone d’inhibition

selon BELAICHE, (1979).

Diamètre Expression
0 mm Résistant
05 mm Peu sensible
10 mm sensible
20-30 mm Assez sensible
˃ 30 mm Très sensible
Le diamètre de disque est soustrait
 Annexes II: Activité antibactérienne

Figure 02: Quelques effets antibactériens des huiles essentielles.

 Annexes III: Analyses statistiques
1. Contenu phénolique et flavonoïque
Nuage de Points : FE vs. FR (Obs. à VM ignorées)
FR = 13,765 + ,51545 * FE
Corrélation: r = ,93957
32,0

31,5

31,0

30,5

FR
30,0

29,5

29,0

28,5

28,0
29 30 31 32 33 34 35
FE 95% de confiance

Figure 01: Corrélation entre les FE et les FR de point de vue contenu phénolique.

Corrélations (Feuille de données1 2v*6c)

phénols

flavonoides

Figure 02: Corrélation entre la teneur en polyphénols et en flavonoïdes.

Nuage de Points : Teneur en phénols vs. IC 50 (Obs. à VM ignorées)

IC 50 = 140,77 - 1,766 * Teneur en phénols
Corrélation: r = -,8095
96

94

92

90

88
IC 50

86

84

82

80

78
28 29 30 31 32 33 34 35
Teneur en phénols
95% de confiance

Figure 03: Corrélation entre la teneur en polyphénols et la valeur d’IC 50.

 Annexes III: Analyses statistiques
2. Analyse de la variance ANOVA

2.1. Teneur en polyphénols

Tableau I : Analyse du modèle (Type I SS) :

Carré
Source ddl Somme des carrés moyen F de Fisher Pr > F
espèce 2 53,762 26,881 41,352 < 0,0001
type d'organe 1 9,886 9,886 15,209 0,002
espèce*type d'organe 2 6,280 3,140 4,830 0,029
Tableau II : Analyse du modèle (Type III SS) :

Carré
Source ddl Somme des carrés moyen F de Fisher Pr > F
espèce 2 53,762 26,881 41,352 < 0,0001
type d'organe 1 9,886 9,886 15,209 0,002
espèce*type d'organe 2 6,280 3,140 4,830 0,029

2.2. Teneur en flavonoïdes

Tableau III : Analyse du modèle (Type I SS) :

Carré
Source ddl Somme des carrés moyen F de Fisher Pr > F
espèce 2 19,382 9,691 163,484 < 0,0001
type d'organe 1 0,252 0,252 4,252 0,062
espèce*type d'organe 2 0,232 0,116 1,958 0,184

Tableau IV : Analyse du modèle (Type III SS) :

Carré
Source ddl Somme des carrés moyen F de Fisher Pr > F
espèce 2 19,382 9,691 163,484 < 0,0001
type d'organe 1 0,252 0,252 4,252 0,062
espèce*type d'organe 2 0,232 0,116 1,958 0,184
 Annexes III: Analyses statistiques

2.3. Activité antioxydante

Le test β-carotène/acide linoléique

Tableau V : Test de Dunnett / Comparaison des groupes avec le groupe de contrôle BHT avec un intervalle
de confiance à 95,00 % :

Modalités Différence Différence réduite Valeur critique d Différence critique Significatif

ASCORBIC ~
BHT -5,213 -62176,786 2,887 0,000 Oui
S. brl ~ BHT -41,008 -564749,072 2,887 0,000 Oui
S. alg ~ BHT -45,413 -625412,776 2,887 0,000 Oui
S. arg ~ BHT -54,327 -748163,359 2,887 0,000 Oui

Tableau VI : Test de Dunnett / Comparaison des groupes avec le groupe de contrôle ASCORBIC avec un
intervalle de confiance à 95,00 % :

Différence Valeur critique Différence

Modalités Différence réduite d critique Significatif
BHT ~ ASCORBIC 5,213 62176,786 2,887 0,000 Oui
S. brl ~ ASCORBIC -35,795 -492953,238 2,887 0,000 Oui
S. alg ~ ASCORBIC -40,200 -553616,985 2,887 0,000 Oui
S. arg ~ ASCORBIC -49,113 -676367,556 2,887 0,000 Oui

Le test DPPH
Tableau VII : Test de Dunnett / Comparaison des groupes avec le groupe de contrôle BHT avec un intervalle
de confiance à 95,00 % :

Modalités Différence Différence réduite Valeur critique d Différence critique Significatif

S. arg ~ BHT 74,310 2100262,124 2,887 0,000 Oui
S. brl ~ BHT 67,390 1904678,706 2,887 0,000 Oui
S. alg ~ BHT 65,137 1840991,406 2,887 0,000 Oui
ASCORBIC ~ BHT -12,657 -309795,412 2,887 0,000 Oui

Tableau VIII : Test de Dunnett / Comparaison des groupes avec le groupe de contrôle ASCORBIC avec un
intervalle de confiance à 95,00 % :

Modalités Différence Différence réduite Valeur critique d Différence critique Significatif

S. arg ~ ASCORBIC 86,967 2457983,955 2,887 0,000 Oui
S. brl ~ ASCORBIC 80,047 2262400,413 2,887 0,000 Oui
S. alg ~ ASCORBIC 77,793 2198713,265 2,887 0,000 Oui
BHT ~ ASCORBIC 12,657 309795,412 2,887 0,000 Oui
 Annexes III: Analyses statistiques

2.4. Activité antibactérienne

Tableau IX: Tests Multivariés de Significativité, montrant l’effet significatif de l’espèce sur
l’activité antibactérienne.

Test Valeur F Effet Erreur p

ord. origine Wilk 0,000314 397,5962 8 1 0,038768
Espèce Wilk 0,000001 117,3716 16 2 0,008479
Organe de la plante Wilk 0,001434 87,0275 8 1 0,082726

Tableau X : Analyse des différences entre les groupes avec un intervalle de confiance à 95,00
% (Tukey) pour E. Coli

Pr. >
Modalités Différence Différence réduite Valeur critique Diff Significatif
S. argentea ~ S. barrelieri 12,250 21,218 3,462 0,006 Oui
S. argentea ~ S. algeriensis 10,500 18,187 3,462 0,006 Oui
S. algeriensis ~ S. barrelieri 1,750 3,031 3,462 0,083 Non
FR ~ FE 0,000 0,000 3,068 1,000 Non

Tableau XI : Analyse des différences entre les groupes avec un intervalle de confiance à
95,00 % (Tukey) pour S. Typhimirium

Différence Valeur
Modalités Différence réduite critique Pr. > Diff Significatif
S. algeriensis ~ S. argentea 10,000 18,516 3,462 0,006 Oui
S. algeriensis ~ S. barrelieri 9,500 17,591 3,462 0,006 Oui
S. barrelieri ~ S. argentea 0,500 0,926 3,462 0,793 Non
FE ~ FR 6,5 14,74 3,068 0,0036 Oui

Tableau XII: Analyse des différences entre les groupes avec un intervalle de confiance à
95,00 % (Tukey) pour S. aureus ATCC 25923

Différence Valeur
Modalités Différence réduite critique Pr. > Diff Significatif
S. argentea ~ S. barrelieri 1,500 1,643 3,462 0,424 Non
S. argentea ~ S. algeriensis 0,250 0,274 3,462 0,992 Non
S. algeriensis ~ S. barrelieri 1,250 1,369 3,462 0,558 Non
FE ~ FR 4,666 6,261 3,068 0,005 Oui
 Annexes III: Analyses statistiques

Tableau XIII : Analyse des différences entre les groupes avec un intervalle de confiance à
95,00 % (Tukey) pour S. aureus

Différence Valeur
Modalités Différence réduite critique Pr. > Diff Significatif
S. argentea ~ S. algeriensis 10,250 11,520 3,462 0,006 Oui
S. argentea ~ S. barrelieri 9,250 10,396 3,462 0,006 Oui
S. barrelieri ~ S. algeriensis 1,000 1,124 3,462 0,690 Non
FE ~ FR 1,167 1,606 3,068 0,314 Non

Tableau XIV : Analyse des différences entre les groupes avec un intervalle de confiance à
95,00 % (Tukey) pour P. vulgaris

Différence Valeur
Modalités Différence réduite critique Pr. > Diff Significatif
S. algeriensis ~ S. argentea 8,000 10,119 3,462 0,006 Oui
S. algeriensis ~ S. barrelieri 5,500 6,957 3,462 0,006 Oui
S. barrelieri ~ S. argentea 2,500 3,162 3,462 0,071 Non
FE ~ FR 0,500 0,775 3,068 0,731 Non

Tableau XV : Analyse des différences entre les groupes avec un intervalle de confiance à
95,00 % (Tukey) pour P. mirabilis

Différence Valeur
Modalités Différence réduite critique Pr. > Diff Significatif
S. barrelieri ~ S. algeriensis 6,500 9,601 3,462 0,006 Oui
S. barrelieri ~ S. argentea 6,250 9,232 3,462 0,006 Oui
S. argentea ~ S. algeriensis 0,250 0,369 3,462 0,981 Non
FE ~ FR 2,167 3,920 3,068 0,018 Oui

Tableau XVI : Analyse des différences entre les groupes avec un intervalle de confiance à
95,00 % (Tukey) pour E. coli ATCC 25922

Différence Valeur
Modalités Différence réduite critique Pr. > Diff Significatif
S. argentea ~ S. barrelieri 10,000 14,142 3,462 0,006 Oui
S. argentea ~ S. algeriensis 7,750 10,960 3,462 0,006 Oui
S. algeriensis ~ S. barrelieri 2,250 3,182 3,462 0,069 Non
FE ~ FR 0,000 0,000 3,068 1,000 Non
 Annexes III: Analyses statistiques

Tableau XVII : Analyse des différences entre les groupes avec un intervalle de confiance à
95,00 % (Tukey) pour P. aeroginosa ATCC 27853

Différence Valeur
Modalités Différence réduite critique Pr. > Diff Significatif
S. argentea ~ S. algeriensis 7,750 12,006 3,462 0,006 Oui
S. argentea ~ S. barrelieri 4,750 7,359 3,462 0,006 Oui
S. barrelieri ~ S. algeriensis 3,000 4,648 3,462 0,014 Oui
FR ~ FE 1,000 1,897 3,068 0,220 Non

Tableau XVIII : Analyse des différences entre les groupes avec un intervalle de confiance à
95,00 % (Tukey) pour H. pylori

Différence Valeur
Modalités Différence réduite critique Pr. > Diff Significatif
S. argentea ~ S. algeriensis 7,000 9,165 3,462 0,006 Oui
S. argentea ~ S. barrelieri 5,750 7,529 3,462 0,006 Oui
S. barrelieri ~ S. algeriensis 1,250 1,637 3,462 0,427 Non
FR ~ FE 0,000 0,000 3,068 1,000 Non

Tableau XIX : Analyse des différences entre les groupes avec un intervalle de confiance à
95,00 % (Tukey) pour Citrobacter ssp

Différence Valeur
Modalités Différence réduite critique Pr. > Diff Significatif
S. barrelieri ~ S. argentea 4,250 9,311 3,462 0,006 Oui
S. barrelieri ~ S. algeriensis 2,500 5,477 3,462 0,007 Oui
S. algeriensis ~ S. argentea 1,750 3,834 3,462 0,033 Oui
FR ~ FE 1,500 4,025 3,068 0,016 Oui
 :‫ملخص‬

‫ن جسا‬ ‫ثاث أن ا‬ ‫ج نأ ا‬ ‫ا س‬ ‫ا‬ ‫ا‬ ‫ا‬ ‫ا‬ ‫ا‬ ‫ ا ا ا ا أكس‬، ‫ا اس إ فح ا ك ب ا ائ‬ ‫ف‬
. ‫ا اا‬ ‫أج اء‬ ‫ا ان‬ ‫كا ا‬ ‫نا‬ ‫ا‬ ‫ ك ك ا ح‬، ]Salvia barrelieri Salvia argentea, Salvia algeriensis[

39 Salvia algeriensis ‫ن أ ا‬ ‫ا ا ا س‬ ‫( ف ا‬٪94.61 ) ‫ ك ا‬45 ‫( ح‬GC\MS ) ‫فا‬ ‫ا‬/ ‫ا غ اف ا غا‬ ‫ن ائج ح ا‬

،(٪99.44 ) ‫ك ا‬ 81 S. barrelieri ‫ن أ ا‬ ‫ا ا ا س‬ ‫ا سب ن ح ث ا نا ف ا‬ ‫أ‬ ‫ ا ث‬.‫أ ا ا‬ (٪98.03 ) ً‫ ا ُ ث‬،‫ك ا‬
. ‫ا ح اس ا‬ ‫ا ح ن ائج غ‬ ‫( أ‬S. argentea) ‫ا‬ ‫ ف حا ا‬.٪99.96 ‫ ك ا أ ا ا‬76 ‫ا‬ ‫ن‬ ‫ا‬

‫ ث ائ‬2-، 2 ‫ اخ ا ا ج ا ح‬،‫ن‬ ‫ب ا ن‬ ‫اخ ا‬ ‫ا‬ ‫ا أكس‬ ‫ا ا ا‬ ‫ا ان‬ ‫ا كا ا‬ ‫ن ائج اس ب ن ح‬ ‫اح‬

S. barrelieri S. algeriensis ‫ا ا‬ ‫ أ‬، ‫ا‬ ‫ا‬ ‫اأ ا‬ ‫ أ‬.‫ك‬ ‫ح ض ا‬/ ‫ن‬ ‫كا‬- ‫( ن ا‬DPPH) ‫ا‬ ‫ب‬ ‫ا‬
.S. argentea

‫أ ا‬ ‫أ ا‬ ‫ أث‬. ‫ا ك اأ ن ا ث‬ ‫ا‬ ‫ن‬ ‫ اس ا اخ ا ن ا اان ا‬، ‫ساا‬ ‫اض‬ ‫ا ا ا ا‬ ‫ ح‬،‫ك ك‬

. ‫ا ا‬ S. barrelieri S. Algeriensis ‫ن‬ ‫ا ا أث‬ ‫ ا‬[Link]

، ‫ن س كا‬ ‫ا‬ ‫ا‬ ، ‫ا أكس‬ ‫ ا ا ا‬،‫ا‬ ‫ا‬ ‫ا ا ا‬، ‫ا‬ ‫ا‬ ‫ ا‬، Salvia barrelieri, Salvia argentea, Salvia algeriensis :‫الكلمات المفتاح‬
. ‫ا ف ا‬/ ‫ا غ اف ا غا‬ ‫ا‬

Abstract

Essential oils of leaves and flowers of three different Salvia species [Salvia algeriensis, Salvia argentea and Salvia barrelieri] were
screened for their possible antioxidant and antibacterial properties as well as their chemical compositions, moreover of the content of total
phenolics compounds of the parts of these species.

The GC/MS (gas chromatography/mass spectrum) analysis results were identified in essential oils of S. algeriensis: 45 compounds
(94.61 %) for the leaves, 39 compounds (98.03 %) for the flowers. The highest number of constituents was found at leaves of S. barrelieri
with 81 compounds (99.44%), leaves followed by flowers of this sage with 76 compounds (99.96 %). In the case of S. Argentea, GC/MS
results are unexploitables.

Equivalents results was obtained in the amount of total phenolics and flavonoids with antioxidant activity examined by two
complementary test systems namely 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) free radical scavenging and -carotene/linoleic acid systems.
Leaves was found to be high than flowers, with favour of S. algeriensis then S. barrelieri against S. argentea.

In the case of antibacterial activity, also two tests are employed: disc diffusion and MIC (Minimal Inhibitory Concentration).
Antibacterial activity of S. argentea (leaves and flowers) was found to be the higher, following by S. algeriensis and S. barrelieri,
respectively.

Key words: Salvia algeriensis, Salvia argentea, Salvia barrelieri, essential oils, antibacterial activity, antioxydant activity, Follin-Ciocalteu,
GC/MS.

Résumé

Les huiles essentielles des feuilles et des fleurs de trois espèces de genre Salvia [Salvia algeriensis, Salvia argentea and Salvia
barrelieri] ont été examinées pour leur possible activité antioxydante et antibactérienne, aussi bien que leurs compositions chimiques, et la
teneur en composés phénolique et flavonoïques totaux des parties de ces espèces.

Les résultats de l’analyse GC/MS (chromatographie en phase gaz/ spectrométrie de masse) ont identifiés 45 composés
(94.61 %) pour les huiles essentielles des feuilles de Salvia algeriensis et 39 composés (98.03 %) pour leurs fleurs, le nombre
de constituants le plus élevé est aperçu dans les huiles essentielles des feuilles de S. barrelieri avec 81 composés (99.44 %)
suivie par les fleurs de cette sauge avec 76 composés (99.96 %). Dans le cas de Salvia argentea, la GC/MS a donnée des
résultats non exploitables.

Une équivalence des résultats est obtenue entre la teneur en composés phénolique et flavonoïques avec ceux de l’activité antioxydante
testée par deux systèmes complémentaire; le piégeage par le radical libre 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) et le système -
carotène/acide linoléique. Les feuilles ont montré une supériorité par rapport aux fleurs, avec avantage de S. algeriensis et S. barrelieri sur S.
argentea.

De même deux test ont été utilisé pour déterminer l’activité antibactérienne contre dix souche; la diffusion sur disques et la CMI
(Concentration Minimale Inhibitrice). L’effet antibactérien de S. argentea (feuilles et fleurs) est le plus élevé, cet effet est suivi par celui de
S. algeriensis et S. barrelieri, respectivement.

Mots clés: Salvia algeriensis, Salvia argentea, Salvia barrelieri, huile essentielle, activité antibactérienne, activité antioxydante, Follin-
Ciocalteu, GC/MS.